專利名稱：異維a酸軟膠丸的測試方法
技術領域：
本發(fā)明屬于藥品檢測技術領域。具體涉及異維A酸軟膠丸的溶出度和其中的抗氧 齊U、防腐劑的鑒別測試方法。
背景技術：
異維A酸軟膠丸目前執(zhí)行的質量標準分別為中國藥典現(xiàn)行版(中國藥典2005版 二部P216)，檢測項目為性狀、鑒別、含量、含量均勻度、崩解、微生物限度控制等；美國藥 典現(xiàn)行版，檢測項目為性狀、鑒別、含量、含量均勻度、崩解、有關雜質、微生物限度控制等。由于異維A酸為一性狀極不穩(wěn)定的活性原料，遇光、熱、空氣等極易變性。故通過 專門的工藝，并加入一定的藥用輔料，將其制成油狀混懸液，能使其性狀相對穩(wěn)定。目前藥 典收載的檢測項目僅對藥物本身的活性原料作相應的定性或定量檢測，而所用的藥用輔料 在貯藏期內對藥物穩(wěn)定性作用(如抗氧化作用、防腐作用等)均沒有明確的界定，故使該產(chǎn) 品對抗氧劑，防腐劑使用的有效性，沒有明確的檢測方法和衡量標準。另外，中國藥典和美國藥典等目前收載的軟膠丸質量標準，均未將溶出度測試列 入其中。藥品作為一特殊商品，安全、有效是質量控制的首要保障。由于生物等效性，使體 外溶出度基本反映了體內生物利用度?；诖耍艹龆茸鳛樗幤焚|量的有效性和可控性的 重要標志之一，隨著對藥品質量標準的不斷提高和完善，軟膠丸劑的溶出度試驗應作為檢 測項目被列入質量標準當中。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題在于研究設計關于提高異維A酸軟膠丸質量標準的 方法。本發(fā)明提供了異維A酸軟膠丸之一溶出度測試的方法，本發(fā)明的方法基于下列原 理溶出度測試作為模擬人體體內生物利用度的一個有效途徑，已被列入固體制劑質 量標準的主要檢測項目之一，至今已有數(shù)十年歷史。經(jīng)過反復論證和臨床實驗，按照與人體 生物等效性相關的原理，選用一合理的試劑作為溶出度測試介質，至關重要。目前常用的介 質基本包括0. 1NHC1、0. INNaOH、醋酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液，水等。根據(jù)藥代動力學原理，異維A酸膠丸主要通過胃腸道吸收，服用人群主要是18 30歲青年人居多。上述幾種介質均能作為該實驗的溶出介質。由于軟膠丸內容物性狀多為油狀，在上述提及的幾種介質中，均為水溶性介質。本 實驗利用異維A酸軟丸內容物僅為混懸物，其主要活性成分并非脂溶性這一特點，經(jīng)過旋 轉后的游離分散，使主要活性成分溶解于溶出介質中，經(jīng)過稀釋、定量，用紫外分光光度計測定吸收值，計算溶出度。本實驗的最終目的，是對藥物通過體外溶出度測試，將得到的結果與臨床所做的 體內生物利用度作比較，求出兩者相關性，確認服用的有效性和安全性。由于體內利用度實 驗費用大，周期長，該實驗不宜于長期、反復進行。而體外溶出度正是解決了這一難題。經(jīng) 反復測試，基本能掌握藥物的有效作用時間和用量，達到預期效果。本發(fā)明的異維A酸軟膠丸溶出度的測試方法包括下列步驟 取異維A酸軟膠丸6粒，用崩解時限測定項下的裝置，每杯置1粒，以900ml 0. INHCl、0. IN氫氧化鈉或純化水為介質；測試溫度為37. 0°C 士 1°C ；40 45分鐘時，立即 取溶出液20ml經(jīng)0. 45um的膜濾過，冷卻至室溫。精密量取續(xù)濾液5ml，用0. lmol/LHCl、 0. lmol/L氫氧化鈉或純化水稀釋成25m 1 (IOmg規(guī)格)；精密量取續(xù)濾液5ml，用0. lmol/L HCl、0. lmol/L氫氧化鈉或純化水稀釋成50ml (20mg規(guī)格)；對照液精密稱取異維A酸對照品10mg，用0. lmol/LHCl,0. lmol/L氫氧化鈉或純 化水溶解并稀釋50ml ；精密量取2ml，用0. lmol/LHCl,0. lmol/L氫氧化鈉或純化水稀釋成 200ml，按照分光光度法檢測，在343nm的波長處分別測定吸收度，計算出每丸的溶出量。應 大于標示量的75%。本發(fā)明的另一目的是提供了異維A酸軟膠丸中抗氧劑，防腐劑的鑒別測試方法。該軟膠丸劑主要由兩部分組成內容物為油狀混懸物，外層為膠皮。由于膠皮主要 原料為明膠。鑒于明膠原料的特殊性，因而在膠液內加入微量防腐劑(< 0. 04% )，以防止 在貯藏期間引起生物變性。異維A酸軟膠丸的內容物中主要活性成分異維A酸性狀極不穩(wěn) 定，在貯藏期內常常發(fā)生含量下降和有關雜質超標等質量問題。故本發(fā)明人在藥液內添加 微量的抗氧劑(< 0. 008% )，用以保持活性成分的穩(wěn)定性。目前執(zhí)行的軟膠丸劑質量標準中，均未將抗氧劑、防腐劑的鑒別列入，企業(yè)在產(chǎn)品 最終檢驗中，也未將此項作為監(jiān)控項目。但在制劑制備中，藥物內添加的微量輔料成分究竟 是否被破壞，沒有明確界定，尤其是在藥品貯藏期內，防腐劑、抗氧劑的有效性和延續(xù)性，應 需得到確認。本發(fā)明提供的異維A酸軟膠丸中抗氧劑的鑒別測試方法包括下列步驟(1)系統(tǒng)適用性條件用DB-I毛細管柱(0. 25mmX30mX0. 25 μ m)、HP-5毛細管柱 (0. 25mm*30m*0. 3μπι)或 DB-2 毛細管柱(0. 25mmX30mX0. 25μπι)，分流比為 10 1，尾吹 為40ml/min，柱溫在50或100°C保持2 5分鐘，然后以20 30°C /分鐘的速率升到150 或200°C，保持3 5分鐘。(2)對照液的制備稱取抗氧劑40mg，置100ml容量瓶中，用甲醇、乙醇或正己烷溶 解并稀釋至刻度，精密吸取1ml，至IOml容量瓶中，并稀釋至刻度。(3)供試液的制備取本品20粒，剪開，去殼后，內容物放入具塞錐形瓶中，加IOml 甲醇、乙醇或正己烷，超聲20分鐘，靜置，取上清液，即得。(4)測定法取對照液和供試液各1 μ 1，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，供試液 中抗氧劑的保留時間應分別與對照液中抗氧劑的保留時間一致。所述的抗氧劑為叔丁基對羥基茴香醚或2. 6- 二叔丁基對甲酚。本發(fā)明的異維A酸軟膠丸中防腐劑的鑒別測試方法包括下列步驟(1)系統(tǒng)適用性條件用DB-I毛細管柱(0. 25mmX30mX0. 25 μ m)、HP-5毛細管柱 (0. 25mm*30m*0. 3μπι)或 DB-2 毛細管柱(0. 25mmX30mX0. 25μπι)，分流比為 10 1，尾吹為40ml/min，柱溫在50或100°C保持2 5分鐘，然后以20 30°C /分鐘的速率升到150 或200，保持3 5分鐘。(2)對照液的制備稱取防腐劑40mg，置IOOml容量瓶中，用甲醇、乙醇、正己烷溶解 并稀釋至刻度，精密吸取1ml，至IOml容量瓶中，用甲醇、乙醇、正己烷稀釋至刻度。
(3)供試液的制備取本品20粒，剪開，去殼后，內容物放入具塞錐形瓶中，加IOml 甲醇、乙醇、正己烷，超聲20分鐘，靜置，取上清液，即得。(4)測定法取對照液和供試液各1 μ 1，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，供試液 中防腐劑的保留時間應分別與對照液中防腐劑的保留時間一致。所述的防腐劑為山梨酸鉀、對羥基苯甲酸乙酯或苯甲酸鈉。本發(fā)明提供的異維A酸軟膠丸溶出度和其中的抗氧劑、防腐劑鑒別測試方法，在 藥典規(guī)定的基礎上，提高了異維A酸軟膠丸劑的質量標準，為產(chǎn)品的質量控制提供保障，有 利于對產(chǎn)品穩(wěn)定性的監(jiān)測，有較大的實用價值。在本發(fā)明的檢測產(chǎn)品中，異維A酸軟膠丸有IOmg和20mg兩個規(guī)格，每粒軟膠丸的 內容物重量均為0. 25g，本發(fā)明在檢測中樣品均以“?！北硎?。
具體實施例方式實例1溶出度測試實驗步驟實驗用儀器島津紫外分光光度儀實驗用對照品異維A酸對照品實驗用樣品本公司生產(chǎn)的異維A酸膠丸6粒實驗用試劑二氯甲烷、正己烷、NaOH、HCl等方法一、取異維A酸軟膠丸6粒，用崩解時限測定法下的裝置，每杯置1粒；以 900ml 0. INHCl為介質；測試溫度為37. 0°C 士 1°C ;40分鐘時，立即取溶出液20ml經(jīng)0. 45um 的膜濾過，冷卻至室溫。精密量取濾液5ml，用0. lmol/LHCl稀釋成25ml (IOmg規(guī)格)；精密 量取續(xù)濾液5ml，用0. lmol/L HCl稀釋成50ml (20mg規(guī)格)；對照液精密稱取異維A酸對照品10mg，用0. lmol/LHCl溶解并稀釋50ml ；精密量 取2ml，用0. lmol/LHCl稀釋成200ml，按分光光度法，在343nm的波長處分別測定吸收度， 計算出每丸的溶出量。應大于標示量的75%。方法二、取異維A酸軟膠丸6粒，用崩解時限測定法下的裝置，每杯置1粒；以 900ml 0. IN氫氧化鈉為介質；測試溫度為37. 0°C 士 1°C ；45分鐘時，立即取溶出液20ml經(jīng) 0. 45um的膜濾過，冷卻至室溫。精密量取濾液5ml，用0. lmol/L氫氧化鈉稀釋成25ml (IOmg 規(guī)格)；精密量取續(xù)濾液5ml，用0. lmol/L氫氧化鈉稀釋成50ml (20mg規(guī)格)；對照液精密稱取異維A酸對照品10mg，用0. lmol/L氫氧化鈉溶解并稀釋50ml ； 精密量取2ml，用0. lmol/L氫氧化鈉稀釋成200ml，按分光光度法，在343nm的波長處分別 測定吸收度，計算出每丸的溶出量。應大于標示量的75%。方法三、取異維A酸軟膠丸6粒，用崩解時限測定法下的裝置，每杯置1粒；以 900ml純化水為介質；測試溫度為37. 0°C 士 1°C ;45分鐘時，立即取溶出液20ml經(jīng)0. 45um 的膜濾過，冷卻至室溫。精密量取濾液5ml，用純化水稀釋成25ml (IOmg規(guī)格)；精密量取續(xù) 濾液5ml，用純化水稀釋成50ml (20mg規(guī)格)；。
對照液精密稱取異維A酸對照品10mg，用純化水溶解并稀釋50ml ；精密量取 2ml，用純化水稀釋成200ml，按分光光度法，在343nm的波長處分別測定吸收度，計算出每 丸的溶出量。應大于標示量的75%。實例2抗氧劑叔丁基對羥基茴香醚鑒別測試實驗步驟實驗用儀器島津氣相色譜儀實驗用對照品抗氧劑叔丁基對羥基茴香醚對照品40mg實驗用樣品本公司生產(chǎn)的異維A酸膠丸20粒實驗用試劑甲醇、乙醇、正己烷等方法一供試品制備取樣品20粒，剪開，取內容物至量具塞玻璃容器內，加甲醇15ml，超聲溶解離心，靜置，取上清液，即得。色譜系統(tǒng)色譜柱型號DB-I (0. 25mm*30m*0. 25 μ m)程序升溫第一階段100°C保持4分鐘第二階段100°C 200°C升溫速率為30°C /s第三階段200°C保持5分鐘分流比10 1方法二 供試品制備取樣品20粒，剪開，取內容物至具塞玻璃容器內，加正己烷 20ml，45°C水溶解，放至高溫，即得。色譜系統(tǒng)色譜柱型號HP-5 (0. 25mm*30m*0. 3 μ m)程序升溫第一階段50°C保持5分鐘第二階段50°C 150°C升溫速率為30°C /s第三階段150°C保持3分鐘分流比10 1方法三供試品制備取樣品20粒，剪開，取內容物至具塞玻璃容器內，加乙醇 30ml，60°C水溶解，放至高溫，即得。色譜系統(tǒng)色譜柱型號DB-2 (0. 25mm*30m*0. 25 μ m)程序升溫第一階段100°C保持3分鐘第二階段100°C 200°C升溫速率為20°C /s第三階段200°C保持5分鐘分流比10 1實驗結果溶出度測試結果> 75%/30min抗氧劑鑒定結果供試液中抗氧劑的保留時間分別與對照液中抗氧劑的保留時間一致。實例3方法同實例2，抗氧劑替換為2. 6- 二叔丁基對甲酚。實例4防腐劑山梨酸鉀鑒別測試實驗步驟實驗用儀器島津氣相色譜儀實驗用對照品防腐劑山梨酸鉀對照品40mg實驗用樣品本公司生產(chǎn)的異維A酸膠丸20粒
實驗用試劑甲醇、乙醇、正己烷等方法一供試品制備取樣品20粒，剪開，取內容物至量具塞玻璃容器內，加甲醇15ml，超聲溶解離心，靜置，取上清液，即得。色譜系統(tǒng)色譜柱型號DB-I (0. 25mm*30m*0. 25 μ m)程序升溫第一階段100°C保持4分鐘第二階段100°C 200°C升溫速率為30°C /s第三階段200°C保持5分鐘分流比10 1方法二 供試品制備取樣品20粒，剪開，取內容物至具塞玻璃容器內，加正己烷 20ml，45°C水溶解，放至高溫，即得。色譜系統(tǒng)色譜柱型號HP-5 (0. 25mm*30m*0. 3 μ m)程序升溫第一階段50°C保持5分鐘第二階段50°C 150°C升溫速率為30°C /s第三階段150°C保持3分鐘分流比10 1方法三供試品制備取樣品20粒，剪開，取內容物至具塞玻璃容器內，加乙醇 30ml，60°C水溶解，放至高溫，即得。色譜系統(tǒng)色譜柱型號DB-2 (0. 25mm*30m*0. 25 μ m)程序升溫第一階段100°C保持3分鐘第二階段100°C 200°C升溫速率為20°C /s第三階段200°C保持5分鐘分流比10 1實驗結果溶出度測試結果> 75%/30min防腐劑鑒定結果供試液中防腐劑的保留時間分別與對照液中防腐劑的保留時間一致。實例 5方法同實例4，防腐劑替換為對羥基苯甲酸乙酯。實例6方法同實例4，防腐劑替換為苯甲酸鈉。
權利要求
一種異維A酸軟膠丸中抗氧劑的測試方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)系統(tǒng)適用條件用DB-1毛細管柱0.25mm×30m×0.25μm、HP-5毛細管柱0.25mm*30m*0.3μm或DB-2毛細管柱0.25mm×30m×0.25μm；分流比為10∶1；尾吹為40ml/min，柱溫在50或100℃保持2～5分鐘；然后以20～30℃/分鐘的速率升到150或200℃，保持3～5分鐘；(2)對照液的制備稱取抗氧劑40mg，置100ml容量瓶中，用甲醇、乙醇或正己烷溶解并稀釋至刻度，精密吸取1ml，置10ml容量瓶中，并稀釋至刻度；(3)供試液的制備取本品20粒，剪開，去殼，內容物放入具塞錐形瓶中，加10ml甲醇、乙醇或正己烷，超聲20分鐘，靜置，取上清液，即得；(4)測定方法取對照液和供試液各1μl，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，供試液中抗氧劑的保留時間應分別與對照液中抗氧劑的保留時間一致。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種異維A酸軟膠丸中抗氧劑的測試方法，其特征在于其中 所述的抗氧劑為叔丁基對羥基茴香醚或2. 6- 二叔丁基對甲酚。
3.—種異維A酸軟膠丸中防腐劑的測試方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)系統(tǒng)適用條件用DB-I毛細管柱0.25mmX30mX0. 25 μ m、HP-5毛細管柱 0.25mm*30m*0.3ym 或 DB-2 毛細管柱 0.25mmX30mX0.25ym;分流比為 10 1 尾吹為 40ml/min ；柱溫在50或100°C保持2 5分鐘，然后以20 30°C /分鐘的速率升到150或 200°C，保持3 5分鐘；(2)對照液的制備稱取防腐劑40mg，置IOOml容量瓶中，用甲醇、乙醇或正己烷溶解并 稀釋至刻度，精密吸取1ml，置IOml容量瓶中，并稀釋至刻度；⑶供試液的制備取本品20粒，剪開，去殼，內容物放入具塞錐形瓶中，加IOml甲醇、乙 醇或正己烷，超聲20分鐘，靜置，取上清液，即得；(4)測定方法取對照液和供試液各Iy 1，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，供試液中 防腐劑的保留時間應分別與對照液中防腐劑的保留時間一致。
4.根據(jù)權利要求3所述的一種異維A酸軟膠丸中防腐劑的測試方法，其特征在于其中 所述的防腐劑為山梨酸鉀、對羥基苯甲酸乙酯或苯甲酸鈉。
全文摘要
本發(fā)明提供了異維A酸軟膠丸的溶出度和其中的抗氧劑、防腐劑的鑒別測試方法。通過本發(fā)明方法提高了異維A酸軟膠丸的質量標準，有利于監(jiān)控產(chǎn)品起始期和有效貯藏期內異維A酸軟膠丸的穩(wěn)定性，具有較大的應用價值。
文檔編號G01N21/31GK101846659SQ20091020511
公開日2010年9月29日 申請日期2006年4月29日 優(yōu)先權日2006年4月29日
發(fā)明者朱海芒 申請人:上海信誼萬象藥業(yè)股份有限公司