專利名稱：一種檢測尿囊素的關(guān)-開型熒光分子探針的設(shè)計(jì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物活性分子的熒光化學(xué)傳感領(lǐng)域，特別涉及一種對尿囊素具有 關(guān)-開(OfT-On)型熒光響應(yīng)的分子探針的設(shè)計(jì)方法。
背景技術(shù)：
尿囊素又名1-脲基間二氮雜戊烷_2，4- 二酮或5-脲基海因，具有促進(jìn)細(xì)胞生長、 加快傷口愈合、軟化角質(zhì)蛋白等生理功能，臨床上主要用于皮膚干燥皸裂、手部皮炎、胃及 十二指腸潰瘍等的治療。尿囊素能與許多物質(zhì)形成金屬鹽或加合物，既保持了尿囊素原有 的功效，又具有加合物的固有特性，因此，尿囊素也用作美容、護(hù)膚等化妝品的特效添加劑。 同時(shí)，尿囊素在農(nóng)業(yè)上又是優(yōu)良的植物生長調(diào)節(jié)劑，可刺激植物生長，對一些農(nóng)作物具有顯 著的固果、早熟和增產(chǎn)作用。尿囊素屬咪唑類雜環(huán)化合物，目前已開發(fā)出的檢測方法有分光光度法、薄層層析 法、紅外光譜法和高效液相色譜法(紫外檢測器)等。但由于其紫外吸收較弱，溶液中存 在酮式與烯醇式兩種相互轉(zhuǎn)換的構(gòu)型，這種平衡的存在會導(dǎo)致檢測靈敏度下降，且測定結(jié) 果不穩(wěn)定，因而，迄今高效液相色譜法尚未收載入藥品的檢測標(biāo)準(zhǔn)(秦雪梅等，藥物分析雜 志，2008，Vol28 No. 10,1648) 0所以，開發(fā)選擇性檢測尿囊素的新技術(shù)有著顯著的實(shí)用價(jià) 值。半導(dǎo)體量子點(diǎn)(QDs)的尺寸效應(yīng)使其具有獨(dú)特的光學(xué)特性。自從水相合成QDs的 諸多方法報(bào)道以來，QDs在免疫生物學(xué)和臨床檢驗(yàn)學(xué)等研究中用作生物分子的熒光標(biāo)記物 即熒光分子探針，其潛在的應(yīng)用價(jià)值已引起科學(xué)工作者的廣泛關(guān)注。與傳統(tǒng)免疫熒光分析 法所采用的羅丹明6G或其它有機(jī)染料分子探針相比較，用QDs特別是經(jīng)過表面結(jié)構(gòu)修飾、 調(diào)控或功能化的QDs作熒光探針，具有選擇性強(qiáng)、靈敏度高、對生物體系無明顯侵害等優(yōu) 勢。同時(shí)，還可消除有機(jī)熒光染料分子因發(fā)生光漂白和光降解現(xiàn)象所引起的分析體系不穩(wěn) 定等問題。水相合成的II-VI族QDs的熒光常被一些外部引入的過渡金屬離子所猝滅，而咪 唑分子中的胺氮原子又能與某些特定的金屬離子結(jié)合使QDs的熒光得到一定程度的恢復(fù)。 基于這種思想，本發(fā)明利用過渡金屬離子作猝滅劑，尿囊素通過與金屬離子的作用使QDs 熒光恢復(fù)的原理，設(shè)計(jì)出對尿囊素產(chǎn)生熒光信號響應(yīng)的Off-On型熒光分子探針，并以此建 立尿囊素的靈敏檢測方法。所以，本發(fā)明所涉及的設(shè)計(jì)思想對咪唑類雜環(huán)藥物檢測用熒光 探針的開發(fā)具有一定的學(xué)術(shù)研究和應(yīng)用推廣價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種對尿囊素產(chǎn)生選擇性響應(yīng)的OfT-On型熒光探針的設(shè) 計(jì)策略。本發(fā)明所提供的一種檢驗(yàn)?zāi)蚰宜氐腛fT-On型熒光分子探針的設(shè)計(jì)與檢驗(yàn)方法， 是選擇N-乙酰-半胱氨酸(Ac-Cys)包覆CdTe量子點(diǎn)(CdTeOAc-Cys QDs)為本底熒光源QDs,以Fe3+作CdTeOAc-Cys QDs熒光猝滅劑，并通過以下步驟來實(shí)現(xiàn)(1)在50mL三口瓶中加入0. Ig 二水檸檬酸鈉，按Cd Ac-Cys Te的摩爾比為 1 2.0 (0. 2-0. 25)的比例加入Ac-Cys、CdCl2溶液和一定量的水，攪拌下溶解。在密閉 條件下通高純氮保護(hù)30min后，先后用注射器注入K2TeO3和KBH4溶液，加熱回流，在密閉或 敞口條件下反應(yīng)2. 5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，用無水乙醇將CdTeOAc-Cys QDs沉淀提純，并重新 分散到超純水中。(2)分別移取適量CdTeOAc-Cys QDs溶液于一組比色管中，各加入一定量Fe3+，室 溫下靜置15-20min，分別加入不同濃度的尿囊素，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下測定CdTeOAc-Cys QDs 的熒光恢復(fù)值(AF)。根據(jù)AF與尿囊素濃度的定量關(guān)系，建立CdTeOAc-Cys QDs熒光Off-On 型分子探針檢驗(yàn)?zāi)蚰宜氐姆椒ā?br>

圖1為不同濃度的Fe3+對1. lX10-7mol/L CdTeiAc-Cys QDs熒光發(fā)射的猝滅曲 線；其中1 — 7 所對應(yīng)的 Fe3+的濃度(Xl(T7mol/L)依次為:0· 5、1. 0、2· 5、3· 0、4· 0、5. 0 和 6. 0。圖2為在3. 0Xl(Tmol/L Fe3+存在下，不同濃度尿囊素對1. 1 X 10_7mol/LCdTe@ Ac-Cys QDs熒光恢復(fù)曲線；其中1 — 5所對應(yīng)的尿囊素的濃度(X10_9mol/L)依次為0. 5、
2.0,10. 0,20. 0 和 30. 0。圖3為尿囊素對不同金屬離子猝滅CdTeOAc-Cys QDs熒光后的恢復(fù)性能比較。 其中金屬離子的濃度均為3.0X10_7mol/L;QDS濃度1. 1 X 10_7mol/L，尿囊素的濃度均為
3.0Xl(T8mol/L。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例(I)CdTeOAc-Cys QDs 的合成按照Cd Ac-Cys Te = 1 2. 0 (0.2-0.25)的摩爾比，分別稱取 0. 0656g Ac-Cys (0. 4mmol)和0. Ig 二水檸檬酸鈉加到50mL三口瓶中，加45mL純水?dāng)嚢柘氯芙?，再?入0. 2mol/L CdCl2溶液lmL。在全密封的條件下，通入高純氮保護(hù)30min后，先后用注射器 注入0. 04mol/L K2TeO3溶液ImL和含0. 05g的KBH4 (0. 05g KBH4用少量水溶解)溶液，加熱 至回流，在密閉或敞口條件下反應(yīng)2. 5小時(shí)后，自然冷卻至室溫。反應(yīng)結(jié)束后，用無水乙醇 將CdTeOAc-Cys QDs沉淀提純，再重新分散到超純水中，該QDs的濃度為7. 6 X 10_6mol/L， 使用時(shí)稀釋10倍。(2) Off-On型探針的熒光測定分別移取0. 15mL CdTeiAc-Cys QDs使用液于一組IOmL比色管中，各加入0. 3mL 1.0X10_5mol/L Fe3+使用液，室溫下靜置15-20min后，配制尿囊素的標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，在最佳 實(shí)驗(yàn)條件下測定不同濃度尿囊素對CdTeOAc-Cys QDs的熒光恢復(fù)值(Δ F)。在試驗(yàn)的濃度 范圍內(nèi)，AF與尿囊素濃度存在良好的線性關(guān)系，R2 = 0.99。
權(quán)利要求
一種檢測尿囊素的關(guān) 開(Off On)型熒光分子探針的設(shè)計(jì)，其特征在于利用金屬離子作猝滅劑將量子點(diǎn)(QDs)的本底熒光猝滅，尿囊素通過與金屬離子的作用使QDs的熒光得以恢復(fù)的原理來建立尿囊素的檢測方法。
2.權(quán)利要求1所述的一種檢測尿囊素的OfT-On型熒光分子探針的設(shè)計(jì)，其特征在于選 擇的QDs為水相合成的N-乙酰-半胱氨酸(Ac-Cys)包覆CdTe量子點(diǎn)(CdTeOAc-Cys QDs)。
3.權(quán)利要求1所述的一種檢測尿囊素的OfT-On型熒光分子探針的設(shè)計(jì)，其特征在于所 選擇的金屬離子是一種過渡金屬離子。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的CdTeOAc-CysQDs的合成，其特征在于碲源為亞碲酸鈉 (Na2TeO3)或亞碲酸鉀(K2TeO3)中的任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的CdTeOAc-CysQDs，其特征在于Cd Ac-Cys Te的摩爾比 為 1 2. 0 (0. 2-0. 25)。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的過渡金屬離子，其特征在于適用的金屬離子為Fe3+。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測尿囊素的關(guān)-開型熒光分子探針的設(shè)計(jì)。本發(fā)明所提供的關(guān)-開型熒光分子探針的設(shè)計(jì)是利用過渡金屬離子作猝滅劑，尿囊素通過與金屬離子的作用使N-乙酰-半胱氨酸包覆CdTe量子點(diǎn)熒光恢復(fù)的原理，設(shè)計(jì)出對尿囊素產(chǎn)生熒光信號響應(yīng)的關(guān)-開型熒光分子探針，并以此建立尿囊素的檢測方法。
文檔編號G01N21/64GK101986141SQ200910154000
公開日2011年3月16日 申請日期2009年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月30日
發(fā)明者李芳 , 楊燕, 許丹萍, 賈文平, 韓得滿 申請人:賈文平;韓得滿;李芳;楊燕;許丹萍