專利名稱：一種羥基自由基的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種羥基自由基的測定方法。具體地說，涉及一種利用萘基二苯甲烷
染料-夜藍(lán)作為顯色劑，利用分光光度法測定羥基自由基的新方法。
背景技術(shù)：
羥基自由基( OH)對生物體毒性強(qiáng)危害大，并且反應(yīng)活性大，壽命短，存在濃度低。目前，國內(nèi)外報(bào)道的測定羥基自由基的方法有電子自旋共振法、高效液相色譜法、熒光法、共振散射光譜法和分光光度法等。這些方法或儀器昂貴，或靈敏度不夠。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服上述技術(shù)弊端，提供一種具有使用設(shè)備簡單、檢測成本低、操作簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)的羥基自由基的測定方法。
本發(fā)明的技術(shù)原理 在水溶液中，羥基自由基氧化夜藍(lán)，夜藍(lán)溶液褪色，對波長618nm處的可見光有選
擇性吸收，通過測定溶液的吸光度可以得到溶液中羥基自由基的濃度。 本發(fā)明的技術(shù)方案 —種羥基自由基的測定方法，測定步驟如下
(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別往編號為①到⑥的6個(gè)50mL容量瓶中都加入2. 0X 10—4mol L—1的夜藍(lán)水溶液9. 0mL， pH為3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. 0mL， 1. 0X 10—3mol *L—VeSC^水溶液0. 3mL ; 再分別往①到⑤號的5個(gè)容量瓶中加入現(xiàn)配制的5. OX 10—4mol L—1的雙氧水，其中①號中加入0. 2mL雙氧水，②號中加入0. 4mL雙氧水，③號中加入0. 6mL雙氧水，④號中加入O. 8mL雙氧水，⑤號中加入l.OmL雙氧水；
⑥號中不加雙氧水，作為參比液； 將①到⑥號分別充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻；用lcm比色皿，用⑥號作參比，測定618nm處①到⑤號的5個(gè)容量瓶中溶液的吸光
度； 以吸光度為縱坐標(biāo)，雙氧水濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)回歸方程的獲得根據(jù)步驟(1)的標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得回歸方程A = 1. 07C(mg L—"-0. 0038 ;其中A為吸光度；C為雙氧水摩爾濃度；
(3)羥基自由基的測定 往50mL容量瓶中加入2. OX 10—4mol L-1夜藍(lán)水溶液9. OmL， pH為3. 1 3. 3的磷酸_磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol L—卞^04水溶液0. 3mL，加入可產(chǎn)生羥基自由基的物質(zhì)，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，用lcm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度，根據(jù)步驟(2)的回歸方程計(jì)算羥基自由基的濃度； 其中加入可產(chǎn)生羥基自由基的物質(zhì)的量按其最終含羥基自由基濃度為0. 039 0. 379mg/L計(jì)算。 本發(fā)明的測定方法當(dāng)H202濃度為0. 17mg L—、相對誤差小于5%時(shí)，以下離子允
許量為(mg L—0 :K+(2000) 、 Ca2+(2000) 、 Sn2+(2000) 、 Al3+(2000) 、 Pb2+(2000) 、 N03—(20 00)、
S042—(2000) 、 NH4+(2000) 、 Br—(2000) 、 HC204—(2000) 、 H2B03—(20 00) 、 H4P301(T (2000)、擰檬酸
根(2000) ， Ni+(100) 、 Cu2+(100) 、 Co2+(100) 、 Mn2+(100) 、 Cr3+(100) ， CI—(5000) ， Fe3+(400)，
F—(30)，硅酸氫根(1000) ， Ag+(0. 05) ， Hg2+(0. 03) ， Cd2+(0. 05) ， Mn7+(0. 2) ， Cr6+(0. 6)。以上
離子濃度上限未做。 本發(fā)明的有益效果 目前國內(nèi)外報(bào)道的測定羥基自由基的方法有電子自旋共振法、高效液相色譜法、熒光法、共振散射光譜法和分光光度法等。這些方法或儀器昂貴，或靈敏度不高，本發(fā)明采用夜藍(lán)為顯色劑，分光光度法測定羥基自由基，可檢測濃度范圍為0. 039 0. 379mg/L的羥基自由基，該方法具有儀器簡單、檢測成本低、操作簡便快捷、靈敏度高，摩爾吸光系數(shù)以雙氧水濃度計(jì)高達(dá)3. 6X 104L mo1—1 cm—1等優(yōu)點(diǎn)。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)一步闡述，但并不限制本發(fā)明。
本發(fā)明檢測方法所用的儀器 UV757CRT紫外可見分光光度計(jì)(上海精密科學(xué)儀器有限公司)ras-2C型精密酸度計(jì)(上海雷磁儀器廠) JA2003型電子天平(上海精科天平廠) 本發(fā)明檢測方法所用的試劑 FeS04、 H202、 H3P04和NaH2P04均為分析純 商品化夜藍(lán)(C. I 44085) 實(shí)施例1 (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別往編號為①到⑥的6個(gè)50mL容量瓶中都加入2. OX 10—4mol L—1的夜藍(lán)水溶液9. OmL， pH為3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol *L—VeSC^水溶液0. 3mL ; 再分別往①到⑤號的5個(gè)容量瓶中加入現(xiàn)配制的5. OX 10—4mol L—1的雙氧水，其中①號中加入0. 2mL雙氧水，②號中加入0. 4mL雙氧水，③號中加入0. 6mL雙氧水，④號中加入O. 8mL雙氧水，⑤號中加入l.OmL雙氧水；
⑥號中不加雙氧水，作為參比液； 將①到⑥號分別充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻； 用lcm比色皿，用⑥號作參比，測定618nm處①到⑤號的5個(gè)容量瓶中溶液的吸光
度； 以吸光度為縱坐標(biāo)，雙氧水濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)回歸方程的獲得 根據(jù)步驟(1)的標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得回歸方程A = 1. 07C(mg L—O-O. 0038 ;其中A為吸光度；C為雙氧水摩爾濃度；
(3)羥基自由基的測定往50mL容量瓶中加入含乳化劑2. 0 X 10—4mol *L—1夜藍(lán)水溶液9. OmL， pH為3. 1
3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol L—￥^04水溶液0. 3mL，現(xiàn)配制的
濃度為5.0X10-W L-1的雙氧水O. lmL，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，
用lcm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度為0. 038，根據(jù)步驟
(2)的回歸方程計(jì)算羥基自由基的濃度為0. 039mg/L ; 實(shí)施例2 (D標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 同實(shí)施例1 ; (2)回歸方程的獲得 同實(shí)施例1 (3)羥基自由基的測定往50mL容量瓶中加入含乳化劑2. 0 X 10—4mol *L—1夜藍(lán)水溶液9. OmL， pH為3. 1
3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol L—￥^04水溶液0. 3mL，現(xiàn)配制的
濃度為5.0X10-W L-1的雙氧水O. 7mL，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，
用lcm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度為0. 252，根據(jù)步驟
(2)的回歸方程計(jì)算羥基自由基的濃度為0. 119mg/L ; 實(shí)施例3 (1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 同實(shí)施例1 ; (2)回歸方程的獲得 同實(shí)施例1 (3)羥基自由基的測定 往50mL容量瓶中加入含乳化劑2. OX 10—4mol *L—"夜藍(lán)(C. I 44085)水溶液9. OmL，pH為3. 1 3. 3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5. OmL， 1. OX 10—3mol *L—卞e(cuò)S04水溶液0. 3mL，現(xiàn)配制的濃度為5.0X10—4mol L—1的雙氧水1. lmL，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，用lcm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度為0. 401，根據(jù)步驟(2)的回歸方程計(jì)算羥基自由基的濃度為0.379mg/L。 以上所述內(nèi)容僅為本發(fā)明構(gòu)思下的基本說明，而依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案所作的任何等效變換，均應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
一種羥基自由基的測定方法，其特征在于測定步驟如下(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別往編號為①到⑥的6個(gè)50mL容量瓶中都加入2.0×10-4mol·L-1的夜藍(lán)水溶液9.0mL，pH為3.1～3.3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5.0mL，1.0×10-3mol·L-1FeSO4水溶液0.3mL；再分別往①到⑤號的5個(gè)容量瓶中加入現(xiàn)配制的5.0×10-4mol·L-1的雙氧水，其中①號中加入0.2mL雙氧水，②號中加入0.4mL雙氧水，③號中加入0.6mL雙氧水，④號中加入0.8mL雙氧水，⑤號中加入1.0mL雙氧水；⑥號中不加雙氧水，作為參比液；將①到⑥號分別充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻；用1cm比色皿，用⑥號作參比，測定618nm處①到⑤號的5個(gè)容量瓶中溶液的吸光度；以吸光度為縱坐標(biāo)，雙氧水濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)回歸方程的獲得根據(jù)步驟(1)的標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得回歸方程A＝1.07C(mg·L-1)-0.0038；其中A為吸光度；C為雙氧水摩爾濃度；(3)羥基自由基的測定往50mL容量瓶中加入2.0×10-4mol·L-1夜藍(lán)水溶液9.0mL，pH為3.1～3.3的磷酸-磷酸二氫鈉緩沖溶液5.0mL，1.0×10-3mol·L-1FeSO4水溶液0.3mL，加入可產(chǎn)生羥基自由基的物質(zhì)，充分混勻，靜置15min后，用蒸餾水定容，搖勻，用1cm比色皿，用步驟(1)中的⑥號作參比，測定618nm處溶液的吸光度，根據(jù)步驟(2)的回歸方程計(jì)算羥基自由基的濃度。
全文摘要
本發(fā)明提供一種測定羥基自由基的測定方法。即在水溶液中，羥基自由基氧化夜藍(lán)，夜藍(lán)溶液褪色，對波長618nm處的可見光有選擇性吸收，通過測定溶液的吸光度可以得到溶液中羥基自由基的濃度。本發(fā)明的檢測方法可檢測濃度范圍為0.039～0.379mg/L的羥基自由基，具有儀器簡單、檢測成本低、操作簡便快捷、靈敏度高，摩爾吸光系數(shù)以雙氧水濃度計(jì)高達(dá)3.6×104L·mol-1·cm-1等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號G01N21/77GK101718705SQ20091019871
公開日2010年6月2日 申請日期2009年11月13日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月13日
發(fā)明者周艷, 施文健, 楊琴淋, 秦琴, 路榮春, 聞海峰 申請人:上海理工大學(xué)