專利名稱：：用于蛋白懸浮芯片檢測(cè)的血清樣品處理制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種血清樣品的處理制劑，尤指一種用于蛋白懸浮芯片;險(xiǎn)測(cè)的血清樣品處理制劑。
背景技術(shù)：
：隨著全球生物安全戰(zhàn)略的廣泛實(shí)施，針對(duì)病原生物的快速診斷需求明顯增加，像經(jīng)典的檢測(cè)方法如檢測(cè)核酸的各類PCR、原位雜交、DNA芯片、NASBA等技術(shù)，檢測(cè)蛋白質(zhì)等抗原、抗體物質(zhì)的ELISA、免疫層析技術(shù)、蛋白芯片技術(shù)等，都具有各自的特點(diǎn)。但是一般的方法主要檢測(cè)單種病原或傳染病，面對(duì)一個(gè)感染者，難以實(shí)現(xiàn)多病因的同時(shí)篩查。懸浮芯片檢測(cè)的基本原理是利用聚苯乙烯(polystyrene)所制作的微球，包覆不同比例的紅色和橙色兩種熒光染料，當(dāng)微球被635nm的激光照射后，發(fā)射658nm和712nm的熒光。比較二者發(fā)射光的比率，能夠區(qū)分100種不同的熒光微球，而產(chǎn)生100種不同比例顏色，作為IOO種獨(dú)特的色彩編號(hào)，每顆微球大小約5.6iim，可依不同研究目的如免疫分析、核酸研究、酶分析、受體和配體識(shí)別分析等，并根據(jù)不同研究目的而標(biāo)定特定抗體、核酸探針及各種受體探針。標(biāo)記探針的微球與待測(cè)物在96孔板中進(jìn)行反應(yīng)。檢測(cè)通道中設(shè)有兩道激光，一道識(shí)別微球分類編碼以確定檢測(cè)項(xiàng)目；一道記錄焚光信號(hào)強(qiáng)弱以檢測(cè)待測(cè)物的含量。當(dāng)待測(cè)樣本與特定微球的探針吸附在一起時(shí)，兩道激光所激發(fā)的光都可被檢測(cè)到。而若樣本中不含該標(biāo)的物，則僅有微球中的激發(fā)光可被檢測(cè)到。再通過(guò)機(jī)器與計(jì)算機(jī)自動(dòng)統(tǒng)計(jì)分析兩道激光所激發(fā)的微球種類與信號(hào)強(qiáng)弱，判定待測(cè)樣本中有幾種測(cè)試目標(biāo)物在其中，從而得知測(cè)試樣本中有無(wú)待測(cè)病原存在，或同時(shí)存在有幾種至數(shù)十種病原。采用蛋白懸浮芯片進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，其4企測(cè)對(duì)象主要可分為抗原和抗體3兩大類，目前，應(yīng)用蛋白懸浮芯片檢測(cè)蛋白質(zhì)時(shí)多是用抗體包被微球然后檢測(cè)體液中的細(xì)胞因子或是抗原，但是在檢測(cè)不同的抗原時(shí)需要選擇不同的抗體，由此就增加了實(shí)驗(yàn)的繁瑣程度。如果用抗原包被微球，進(jìn)而檢測(cè)血清中的抗體就可簡(jiǎn)化實(shí)-瞼,易于操作。但是，由于血清中的抗體成分種類復(fù)雜繁多，用抗原包被的微球檢測(cè)抗體常常出現(xiàn)嚴(yán)重的非特異性吸附現(xiàn)象，嚴(yán)重影響檢測(cè)敏感性，因此，采用懸浮芯片檢測(cè)血清時(shí)需要制備一種能有效降低血清中非特異性吸附的樣品處理制齊i蛋白懸浮芯片用于檢測(cè)抗體的原理基于免疫學(xué)中抗原抗體的特性性反應(yīng)，在免疫學(xué)中用于檢測(cè)抗體的方法有酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定(ELISA)間接法中測(cè)抗體時(shí)，所用的血清樣本處理液為PB或PBS溶液，將PB或PBS溶液用于懸浮芯片檢測(cè)的血清樣本處理液時(shí)，非特異性吸附較嚴(yán)重，易出現(xiàn)假陽(yáng)性和弱陽(yáng)性，主要是由于人血清中含有約40%以上的異嗜性抗體，易與微球發(fā)生非特異性吸附，從而導(dǎo)致假陽(yáng)性和弱陽(yáng)性的現(xiàn)象。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種可減少待測(cè)血清樣品中非特異性吸附的樣品處理制劑，尤其是用于蛋白懸浮芯片檢測(cè)的樣品處理中，由此提高蛋白懸浮芯片檢測(cè)的靈敏度，而且該血清樣品處理制劑的原料來(lái)源容易，配制方法簡(jiǎn)便。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供一種用于蛋白懸浮芯片檢測(cè)血清抗體的樣品處理制劑，其特征在于該制劑包括基礎(chǔ)緩沖液、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，其中，該基礎(chǔ)緩沖液的pH值在5.5-9.0之間，聚乙烯醇的質(zhì)量體積百分比含量在0.05%-1.5%(即0.5-15毫克/毫升)之間，聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量體積百分比含量在0.05%-2.0%(即0.5-20毫克/毫升)之間。本發(fā)明所述的血清樣品處理制劑進(jìn)一步含有所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
常用的封閉劑，例如，所述封閉劑可選自BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、賴氨酸等中的一種或多種。本發(fā)明所述的血清樣品處理制劑進(jìn)一步包括所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的常用防腐劑，所述防腐劑例如是:疊氮鈉、硫汞撒或慶大霉素。本發(fā)明的處理制劑中的基礎(chǔ)緩沖液可以為生物化學(xué)中常用的緩沖液或鹽溶液，例如，可選自Tris緩沖液、Hepes緩沖液、磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液等中的一種或幾種的混合氣本發(fā)明所述的樣品處理制劑還可以含有高分子表面活性劑，其選自海藻酸鈉、曱基纖維素、聚維酮等中的一種或多種。本發(fā)明的樣品處理制劑中包括特定含量的高分子表面活性劑聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮，因此可有效的降低血清樣品中的非特異性吸附，使之在經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單處理后適用于懸浮芯片檢測(cè)，從而提高懸浮芯片分析方法檢測(cè)血清樣品的能力。另外，本發(fā)明優(yōu)化了所述制劑中的聚乙烯醇和聚乙烯吡咯酮的濃度、基礎(chǔ)緩沖液pH值，適用于蛋白懸浮芯片的血清檢測(cè)。本發(fā)明的樣品處理制劑與現(xiàn)有樣品處理劑比較，明顯降低了反應(yīng)中的非特異性吸附現(xiàn)象，有效提高了檢測(cè)的敏感度。同時(shí)，本發(fā)明的樣品制劑所采用的組分原料容易獲得，配制簡(jiǎn)便，普通技術(shù)人員在無(wú)特殊設(shè)備的條件下就可以完成對(duì)所述制劑的配制工作。具體實(shí)施例方式本發(fā)明下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步非限定地說(shuō)明本發(fā)明。實(shí)施例1本發(fā)明的用于懸浮芯片血清檢測(cè)的樣品處理制劑，其組成如下1、基礎(chǔ)緩沖液，本實(shí)施例以PB緩沖液作為本發(fā)明的溶液基質(zhì)(即基礎(chǔ)緩沖液)；2、聚乙烯醇0.05%(w/v);3、聚乙烯吡咯烷酮2.0%(w/v);將本發(fā)明的處理制劑的PH值調(diào)整為7.0。將配制好的上述樣品處理制劑用于處理添加了兔抗結(jié)核抗體的正常健康A(chǔ)Ji清樣本。室溫下，取5ia1血清樣本力。入到50ja1的上述處理制劑中(i:io稀釋)，混勻，處理過(guò)的血清樣本采用蛋白懸浮芯片進(jìn)行結(jié)核抗體的^f全測(cè)。結(jié)果顯示，與用pb溶液處理相比較，經(jīng)本實(shí)施例的樣品處理制劑作用后，非特異性吸附的熒光值降低約為ioy。，檢測(cè)靈敏度提高io倍以上。表1、經(jīng)PB溶液處理和本實(shí)施例的樣品處理制劑處理后io份樣本非特異性吸附的熒光值檢測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實(shí)施例2以PBS緩沖液作為本發(fā)明的溶液基質(zhì)(基礎(chǔ)緩沖液)，將其PH值調(diào)整為7.4，配制成含以下成分的溶波聚乙烯醇0.5%(w/v)聚乙烯吡咯烷酮1.0%(w/v)BSA1%(w/v)上述樣本處理制劑用于處理結(jié)核病人的血清樣本，在室溫條件下取5ia1血清樣本加入到50m1處理制劑中(1:10稀釋)，吹打混勻，用于蛋白懸浮芯片結(jié)核抗體的檢測(cè)。結(jié)果顯示，與通用同濃度的Tween-20溶液處理相比較，經(jīng)本實(shí)施例的樣品處理制劑作用后，非特異性吸附可降低15%左右，檢測(cè)靈敏度提高10倍以上。而且，在基質(zhì)中加入BSA更可增加試劑的封閉性。表格2是經(jīng)通用同濃度的Tween-20溶液處理和本實(shí)施例的才羊品處理制劑作用后10份樣本非特異性吸附的焚光值檢測(cè)結(jié)^c表2、通用同濃度的Tween-20溶液處理與本實(shí)施例的樣品處理制劑作用10份樣本非特異性吸附的熒光值檢測(cè)結(jié)果通用同濃度的Tween-20溶液本實(shí)施例的樣品處理制劑處理11028.5869.52319.0280.53192.0158.54650.5563.55273.5229.06194.0155.57293.5235.58137.0125.59205.5163.010234.5210.5實(shí)施例3以PBS緩沖液作為本發(fā)明的溶液基質(zhì)(基礎(chǔ)緩沖液)，將其PH值調(diào)整為9.0,配制成含以下成分的溶液聚乙烯醇0.05%(w/v)聚乙烯吡咯烷酮10%(w/v)酪蛋白2%(w/v)疊氮鈉0.05%(w/v)上述樣本處理制劑用于處理添加兔抗結(jié)核抗體的正常健康A(chǔ)jk清樣本，在室溫條件下取5ia1血清樣本原液加入到50m1處理制劑中(1:7IO稀釋)，吹打混勻，用于蛋白懸浮芯片結(jié)核抗體的^r測(cè)。結(jié)果顯示，與用同濃度的Tween-20溶液處理相比較，經(jīng)本實(shí)施例的樣品處理制劑作用后，非特異性吸附可降低20%左右，檢測(cè)靈敏度提高了10倍，而且在溶a質(zhì)中加入O.05%疊氮鈉可以起到防腐作用，使配制好的溶液不會(huì)變質(zhì)，加入2%的酪蛋白增強(qiáng)試劑的封閉性可有效的降低非特異性吸附>從而提高檢測(cè)的敏感性。表格3是經(jīng)Tween-20溶液處理和本實(shí)施例的樣品處理制劑作用后10份樣本非特異性吸附的焚光值檢測(cè)結(jié)t表3、同濃度的Tween-20溶液處理與本實(shí)施例的樣品處理制劑作用10份樣本非特異性吸附的熒光值;險(xiǎn)測(cè)結(jié)果同濃度的Tween-20溶'液處理本實(shí)施例的樣品處理制劑處理1103.579.02144.0121.53203.5171.54147.0110.55260.0208.5660.557.07141.5109.08256.0224.59311.0230.510353.0270.0實(shí)施例4以PB緩沖液作為本發(fā)明的溶液基質(zhì)(基礎(chǔ)緩沖液)，將其PH值調(diào)整為7.4,配制成含以下成分的溶'氣聚乙烯醇0.05%(w/v)聚乙烯吡咯烷酮1.0%(w/v)BSA2%(w/v)疊氮鈉0.05%(w/v)上述樣本處理制劑用于處理添加兔抗結(jié)核抗體的正常健康人血清8樣本，在室溫條件下取5n1血清樣本加入到50|i1處理制劑中(1:10稀釋)，吹打混勻，用于蛋白懸浮芯片結(jié)核抗體的^r測(cè)。結(jié)果顯示，與同濃度Tween-20和BSA的PB溶液處理比較，經(jīng)本實(shí)施例的樣品處理制劑作用后，非特異性吸附可降低20y。左右，檢測(cè)敏感性提高IO倍左右。而且在溶液基質(zhì)中加入O.05%疊氮鈉可以起到防腐作用，使配制好的溶液不會(huì)變質(zhì)。表格4是經(jīng)Tween-20和BSA的PB溶液和本實(shí)施例的樣品處理制劑作用后10份樣本非特異性吸附的焚光值;險(xiǎn)測(cè)結(jié)表表4、經(jīng)Tween-20和BSA的PB溶液和本實(shí)施例的樣品處理制劑作用后IO份樣本非特異性吸附的熒光值;險(xiǎn)測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>實(shí)施例5以PB緩沖液作為本發(fā)明的溶液基質(zhì)(基礎(chǔ)緩沖液)，將其PH值調(diào)整為8.0，配制成含以下成分的溶'波聚乙烯醇0.05%(w/v)聚乙烯吡咯烷酮1.0%(w/v)BSAl%(w/v)酪蛋白0.2%(w/v)疊氮鈉0.05%(w/v)上述樣本處理制劑用于處理添加兔抗結(jié)核抗體的正常健康人血清樣本，在室溫條件下取5n1血清樣本原液加入到50n1處理制劑中(1:IO稀釋)，吹打混勻，用于蛋白懸浮芯片的^r測(cè)。結(jié)果顯示，與通用的同濃度Tween-20溶液處理比較，經(jīng)本實(shí)施例的樣品處理制劑作用后，非特異性吸附可降低15°/。左右，檢測(cè)靈敏度提高IO倍以上。而且在溶液基質(zhì)中加入O.05%疊氮鈉起到防腐作用，使配制好的溶液不會(huì)變質(zhì)。表格5是經(jīng)Tween-20溶液和本實(shí)施例的樣品處理制劑作用后10份樣本非特異性吸附的焚光值的檢測(cè)結(jié)果。表5、通用同濃度的Tween-20溶液處理與本實(shí)施例的樣品處理制劑作用10份樣本非特異性吸附的熒光值檢測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>綜上所述，本發(fā)明所述的血清樣品處理制劑可以降低血液檢測(cè)中的非特異性吸附，由此提高了檢測(cè)的靈敏度，而且原料易得，方法筒單，結(jié)果準(zhǔn)確，為蛋白懸浮芯片的檢測(cè)技術(shù)作出了突破性的貢亂權(quán)利要求1、一種用于蛋白懸浮芯片血清樣品檢測(cè)的處理制劑，其特征在于該制劑包括基礎(chǔ)緩沖液、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，其中該基礎(chǔ)緩沖液的PH值在5.5-9.0之間，聚乙烯醇的質(zhì)量體積百分比含量是0.05％-1.5％，聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量體積百分比含量是0.05％-2.0％。2.如權(quán)利要求1所述的處理制劑，其特征在于所述制劑還包括封閉劑，所述封閉劑可選自BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、賴氨酸中的一種或多種。3.如權(quán)利要求1所述的樣品處理制劑，其特征在于所述制劑還包括防腐劑，所述防腐劑選自疊氮鈉、硫汞撒或慶大霉素中的一種或多種。4.如權(quán)利要求1所述的樣品處理制劑，其特征在于所述制劑還包括高分子表面活性劑。5.如權(quán)利要求4所述的樣品處理制劑，其特征在于所述高分子表面活性劑可為海藻酸鈉、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、曱基纖維素中的一種或多種。6.如權(quán)利要求1所述的處理制劑，其特征在于所述J^出緩沖液可選自Tris緩沖液、H印es緩沖液、磷酸鹽緩沖液、醋酸鹽緩沖液、碳酸鹽緩沖液等中的一種或幾種的混合-氣全文摘要本發(fā)明公開(kāi)了一種用于液相蛋白懸浮芯片檢測(cè)方法的血清樣本處理制劑，該制劑包括基礎(chǔ)緩沖液、聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，其中，該基礎(chǔ)緩沖液的pH值在5.5-9.0之間，聚乙烯醇的質(zhì)量體積百分比含量在0.05％-1.5％之間，聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量體積百分比含量在0.05％-2％之間。由于本發(fā)明的血清樣本處理制劑中含有高分子表面活性劑聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮，可有效的降低抗體的一些非特異性吸附，降低本底值，提高檢測(cè)的靈敏度。文檔編號(hào)G01N33/543GK101504410SQ20091008025公開(kāi)日2009年8月12日申請(qǐng)日期2009年3月17日優(yōu)先權(quán)日2009年3月17日發(fā)明者孫肖紅,宇楊,楊永莉,靜王,胡孔新申請(qǐng)人:中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院