專利名稱：：乙醇酸正丁酯及雜質(zhì)含量的高效液相色譜分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種乙醇酸正丁酯及雜質(zhì)含量的高效液相色譜分析方法。
背景技術(shù)：
：乙醇酸正丁酯是一種用途廣泛的有機(jī)助劑，作為高效的流平劑用于涂料，在硝基漆中加入總量的3wt%5wt^，可提供非常好的光澤和流平性；用于皮革的硝基漆中適當(dāng)?shù)卦黾右掖妓嵴□サ募尤肓浚哂懈玫墓鉂?；用于手刷醇酸漆和油性漆中加入總量的lwt%2wt^的乙醇酸正丁酯時(shí)，能在很大程度上阻止油性漆起皺的現(xiàn)象。乙醇酸正丁酯也常應(yīng)用于印刷油墨業(yè)，汽車修補(bǔ)漆中，還可以降低聚醋酸乙烯分散體的最低成膜溫度。乙醇酸正丁酯的結(jié)構(gòu)如下乙醇酸正丁酯通常采用乙二醛、正丁醇為原料，在復(fù)合催化劑的存在下制備得到乙醇酸正丁酯。但其最終產(chǎn)品中始終都存有乙醇酸雜質(zhì)，其含量的多少直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和應(yīng)用性能，因此分析乙醇酸正丁酯的含量對(duì)雜質(zhì)含量的監(jiān)控十分重要，目前還未見乙醇酸正丁酯及雜質(zhì)含量高效液相色譜分析方法的報(bào)道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于提供一種乙醇酸正丁酯及雜質(zhì)含量的高效液相色譜分析方法，以填補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)乙醇酸正丁酯及雜質(zhì)含量進(jìn)行定量檢測(cè)的空白。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)—種乙醇酸正丁酯及雜質(zhì)含量的高效液相色譜分析方法，采用反相高效液相色譜法，測(cè)定乙醇酸正丁酯以及雜質(zhì)的含量，高效液相色譜條件為色譜柱C18，5iim，250X4.6mm(I.D.)。流動(dòng)相組成的體積比乙腈磷酸-磷酸鹽緩沖水溶液(pH2.5)=10:90，m1/ml。流速0.5ml/min。柱溫25。C。檢測(cè)波長(zhǎng)200nm。進(jìn)樣量20iU。按照本發(fā)明的高效液相色譜分析方法，將測(cè)定含量的進(jìn)樣樣品濃度稀釋10倍，測(cè)定乙醇酸正丁酯主體及其雜質(zhì)的含量，本發(fā)明的流動(dòng)相中添加20mmol/LNa^P04，用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.5。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明采用C18反相色譜柱，以液相色譜方法準(zhǔn)確測(cè)定乙醇酸正丁酯主體含量的同時(shí)，可以準(zhǔn)確測(cè)定乙醇酸雜質(zhì)的含量；本發(fā)明選用流動(dòng)相溶解樣品，確保了溶液的穩(wěn)定性；選用進(jìn)樣體積為20iU，柱溫為25t:，提高了色譜峰的對(duì)稱性；為乙醇酸正丁酯主體含量的質(zhì)量控制提供了可靠的檢測(cè)數(shù)據(jù)。圖1為不同體積比流動(dòng)相組成的色譜圖，其中圖l-a為20X乙腈和80X含有pH=2.5的磷酸緩沖水溶液作為流動(dòng)相時(shí)的分離效果圖；圖l-b為10%乙腈和90%含有pH=2.5的磷酸緩沖水溶液作為流動(dòng)相時(shí)的分離效果圖。圖1中a峰為乙醇酸，b峰為乙醇酸正丁酯。圖2為紫外光譜圖，其中圖2-a為乙醇酸正丁酯紫外光譜圖；圖2-b為乙醇酸紫外光譜圖。圖3為乙醇酸正丁酯標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖4為乙醇酸標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖5為樣品的色譜圖，a峰為乙醇酸，b峰為乙醇酸正丁酯。具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但實(shí)施例并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。主要實(shí)驗(yàn)儀器及色譜條件Waters1525型高效液相色譜儀，Waters717plus自動(dòng)進(jìn)樣器，配Waters2996型二極管陣列(PDA)檢測(cè)器，色譜分離系統(tǒng)的控制和記錄由WatersEmpower色譜管理系統(tǒng)完成。色譜柱選用的是Cw，5iim，250X4.6mm(I.D)，流動(dòng)相為乙腈磷酸_磷酸二氫鈉緩沖水溶液(pH2.5)=10:90ml/ml，流速0.5ml/min，柱溫25。C，檢測(cè)波長(zhǎng)200nm。試劑與藥品乙醇酸正丁酯對(duì)照品(>99.0%)乙醇酸對(duì)照品(>99.0%)乙腈HPLC級(jí)；磷酸分析純；磷酸二氫鈉分析純；實(shí)驗(yàn)中流動(dòng)相和溶液用水均為二次石英蒸餾水。實(shí)施例1高效液相色譜條件的選擇1.l流動(dòng)相的選擇將不同體積比的流動(dòng)相組成進(jìn)行試驗(yàn)，當(dāng)乙腈比例大于20%，乙醇酸正丁酯和乙醇酸兩個(gè)色譜峰出峰較快不能達(dá)到很好的分離，且有拖尾現(xiàn)象，見圖卜a。當(dāng)乙腈-水比例為IO:90ml/ml(體積比)的條件下，各成分能夠達(dá)到基線分離，且拖尾現(xiàn)象得到改善，見圖l-b。由于乙醇酸正丁酯在水中溶解性差，在有機(jī)相溶解性比較好，用此流動(dòng)相需先用有機(jī)溶劑溶解樣品，在再用流動(dòng)相進(jìn)行稀釋的辦法。1.2檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇4用二極管陣列檢測(cè)器在190-400nm進(jìn)行連續(xù)掃描，得到紫外吸收光譜圖，乙醇酸正丁酯在205nm附近有最大吸收(參見圖2_a)，而乙醇酸在190-400nm區(qū)間沒(méi)有最大吸收波長(zhǎng)(參見圖2-b)，在兼顧各組分靈敏度，選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm。1.3樣品濃度的選擇為了同時(shí)兼顧主成分含量與雜質(zhì)含量的測(cè)定，在測(cè)定雜質(zhì)的含量時(shí)，樣品的濃度必須足夠大，以使雜質(zhì)能夠出峰；測(cè)定主成分的含量時(shí)，溶液濃度過(guò)大會(huì)導(dǎo)致色譜峰峰超出檢測(cè)范圍而不能定量，故將樣品稀釋IO倍后再測(cè)定，試驗(yàn)準(zhǔn)確度見表1。實(shí)施例2標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液的配制準(zhǔn)確稱取200.OOmg乙醇酸正丁酯標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，置于10ml容量瓶中，先加入少量甲醇使之溶解，再用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，配成濃度為20mg/ml的乙醇酸正丁酯的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，使用時(shí)逐級(jí)稀釋到所需濃度。準(zhǔn)確稱取20.OOmg乙醇酸標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，置于10ml容量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為2.Omg/ml的乙醇酸的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，使用時(shí)逐級(jí)稀釋到所需濃度。實(shí)施例3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作選擇最佳高效液相色譜條件，即色譜柱為C18，5iim，250X4.6mm(I.D);流動(dòng)相組成為的體積比為乙腈磷酸-磷酸二氫鈉緩沖水溶液(PH=2.5)=10:90ml/ml;流速為0.5ml/min;柱溫為25°C;檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm。取乙醇酸正甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液20ill進(jìn)樣，以峰面積對(duì)濃度作圖(參見圖3)。乙醇酸正丁酯溶液在濃度O.515mg/ml的范圍內(nèi)時(shí)，樣品濃度與峰面積成線性關(guān)系，線性回歸方程為A乙醇酸正丁酯216692.55354+6.72359E7C，r=0.99991。取乙醇酸標(biāo)準(zhǔn)溶液20ill進(jìn)樣，以峰面積對(duì)濃度作圖(參見圖4)。乙醇酸溶液在濃度為0.041.2mg/ml的范圍內(nèi)時(shí)，樣品濃度與峰面積成線性關(guān)系，線性回歸方程為A乙醇酸二113498.56134+5.67617E7C，r=0.99985。當(dāng)信噪比S/N二3時(shí)，測(cè)得乙醇酸正丁酯和乙醇酸的最低檢測(cè)限分別為0.OOOlmg/ml、和0.0002mg/ml。實(shí)施例4樣品的測(cè)定4.1主含量的測(cè)定精確稱取200.Omg乙醇酸正丁酯試樣，置于10ml容量瓶中，先加入少量甲醇使之溶解，再用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得濃度為20.Omg/ml的溶液。取上述20.Omg/ml溶液1.Oml置于10ml容量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，得2.Omg/ml的溶液，備用。選擇任意5個(gè)批號(hào)的樣品，按上述方法配制2.Omg/ml樣品溶液。在本發(fā)明的高效液相色譜條件，即色譜柱C化，5iim，250X4.6mm(I.D);流動(dòng)相組成為的體積比為乙腈:磷酸-磷酸鹽緩沖水溶液怖2.5)=10:90ml/ml;流速為0.5ml/min;柱溫為25。C;檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm進(jìn)行高效液相色譜分析，進(jìn)樣量為20(參見圖5)。4.2雜質(zhì)含量的測(cè)定5選擇任意五個(gè)批號(hào)的樣品，按上述方法配制20mg/ml樣品溶液。根據(jù)本發(fā)明的高效液相色譜條件，即色譜柱C化，5iim，250X4.6mm(I.D);流動(dòng)相組成為的體積比乙腈:磷酸-磷酸鹽緩沖水溶液(PH2.5)=10:90，ml/ml;流速為0.5ml/min;柱溫為25°C;檢測(cè)波長(zhǎng)為200nm進(jìn)行HPLC分析，進(jìn)樣量為20(參見圖l_b)。樣品中主體成分乙醇酸正丁酯及雜質(zhì)乙醇酸的檢測(cè)結(jié)果列于表1。表1檢測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求一種乙醇酸正丁酯及雜質(zhì)含量的高效液相色譜分析方法，其特征在于，包括以下步驟1)采用反相高效液相色譜法，其高效液相色譜的條件為色譜柱C18，5μm，250×4.6mm(I.D.)；流動(dòng)相組成乙腈∶磷酸-磷酸鹽緩沖水溶液pH2.5＝10∶90ml/ml；流速0.5ml/min；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)200nm；進(jìn)樣量20μl；2)分別配制乙醇酸正丁酯和乙醇酸的標(biāo)準(zhǔn)溶液及樣品溶液；3)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；4)樣品含量的測(cè)定。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高效液相色譜分析方法，其特征在于，將測(cè)定含量的進(jìn)樣樣品濃度稀釋10倍，測(cè)定乙醇酸正丁酯主體及其雜質(zhì)的含量。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的高效液相色譜分析方法，其特征在于，在流動(dòng)相中添加20mmol/LNaH2P04，用磷酸調(diào)節(jié)pH值為2.5。全文摘要本發(fā)明公開了一種乙醇酸正丁酯及雜質(zhì)含量的高效液相色譜分析方法。采用反相高效液相色譜法，高效液相色譜條件為色譜柱C18，5μm，250×4.6mm(I.D.)，流動(dòng)相組成體積比乙腈∶磷酸-磷酸鹽緩沖水溶液(pH＝2.5)＝10∶90，流速0.5ml/min，柱溫25℃，檢測(cè)波長(zhǎng)200nm，進(jìn)樣量20μl；本發(fā)明流動(dòng)相中添加20mmol/L的NaH2PO4，將測(cè)定含量的進(jìn)樣樣品濃度稀釋10倍，準(zhǔn)確測(cè)定乙醇酸正丁酯主體及雜質(zhì)的含量。本發(fā)明為乙醇酸正丁酯主體含量的質(zhì)量控制提供了簡(jiǎn)易可靠的分析方法。文檔編號(hào)G01N30/00GK101726550SQ20091020131公開日2010年6月9日申請(qǐng)日期2009年12月17日優(yōu)先權(quán)日2009年12月17日發(fā)明者劉慧青,蔣旭亮,黃瑩申請(qǐng)人:上?；瘜W(xué)試劑研究所