專利名稱：中藥材有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留樣品測定前的處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥材測定技術(shù)領(lǐng)域，涉及中藥材樣品中農(nóng)藥殘留快速檢測的方法。 更具體的說，是利用加速溶劑萃取方法對中藥材中的18種農(nóng)藥多殘留的樣品前處理的方法。
背景技術(shù)：
中藥材是人們用以防病、治病的特殊商品，首先應(yīng)對人體無毒害作用。但是在中藥 材的種植過程中，往往會使用一些農(nóng)藥。中藥產(chǎn)業(yè)是天津市優(yōu)勢產(chǎn)業(yè)之一。隨著國際“回 歸自然熱”的升溫，中草藥被很多國家和地區(qū)看好，中藥在國際市場的影響逐漸增大。隨之 而來，很多中藥進(jìn)口國家的檢測機(jī)構(gòu)對于中藥在種植、生產(chǎn)加工過程中產(chǎn)生的農(nóng)藥殘留等 有害物質(zhì)控制也越來越嚴(yán)格。我國2005年修訂頒布的新版《中華人民共和國藥典》，對國內(nèi) 中藥產(chǎn)品的無公害標(biāo)準(zhǔn)作出強(qiáng)制性規(guī)定，要求中藥產(chǎn)品中農(nóng)藥殘量等有毒有害物質(zhì)不得超 標(biāo)。這一強(qiáng)制規(guī)定將有力促進(jìn)我國中藥出口水平的提高，促使更多的中藥生產(chǎn)企業(yè)向國際 市場進(jìn)軍。從近年來海關(guān)統(tǒng)計來看，出口中藥材因有害殘留物超標(biāo)頻遭扣留和退運，已經(jīng)成 為我國中藥出口和中藥發(fā)展的一只“攔路虎”，對中藥的國際聲譽(yù)產(chǎn)生了極大的負(fù)面影響， 是制約中藥走向世界的“瓶頸”之一。目前，我國中藥中農(nóng)藥殘留的檢測方法落后，發(fā)達(dá)國家經(jīng)常采用先進(jìn)的農(nóng)藥殘留 檢測技術(shù)加強(qiáng)農(nóng)藥殘留監(jiān)測工作，所用檢測技術(shù)如氣相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，液相色譜與 質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，毛細(xì)管電泳與質(zhì)譜聯(lián)用，以及氣相、液相色譜與多級質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)等，這些 技術(shù)的應(yīng)用大大提高了農(nóng)藥殘留檢測的定性能力和檢測的靈敏度、檢測限和檢測覆蓋范 圍。我國當(dāng)前的中藥農(nóng)殘分析方法研究仍以氣相或液相色譜配不同的檢測器為主，較少采 用各種色質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，研究仍然集中在個別品種中藥中的某類農(nóng)藥的檢測方法研究。這嚴(yán) 重影響了檢驗工作的準(zhǔn)確程度，在一定程度上也降低了我國檢驗機(jī)構(gòu)的公正性與權(quán)威性。在樣品前處理方面，現(xiàn)代儀器分析樣品制備技術(shù)的發(fā)展趨勢就是使處理樣品的過 程要簡單、處理速度快、使用裝置要小、引進(jìn)的誤差要小、對欲測定組分的選擇性和回收率 要高。目前，國際上較多使用固相萃取(SPE)技術(shù)，其他微波提取技術(shù)、凝膠層析(GPC)、基 質(zhì)分散固相萃取(MSPD)、超臨界萃取(SFE)、固相微萃取技術(shù)等也用于多殘留分析。而我國 目前多數(shù)分析單位仍采用傳統(tǒng)的溶劑萃取，液液分配，柱層析凈化，前處理方法自動化程度 低、提取凈化的效率不高，速度慢，環(huán)境污染嚴(yán)重。
三.

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，提供一種自動化程度高，提取凈 化簡便、速度快、無環(huán)境污染的處理方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下一種中藥材有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留樣品測定前的處理方法，包括如下的步驟(1)將待測中藥材樣品粉碎，過60-100目篩，60-80°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)準(zhǔn)確稱取2. 0g樣品，加0. 5-2g硅藻土混合均勻，在萃取池底部加入一片纖維素濾膜，然后從底部裝入2-5g弗羅里硅土，混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃取；(3)在溫度 80-100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，壓力 1500psi-2000psi 條件下 靜態(tài)萃取5-10min，萃取2-4個循環(huán)；(4)用相當(dāng)于萃取池60% -70%的溶劑沖洗萃取池，最后用氮氣吹掃60s，收集提 取物，濃縮至近干，吹氮至干，加有機(jī)溶劑溶解待凈化；例如乙腈、正己烷或正己烷與丙酮混 合液。優(yōu)選為正己烷2ml，定容待測。本發(fā)明所述的中藥材有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留樣品測定前的處理方法，其步驟(1)中的 將待測中藥材樣品粉碎，優(yōu)選過60目篩，60°C烘干2-4小時備用。本發(fā)明所述的中藥材有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留樣品測定前的處理方法，其步驟(2)中所 述硅藻土的加入量優(yōu)選為0. 5-1. 5g。本發(fā)明所述的中藥材農(nóng)藥殘留樣品測定前處理方法，其步驟(3)中所述的萃取溫 度優(yōu)選為100°c，萃取壓力優(yōu)選為1500psi，靜態(tài)萃取時間優(yōu)選為5min，優(yōu)選萃取2個循環(huán)。本發(fā)明所述的處理方法，其中步驟⑷中所述的有機(jī)溶劑為為乙腈、正己烷、丙酮 的一種或兩種的混合液。優(yōu)選的有機(jī)溶劑為正己烷。下面是本發(fā)明中藥材有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留樣品測定前的處理方法在檢測中藥材農(nóng) 藥殘留方面的應(yīng)用。特別是在檢測中藥材有機(jī)氯類18種農(nóng)藥殘留樣品完整的測定方法1.儀器與試劑儀器ASE200加速溶劑萃取儀(Dionex公司)；VarianGC/MS/MS 氣質(zhì)質(zhì)聯(lián)用儀，VF-5MS 色譜柱(30mX0. 25mmX0. 25 u m) ；RE-47 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；SHB-111循環(huán)水式多用真空泵。試劑弗羅里硅土(分析純)、乙腈(分析純)、丙酮(分析純和色譜純)、正己烷 (分析純和色譜純)。標(biāo)準(zhǔn)品18種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品，10mg/l2.樣品制備1)前處理條件樣品處理中藥材樣品粉碎，過60目篩，60°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放。加速溶劑萃取準(zhǔn)確稱取2. 0g樣品，加lg硅藻土混合均勻，22ml萃取池在底部加 入一片纖維素濾膜，然后從底部裝入4g弗羅里硅土，混合好的樣品。然后進(jìn)行加速溶劑萃 取，在溫度100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，壓力1500psi條件下靜態(tài)萃取5min，萃取2 個循環(huán)，用相當(dāng)于萃取池60%的溶劑沖洗萃取池，最后用氮氣吹掃60s。收集提取物，在旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干，吹氮至干，加2ml正己烷定容待測。2)儀器分析條件VarianGC/MS/MS 儀器條件如下色譜條件進(jìn)樣口溫度250°C ；柱溫80°C，每分鐘15°C升至150°C，再以每分鐘 3°C升至20(TC，保持3分鐘，每分鐘15°C升至250°C，保持4分鐘。載氣He ；柱流量1ml/ min ；進(jìn)樣方式不分流；進(jìn)樣體積1 P L ；質(zhì)譜條件NCI 電子能量70ev ；反應(yīng)氣甲烷；離子源溫度200°C ；傳輸線溫度 250°C ；Scan :20_350 ；SIM :35，37，71，215，217，245，249，251，278，281，282，283。3)農(nóng)藥保留時間和特征離子
4 本發(fā)明公開的中藥材有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留樣品測定前的處理方法與現(xiàn)有技術(shù)公開 的內(nèi)容相比所具有的優(yōu)點和特點在于現(xiàn)有的中藥材中農(nóng)藥的提取方法通常有索氏提取、振蕩提取和超聲波提取等，他 們共同的缺點是要消耗溶劑量大、時間長、效率低、不能全自動進(jìn)行，并且對實驗員身體有損傷、污染環(huán)境。本發(fā)明采用加速溶劑萃取在線凈化技術(shù)測定有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留，使萃取和 凈化一步完成，檢驗流程短，操作方便，萃取效率高，重復(fù)性好，用的溶劑少，對操作人員和 環(huán)境的污染少?；厥章?0-110%，方法靈敏度高，可以同時檢測中藥材中的18種農(nóng)藥殘留量。


圖1為標(biāo)樣總離子流圖圖2為添加總離子流圖圖3為空白總離子流圖。
具體實施例方式為了簡單和清楚的目的，下文恰當(dāng)?shù)氖÷粤斯夹g(shù)的描述，以免那些不必要的 細(xì)節(jié)影響對本技術(shù)方案的描述。以下結(jié)合檢測實例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。其中的纖維 素濾膜由儀器廠商提供的，PSA，C18均可以購買。實施例1(1)將甘草樣品粉碎，過60目篩，60°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)準(zhǔn)確稱取3份2. 0g薏苡仁樣品，其中一份添加18種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品0. lml, 放置10分鐘，然后將樣品與lg硅藻土混合均勻，22ml萃取池在底部加入一片纖維素濾膜， 然后從依次底部裝入4g弗羅里硅土，混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃??；(3)在溫度100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，壓力1500psi條件下靜態(tài)萃取 5min，萃取2個循環(huán)；(4)用相當(dāng)于萃取池60%的溶劑沖洗萃取池，最后用氮氣吹掃60s。收集提取物， 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干，吹氮至干，加正己烷2ml，定容待測。實施例2(1)將金銀花樣品粉碎，過100目篩，80°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)準(zhǔn)確稱取3份2. 0g蒼術(shù)樣品，其中一份添加18種農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)品0. 1ml，放 置10分鐘，然后將樣品與lg硅藻土混合均勻，22ml萃取池在底部加入一片纖維素濾膜，然 后從底部依次裝入2g弗羅里硅土，混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃??；(3)在溫度100°C，丙酮正己烷(1 9，v/v)，壓力2000psi條件下靜態(tài)萃取 lOmin，萃取4個循環(huán)；(4)用相當(dāng)于萃取池70%的溶劑沖洗萃取池，最后用氮氣吹掃60s。收集提取物， 在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干，吹氮至干，加丙酮正己烷(1 1，v/v)的混合液2ml，溶解 待凈化。實施例31.加速溶劑萃取準(zhǔn)確稱取3份2. 0g人參樣品，其中一份添加18種農(nóng)藥混合標(biāo) 準(zhǔn)品0. 1ml，放置10分鐘，然后將樣品與1. 5g硅藻土混合均勻，11ml萃取池在底部加入一 片纖維素濾膜，然后從底部依次裝入5g弗羅里硅土，混合好的樣品。然后進(jìn)行加速溶劑萃 取，在溫度80°C，丙酮正己烷(1 9，？/力，壓力2000 ^靜態(tài)萃取81^11，萃取3個循環(huán)， 用相當(dāng)于萃取池70%的溶劑沖洗萃取池，最后用氮氣吹掃60s。收集提取物，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至近干，吹氮至干，加2ml乙腈定容待測。將實施例1所得到的定容待測溶液經(jīng)下述方法完成進(jìn)一步的測定儀器分析條件VarianGC/MS/MS 儀器條件如下色譜條件進(jìn)樣口溫度250°C ；柱溫80°C，每分鐘15°C升至150°C，再以每分鐘 3°C升至20(TC，保持3分鐘，每分鐘15°C升至250°C，保持4分鐘。載氣He ；柱流量1ml/ min ；進(jìn)樣方式不分流；進(jìn)樣體積1 P L ；質(zhì)譜條件NCI 電子能量70ev ；反應(yīng)氣甲烷；離子源溫度200°C ；傳輸線溫度 250°C ；Scan :20_350 ；SIM :35，37，71，215，217，245，249，251，278，281，282，283采用本發(fā)明實施例1方法獲得的上清液經(jīng)定容后測定的結(jié)果如下 在詳細(xì)說明的較佳實施例之后，熟悉該項技術(shù)人士可清楚地了解，在不脫離上述 申請專利范圍與精神下可進(jìn)行各種變化與修改，凡依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實質(zhì)對以上實施例所 作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均屬于本發(fā)明技術(shù)方案的范圍。且本發(fā)明亦不受說明 書中所舉實例實施方式。
權(quán)利要求
中藥材有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留樣品測定前的處理方法，按如下的步驟進(jìn)行(1)將待測中藥材樣品粉碎，過60-100目篩，60-80℃烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)準(zhǔn)確稱取2.0g樣品，加0.5-2g硅藻土混合均勻，在萃取池底部加入一片纖維素濾膜，然后從底部裝入2-5g弗羅里硅土，混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃取；(3)在溫度80-100℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，壓力1500psi-2000psi條件下靜態(tài)萃取5-10min，萃取2-4個循環(huán)；(4)用相當(dāng)于萃取池60％-70％的溶劑沖洗萃取池，最后用氮氣吹掃60s，收集提取物，濃縮至近干，吹氮至干，加有機(jī)溶劑定容待測。
2.如權(quán)利要求1所述的處理方法，其中步驟(3)中所述的萃取溫度為100°C，萃取壓力 為1500psi，靜態(tài)萃取時間為5min，萃取2個循環(huán)。
3.如權(quán)利要求1所述的處理方法，其中步驟(4)中所述的有機(jī)溶劑為乙腈、正己烷或正 己烷與丙酮混合液。
4.權(quán)利要求1所述的處理方法在檢測中藥材有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留方面的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述的處理方法在檢測中藥材有機(jī)氯類18種農(nóng)藥殘留方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥材有機(jī)氯類農(nóng)藥殘留樣品測定前的處理方法。它是準(zhǔn)確稱取處理過的中藥材樣品與硅藻土混合均勻，在萃取池底部加入一片纖維素濾膜，然后從底部裝入2-5g弗羅里硅土，混合好的樣品進(jìn)行加速溶劑萃取，在溫度100℃，丙酮∶正己烷(1∶9，v/v)，壓力1500-2000psi條件下靜態(tài)萃取5min，萃取2個循環(huán)，用相當(dāng)于萃取池60-70％的溶劑沖洗萃取池，收集提取物濃縮至近干，吹氮至干，加有機(jī)溶劑溶解，定容待測。本發(fā)明檢驗流程短，操作方便，萃取效率高，重復(fù)性好，用的溶劑少，對操作人員和環(huán)境的污染少?；厥章?0-110％，方法靈敏度高，可以同時檢測中藥材中的18種農(nóng)藥殘留量，具有很好的應(yīng)用前景。
文檔編號G01N30/14GK101852699SQ20091006833
公開日2010年10月6日 申請日期2009年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月2日
發(fā)明者劉磊, 宋淑榮, 張玉婷, 李輝, 程奕, 邵輝, 郭永澤 申請人:天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院中心實驗室