專利名稱：：一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于食品檢測
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其是涉及一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法。
背景技術(shù)：
：隨著日本肯定列表的實(shí)施，各種農(nóng)產(chǎn)品限量標(biāo)準(zhǔn)越來越低，出口形勢變的十分嚴(yán)峻。特別是日本"毒餃子"事件以后，動(dòng)植物性等油脂含量高的食品中農(nóng)藥殘留的檢測也逐漸被大家所重視。過去由于含油食品基質(zhì)復(fù)雜，同時(shí)儀器設(shè)備等的制約，直以來沒有一個(gè)很好的方法能夠檢測含油食品中的農(nóng)藥殘留。在食品檢測中傳統(tǒng)的凈化方法一般采用液一液萃取法或者SPE凈化。液一液萃取法消耗溶劑量大，且易形成乳化現(xiàn)象，操作較為繁瑣。固相萃取法常用Florisil柱吸附脂類雜質(zhì)，然后用低極性溶劑淋洗，是分析有機(jī)氯、菊酯類農(nóng)藥常用的方法。但是對(duì)于含油脂較高的復(fù)雜基質(zhì)，采用常規(guī)的液一液萃取、SPE凈化等方法不能將油脂除去，且操作步驟復(fù)雜。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于改進(jìn)己有技術(shù)的不足而提供一種基于凝膠滲透色譜凈化原理實(shí)現(xiàn)了含油食品中農(nóng)藥殘留與大分子油脂分離、可快速實(shí)現(xiàn)殘留農(nóng)藥與油脂等大分子干擾物質(zhì)的分離、能夠很好的降低檢出限、滿足高含油食品中農(nóng)藥殘留的分析、檢測結(jié)果準(zhǔn)確的含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的，一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，其特點(diǎn)是該方法包括以下歩驟a、提取是將待檢含油樣品加水，加丙酮-正己烷混合液進(jìn)行提?。籦、GPC凈化流動(dòng)相采用丙酮-環(huán)己垸，分離柱為ShodexEV-2000,根據(jù)出峰時(shí)間的不同分別收集，把收集到的液體減壓濃縮至干，殘留物用甲苯-乙腈溶解；c、ENVI-Carb/LC-NH2SPE柱凈化用甲苯-乙腈預(yù)淋洗ENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC凈化中得到的殘留物甲苯-乙腈溶解液過柱并收集，用甲苯-乙腈洗脫，洗脫液合并收集，減壓濃縮至近干，氮?dú)獯蹈?，然后用丙?正己烷溶解，過濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜檢測用；d、GC雄檢湖U:儀器條件載氣純度99.999%的氦氣；色譜柱DB-17ms，30mX0.25mmX0.25um;進(jìn)樣口溫度250°C，不分流模式；柱溫程序初始溫度60。C，保持lmin，以25°C/min，升溫至15(TC，再以4.5。C/min升溫至280。C，最后以10°C/min，升溫至300°C，保持10min;柱流速1.1mL/min;進(jìn)樣量2pL;色譜-質(zhì)譜接口溫度280°C;離子源溫度23(TC，四極桿溫度150°C;離子化方式電子轟擊模式(EI);電子能量70eV;質(zhì)譜檢測方式選擇離子監(jiān)測模式。所述的提取是稱取待測含油樣品lO.Og于lOOmL離心管中，加10mL水，充分混勻后加丙酮正己烷體積比為1:2的混合液50mL，激烈震蕩lmin，超聲提取15min后3000r/min離心5min，上層清液過鋪有少量無水硫酸鈉漏斗，收集濾液于250mL梨形瓶中，殘留物用30mL正己烷再提取，合并濾液，4(TC減壓濃縮至干，殘留物用10mL丙酮正己垸體積比為2:8的混合液溶解。所述的GPC凈化是流動(dòng)相采用丙酮環(huán)己垸體積比為2:8的混合液，流速為5mL/min，進(jìn)樣體積5mL，分離柱:ShodexEV-2000，根據(jù)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品在凝膠滲透色譜中在GPC出峰時(shí)間來確定收集時(shí)間段，進(jìn)行分別收集，把收集到的液體轉(zhuǎn)移到250mL梨形瓶中，40°C下減壓濃縮至干，殘留物用2mL甲苯乙腈體積比為1:3的混合液溶所述的ENVI-Carb/LC-NH2SPE柱凈化是用10mL甲苯乙腈體積比為h3的混合液預(yù)淋洗ENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC凈化中得到的2mL殘留物的甲苯-乙腈溶解液過柱并收集，20mL甲苯乙腈體積比為l:3的混合液洗脫，洗脫液合并收集于50mL茄形瓶中，4(TC減壓濃縮至近干，氮?dú)獯蹈?，?.00mL丙酮正己垸體積比為1:l的混合液溶解，過0.45pm濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜檢測用。本發(fā)明基于凝膠滲透色譜凈化原理實(shí)現(xiàn)了含油食品中農(nóng)藥殘留與大分子油脂分離，建立了GC/MS檢測含油食品中多農(nóng)藥殘留的方法，方法采用丙酮正己垸超聲震蕩提取，經(jīng)GPC除油濃縮、ENVI-Carb/LC-NH2SPE進(jìn)一歩凈化，最終通過GC/MS對(duì)高含油食品中農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，實(shí)驗(yàn)通過對(duì)65種農(nóng)藥進(jìn)行驗(yàn)證，回收率均在70%~120%;本發(fā)明方法可快速實(shí)現(xiàn)殘留農(nóng)藥與油脂等大分子干擾物質(zhì)的分離，并能夠很好的降低檢出限，滿足高含油食品中農(nóng)藥殘留的分析，本發(fā)明方法最低檢出限為0.02mg/kg。本發(fā)明主要采用GPC對(duì)含油食品進(jìn)行除油，同時(shí)將其與GC/MS聯(lián)用應(yīng)用于肉和調(diào)理食品等高含油食品中農(nóng)藥的多殘留分析。本發(fā)明具有以下特點(diǎn)1、凈化效果本發(fā)明中所用到凝膠滲透色譜其基本原理是以不同孔徑的多孔凝膠裝柱，不同配比的環(huán)己垸和丙酮作為洗脫劑，根據(jù)多孔凝膠對(duì)不同大小分子的排阻效應(yīng)進(jìn)行分離，大分子的油脂、色素(葉綠素、葉黃素)、生物堿、聚合物等先淋洗出來，農(nóng)藥等相對(duì)分子質(zhì)量較小，后淋洗出。GPC法的柱填料和被分離試樣沒有任何相互作用，完全靠分子自身的大小進(jìn)行分離。這種按體積大小的分離方式?jīng)Q定了GPC技術(shù)可在溫和條件下進(jìn)行，因?yàn)闆]有可逆吸附，所以每個(gè)適用于GPC分離的樣品都能完全洗脫，并能得到非常好的凈化。GPC可去除大分子干擾物，適用于更加廣泛、更加復(fù)雜的基質(zhì)。以油炸土豆為例，采用GPC進(jìn)行凈化，得到其凈化分離時(shí)間圖1;通過對(duì)圖1中011.5min、11.537.0min和37.0~40.0min三個(gè)時(shí)間段收集液分別蒸干后進(jìn)行稱量，得到的差重與提取質(zhì)量比較發(fā)現(xiàn)，約98。/。的雜質(zhì)在011.5min流出，可見GPC對(duì)大分子油脂分離效果非常明顯；實(shí)驗(yàn)過程中還發(fā)現(xiàn)，一些色素和目標(biāo)化合物流出時(shí)間重疊，GPC無法進(jìn)一步凈化，為此我們考慮采用了ENVI-Carb/LC-NH2SPE柱再進(jìn)一步凈化，結(jié)果顯示通過以上兩步凈化后，檢測過程中干擾明顯減少，圖2為凈化前樣品色譜圖，圖3為凈化后樣品色譜圖，同時(shí)提高了檢測靈敏度，降低了假陽性的幾率，實(shí)現(xiàn)了多殘留、高靈敏度的分析。2、方法的準(zhǔn)確度、精密度及檢出限以痩肉為例，分別添加0.02mg/kg、0.04mg/kg、0.08mg/kg農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品做回收，每個(gè)含量水平重復(fù)3次，所得到的各種農(nóng)藥化合物的平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差當(dāng)添加水平在0.020.08mg/kg范圍內(nèi)，農(nóng)藥回收率在70%~110%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.7%~20.0%,11=3，回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均符合農(nóng)殘檢測要求，農(nóng)藥最低檢出限為0.02mg/kg。具體數(shù)據(jù)如下表表1平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差n=3Added0.02mg/kgAdded0.04mg/kgAdded0.08mg/kgN.oPesticides-Recovery-%RSDn=3Recovery-%RSDn=3Recovery-%RSDn=31a-BHC/a-六六六769.2795.3788.42P-BHC/P-六六六817.6825.4788.53Y-BHC/Y-六六六7616.77515.28619.845-BHC/S-六六六837.9843.28716.35Isoprocarb/異丙威718.9765.18020.26Tetradifon/三氯殺螨砜875.6853.1967.77Phenthoate/稻豐散875.5804.4965.18Flusilazole/氟硅唑826.7754.19111.19Quintozene/五氯硝基苯7513.6776.1808.410Quinalphos/喹硫磷857.4835.6998.411Kresoxim-methyl/克收欣874.3833.5969.9Chlorpyrifos-methy1/甲基毒死12蜱7712.4824.4939.813Cyprodinil/嘧菌磺胺828.384968.614Diazinon/二嗪磷7714,4834.8968.615Tetraconazole/四氟醚哩815.9822.3949.116Tebufenpyrad/吡螨胺933.4798.7999.817Parathion/對(duì)硫磷882.8793.99713.418Parathion-methy/甲基-對(duì)硫磷818.7785.49613.819Pirimiphos-methyl/甲基嘧啶磷838.1814.79210.220Fenitrothion/殺螟松835.6798.11018.521Fenthion/倍硫磷874.0816.1947.022Flucythrinate/氟氰戊菊酯904.5844.58813.223Procymidone/腐霉利845.0843.9967.124Prothiofos/丙硫磷866.4833.99510.325Profenofos/丙溴磷827.481'4.18711.826Permethrin/氯菊酉旨865,2868.8978.5<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>圖1為油炸土豆GPC凈化分離時(shí)間圖。圖2為凈化前油炸土豆樣品色譜圖。圖3為凈化后油炸土豆樣品色譜圖。在圖l中收集時(shí)間段①0-11.5min，約98Q/o的大分子雜質(zhì)被收集；收集時(shí)間段②11.5min-37min，氟丙菊酯到三唑磷時(shí)間段中大部分農(nóng)藥的收集；收集時(shí)間段③37rnin以后，小分子雜質(zhì)和化合物的收集。具體實(shí)施例方式實(shí)例l，一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，本實(shí)施例以油炸土豆為待測品，是稱取油炸土豆10.0g于100mL離心管中，加10mL水，充分混勻后加丙酮正己烷體積比為1:2的混合液50mL，激烈震蕩lmin，超聲提取15min后3000r/min離心5min，上層清液過鋪有少量無水硫酸鈉漏斗，收集濾液于250mL梨形瓶中，殘留物用30mL正己烷再提取，合并濾液，4(TC減壓濃縮至干，殘留物用10mL丙酮環(huán)己烷體積比為2:8的混合液溶解；流動(dòng)相采用丙酮環(huán)己烷體積比為2:8的混合液，流速為5mL/min，進(jìn)樣體積5mL，分離柱:ShodexEV-2000,根據(jù)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品在凝膠滲透色譜中在GPC出峰時(shí)間來確定收集時(shí)間段，進(jìn)行分別收集，把收集到的液體轉(zhuǎn)移到250mL梨形瓶中，4(TC下減壓濃縮至干，殘留物用2mL甲苯乙腈體積比為1:3的混合液溶解；ENVI-Carb/LC-NH2SPE柱凈化是用10mL甲苯乙腈體積比為1:3的混合液預(yù)淋洗ENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC凈化中得到的2mL殘留物的甲苯-乙腈溶解液過柱并收集，20mL甲苯乙腈體積比為1:3的混合液洗脫，洗脫液合并收集于50mL茄形瓶中，40。C減壓濃縮至近干，氮?dú)獯蹈?，?.00mL丙酮正己烷體積比為l:l的混合液溶解，過0.45pm濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜檢測用；GC/MS檢測是使用的儀器條件為載氣純度99.999%的氦氣；色譜柱DB-17ms，體積30mxO.25mmxO.25pm;進(jìn)樣口溫度250°C，不分流模式；柱溫程序初始溫度60。C，保持lmin，以25°C/min，升溫至15(TC，再以4.5°C/min升溫至280°C，最后以10°C/min，升溫至300。C，保持10min;柱流速1.1mL/min;進(jìn)樣量2pL;色譜-質(zhì)譜接口溫度280°C;離子源溫度230。C，四極桿溫度150°C;離子化方式電子轟擊模式；電子能量70eV;質(zhì)譜檢測方式選擇離子監(jiān)測模式-SIM。本實(shí)施例樣品油炸土豆在加工之前，原料有低濃度的e-六六六檢出，檢出值為0.024mg/kg，采用方法為GB/T5009.146.-2003，農(nóng)殘藥物類型六六六-有機(jī)氯類農(nóng)藥。檢出結(jié)果按照本實(shí)施例檢測方法，對(duì)油炸土豆進(jìn)行檢測分析，e-六六六檢出值0.020mg/kg，按照GB/T5009.146-2003對(duì)油炸土豆檢測分析，P-六六六檢出值ND。上述實(shí)例說明，加工之后的油炸土豆與加工之前在結(jié)果上無顯著差異，說明本方法得到了一個(gè)比較好的凈化和定量。實(shí)例2，一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，本實(shí)施例以鱈魚為待測品，是稱取鱈魚10.0g于100mL離心管中，力n10mL水，充分混勻后加丙酮正己烷體積比為1:2的混合液50mL，激烈震蕩lmin，超聲提取15min后3000r/min離心5min，上層清液過鋪有少量無水硫酸鈉漏斗，收集濾液于250mL梨形瓶中，殘留物用30mL正己垸再提取，合并濾液，40'C減壓濃縮至干，殘留物用10mL丙酮環(huán)己垸體積比為2:8的混合液溶解；流動(dòng)相采用丙酮環(huán)己垸體積比為2:8的混合液，流速為5mL/min，進(jìn)樣體積5mL，分離柱:ShodexEV-2000，根據(jù)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品在凝膠滲透色譜中在GPC出峰時(shí)間來確定收集時(shí)間段，進(jìn)行分別收集，把收集到的液體轉(zhuǎn)移到250mL梨形瓶中，40。C下減壓濃縮至干，殘留物用2mL甲苯乙腈體積比為1:3的混合液溶解；ENVI-Carb/LC-NH2SPE柱凈化是用10mL甲苯乙腈體積比為1:3的混合液預(yù)淋洗ENVIENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC凈化中得到的2mL殘留物的甲苯乙腈溶解液過柱并收集，20mL甲苯乙腈體積比為h3的混合液洗脫，洗脫液合并收集于50mL茄形瓶中，40。C減壓濃縮至近干，氮?dú)獯蹈?，?.00mL丙酮正己垸體積比為l:1的混合液溶解，過0.45pm濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜檢測用；GC/MS檢測是使用的儀器條件為載氣純度99.999%的氦氣；色譜柱DB-17ms，體積30mx0.25mmx0.25nm;進(jìn)樣口》顯度250°C，不分流模式；柱溫程序初始溫度60。C，保持lmin，以25°C/min，升溫至150°C，再以4.5°C/min升溫至280°C，最后以10°C/min，升溫至300。C，保持10min;柱流速l.lmL/min;進(jìn)樣量2pL;色譜-質(zhì)譜接口溫度280。C;離子源溫度230。C，四極桿溫度150°C;離子化方式電子轟擊模式；電子能量70eV;質(zhì)譜檢測方式選擇離子監(jiān)測模式-SIM。本實(shí)施例檢測的農(nóng)殘藥物類型日本通關(guān)57項(xiàng)有機(jī)磷類農(nóng)藥，結(jié)果均未檢出。加標(biāo)回收添加0.2mg/kg標(biāo)準(zhǔn)品做回收，設(shè)3個(gè)平行，分析物回收率75%-110%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.8°/。19.8%11=3，數(shù)據(jù)見表2。表2.平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差n=3<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>35甲基對(duì)硫磷/Parathion-methyl692.836吡唑硫磷/Pyraclofos1055.237甲基嘧啶磷/Pirimiphos-methyl905.838殺螟松/Fenitrothion1026.339倍硫磷/Fenthion9014.640稻豐散/Phenthoate1078.241抑草磷/Butamifos899.042丙硫磷/Prothiofos865.543乙酰甲胺磷/Ac印hate875.344乙硫磷/Ethion9115.745克瘟散/Edifenphos10219.846丙線磷/Ethoprophos878.847乙嘧硫磷/Etrimfos894.948喹硫磷/Quinalphos906.249毒死蜱/Chlorpyrifos恥6.150甲基毒死蜱/Chlorpyrifos-methyl9111.251毒蟲畏/Chorferwinphos945.852蔬果磷/Salithion906.353敵敵畏/Dichlorvos7917,054硫丙磷/Sulprofos9015.555二嗪磷/Diazinon877.556甲基乙拌磷/Thiometon827.257苯硫磷/EPN9212.8以上所述的實(shí)例僅僅是對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式進(jìn)行描述，并非對(duì)本發(fā)明的范圍進(jìn)行限定。1權(quán)利要求1、一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，其特征是該方法包括以下步驟a、提取是將待檢含油樣品加水，加丙酮-正己烷混合液進(jìn)行提取；b、GPC凈化流動(dòng)相采用丙酮-環(huán)己烷，分離柱為ShodexEV-2000，根據(jù)出峰時(shí)間的不同分別收集，把收集到的液體減壓濃縮至干，殘留物用甲苯-乙腈溶解；c、ENVI-Carb/LC-NH2固相萃取柱凈化用甲苯-乙腈預(yù)淋洗ENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC凈化中得到的殘留物甲苯-乙腈溶解液過柱并收集，用甲苯-乙腈洗脫，洗脫液合并收集，減壓濃縮至近干，氮?dú)獯蹈?，然后用丙?正己烷溶解，過濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜檢測用；d、GC/MS檢測儀器條件載氣純度99.999％的氦氣；色譜柱DB-17ms，30m×0.25mm×0.25μm；進(jìn)樣口溫度250℃，不分流模式；柱溫程序初始溫度60℃，保持1min，以25℃/min，升溫至150℃，再以4.5℃/min升溫至280℃，最后以10℃/min，升溫至300℃，保持10min；柱流速1.1mL/min；進(jìn)樣量2μL；色譜-質(zhì)譜接口溫度280℃；離子源溫度230℃，四極桿溫度150℃；離子化方式電子轟擊模式；電子能量70eV；質(zhì)譜檢測方式選擇離子監(jiān)測模式。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，其特征是所述的提取是稱取待測含油樣品lO.Og于lOOmL離心管中，力n10mL水，充分混勻后加丙酮和正己烷體積比為1:2的混合液50mL，激烈震蕩lmin，超聲提取15min后3000r/min離心5min，上層清液過鋪有少量無水硫酸鈉漏斗，收集濾液于250mL梨形瓶中，殘留物用30mL正己垸再提取，合并濾液，40°C減壓濃縮至干，殘留物用10mL丙酮和環(huán)己垸體積比為2:8的混合液溶解。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，其特征是所述的GPC凈化是流動(dòng)相采用丙酮和環(huán)己垸體積比為2:8的混合液，流速為5mL/min，進(jìn)樣體積5mL，分離柱ShodexEV-2000，根據(jù)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品在凝膠滲透色譜中出峰時(shí)間來確定收集時(shí)間段，進(jìn)行分別收集，把收集到的液體轉(zhuǎn)移到250mL梨形瓶中，40°C下減壓濃縮至干，殘留物用2mL甲苯和乙腈體積比為1:3的混合液溶解。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，其特征是所述的ENVI-Carb/LC-NH2SPE柱凈化是用10mL甲苯和乙腈體積比為l:3的混合液預(yù)淋洗ENVI-Carb/LC-NH2柱，然后把GPC凈化中得到的2mL殘留物的甲苯和乙腈體積比為1:3的溶解液過柱并收集，20mL甲苯和乙腈體積比為1:3的混合液洗脫，洗脫液合并收集于50mL茄形瓶中，4(TC減壓濃縮至近干，氮?dú)獯蹈?，?.00mL丙酮和正己烷體積比為1:1的混合液溶解，過0.45pm濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜檢測用。全文摘要本發(fā)明公開了一種含油食品中多種農(nóng)藥殘留的檢測方法，是將含油樣品加水、丙酮-正己烷混合液提取，GPC凈化，流動(dòng)相采用丙酮-環(huán)己烷，分離柱為ShodexEV-2000，根據(jù)出峰時(shí)間的不同，把分別收集到的液體減壓濃縮至干，殘留物用甲苯-乙腈溶解，甲苯-乙腈預(yù)淋洗ENVI-Carb/LC-NH2固相萃取柱，把殘留物甲苯-乙腈溶解液過柱并收集，用甲苯-乙腈洗脫，洗脫液合并收集，減壓濃縮至近干，氮?dú)獯蹈?，然后用丙?正己烷溶解，過濾膜，GC/MS檢測，本發(fā)明基于凝膠滲透色譜凈化原理實(shí)現(xiàn)了含油食品中農(nóng)藥殘留與大分子油脂分離、可快速實(shí)現(xiàn)殘留農(nóng)藥與油脂等大分子干擾物質(zhì)的分離，能夠很好的降低檢出限、滿足高含油食品中農(nóng)藥殘留的分析、檢測結(jié)果準(zhǔn)確。文檔編號(hào)G01N30/00GK101598707SQ20091001557公開日2009年12月9日申請(qǐng)日期2009年5月19日優(yōu)先權(quán)日2009年5月19日發(fā)明者建付,婁喜山,高洪良申請(qǐng)人:煙臺(tái)杰科檢測服務(wù)有限公司