專利名稱：一種用于預(yù)測(cè)干擾素治療丙型肝炎療效的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種應(yīng)用免疫組化技術(shù)，通過檢查丙型肝炎病人肝組織內(nèi)一些干擾素 敏感基因(如ISG15， MxA等)在不同細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)，對(duì)丙肝病人治療開始前對(duì)干擾素治療 是否有效(敏感)做出預(yù)測(cè)。治療前的療效預(yù)測(cè)屬個(gè)體化醫(yī)療(personalized medicine) 領(lǐng)域，是當(dāng)今醫(yī)學(xué)發(fā)展的必然方向。療效預(yù)測(cè)病人對(duì)特定治療有效，可以極大的堅(jiān)定病人堅(jiān) 持全程足量用藥的信心，從而提高治愈率；如果預(yù)測(cè)無效，可以幫助醫(yī)生更好的選擇其它治 療方案，達(dá)到降低治療成本，更加有效的管理病人的目的。


圖1 :對(duì)干擾素治療有效和無效的丙肝病人肝臟中ISG15蛋白表達(dá)的細(xì)胞特異性 (免疫組化檢測(cè)結(jié)果) A.對(duì)干擾素治療無效病人肝臟組織內(nèi)ISG15蛋白的表達(dá)主要集中在肝細(xì)胞內(nèi) (50X) B.對(duì)干擾素治療無效病人肝臟組織內(nèi)ISG15蛋白的表達(dá)主要集中在肝細(xì)胞內(nèi) (400X) C.對(duì)干擾素治療有效病人肝臟組織內(nèi)ISG15蛋白的表達(dá)主要集中在巨噬細(xì)胞內(nèi) (50X) D.對(duì)干擾素治療有效病人肝臟組織內(nèi)ISG15蛋白的表達(dá)主要集中在巨噬細(xì)胞內(nèi) (400X) 圖2 :對(duì)干擾素治療有效和無效的丙肝病人肝臟中MxA蛋白表達(dá)的細(xì)胞特異性 (免疫組化檢測(cè)結(jié)果) A.對(duì)干擾素治療無效病人肝臟組織內(nèi)MxA蛋白的表達(dá)主要集中在肝細(xì)胞內(nèi)(50X) B.對(duì)干擾素治療無效病人肝臟組織內(nèi)MxA蛋白的表達(dá)主要集中在肝細(xì)胞內(nèi) (400X) C.對(duì)干擾素治療有效病人肝臟組織內(nèi)MxA蛋白的表達(dá)主要集中在巨噬細(xì)胞內(nèi) (50X) D.對(duì)干擾素治療有效病人肝臟組織內(nèi)MxA蛋白的表達(dá)主要集中在巨噬細(xì)胞內(nèi) (400X) 圖3 :巨噬細(xì)胞特異性染色(CD68) 用針對(duì)巨噬細(xì)胞表面特異性抗原CD68的抗體作為第一抗體來證明在對(duì)治療有效的病人肝臟組織中表達(dá)ISG15蛋白的細(xì)胞為巨噬細(xì)胞 A.對(duì)干擾素治療有效病人肝臟組織內(nèi)ISG15蛋白的典型表達(dá)細(xì)胞(400X) B.對(duì)干擾素治療有效病人肝臟組織內(nèi)ISG15蛋白表達(dá)細(xì)胞不是星型膠質(zhì)細(xì)胞
(stellate cells, smooth muscle actin， SMA染色) C.對(duì)干擾素治療有效病人肝臟組織內(nèi)ISG15蛋白表達(dá)細(xì)胞是巨噬細(xì)胞(巨噬細(xì)胞 特異性CD68染色) 圖4 :免疫組化預(yù)測(cè)干擾素治療丙肝療效流程圖
具體實(shí)施例方式
應(yīng)用免疫組化對(duì)肝穿活檢樣品組織中的ISG15或MxA蛋白表達(dá)的細(xì)胞特異性差異 預(yù)測(cè)干擾素治療丙肝病毒感染者的療效 該專利的發(fā)明人及申請(qǐng)人研究發(fā)現(xiàn)，干擾素治療開始前，肝臟組織內(nèi)特定蛋白的 表達(dá)存在細(xì)胞特異性。例如，ISG15或MxA等干擾素剌激(敏感)基因的表達(dá)產(chǎn)物(蛋白) 如果主要集中在肝細(xì)胞內(nèi)，則該病人對(duì)即將開始的干擾素治療無效；如果這些蛋白的表達(dá) 主要集中在巨噬細(xì)胞內(nèi)，則該病人對(duì)干擾素的治療有效。
具體的實(shí)施方式如下 1.丙肝病人肝穿活檢樣本的獲取現(xiàn)行的臨床操作規(guī)范要求在治療前常規(guī)取肝 穿活檢樣本，用以評(píng)估病人肝臟的炎性化、纖維化程度；本檢測(cè)可以用該常規(guī)方法獲取的肝 穿活檢樣本而不需要重新肝穿取肝組織。 2.肝穿活檢樣本用10X福爾馬林固定，石蠟包埋后，切成4m厚的薄片。用 hematoxylin/eosin常規(guī)染色。 3. ISG15或MxA染色上述病理切片經(jīng)Tris-EDTA(pH9. 0) (MxA)或磷酸緩沖液 (p朋.O) (ISG15)處理后，分別用鼠抗人MxA單克隆抗體(1 : 300稀釋)或兔抗人ISG15抗 血清(1 : 300稀釋)為第一抗體作用1小時(shí)后用通用的顯色試劑盒MACH 4 Universal AP Polymer Kit (BiocareMedical， Concord, CA)進(jìn)行顯色。 4.在顯微鏡下(50x和400x)觀察ISG15或MxA蛋白在不同細(xì)胞內(nèi)的分布。
5.療效預(yù)測(cè)如果ISG15或MxA蛋白主要分布在肝細(xì)胞內(nèi)，則該病人對(duì)干擾素治 療不敏感(無效)；如果ISG15或MxA蛋白主要分布在巨噬細(xì)胞內(nèi)，則該病人對(duì)干擾素治療 敏感(有效)；見圖1-2 巨噬細(xì)胞特異性抗原(CD68)染色證實(shí)了對(duì)干擾素治療有效的病人肝組織內(nèi)的著 色細(xì)胞為巨噬細(xì)胞而不是與其形態(tài)相似的星型膠質(zhì)細(xì)胞(圖3)。 利用該方法對(duì)31例丙肝病毒感染者(其中15例對(duì)干擾素治療有效，16例對(duì)干擾 素治療無效)進(jìn)行療效預(yù)測(cè)，準(zhǔn)確率100%。
療效預(yù)測(cè)流程見圖4。
權(quán)利要求
一種治療開始前用于預(yù)測(cè)病人對(duì)特定治療用藥物是否敏感或有效的方法。通過檢測(cè)病人樣本中特定物質(zhì)生物學(xué)含量的改變或在不同細(xì)胞中的分布不同對(duì)特定的治療藥物的療效進(jìn)行預(yù)測(cè)。本專利的專有特征是利用一些干擾素敏感基因的表達(dá)具有細(xì)胞特異性發(fā)明了一種簡單，快速，準(zhǔn)確的預(yù)測(cè)干擾素治療丙肝病毒感染者是否有效的方法。
2. 權(quán)利要求1中，丙肝病毒感染者對(duì)干擾素治療有效和無效者之間治療開始前肝臟組 織內(nèi)，部分或全部干擾素剌激/敏感基因(Interferon Stimulated/Sensitive Gene，ISG) 蛋白表達(dá)的細(xì)胞特異性。
3. 權(quán)利要求1中，基于ISG15蛋白表達(dá)細(xì)胞特異性而開發(fā)出的用于預(yù)測(cè)丙肝 病人對(duì)干擾素治療是否敏感(有效)的療效預(yù)測(cè)方法包括但不限于應(yīng)用免疫組化 (Immunohistochemistry)檢測(cè)ISG15蛋白表達(dá)的細(xì)胞特異性(說明書附圖1)。
4. 權(quán)利要求1中，基于MxA蛋白表達(dá)細(xì)胞特異性而開發(fā)出的用于預(yù)測(cè)丙肝病 人對(duì)干擾素治療是否敏感(有效)的療效預(yù)測(cè)方法包括但不限于應(yīng)用免疫組化 1 Immunohistochemistry)檢測(cè)MxA蛋白表達(dá)的細(xì)胞特異性(說明書附圖2)。
5. 權(quán)利要求1中，基于ISG15和MxA蛋白表達(dá)細(xì)胞特異性而開發(fā)出的用于預(yù)測(cè)丙 肝病人對(duì)干擾素治療是否敏感(有效)的療效預(yù)測(cè)方法包括但不限于應(yīng)用免疫組化 (Immunohistochemistry)檢測(cè)MxA蛋白表達(dá)的細(xì)胞特異性(說明書附圖1，2)。
6. 權(quán)利要求l中，基于其它干擾素敏感基因蛋白表達(dá)細(xì)胞特異性而開發(fā)出的用于預(yù) 測(cè)丙肝病人對(duì)干擾素治療是否敏感(有效)的療效預(yù)測(cè)方法包括但不限于應(yīng)用免疫組化 (Imm皿ohistochemistry)檢測(cè)這些蛋白表達(dá)的細(xì)胞特異性。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于預(yù)測(cè)丙型肝炎病人對(duì)干擾素治療是否有效的體外預(yù)測(cè)方法，屬生物醫(yī)藥體外診斷試劑類，是基于目前一個(gè)在申請(qǐng)專利的實(shí)質(zhì)性改進(jìn)。僅有50％的丙肝患者對(duì)干擾素治療有效。臨床上缺乏丙肝治療前療效預(yù)測(cè)方法。利用免疫組化技術(shù)對(duì)丙肝病人治療開始前肝組織內(nèi)ISG15或MxA蛋白表達(dá)定位分析發(fā)現(xiàn)，對(duì)干擾素治療有效和無效病人肝組織內(nèi)ISG15和MxA的分布不同這些基因在肝細(xì)胞內(nèi)表達(dá)預(yù)示病人對(duì)干擾素治療無效；在巨噬細(xì)胞內(nèi)表達(dá)預(yù)示病人對(duì)于擾素治療有效。利用該方法對(duì)31例丙肝病人干擾素治療進(jìn)行療效預(yù)測(cè)，準(zhǔn)確率達(dá)100％。該發(fā)明可預(yù)測(cè)丙型肝炎病人干擾素治療前是否對(duì)干擾素治療敏感，從而優(yōu)化病人管理。
文檔編號(hào)G01N33/68GK101750474SQ20091016764
公開日2010年6月23日 申請(qǐng)日期2009年9月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月16日
發(fā)明者陳利民 申請(qǐng)人:陳利民