專利名稱：一種婦科調經用中藥制劑的質量控制方法
一種婦科調經用中藥制劑的質量控制方法技術領域
本發(fā)明屬于中藥技術領域，涉及中藥的檢測方法，尤其是一種婦科調經用中藥制 劑濕消丸的質量控制方法。
背景技術：
濕消丸由熟地黃、地黃、北沙參、白術、白芍、烏梅、木瓜和香附等八味中藥組成。制 備方法為以上八味，粉碎成細粉，混勻，過篩，每IOOg粉末加煉蜜100 120g制成大蜜丸， 即得。濕消丸具有滋陰補腎，健脾益胃，利濕消腫之功效。常用于治療脾腎陰虛，濕盛所致 單純性肥胖，浮腫，及月經不調等癥，是婦科調經的常用中藥制劑。
濕消丸由天津中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院中醫(yī)科專家運用傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論及多年臨 床經驗結合辨證施治研制而成的。本品經天津市衛(wèi)生局1984年批復同意生產，《天津市藥 品標準》1990年版，《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑第二十冊》(標準號 WS3-B-4024-98)中予以收載。濕消丸是天津中新藥業(yè)集團股份有限公司達仁堂制藥廠生產 的獨家品種。
隨著經濟的不斷發(fā)展，中藥受到世人更多的了解與矚目。中藥是在傳統(tǒng)的中醫(yī)理 論指導下發(fā)展起來的，原料多是草根樹皮、礦物、動物等天然材料，來源廣泛，成分復雜。這 就決定了中藥安全性標準的特殊性，安全性標準問題也同樣成為中藥進入國際市場的一個 難題。目前國際上雖然尚無植物類中藥的國際標準，但是美國、歐盟及我國傳統(tǒng)出口中藥的 東南亞地區(qū)均有提高中藥標準的趨勢。在此情況下，更要提出適合我國產品質量的標準以 適應國際標準，而且中藥在中國有數(shù)千年的使用歷史，世界各國在制訂相應的植物藥產品 質量標準中也多參考我國的中藥標準。完善、提高中藥的質量標準更加成為了迫在眉睫的 事情了。
薄層色譜法(TLC)鑒別中對照藥材的確定越來越多的運用在中藥制劑中，由于對 照品的限制或選擇對照品不夠專屬等原因，常選用對照藥材作為TLC鑒別的色譜對照。
高效液相色譜(HPLC)具有快速、靈敏、分離效能高等優(yōu)點，在中藥鑒定中，采用 HPLC法分離特征成分后，用紫外檢測器(UV)或質譜檢測器(MQ進行結構分析和定量分析， 是全面評價質量的有效方法。中國藥典(2000年版)一部中就有59種藥材和50種中成藥 采用HPLC法進行鑒定，而且還不斷有人用HPLC法對其它的中藥進行鑒定和成分分析研究。
濕消丸原有質量標準表述“為取本品置顯微鏡下觀察含糊化淀粉粒薄壁細胞， 單個散離或破碎，呈類圓形、橢圓形或不規(guī)則形，充滿糊化的淀粉粒，壁有時可察見，草酸鈣 簇晶直徑11 M 35 μ m，偶見方晶。非腺毛大多為單細胞，平直或彎曲成鐮刀狀，淡黃 棕色，胞腔內常充滿暗棕色物”。對于該品種的質量控制方法而言，顯然十分的模糊和不足。 原有標準中僅有烏梅及白芍等部分中藥顯微鑒別特征的描述，對于質量控制標準而言，遠 遠不夠，應該添加對照藥材和對照品作為薄層色譜鑒別檢驗方法的依據(jù)。沒有特征藥材的 鑒別和反映藥物內在質量的指標成分的含量測定項，無法在生產中有效的保證產品的內在 質量，藥效也得不到保證。發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術的不足之處，提供一種能夠定性并且定量婦科調 經用中藥制劑濕消丸的質量控制方法，本方法具有檢測手段簡單、檢測結果準確的特點。
本發(fā)明的目的是通過以下技術方案實現(xiàn)的
一種婦科調經用中藥制劑濕消丸的質量控制方法，步驟是
(1)性狀鑒別;
(2)鑒別木瓜采用薄層色譜法以木瓜為對照藥材，鑒別濕消丸處方中是否含有 木瓜成分；
(3)鑒別烏梅采用薄層色譜法以烏梅為對照藥材，鑒別濕消丸處方中是否含有 烏梅成分；
(4)鑒別白芍采用薄層色譜法以芍藥苷為對照品，鑒別濕消丸處方中是否含有 白芍成分；
(5)測定白芍采用高效液相法以芍藥苷為對照品，測定濕消丸處方中的白芍含量。
而且，所述性狀鑒別是
①性狀描述為黑褐色的大蜜丸，味甜、微酸；
②置顯微鏡下觀察薄壁組織灰棕色至黑棕色，細胞多皺縮，內含棕色核狀物，分 泌細胞類圓形，含淡黃棕色至紅棕色分泌物，其周圍細胞作放射狀排列；纖維束紅棕色，纖 維細，直徑8 10 μ m。
而且，所述薄層色譜法鑒別木瓜的方法是
①將濕消丸樣品制成供試品溶液；
②取木瓜為對照藥材制成對照藥材溶液；
③陰性樣品溶液的制備；
④薄層色譜檢測?、?、②、③溶液于同一硅膠薄層板上，以體積比甲苯乙酸乙 酯甲酸=5 1 0.1為展開劑展開，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；
⑤結果分析將薄層板置紫外光燈365nm波長下檢視，確定供試樣品中是否含有 木瓜成分。
而且，所述薄層色譜法鑒別烏梅的方法是
①取木瓜鑒別剩下的藥渣制成供試品溶液；
②取烏梅對照藥材制成對照藥材溶液；
③陰性樣品溶液的制備；
④薄層色譜檢測取①、②、③溶液于同一硅膠薄層板上，以體積比甲苯乙酸乙 酯甲酸=5 3 1為展開劑展開，噴以5%香草醛硫酸溶液溶液，加熱至斑點顯色清晰；
⑤結果分析分析硅膠薄層板上相同顏色的斑點的位置，確定供試樣品中是否含 有烏梅成分。
而且，所述薄層色譜法鑒別白芍的方法是
①取烏梅鑒別剩下的藥渣制成供試品溶液；
②取芍藥苷對照品，加乙醇制成對照品溶液；
③陰性樣品溶液的制備；
④薄層色譜檢測?、?、②、③溶液于同一硅膠薄層板上，以體積比三氯甲烷乙 酸乙酯甲醇甲酸=40 5 10 0.2為展開劑展開，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱 至斑點顯色清晰；
⑤結果分析分析硅膠薄層板上相同顏色的斑點的位置，確定供試樣品中是否含 有白芍成分。
而且，所述高效液相法測定白芍的方法是
①液相色譜條件的設定；
②標準品溶液的制備；
③供試品溶液的制備；
④陰性樣品溶液的制備；
⑤測定白芍色譜⑥結果分析根據(jù)色譜圖可推算得到濕消丸中白芍的含量。
本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是
1、本發(fā)明的檢測方法在《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第二十冊原標準的基礎 上，對性狀和顯微鑒別進行了修訂，增加了對照藥材和對照品的薄層鑒別檢驗方法；并制定 了高效液相色譜法進行含量測定的方法。
2、本發(fā)明在濕消丸的檢測方法中增加對照藥材、對照品的薄層色譜法鑒別以及高 效液相鑒別等檢驗項目，更有利于中藥制劑的質量控制，從而更加準確地檢驗出假藥和劣 藥，對于中藥現(xiàn)代化和中藥走出國門意義重大。
3、本發(fā)明對濕消丸的質量標準進行了提高、完善，在原標準基礎上，修訂了濕消丸 的性狀和顯微鑒別特征，增加了處方中木瓜、烏梅及白芍的薄層鑒別檢驗方法，以芍藥苷為 對照品，制定了采用高效液相色譜法測定處方中自芍的含量；修訂后的質量標準，提高了濕 消丸質量標準的可控性，進一步確保產品內在質量和療效，而且對促進產品銷售、增加產品 的市場競爭力、保證患者用藥安全意義重大。


圖1和圖2分別為本發(fā)明供試樣品中木瓜在日光及波長為365nm紫外光燈下的檢 視圖，其中，圖1和圖2中條帶從左至右依次為1.供試品溶液1(批號200601),2.供試品 溶液2 (批號20060 ，3.供試品溶液3 (批號20060 ，4.木瓜對照藥材，5.木瓜陰性樣品O
圖3為本發(fā)明供試樣品中烏梅在日光下的檢視圖；其中條帶從左至右依次為 1.供試品溶液1 (批號200601)，2.供試品溶液2 (批號20060 ，3.供試品溶液3 (批號 200603),4.烏梅對照藥材，5.烏梅陰性樣品。
圖4為本發(fā)明供試樣品中白芍在日光下的檢視圖，其中條帶從左至右依次為 1.供試品溶液1 (批號200601)，2.供試品溶液2 (批號20060 ，3.供試品溶液3 (批號 200603),4.芍藥苷對照品(中檢所)，5.白芍陰性樣品。
圖5為本發(fā)明芍藥苷對照品(中檢所)的液相色譜圖6為本發(fā)明供試樣品的液相色譜圖7為本發(fā)明白芍陰性樣品的液色相圖譜。
具體實施方式
下面結合實施例，對本發(fā)明進一步說明，下述實施例是說明性的，不是限定性的， 不能以下述實施例來限定本發(fā)明的保護范圍。
一種婦科調經的中藥制劑濕消丸的質量控制方法，其方法的步驟是
(1)性狀鑒別
性狀描述為濕消丸為黑褐色的大蜜丸；味甜、微酸。置顯微鏡下觀察薄壁組織 灰棕色至黑棕色，細胞多皺縮，內含棕色核狀物(熟地黃)。分泌細胞類圓形，含淡黃棕色至 紅棕色分泌物，其周圍細胞作放射狀排列；纖維束紅棕色，纖維細，直徑8 ΙΟμπι(香附)。
(2)薄層色譜法鑒別木瓜采用薄層色譜法，以木瓜為對照藥材，鑒別濕消丸處方 中木瓜。
①供試品溶液的制備據(jù)文獻報道，木瓜中含有酸性皂苷類，如熊果酸等，故試驗 中采用乙醚作為提取溶劑進行了試驗。取濕消丸1丸，剪碎，加硅藻土 2. 5g，研勻，加乙醚超 聲處理兩次，每次30ml，每次10分鐘，濾過，合并濾液，蒸干，殘渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作 為供試品溶液。
②對照藥材溶液的制備取木瓜對照藥材lg，加乙醚超聲處理兩次，同法制成對 照藥材溶液。
③陰性樣品溶液的制備按處方配比，取處方藥材4g(木瓜除外)，加煉蜜適量，加 乙醚30ml，按照《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第二十冊原標準上制法制備，作為陰性對 照溶液。
④薄層檢測照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取供 試品溶液及陰性樣品溶液各10 μ 1、對照藥材溶液6 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以 甲苯乙酸乙酯甲酸=5 1 0. 1為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶 液，加熱至斑點顯色清晰。
⑤結果分析不同生產批次濕消丸供試品的檢測結果見圖1及圖2。日光下，供試 品色譜中，在與木瓜對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾；置 紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與木瓜對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏 色的熒光斑點，陰性樣品亦無干擾，表明供試樣品含有木瓜成分。
(3)薄層色譜法鑒別烏梅采用薄層色譜法，以烏梅為對照藥材，鑒別濕消丸處方 中烏梅。
①供試品溶液的制備取木瓜鑒別項下乙醚提取后的藥渣，加乙酸乙酯40ml，加 熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙酯Iml使溶解，作為供試品溶液。
②對照藥材溶液的制備另取烏梅對照藥材lg，加乙酸乙酯20ml，同法制成對照 藥材溶液。
③陰性樣品溶液的制備按處方配比，取處方藥材4g(烏梅除外)，加煉蜜適量，加 乙醚30ml，再按照《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第二十冊原標準上制法制備，作為陰性 樣品溶液。
④薄層檢測照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上7述三種溶液各6 μ 1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯乙酸乙酯甲酸=5 :3:1 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色清晰
⑤結果分析不同生產批次濕消丸供試品的檢測結果見圖3。供試品色譜中，在與 烏梅對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾。表明供試樣品含有烏 梅成分。
(4)薄層色譜法鑒別白芍采用薄層色譜法以芍藥苷為對照品，鑒別濕消丸處方 中的白芍。
①供試品溶液的制備取烏梅鑒別項下的藥渣，加水飽和的正丁醇40ml，超聲處 理60分鐘，濾過，正丁醇液蒸干，殘渣加無水乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。
②對照品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，加乙醇制成每Iml含Img的溶液，作 為對照品溶液。
③陰性樣品溶液的制備按處方配比，取處方藥材4g(白芍除外)，加煉蜜適量，按 照《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第二十冊原標準上制法制備，作為陰性樣品溶液。
④薄層檢測照薄層色譜法(《中國藥典》2005年版一部附錄VI B)試驗吸取上述 三種溶液各6μ1，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸= 40 5 10 0.2為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑點顯色 清晰。
⑤結果分析不同生產批次濕消丸供試品的檢測結果見圖4。供試品色譜中，在與 芍藥苷對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點，陰性樣品無干擾。表明供試品含有白 芍成分；
(5)高效液相法測定白芍采用高效液相法測定濕消丸處方中的白芍，以芍藥苷 為對照品。
①液相色譜條件的設定參照《中國藥典》2005年版一部有關測定方法，確定檢測 波長為230nm。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以四氫呋喃磷酸鹽緩沖液〔l/15mol/ L磷酸二氫鈉-l/15mol/L磷酸氫二鈉溶液(5 1) ) = 15 85為流動相；理論板數(shù)按芍 藥苷峰計算應不低于3000。
②標準品溶液的制備取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加稀乙醇制成每Iml含 0. Img的溶液，即得。液相色譜檢測結果見圖5;
③供試品溶液的制備取濕消丸適量，剪碎，取2g，精密稱定，精密加入稀乙醇 50ml，稱定重量，超聲處理(功率^OW,頻率33kHz) 60分鐘，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補 足減失的重量，搖勻，離心(轉速為每分鐘3000轉)5分鐘，取上清液，用0. 45 μ m微孔濾膜 過濾，取續(xù)濾液，即得。液相色譜檢測結果見圖6。
④陰性樣品溶液的制備按處方取除白芍的其他各味，按照《衛(wèi)生部藥品標準》中 藥成方制劑第二十冊原標準上制法制得樣品，再按上述供試品溶液制備方法，制得陰性樣 品溶液。再按同樣的色譜條件分析，陰性樣品在芍藥苷相應的保留時間處未見色譜峰。結 果表明，陰性樣品對檢測無干擾。液相色譜檢測結果見圖7。
⑤測定分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶各10 μ 1，注入液相 色譜儀，測定，即得。
⑥結果分析由保留時間可以確定供試樣品中含有芍藥苷。參照《中國藥典》2005年版一部白芍項下含量限度計算，每g樣品含芍藥苷應為0. 97mg。根據(jù)色譜圖可推算得到 濕消丸中芍藥苷的含量，該含量與國家藥典進行比較，即可判斷供試樣品的白芍含量是否 合格，進而判斷不同廠家、不同批次的濕消丸的品質。本實驗樣品濕消丸處方中，白芍占處 方總量的12. 74%，制劑中按每IOOg生粉加煉蜜IlOg計算，每g樣品含白芍應為60. 7mg, 鑒于濕消丸為生粉入藥，按照國家藥典委員會要求，生粉入藥按80%轉移率計算，為每g含 白芍以芍藥苷(C23H28O11)計，為0. 78mg，若按每丸含白芍以芍藥苷(C23H28O11)計，應不得少于 7. Omg0
權利要求
1.一種婦科調經用中藥制劑濕消丸的質量控制方法，其特征在于方法的步驟是(1)性狀鑒別；(2)鑒別木瓜采用薄層色譜法以木瓜為對照藥材，鑒別濕消丸處方中是否含有木瓜 成分；(3)鑒別烏梅采用薄層色譜法以烏梅為對照藥材，鑒別濕消丸處方中是否含有烏梅 成分；(4)鑒別白芍采用薄層色譜法以芍藥苷為對照品，鑒別濕消丸處方中是否含有白芍 成分；(5)測定白芍采用高效液相法以芍藥苷為對照品，測定濕消丸處方中的白芍含量。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種婦科調經用中藥制劑濕消丸的質量控制方法，其特征在 于所述性狀鑒別是①性狀描述為黑褐色的大蜜丸，味甜、微酸；②置顯微鏡下觀察薄壁組織灰棕色至黑棕色，細胞多皺縮，內含棕色核狀物，分泌細 胞類圓形，含淡黃棕色至紅棕色分泌物，其周圍細胞作放射狀排列；纖維束紅棕色，纖維細， 直徑8 10 μ m。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種婦科調經用中藥制劑濕消丸的質量控制方法，其特征在 于所述薄層色譜法鑒別木瓜的方法是①將濕消丸樣品制成供試品溶液；②取木瓜為對照藥材制成對照藥材溶液；③陰性樣品溶液的制備；④薄層色譜檢測?、?、②、③溶液于同一硅膠薄層板上，以體積比甲苯乙酸乙酯 甲酸=5 1 0.1為展開劑展開，噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點顯色清晰；⑤結果分析將薄層板置紫外光燈365nm波長下檢視，確定供試樣品中是否含有木瓜 成分。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種婦科調經用中藥制劑濕消丸的質量控制方法，其特征在 于所述薄層色譜法鑒別烏梅的方法是①取木瓜鑒別剩下的藥渣制成供試品溶液；②取烏梅對照藥材制成對照藥材溶液；③陰性樣品溶液的制備；④薄層色譜檢測取①、②、③溶液于同一硅膠薄層板上，以體積比甲苯乙酸乙酯 甲酸=5 3 1為展開劑展開，噴以5%香草醛硫酸溶液溶液，加熱至斑點顯色清晰；⑤結果分析分析硅膠薄層板上相同顏色的斑點的位置，確定供試樣品中是否含有烏 梅成分。
5.根據(jù)權利要求1所述的一種婦科調經用中藥制劑濕消丸的質量控制方法，其特征在 于所述薄層色譜法鑒別白芍的方法是①取烏梅鑒別剩下的藥渣制成供試品溶液；②取芍藥苷對照品，加乙醇制成對照品溶液；③陰性樣品溶液的制備；④薄層色譜檢測?、?、②、③溶液于同一硅膠薄層板上，以體積比三氯甲烷乙酸乙酯甲醇甲酸=40 5 10 0.2為展開劑展開，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱至斑 點顯色清晰；⑤結果分析分析硅膠薄層板上相同顏色的斑點的位置，確定供試樣品中是否含有白 芍成分。
6.根據(jù)權利要求1所述的一種婦科調經用中藥制劑濕消丸的質量控制方法，其特征在 于所述高效液相法測定白芍的方法是①液相色譜條件的設定；②標準品溶液的制備；③供試品溶液的制備；④陰性樣品溶液的制備；⑤測定白芍色譜圖；⑥結果分析根據(jù)色譜圖可推算得到濕消丸中白芍的含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種婦科調經用中藥制劑濕消丸的質量控制方法，步驟是(1)性狀鑒別；(2)薄層色譜法鑒別木瓜；(3)薄層色譜法鑒別烏梅；(4)薄層色譜法鑒別白芍；(5)高效液相法測定白芍。本發(fā)明對濕消丸的質量標準進行了提高、完善，在原標準基礎上，修訂了濕消丸的性狀和顯微鑒別特征，增加了處方中木瓜、烏梅及白芍的薄層鑒別檢驗方法，以芍藥苷為對照品，制定了采用高效液相色譜法測定處方中自芍的含量；修訂后的質量標準，提高了濕消丸質量標準的可控性，進一步確保產品內在質量和療效，而且對促進產品銷售、增加產品的市場競爭力、保證患者用藥安全意義重大。
文檔編號G01N30/36GK102028839SQ200910070659
公開日2011年4月27日 申請日期2009年9月28日 優(yōu)先權日2009年9月28日
發(fā)明者劉彤, 劉雅華, 孫寶珍, 李艷鈺 申請人:天津中新藥業(yè)集團股份有限公司達仁堂制藥廠