專利名稱：高效液相色譜法分析分離非布司他及其中間體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及非布司他分離與分析方法，尤其是一種高效液相色譜法。
背景技術(shù)：
非布司他(化學(xué)名2-[3_氰基-4-(2_甲基丙氧基)苯基]-4-甲基-5-噻唑甲 酸)為新一代非嘌呤類黃嘌呤氧化酶抑制劑，臨床上用于已出現(xiàn)尿酸沉積(包括痛風(fēng)石、痛 風(fēng)性關(guān)節(jié)炎)的慢性高尿酸血癥的治療。其結(jié)構(gòu)式為 在其合成的過程當(dāng)中可能會引入下列幾個(gè)中間體 對于合成非布司他的過程中引入的中間體雜質(zhì)，不論是在原料藥還是制劑中都是 需要進(jìn)行嚴(yán)格控制的，所以發(fā)現(xiàn)一種非布司他及其中間體分析分離的方法具有現(xiàn)實(shí)意義。申請人:發(fā)現(xiàn)，用以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱(C18(250X4.6mm， 5ym))，采用O.Olmol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.0)-(甲醇-四氫呋喃) (80 20) = 25 75為流動(dòng)相，可以將非布司他及其雜質(zhì)快速有效的分離，很好的控制非 布司他及其制劑的質(zhì)量。本發(fā)明的方法能簡單、快速、準(zhǔn)確地分析非布司他的純度和含量并 能有效的控制中間體雜質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種快速分析分離非布司他及其中間體雜質(zhì)的高效液相色譜法，從 而實(shí)現(xiàn)了非布司他及其中間體雜質(zhì)的分離測定。
本發(fā)明所說的用高效液相色譜法分離與分析非布司他及其中間體雜質(zhì)的方法，是 選擇以氨基鍵合硅膠或烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，以一定比例的有機(jī)相_緩沖 液為流動(dòng)相。上述所說的以氨基鍵合硅膠或烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，優(yōu)選十八烷 基硅烷鍵合硅膠的色譜柱。本發(fā)明的流動(dòng)相中的有機(jī)相選自甲醇、乙腈、四氫呋喃，優(yōu)選甲醇、四氫呋喃。
本發(fā)明的流動(dòng)相，有機(jī)相-緩沖液的的比例為15 85 35 65，優(yōu)選25 75。本發(fā)明的流動(dòng)相中所選用的緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液，優(yōu)選磷酸 鹽緩沖液，最優(yōu)選磷酸二氫鉀緩沖液，緩沖液的濃度范圍為0. 01mol/L 0. 05mol/L，優(yōu)選 0.01mol/L。本發(fā)明所述的分析分離方法，可以依照以下方法實(shí)現(xiàn)(1)取待處理樣品適量，用甲醇-四氫呋喃(4 1)溶解，配制成每Iml中含0. Img 的混合樣品溶液。(2)設(shè)置流動(dòng)相流速為1. OmL/min,檢測波長為314nm，色譜柱溫度為室溫。(3)取(1)的混合樣品溶液20 μ 1注入液相色譜儀，完成非布司他原料藥及其中間 體的分離與分析。本發(fā)明通過選擇適當(dāng)?shù)墓潭ㄏ嗪土鲃?dòng)相，以及適當(dāng)?shù)臏y定條件，為準(zhǔn)確的完成非 布司他的分析分離提供一種可靠的方法。


圖1 按照實(shí)施例1條件分離的非布司他原料藥及其中間體HPLC2 按照實(shí)施例2條件分離的非布司他原料藥及其中間體HPLC3 按照實(shí)施例3條件分離的非布司他原料藥及其中間體HPLC圖
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1儀器SHIMADZU LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-ΙΟΑνρ紫外檢測器；色譜柱C18(250X4.6mm，5ym)；流動(dòng)相0. 01mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0)-(甲醇-四氫呋 喃)(80 20) = 25 75流速1· OmL/min檢測波長314nm柱溫室溫進(jìn)樣體積20 μ 1試驗(yàn)步驟稱取非布司他與中間體各10mg，同置于IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃(4 1) 溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為 混合樣品溶液；另分別稱取非布司他及中間體，分別置于IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃 (4 1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為定性對照溶液。分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖。結(jié)果見圖1。圖1中1號峰為中間體1，2號峰為非布司他主峰，3號峰為中間體2，4 號峰為中間體3，5號峰為中間體5，6號峰為中間體4 ；可以觀察到在該條件下，非布司他主 峰與其他5個(gè)中間體分離完全，非布司他主峰時(shí)間在6. 7min左右。實(shí)施例2 儀器LC-10AT高效液相色譜儀；島津SPD-10A紫外檢測器；色譜柱C18(250X4.6mm，5ym)流動(dòng)相0.01mol/L磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0)-(甲醇-四氫呋 喃)(80 20) = 30 70流速L0mL/min檢測波長314nm柱溫室溫進(jìn)樣體積20 μ 1試驗(yàn)步驟稱取非布司他與中間體各10mg，同置于IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃(4 1) 溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為 混合樣品溶液；另分別稱取非布司他及中間體，分別置于IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃 (4 1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖 勻，作為定性對照溶液。分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖。結(jié)果見圖2。圖2中1號峰為中間體1，2號峰為非布司他主峰，3號峰為中間體2，4 號峰為中間體3，5號峰為中間體5，6號峰為中間體4 ；可以觀察到在該條件下，非布司他主 峰與其他5個(gè)中間體分離完全，非布司他主峰時(shí)間在11. Imin左右。實(shí)施例3儀器LC-10AT高效液相色譜儀；島津SPD-10A紫外檢測器；色譜柱C18(250X4.6mm，5ym)流動(dòng)相0. 05mol/L磷酸二氫銨溶液(用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3. 0)-(甲醇-四氫呋 喃)(80 20) = 30 70流速L0mL/min檢測波長314nm柱溫室溫進(jìn)樣體積20 μ 1試驗(yàn)步驟稱取非布司他與中間體各10mg，同置于IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃(4 1) 溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，作為 混合樣品溶液；另分別稱取非布司他及中間體，分別置于IOml量瓶中，加甲醇-四氫呋喃 (4 1)溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml置50ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖 勻，作為定性對照溶液。
分別取各對照溶液和混合樣品溶液，按上述條件進(jìn)行高效液相色譜分析，記錄色 譜圖。結(jié)果見圖3。圖3中1號峰為中間體1，2號峰為非布司他主峰，3號峰為中間體2，4 號峰 為中間體3，5號峰為中間體5，6號峰為中間體4 ；可以觀察到在該條件下，非布司他主 峰與其他5個(gè)中間體分離完全，非布司他主峰時(shí)間在12. Omin左右。
權(quán)利要求
一種分離分析非布司他(Febuxostat)高效液相色譜方法，其特征在于以氨基鍵合硅膠或烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，以有機(jī)相-緩沖液為流動(dòng)相。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于選擇氨基鍵合硅膠或十八烷基硅烷鍵合硅 膠為固定相的色譜柱，優(yōu)選十八烷基硅烷鍵合硅膠的色譜柱。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述有機(jī)相選自甲醇、乙醇、乙腈、四氫呋 喃，優(yōu)選甲醇、四氫呋喃。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述有機(jī)相與緩沖液的比例范圍為 15 85 35 65，優(yōu)選 25 75。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩 沖液，優(yōu)選磷酸鹽緩沖液，最優(yōu)選磷酸二氫鉀緩沖液。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述緩沖液的濃度范圍為0.Olmol/L 0. 05mol/L，優(yōu)選 0. 01mol/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法包括以下幾個(gè)步驟(1)取待處理樣品適量，加有機(jī)溶劑溶解，配制成混合樣品溶液。(2)設(shè)置流動(dòng)相流速為0.5 1. 5mL/min，檢測波長為314nm。(3)取(1)的混合樣品溶液2-50μ 1注入液相色譜儀，完成非布司他原料藥及其中間體 的分離與分析。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征為樣品溶液的配制中采用的有機(jī)溶劑為甲 醇_四氫呋喃(4 1)。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征為流動(dòng)相的流速為l.OmL/min。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種通過高效液相色譜法分離與分析非布司他的方法，選擇氨基鍵合硅膠或十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，采用該方法可以實(shí)現(xiàn)非布司他及其雜質(zhì)的快速分離和分析。
文檔編號G01N30/50GK101881756SQ20091003129
公開日2010年11月10日 申請日期2009年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月4日
發(fā)明者倪桃, 冒宜蘭, 馮明聲, 姚曉敏, 張璐, 曹于平, 鄭文艷 申請人:南京海辰藥業(yè)有限公司