專利名稱：環(huán)境雌激素的衍生化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬環(huán)境分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種環(huán)境雌激素(雌酮、17 |3 _雌二醇、雌三醇、 17a-乙炔基雌二醇)的衍生化方法，是氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀用于分析此類物質(zhì)的樣品前 處理方法和核心技術(shù)。
背景技術(shù)：
環(huán)境激素(Environmental Hormones)是指環(huán)境中存在的能干擾人類或野生動(dòng)物 內(nèi)分泌系統(tǒng)諸環(huán)節(jié)并對(duì)生殖、神經(jīng)和免疫系統(tǒng)等功能產(chǎn)生影響的外源性化學(xué)物質(zhì)。環(huán)境 激素具有很強(qiáng)的毒性和生物蓄積性，可通過(guò)飲用水和食物鏈富集來(lái)干擾動(dòng)物和人類的內(nèi) 分泌系統(tǒng)，在極低濃度下(ng/L水平)即對(duì)生物體產(chǎn)生嚴(yán)重危害，不僅影響人類健康和持 續(xù)繁衍，也威脅到生物種族的存亡。環(huán)境激素所導(dǎo)致的一系列環(huán)境問(wèn)題已經(jīng)引起了全世 界的高度重視。環(huán)境激素主要包括天然激素(雌激素和雄激素)、人工合成的激素化合物 和具有內(nèi)分泌活性或抗內(nèi)分泌活性的化合物，其中以環(huán)境雌激素危害最大，也是目前國(guó)內(nèi) 外研究的熱點(diǎn)和前沿。本發(fā)明以環(huán)境中普遍存在且危害較大的四種典型環(huán)境雌激素為研 究對(duì)象，包括動(dòng)物和人體內(nèi)天然存在的雌酮(Estrone, El)、17P-雌二醇(強(qiáng)力求偶素) (17P-Estradiol，E2)、雌三醇(Estriol， E3)，人工合成的用于口服避孕藥物的17 a -乙炔 基雌二醇(17 a -ethynylestradoil， EE2)。環(huán)境雌激素El、 E2、 EE2、 E3及其衍生化產(chǎn)物的
化學(xué)結(jié)構(gòu)如下
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雌酮(El)
np-雌二醇(E2)
17a-乙炔基雌二醇(EE2)
雌三醇(E3)
TMS-E1 (C21H30O2Si: MW 342.20)
di-TMS-E2 (C24H4o02Si2: MW 416.26)
di-TMS-EE2 (CMH40O2Si2: MW 440.26)
tri-TMS-E3 (C27H4803Si3: MW 504.29) 這類物質(zhì)具有類固醇環(huán)，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，一旦進(jìn)入環(huán)境和生物體內(nèi)蓄積，就難以分 解，相對(duì)其他環(huán)境激素，有更強(qiáng)的內(nèi)分泌干擾作用，對(duì)生態(tài)環(huán)境及人類健康的影響尤其顯 著，即使環(huán)境濃度在0. lng/L以下也會(huì)對(duì)生物體造成危害。 由于上述此類環(huán)境雌激素在環(huán)境中的濃度極低，通常為ng/L甚至pg/L級(jí)，以及 樣品中復(fù)雜基質(zhì)的干擾，使得其監(jiān)測(cè)難度較大，目前就世界范圍來(lái)說(shuō)還處于起步階段，沒(méi)有 現(xiàn)成的標(biāo)準(zhǔn)分析方法。因此，開(kāi)發(fā)和研究具有極高靈敏度和選擇性的低濃度環(huán)境雌激素的 分析檢測(cè)技術(shù)具有重要意義。環(huán)境樣品中環(huán)境雌激素的檢測(cè)一般包括提取、凈化、濃縮、衍 生化等前處理步驟和儀器分析，通過(guò)固相萃取或固相微萃取，樣品的提取、凈化、濃縮可一 步完成。目前最常用的儀器分析方法為氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(GC-MS)和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法(LC-MS)，然而LC-MS儀器價(jià)格較為昂貴，限制了其廣泛使用，GC-MS以其很好的檢 測(cè)靈敏度和相對(duì)較低的運(yùn)行成本一直受到環(huán)境中痕量有機(jī)污染物分析的青睞。但是環(huán)境雌 激素基本上都含有羥基官能團(tuán)，極性較大，直接用GC-MS分析，在氣相色譜柱內(nèi)容易產(chǎn)生吸 附，從而使檢出值比實(shí)際值偏低，靈敏度下降，不適合痕量分析，需通過(guò)衍生化轉(zhuǎn)化成極性 較低、更易揮發(fā)且熱穩(wěn)定性好的衍生物，從而提高檢測(cè)靈敏度和改善色譜峰形。因此環(huán)境雌 激素衍生化技術(shù)的發(fā)展，成為GC-MS應(yīng)用于此類物質(zhì)分析檢測(cè)的核心技術(shù)。
目前，關(guān)于環(huán)境雌激素的衍生化在國(guó)內(nèi)尚無(wú)專利。在國(guó)外論文報(bào)道的各 種衍生化試劑中，以N， 0-雙三甲基硅基三氟乙酰胺(N， 0-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide， BSTFA)最為常用。A. Shareef等(A. Shareef ， M. J. Angove， J. D.Wells. Journal of Chromatography A， 2006， 1108 :121-128)以BSTFA為衍生化試 劑，以叔丁基二甲基氯硅烷(Tert-butyldimethylsilyl-chlorosilane， TMCS)為催化劑， 在45-105t:范圍內(nèi)研究了衍生化溫度對(duì)于El和EE2衍生化的影響，指出最佳衍生化溫度 為75-80°C。 A. Hibberd等(A. Hibberd， K.Maskaoui, Z. Zhang ， et al. Talanta， 2009， 77 : 1315-1321)在檢測(cè)環(huán)境水樣品和沉積物樣品中環(huán)境雌激素時(shí)，通過(guò)加入50iiLBSTFA(含 催化劑1 % TMCS)和50 ii L吡啶，在60-70。C加熱30min的條件下對(duì)El、 E2、 EE2進(jìn)行了衍 生化，并用GC-MS檢測(cè)了其含量。M. Esperanza等(M. Esperanza， M. T. Suidan， R. M. Vega， et al. Chemosphere，2007，66 :1535-1544)在檢測(cè)城市污水處理廠水樣品和固體樣品中環(huán) 境雌激素時(shí)，通過(guò)加入BSTFA(含催化劑10% TMCS)和吡啶，在7(TC加熱15h的條件下對(duì) El、 E2、 EE2、 E3進(jìn)行了衍生化，然后用GC-MS檢測(cè)了其含量。以上研究表明，目前以BSTFA 為衍生化試劑的E1、E2、EE2、E3的衍生化，基本上都是在加熱的條件下進(jìn)行，并且需要加入 催化劑，實(shí)驗(yàn)操作較為繁瑣和費(fèi)時(shí)。Y. G. Zuo等(Y. G. Zuo， K. Zhang， Y. J. Lin. Journal of Chromatography A，2007，1148 :211-218)探討了微波輔助加熱條件下環(huán)境雌激素El、 E2、 EE2、E3的衍生化，雖然可以把衍生化反應(yīng)時(shí)間縮短到lmin之內(nèi)，但是由于引入了微波輔助 加熱技術(shù)，進(jìn)一步增加了實(shí)驗(yàn)步驟，使衍生化過(guò)程變得更加復(fù)雜。 總之，當(dāng)前環(huán)境雌激素的衍生化方法存在的不足是衍生化反應(yīng)需要在加熱的條 件下進(jìn)行，加熱溫度為60-8(TC，加熱時(shí)間為30min-15h，并且需要加入催化劑，這使得衍生 化實(shí)驗(yàn)?zāi)芎暮统杀旧仙?，操作步驟繁瑣，實(shí)驗(yàn)時(shí)間較長(zhǎng)，在實(shí)際環(huán)境樣品檢測(cè)中，加大了樣 品流失，降低了檢測(cè)準(zhǔn)確度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對(duì)目前環(huán)境雌激素衍生化方法中存在的不足，提出一種衍生 化新方法。該方法具有實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、衍生化效果好的優(yōu)點(diǎn)。 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明在較低的溫度下(20-50°C ，常溫條件下亦可)，以N， 0-雙 三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)為衍生化試劑，對(duì)四種環(huán)境雌激素雌酮(El)、17P-雌二醇 (E2)、雌三醇(E3)、17a-乙炔基雌二醇(EE2)進(jìn)行了衍生化，而且無(wú)需加入催化劑，衍生化 時(shí)間縮短為3min-8min，大大簡(jiǎn)化了衍生化實(shí)驗(yàn)步驟，縮短了反應(yīng)時(shí)間，降低了能耗和成本， 減少了樣品流失。采用本發(fā)明的方法進(jìn)行衍生化后環(huán)境雌激素樣品，經(jīng)氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián) 用儀(GC-MS)檢測(cè)，可以將四種環(huán)境雌激素E1、 E2、 EE2、 E3同時(shí)衍生化，無(wú)副產(chǎn)物生成，各 衍生化產(chǎn)物的線性相關(guān)性良好，儀器檢出限可達(dá)0. 5pg/ ii L。
環(huán)境雌激素標(biāo)準(zhǔn)品El、 E2、 EE2、 E3準(zhǔn)確稱量后溶于甲醇中，配成一定濃度的標(biāo)準(zhǔn) 混合溶液。由于分析樣品的量通常為痕量(pg級(jí))，分析天平的精度難以達(dá)到要求，所以必 須溶于甲醇后稀釋一定倍數(shù)以利于準(zhǔn)確定量。實(shí)際使用時(shí)，為了避免甲醇溶劑的干擾，使 衍生化反應(yīng)更加快速、完全，本發(fā)明將含有一定濃度E1、E2、EE2、E3的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液使用高 純氮?dú)饩徛蹈?，另外，由于高純氮?dú)獾谋Ｗo(hù)，可以減少物質(zhì)的損失。然后在一定的反應(yīng)溫 度和時(shí)間下，往吹干的標(biāo)準(zhǔn)品中加入一定的BSTFA和妣啶進(jìn)行衍生化，BSTFA的加入量要 合適，使用太少，會(huì)使衍生化反應(yīng)不完全，得不到良好的衍生化效果，而太多會(huì)對(duì)色譜柱帶 來(lái)傷害，縮短其使用壽命。在與BSTFA的衍生化過(guò)程中加入一定量的吡啶，不僅可以阻止 EE2衍生化副產(chǎn)物TMS-E1和mono-TMS-EE2的生成，還可以起到溶劑的作用，有利于待測(cè)物 與BSTFA的充分反應(yīng)，消除色譜圖中出現(xiàn)的小雜峰。為了準(zhǔn)確定量，并且能減少衍生化試劑 對(duì)色譜柱的傷害，衍生化反應(yīng)完成后須吹干加入一定量高純有機(jī)溶劑，然后取樣注入GC-MS 檢測(cè)。 上述環(huán)境雌激素標(biāo)準(zhǔn)品E1 、E2、EE2、E3為固體，純度為97 %以上，溶于甲醇中配成 標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，密封后置于-2(TC以下保存，甲醇為色譜純。
上述高純氮?dú)饧兌葹?9. 99%以上。 上述BSTFA級(jí)別為衍生化級(jí)，純度大于98% ，吡啶為色譜純。 上述進(jìn)樣溶劑為色譜純級(jí)高純有機(jī)溶劑，可以是甲醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯 或正己烷。 上述GC-MS所用色譜柱為Supelco SPB _5或者J&W Scientific DB-5MS毛細(xì)管 柱。 本發(fā)明具體包括如下步驟 1、第一步，首先取100iiL含有一定濃度(lpg/iiL-100ng/iiL)El、 E2、 EE2、 E3的 標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于1. 5mL色譜瓶中，將色譜瓶放入氮吹儀，通入高純氮?dú)饩徛蹈伞?
使用高純氮?dú)鈱?biāo)準(zhǔn)混合溶液在氮吹儀中吹干時(shí)無(wú)需加熱，常溫條件下即可。
2、第二步，加入一定量的BSTFA和吡啶，振蕩混合后，置于常溫環(huán)境中或放入恒溫 加熱箱，在室溫(20°C )-5(TC下反應(yīng)3min-8min，得到衍生化產(chǎn)物。 反應(yīng)溫度比較低且較為寬泛，為室溫(20°C )-50°C ;反應(yīng)時(shí)間比較短，為 3min-8min ;加熱方式是恒溫干燥加熱。振蕩混合時(shí)間為20s-60s。 BSTFA用量為15ii L-50ii L ;妣啶用量為30 y L-60 y L ;BSTFA和妣啶的用量比例 沒(méi)有嚴(yán)格的規(guī)定。 3、第三步，取出冷卻至室溫，放入氮吹儀中，通入高純氮?dú)饩徛蹈?，加?0 ii L 進(jìn)樣溶劑和10 y L濃度為lng/ y L的內(nèi)標(biāo)(雄烷)，振蕩混合后，取1 y L注入GC-MS分析。
在氮吹儀中吹干時(shí)無(wú)需加熱，常溫條件下即可。振蕩混合時(shí)間為20s-60s。
El 、 E2、 EE2、 E3的衍生化產(chǎn)物分別為T(mén)MS-E1 (雌酮單羥基衍生化產(chǎn)物)、 di-TMS-E2 (17 P -雌二醇雙羥基衍生化產(chǎn)物)、di-TMS-EE2 (17 a -乙炔基雌二醇雙羥基衍 生化產(chǎn)物)、tri-TMS-E3 (雌三醇三羥基衍生化產(chǎn)物)。 GC以氦氣為載氣，流速為lmL/min ;不分流方式進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度為28(TC，進(jìn)樣體
積1PL;升溫程序如下
612°C/min J L'min
50'C(2min) 260。C(8min) 280'C(5min) MS接口溫度為280°C ，傳輸線溫度為300°C ，離子源溫度為250°C ，電離方式為電子 轟擊電離，即EI，電子轟擊能量為70eV，溶劑延遲時(shí)間為12min。 GC-MS以全掃描模式定性 (掃描范圍m/z 50 600)、選擇離子掃描模式(即SIM模式)定量；在SIM模式下，TMS-E1、 di-TMS-E2、di-TMS-EE2、tri-TMS-E3分別選取m/z342、327、285， m/z416、401、285， m/z440、 425、285， m/z504、489、285作為特征碎片離子，掃描時(shí)間為0. 5s_0. 7s。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn) (1)衍生化反應(yīng)溫度比較低且較為寬泛，常溫條件下(20°C )亦可，由于可省去加 熱步驟，使衍生化實(shí)驗(yàn)變得簡(jiǎn)便省事，降低了能耗和成本； (2)衍生化反應(yīng)時(shí)間較短，為3min-8min，整個(gè)衍生化實(shí)驗(yàn)操作可在10min內(nèi)完成， 減少了樣品流失，提高了檢測(cè)效率和準(zhǔn)確度； (3)無(wú)需加入催化劑，進(jìn)一步簡(jiǎn)化了衍生化反應(yīng)體系，降低了實(shí)驗(yàn)成本；
(4)在上述條件下，本發(fā)明可以將四種環(huán)境雌激素El、 E2、 EE2、 E3同時(shí)衍生化，衍 生化產(chǎn)物分別為T(mén)MS-El、di-TMS-E2、di-TMS-EE2、tri-TMS-E3，無(wú)副產(chǎn)物生成。各衍生化產(chǎn) 物的線性相關(guān)性良好，為0. 99462-0. 99942，線性范圍為lpg/P L-100ng/y L，儀器檢出限 可達(dá)0. 5pg/u L。 本發(fā)明可以應(yīng)用于水體、底泥、生物等樣品中環(huán)境雌激素El、 E2、 EE2、 E3的GC-MS 檢測(cè)。


圖1是環(huán)境雌激素E1、E2、EE2、E3未衍生化時(shí)GC-MS檢測(cè)的全掃描色譜圖(濃度 為10ng/ ii L)。 圖2是環(huán)境雌激素El 、 E2、 EE2、 E3 (濃度為10ng/ y L)衍生化產(chǎn)物TMS-E1 、 di-TMS-E2、 di-TMS-EE2、 tri_TMS_E3經(jīng)GC-MS檢測(cè)的全掃描色譜圖。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖和實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容并不限于此。
實(shí)施例1 : 1、首先取100iiL含有一定濃度(10pg/iiL)El、 E2、 EE2、 E3的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于 1. 5mL色譜瓶中，將色譜瓶放入氮吹儀，通入高純氮?dú)饩徛蹈伞?2、加入15iiLBSTFA和30iiL吡啶，振蕩混合后，置于常溫環(huán)境中(20°C )反應(yīng) 3min。 3、取出冷卻至室溫，放入氮吹儀中，通入高純氮?dú)饩徛蹈?，加?0ii L進(jìn)樣溶劑 和10 ii L濃度為lng/ y L的內(nèi)標(biāo)(雄烷)，振蕩混合后，取1 y L注入GC-MS分析(SIM模 式)。 經(jīng)檢測(cè)，El、 E2、 EE2、 E3已被全部衍生化，衍生化產(chǎn)物分別為T(mén)MS-E1、 di-TMS-E2、 di-TMS-EE2、tri-TMS-E3，無(wú)副產(chǎn)物生成，RRF(相對(duì)響應(yīng)因子RelativeResponse Factor,待測(cè)物峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值)分別為1. 22、 1. 09、0. 09、0. 12。
實(shí)施例2 : 1、首先取100iiL含有一定濃度(10ng/iiL)El、 E2、 EE2、 E3的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于 1. 5mL色譜瓶中，將色譜瓶放入氮吹儀，通入高純氮?dú)饩徛蹈伞?2、加入30iiLBSTFA和50iiL吡啶，振蕩混合后，置于常溫環(huán)境中(20°C )反應(yīng) 5min。 3、取出冷卻至室溫，放入氮吹儀中，通入高純氮?dú)饩徛蹈?，加?0ii L進(jìn)樣溶劑 和10 ii L濃度為lng/ y L的內(nèi)標(biāo)(雄烷)，振蕩混合后，取1 y L注入GC-MS分析(SIM模 式)。 經(jīng)檢測(cè)，El、 E2、 EE2、 E3已被全部衍生化，衍生化產(chǎn)物分別為T(mén)MS-E1、 di-TMS_E2、 di-TMS-EE2、 tri_TMS_E3，無(wú)副產(chǎn)物生成，RRF分別為1157. 76、 1074. 82、 146. 65、 187. 13。
實(shí)施例3 : 1、首先取100 ii L含有一定濃度(8pg/ ii L)E1、E2、EE2、E3的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于1. 5mL 色譜瓶中，將色譜瓶放入氮吹儀，通入高純氮?dú)饩徛蹈伞?2、加入15iiLBSTFA和20 ii L吡啶，振蕩混合后，放入恒溫加熱箱，在30°C反應(yīng) 3min。 3、取出冷卻至室溫，放入氮吹儀中，通入高純氮?dú)饩徛蹈?，加?0ii L進(jìn)樣溶劑 和10 ii L濃度為lng/ y L的內(nèi)標(biāo)(雄烷)，振蕩混合后，取1 y L注入GC-MS分析(SIM模 式)。 經(jīng)檢測(cè)，El、 E2、 EE2、 E3已被全部衍生化，衍生化產(chǎn)物分別為T(mén)MS-E1、 di-TMS-E2、 di-TMS-EE2、 tri-TMS-E3，無(wú)副產(chǎn)物生成，RRF分別為0. 99、0. 88、0. 06、0. 08。
實(shí)施例4 : 1、首先取100iiL含有一定濃度(83pg/iiL)El、 E2、 EE2、 E3的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于 1. 5mL色譜瓶中，將色譜瓶放入氮吹儀，通入高純氮?dú)饩徛蹈伞?2、加入30 ii LBSTFA禾P 50 ii L吡啶，振蕩混合后，放入恒溫加熱箱，在30°C反應(yīng) 5min。 3、取出冷卻至室溫，放入氮吹儀中，通入高純氮?dú)饩徛蹈?，加?0ii L進(jìn)樣溶劑 和10 ii L濃度為lng/ y L的內(nèi)標(biāo)(雄烷)，振蕩混合后，取1 y L注入GC-MS分析(SIM模 式)。 經(jīng)檢測(cè)，El、 E2、 EE2、 E3已被全部衍生化，衍生化產(chǎn)物分別為T(mén)MS-E1、 di-TMS-E2、 di-TMS-EE2、 tri-TMS-E3，無(wú)副產(chǎn)物生成，RRF分別為9. 67、8. 94、 1. 16、 1. 49。
實(shí)施例5 : 1、首先取100ii L含有一定濃度(365pg/ii L)E1、 E2、 EE2、 E3的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于 1. 5mL色譜瓶中，將色譜瓶放入氮吹儀，通入高純氮?dú)饩徛蹈伞?2、加入50 ii LBSTFA禾P 60 ii L吡啶，振蕩混合后，放入恒溫加熱箱，在50°C反應(yīng) 8min。 3、取出冷卻至室溫，放入氮吹儀中，通入高純氮?dú)饩徛蹈桑尤?0ii L進(jìn)樣溶劑 和10 ii L濃度為lng/ y L的內(nèi)標(biāo)(雄烷)，振蕩混合后，取1 y L注入GC-MS分析(SIM模 式)。
8
經(jīng)檢測(cè)，El、 E2、 EE2、 E3已被全部衍生化，衍生化產(chǎn)物分別為T(mén)MS-E1、 di-TMS-E2、 di-TMS-EE2、 tri-TMS-E3，無(wú)副產(chǎn)物生成，RRF分別為42. 32、39. 25、5. 30、6. 77。
權(quán)利要求
環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于包括如下步驟(1)首先取100μL含有雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔基雌二醇的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于1.5mL色譜瓶中，將色譜瓶放入氮吹儀，通入高純氮?dú)饩徛蹈桑?2)加入N，O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺和吡啶，振蕩混合后，置于常溫環(huán)境中或放入恒溫加熱箱，在20℃～50℃下反應(yīng)3min～8min，得到衍生化產(chǎn)物；(3)取出冷卻至室溫，放入氮吹儀中，通入高純氮?dú)饩徛蹈?，加?0μL進(jìn)樣溶劑和10μL濃度為1ng/μL的內(nèi)標(biāo)即雄烷，振蕩混合后，取1μL注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。
2. 如權(quán)利要求l所述的環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于所述步驟(1)中，環(huán)境 雌激素雌酮、17 3-雌二醇、雌三醇、17 0-乙炔基雌二醇分別用El、 E2、 E3、 EE2表示，El、 E2、 E3、 EE2為固體，純度為97 %以上，溶于甲醇中配成標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，密封后置于_20°C 以下保存，甲醇為色譜純，含有雌酮、17|3-雌二醇、雌三醇、17 0-乙炔基雌二醇為lpg/11 H00ng/ ii L。
3. 如權(quán)利要求1所述的環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于所述步驟(1)和(3) 中，高純氮?dú)饧兌葹?9. 99%以上；在氮吹儀中吹干時(shí)無(wú)需加熱，常溫條件下即可。
4. 如權(quán)利要求1所述的環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于所述步驟(2)中，N， 0_雙三甲基硅基三氟乙酰胺級(jí)別為衍生化級(jí)，純度大于98%，用量為15iiL-50iiL;吡啶為 色譜純，用量為30ii L-60ii L。
5. 如權(quán)利要求l所述的環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于所述步驟(2)中，反應(yīng) 溫度為20°C 50°C ;反應(yīng)時(shí)間比較短，為3min 8min ;加熱方式是恒溫干燥加熱，振蕩混 合時(shí)間為20s 60s。
6. 如權(quán)利要求1所述的環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于所述步驟(3)中，進(jìn)樣 溶劑為色譜純級(jí)高純有機(jī)溶劑，可以是甲醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯或正己烷；振蕩混合 時(shí)間為20s 60s。
7. 如權(quán)利要求2所述的環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于所述步驟(3)中，El、 E2、 EE2、 E3的衍生化產(chǎn)物分別為T(mén)MS-E1 (雌酮單羥基衍生化產(chǎn)物)、di-TMS-E2 (17 P -雌 二醇雙羥基衍生化產(chǎn)物)、di-TMS-EE2 (17 a -乙炔基雌二醇雙羥基衍生化產(chǎn)物)、 tri-TMS-E3 (雌三醇三羥基衍生化產(chǎn)物)。
8. 如權(quán)利要求1所述的環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于所述步驟(3)中，氣相 色譜_質(zhì)譜聯(lián)用儀所用色譜柱為Supelco SPB -5或者J&WScientif ic DB-5MS毛細(xì)管柱； 氣相色譜儀以氦氣為載氣，流速為lmL/min ;不分流方式進(jìn)樣，進(jìn)樣口溫度為28(TC，進(jìn)樣體 積1PL;升溫程序如下<formula>formula see original document page 2</formula>
9. 如權(quán)利要求1所述的環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于所述步驟(3)中，質(zhì)譜儀接口溫度為28(TC，傳輸線溫度為30(TC，離子源溫度為250°C，電離方式為電子轟擊電 離，即EI，電子轟擊能量為70eV，溶劑延遲時(shí)間為12min。
10. 如權(quán)利要求l所述的環(huán)境雌激素的衍生化方法，其特征在于所述步驟(3)中，氣 相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀以全掃描模式定性，掃描范圍m/z 50 600，定量采用選擇離子掃描模式，即SIM模式；在SIM模式下，TMS-El、 di-TMS-E2、 di-TMS_EE2、 tri_TMS_E3分別選取m/ z342、327、285， m/z416、401、285， m/z440、425、285， m/z504、489、285作為特征碎片離子，掃 描時(shí)間為0. 5s-0. 7s。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了環(huán)境雌激素(雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔基雌二醇)的衍生化方法，是氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)用于分析此類物質(zhì)的樣品前處理方法和核心技術(shù)。其步驟是首先取含有環(huán)境雌激素的標(biāo)準(zhǔn)混合溶液于常溫下通入高純氮?dú)獯蹈?，加入衍生化試劑N，O-雙三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)和吡啶，在室溫(20℃)-50℃下反應(yīng)，得到衍生化產(chǎn)物，吹干后加入進(jìn)樣溶劑和內(nèi)標(biāo)，取樣分析。該方法具有實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、能耗和成本低的優(yōu)點(diǎn)，可以將以上四種環(huán)境雌激素同時(shí)衍生化，無(wú)副產(chǎn)物生成，各衍生化產(chǎn)物的線性相關(guān)性良好，儀器檢出限可達(dá)0.5pg/μL。本發(fā)明可應(yīng)用于水體、底泥、生物等樣品中環(huán)境雌激素的GC-MS檢測(cè)。
文檔編號(hào)G01N30/00GK101696962SQ20091009509
公開(kāi)日2010年4月21日 申請(qǐng)日期2009年10月26日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月26日
發(fā)明者劉晶靚, 方鍇, 潘學(xué)軍, 王宇, 高建培, 黃斌 申請(qǐng)人:昆明理工大學(xué);