專利名稱：比色法測定奶粉中游離l-羥脯氨酸的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及奶粉中游離L-羥脯氨酸含量的測定。
背景技術：
L-羥脯氨酸(L-HYP)是人體膠原蛋白的組成成分，但不屬于20種常見的氨基酸。 我國最近出臺的《食品添加劑使用衛(wèi)生標準2760-2007》并不允許其作為食品添加劑添加到 各類食品中。但一些企業(yè)為了追求利潤，以次充好，使自己產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量達標而在生產(chǎn) 奶粉利含乳飲料過程中非法添加了游離L-HYP，蒙混通過質(zhì)量監(jiān)管部門的監(jiān)督檢查而在市 場上銷售，這種劣質(zhì)的乳制品將嚴重危及到人體健康。L-HYP的測定主要包括比色法、氨基 酸分析儀法和電泳法等，其中以比色法最為常用。我國于1990年將比色法定為《肉與肉制 品L-羥脯氨酸含量測定》的國家標準方法，并且一直沿用至今。但遺憾的是，目前還未出現(xiàn) 對奶粉中游離L-HYP進行測定的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明專利的目的在于提供一種快速測定奶粉中游離L-羥脯氨酸含量的方法。本發(fā)明專利包括對奶粉中蛋白質(zhì)進行沉淀處理，然后采用經(jīng)典的比色法對其中的 游離L-HYP進行測定獲得相關結(jié)果。作為本發(fā)明專利的特征，蛋白質(zhì)沉淀劑為219g/L乙酸鋅和106g/L亞鐵氰化鉀。作為本發(fā)明專利的特征，顯色劑為對二氨基苯甲醛。本發(fā)明專利所建立的方法，實驗的精密度在2. 6% -4. 9%之間，完全可以滿足定 量分析的需要，表明用此方法測定奶粉中的游離L-HYP是可行的。此外，實驗操作簡單、快 捷、并且檢測成本低。
具體實施例方式準備好主要儀器，包括紫外可見分光光度計、電熱恒溫水浴鍋和電子天平。稱取 L-HYP標準品若干克待用。蛋白質(zhì)沉淀劑包括219g/L乙酸鋅(稱取219g醋酸鋅，加30ml 冰醋酸，溶于水并定容至1000ml)和106g/L亞鐵氰化鉀(稱取106g亞鐵氰化鉀溶于水， 并定容至IOOOmL)。緩沖溶液(pH 6)稱取50. Og檸檬酸，26. 3g氫氧化鈉和146. Ig乙酸 鈉，蒸餾水溶解，定容至1000mL。再加入200mL蒸餾水和300mL正丙醇，混勻，保存。氯胺 T溶液(此溶液現(xiàn)用現(xiàn)配)稱取1. 41g氯胺T溶解IOmL蒸餾水，依次加入IOmL正丙醇和 80mLpH6緩沖液。顯色劑(此溶液現(xiàn)用現(xiàn)配)稱取10. 09對二氨基苯甲醛，35mL高氯酸溶 解，混勻后緩慢加人65mL異丙醇。配制L-HYP標準貯備液(500 μ g/mL)準確稱取L-HYP標準品0. 2500g,加入1滴 lmol/L鹽酸溶解，蒸餾水定容至500mL，4°C冰箱保存。標準曲線工作母液配制(現(xiàn)用現(xiàn) 配)分別吸取500 μ g/mL L-HYP標準貯備液0、0. 5、l、2、4、6、8mL至IOOmL容量瓶，定容至 IOOmL,得到濃度分別為0,2. 5、5、10、20、30、40μ g/mL的L-HYP標準曲線工作母液。以蒸餾水為空白，吸取L-HYP標準工作母液lmL，加入氯胺T2mL溶液，充分混勻后室溫條件下反 應20min后，加入顯色劑2mL，于60°C水浴恒溫反應20min，迅速冷卻至室溫后定容至25ml， 558nm測定吸光度。以L-HYP濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪制標準曲線，求出回歸方程 和相關系數(shù)。 準確稱取20g奶粉(精確至0. OOOlg)于250mL容量瓶中，邊轉(zhuǎn)動容量瓶邊加入亞 鐵氰化鉀溶液20ml，搖勻后，再加入醋酸鋅溶液20ml，以沉淀蛋白質(zhì)。然后，加水至刻度，混 勻，放置半小時后，棄去上層脂肪，清液用濾紙或脫脂棉過濾，棄去初濾液5 10ml，濾液備 用。從制備好的待測液中吸取2mL于25mL具塞試管。吸取待測液lmL，加入氯胺T2mL溶 液，充分混勻后室溫條件下反應20min后，加入顯色劑2mL，于60°C水浴恒溫反應20min，迅 速冷卻至室溫后定容至25ml，以蒸餾水為空白，558nm測定吸光度。每個樣品做3次重復。 將吸光度代人回歸方程求出羥脯氨酸含量。
權利要求
比色法測定奶粉中游離L-羥脯氨酸，包括對奶粉中蛋白質(zhì)進行沉淀處理，然后采用經(jīng)典的比色法對其中的游離L-HYP進行測定從而獲得相關結(jié)果。
2.根據(jù)權利要求1所述的比色法測定奶粉中游離L-羥脯氨酸，其特征在于蛋白質(zhì)沉 淀劑為219g/L乙酸鋅和106g/L亞鐵氰化鉀。
3.根據(jù)權利要求1所述的比色法測定奶粉中游離L-羥脯氨酸，其特征在于顯色劑為 對二氨基苯甲醛。
全文摘要
比色法測定奶粉中游離L-羥脯氨酸，是一種快速測定奶粉中游離L-羥脯氨酸含量的方法。我國相關法規(guī)不允許L-羥脯氨酸作為食品添加劑添加到各類食品中，但一些企業(yè)為了追求利潤，在生產(chǎn)奶粉過程中非法添加游離L-HYP，使產(chǎn)品的蛋白質(zhì)含量達標。但目前國內(nèi)還未出現(xiàn)對奶粉中游離L-HYP進行測定的方法。本發(fā)明對奶粉中蛋白質(zhì)進行沉淀處理，然后采用經(jīng)典的比色法對其中游離L-HYP進行測定從而獲得相關結(jié)果。實驗的精密度在2.6％-4.9％之間，完全可以滿足定量分析的需要。此外，實驗操作簡單、快捷、并且檢測成本低。
文檔編號G01N21/78GK101871893SQ20091004966
公開日2010年10月27日 申請日期2009年4月21日 優(yōu)先權日2009年4月21日
發(fā)明者陳延霞 申請人:陳延霞