專利名稱：半乳糖的測(cè)定方法與半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒的制作方法
半乳糖的測(cè)定方法與半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)/食品檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及半乳糖診斷/測(cè)定方法及其試劑盒。
背景技術(shù)：
牛奶在營(yíng)養(yǎng)界素有"液體黃金"的美稱，我國(guó)早在1992年由七部位聯(lián)合提出‘‘ 一杯牛奶強(qiáng)壯一個(gè)民族"的口號(hào)。奶類除不含纖維素外，幾乎含有人體所需要的各種營(yíng)養(yǎng) 素。牛奶中的乳糖進(jìn)入人體后，經(jīng)小腸乳糖酶作用分解成葡萄糖和半乳糖。半乳糖是嬰兒 大腦發(fā)育的必需物質(zhì)，與嬰兒大腦的迅速成長(zhǎng)有密切關(guān)系。牛奶雖好但并不是所有的人都能享受，有些人由于乳糖酶的缺乏，人體不能很好 的消化吸收牛奶中的營(yíng)養(yǎng)素，還會(huì)造成鈣、磷、鉀、鐵等元素的吸收障礙，影響嬰幼兒的體格 和智力發(fā)育，在老年人中，乳糖酶缺乏是造成骨質(zhì)疏松的重要原因。中國(guó)成年人飲用牛乳后 乳糖吸收不良的發(fā)病率高達(dá)86. 7%，不耐受指數(shù)為0. 9。為了避免不適當(dāng)飲奶對(duì)健康造成的損害，因此最好在飲奶前檢查自己是否耐受乳 糖，在飲用牛奶后，測(cè)試尿液中半乳糖的濃度，這是目前國(guó)外最常用的一種方法，更為簡(jiǎn)便、 經(jīng)濟(jì)、可靠。

發(fā)明內(nèi)容[要解決的技術(shù)問題]本發(fā)明的目的是提供一種半乳糖的測(cè)定方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒。[技術(shù)方案]本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明的方法是一種采用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)與酶 (偶)聯(lián)法(Couple Reaction)的聯(lián)用技術(shù)，利用測(cè)定還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶) 在340nm波長(zhǎng)處的吸光度變化測(cè)定半乳糖的方法。本發(fā)明半乳糖測(cè)定方法的的技術(shù)原理是根據(jù)下述三個(gè)酶的系列催化反應(yīng)完成半乳糖+腺苷三磷酸半乳糖激酶腺苷二磷酸+半乳糖1-磷酸腺苷二磷酸+磷酰胺氨激酶腺苷三磷酸+氨氨+乙酵酸+還原型輔酶甘氨酸脫氫酶甘氨酸+水+輔酶本發(fā)明的方法利用半乳糖激酶(galactokinase ；EC 2. 7. 1. 6)酶(偶)聯(lián)氨激酶 (ammonia kinase ；EC 2. 7. 3. 8)、甘氨酸脫氫酶(glycine dehydrogenase ；EC 1. 4. 1. 10) 酶促反應(yīng)終點(diǎn)法。半乳糖激酶酶解半乳糖反應(yīng)產(chǎn)生腺苷二磷酸，再通過(偶)聯(lián)合氨激酶、 甘氨酸脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm 處沒有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的程度，這樣可以通過測(cè) 量340n m處吸光度下降的程度，可以測(cè)算半乳糖的濃度大小。
本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明涉及一種半乳糖的測(cè)定方法。該半乳糖測(cè)定方法的步驟如下A、樣品準(zhǔn)備A. 1標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備將一定量的半乳糖溶于水或緩沖液中，再將半乳糖濃度調(diào)整到100微摩爾/升，得 到的溶液作為標(biāo)準(zhǔn)樣品；A. 2待測(cè)樣品預(yù)處理

液體待測(cè)樣品直接測(cè)試，無須預(yù)處理；將一定量的固體待測(cè)樣品像制備標(biāo)準(zhǔn)樣品 一樣溶于水或緩沖液中；A. 3空白樣品所述的水或緩沖液作為空白樣品，其半乳糖濃度為0微摩爾/升；B、試劑溶液的制備分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、半乳糖激酶、氨激酶、甘氨酸脫 氫酶、腺苷三磷酸、磷酸胺與乙醛酸，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶 液，它們的濃度分別是 20-500mmol/L、0. 001_7mol/L、0. 1-0. 35mmol/L、1000-80000U/L、 1000-80000U/L、1000-80000U/L、l-100mmol/L、l-100mmol/L 與 l-lOOmmol/L ；C、待測(cè)樣品與在步驟B)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進(jìn)行混合，在 溫度15-45°C下反應(yīng)5-60分鐘，在主波長(zhǎng)340nm與副波長(zhǎng)405nm(如果受儀器限制可以不設(shè) 副波長(zhǎng))下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定其吸光度隨時(shí)間的變化；D、在與步驟C)同樣的條件下測(cè)定步驟A)標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度隨時(shí)間的變化；E、在與步驟C)同樣的條件下測(cè)定在步驟A)空白樣品的吸光度隨時(shí)間的變化；F、數(shù)據(jù)處理由步驟C-E)所述測(cè)定的主波長(zhǎng)340nm的吸光度隨時(shí)間的變化，根據(jù)下式計(jì)算得到
半乳糖的含量
ΔΑ (樣品)-ΔΑ (空白)
半乳糖含量=-^標(biāo)準(zhǔn)濃度(MmoVL、
ΔΑ (標(biāo)準(zhǔn))-ΔΑ (空白)式中Δ A(樣品)表示步驟C)得到的待測(cè)樣品的吸光度變化；Δ A(空白)表示步驟Ε)得到的空白樣品的吸光度變化；Δ A (標(biāo)準(zhǔn))表示步驟D)標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度變化。根據(jù)本發(fā)明，在所述的半乳糖測(cè)定方法中，所述的緩沖液應(yīng)該理解是能夠使其測(cè) 定介質(zhì)的PH基本保持穩(wěn)定(一般是6. 5-8. 5)的溶液。如果該ρΗ高于8. 5或ρΗ低于6. 5， 則該測(cè)定方法使用的酶的活性達(dá)不到預(yù)期的活性效果，因此需要添加更多的介質(zhì)與酶，才 有可能達(dá)到預(yù)期的活性效果。在本發(fā)明中，所述的緩沖液是一種或多種選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖 液、磷酸鹽緩沖液、咪唑_鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液、硼砂_鹽酸緩沖液、甘 氨酸_氫氧化鈉緩沖液、巴比妥鈉_鹽酸緩沖液、硼酸_硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液或“PBS”緩沖液的緩沖液。 優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、 磷酸鹽緩沖液或“PBS”緩沖液。更優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖 液或磷酸鹽緩沖液。根據(jù)本發(fā)明，在所述的半乳糖測(cè)定方法中，所述的穩(wěn)定劑應(yīng)該理解是一種能保護(hù) 試劑中的介質(zhì)(底物)與酶，使其不會(huì)隨著時(shí)間推移而改變其性質(zhì)，進(jìn)而失去活性的物質(zhì)， 它會(huì)使得試劑具備很長(zhǎng)的活性壽命，通常長(zhǎng)達(dá)數(shù)月，甚至一、二年。如果沒有所述的穩(wěn)定劑， 則試劑的活性在溶液中只能維持?jǐn)?shù)十小時(shí)，頂多數(shù)天，就會(huì)逐漸失去活性而不再具備檢測(cè) 性能。在本發(fā)明中，所述的穩(wěn)定劑使用量是0.01-7mol/L。如果所述的穩(wěn)定劑使用量不夠， 則試劑活性的壽命就會(huì)縮短；如果所述的穩(wěn)定劑使用量過高，則會(huì)增加成本。在本發(fā)明中，所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選自-氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油或 雙乙酸鈉或疊氮鈉防腐劑的穩(wěn)定劑。優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自-氯化鈉、丙二醇、甘油雙乙酸鈉或 疊氮鈉的穩(wěn)定劑。更優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自甘油-或雙乙酸鈉的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明中，所述的還原型輔酶是一種或多種選自NADPH、NADH或thio_NADH的還 原型輔酶。根據(jù)一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定半乳糖時(shí)， 待測(cè)樣品、所述標(biāo)準(zhǔn)樣品與所述空白樣品由該分析儀在設(shè)定條件下(參數(shù))自動(dòng)取樣，然 后在下述條件下進(jìn)行測(cè)定測(cè)定方法為終點(diǎn)法，溫度37°C，反應(yīng)時(shí)間10分鐘，測(cè)試主波長(zhǎng) 340nm，測(cè)試副波長(zhǎng)405nm，被測(cè)半乳糖樣品與試劑的體積比例為1/10-1/500，反應(yīng)方向?yàn)?負(fù)反應(yīng)，延遲時(shí)間0分鐘，檢測(cè)時(shí)間5分鐘。根據(jù)另一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明使用的試劑溶液配制成如下雙劑試 劑由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、磷酸胺與乙醛酸組成的試劑 1 ；由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、半乳糖激酶、氨激酶與甘氨酸脫氫酶組成的試劑2 ；其中還原型輔酶、半乳糖激酶、氨激酶、甘氨酸脫氫酶、腺苷三磷酸、磷酸胺、乙醛 酸在試劑1或試劑2中的位置是不限定的。根據(jù)另一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明使用的試劑配制成如下三劑試劑由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、磷酸胺與乙醛酸組成的試劑 1 ；由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氨激酶與甘氨酸脫氫酶組成的試劑2 ；由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑與半乳糖激酶組成的試劑3 ；其中還原型輔酶、半乳糖激酶、氨激酶、甘氨酸脫氫酶、腺苷三磷酸、磷酸胺、乙醛 酸在試劑1、試劑2或試劑3中的位置是不限定的。在本發(fā)明半乳糖測(cè)定方法中使用的測(cè)定儀器可以是紫外/可見光分析儀，例如 上海精密儀器儀表有限公司銷售的紫外可見分光光度計(jì)、天津喀納斯光學(xué)分析儀器有限公司銷售的723可見分光光度計(jì)；半自動(dòng)生化分析儀，例如上海偉思醫(yī)用設(shè)備有限公司的 BTS-330半自動(dòng)生化分析儀；全自動(dòng)生化分析儀，例如由邁瑞公司以商品名BS-300、奧林 帕斯公司以商品名AU400、東芝公司以商品名120、日立公司以商品名7600、雅培公司以商 品名CB8000或貝克曼公司以商品名CX20銷售的全自動(dòng)生化分析儀。本發(fā)明還涉及半 乳糖診斷/測(cè)定試劑盒。該半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒由下述粉狀 試劑組成，在使用時(shí)用水將它們?nèi)芙獾玫骄哂邢率鰸舛确秶目芍苯邮褂玫囊后w試劑緩沖液20_500mmol/L穩(wěn)定劑0. 001-7mol/L還原型輔酶0. 1-0. 35mmol/L半乳糖激酶1000-80000U/L氨激酶1000-80000U/L甘氨酸脫氫酶1000-80000U/L腺苷三磷酸I-IOOmmo 1/L磷酸胺I-IOOmmo 1/L乙醛酸l-100mmol/L。根據(jù)一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明的半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒有試劑1 緩沖液IOOmmol/L穩(wěn)定劑500mmol/L還原型輔酶0.25mmol/L腺苷三磷酸 5mmol/L磷酸胺5mmol/L乙醛酸7mmol/L ；組成如下的試劑2 緩沖液IOOmmol/L穩(wěn)定劑500mmol/L半乳糖激酶 8000U/L氨激酶8000U/L甘氨酸脫氫酶 10000U/L。根據(jù)另一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，本發(fā)明的半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒有試劑1 緩沖液IOOmmol/L穩(wěn)定劑500mmol/L還原型輔酶0. 25mmol/L腺苷三磷酸 5mmol/L磷酸胺5mmol/L乙醛酸7mmol/L ；組成如下的試劑2 緩沖液IOOmmol/L
穩(wěn)定劑500mmol/L氨激酶8000U/L甘氨酸脫氫酶10000U/L ；組成如下的試劑3 緩沖液IOOmmol/L穩(wěn)定劑500mmol/L半乳糖激酶 800U/L。根據(jù)另一種本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，在本發(fā)明的半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒中，所 述的緩沖液是一種或多種選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、咪 唑_鹽酸緩沖液、磷酸氫二鈉_檸檬酸緩沖液、硼砂_鹽酸緩沖液、甘氨酸_氫氧化鈉緩沖 液、巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液或“PBS”緩沖液的緩沖液。優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩沖液、 磷酸鹽緩沖液或“PBS”緩沖液。更優(yōu)選地，所述的緩沖液例如選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(TriS-HCl)緩沖 液或磷酸鹽緩沖液。在本發(fā)明中，所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選自-氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油或 雙乙酸鈉或疊氮鈉防腐劑的穩(wěn)定劑。優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自-氯化鈉、丙二醇、甘油雙乙酸鈉或 疊氮鈉的穩(wěn)定劑。更優(yōu)選地，所述的穩(wěn)定劑例如是一種或多種選自甘油-或雙乙酸鈉的穩(wěn)定劑。在本發(fā)明中，無論是單劑試劑、雙劑試劑或三劑試劑，在本發(fā)明測(cè)定半乳糖的方法 中，所述的還原型輔酶可以是一種或多種選自NADPH、NADH或thio-NADH的還原型輔酶。使用本發(fā)明的半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒時(shí)，可以使用紫外/可見光分析儀，例如 上海精密儀器儀表有限公司銷售的紫外可見分光光度計(jì)、天津喀納斯光學(xué)分析儀器有限 公司銷售的723可見分光光度計(jì)；半自動(dòng)生化分析儀，例如上海偉思醫(yī)用設(shè)備有限公司的 BTS-330半自動(dòng)生化分析儀；全自動(dòng)生化分析儀，例如由邁瑞公司以商品名BS-300、奧林 帕斯公司以商品名AU400、東芝公司以商品名120、日立公司以商品名7600、雅培公司以商 品名CB8000或貝克曼公司以商品名CX20銷售的全自動(dòng)生化分析儀。在采用本發(fā)明方法測(cè)定半乳糖時(shí)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行多次試驗(yàn)，然后將得到的這 些試驗(yàn)結(jié)果按照下式計(jì)算出精密度(CV)
_7] S= V Σ (X-Xi) 2/η-1式中X-試驗(yàn)結(jié)果平均值；Xi-各次試驗(yàn)結(jié)果；η-試驗(yàn)次數(shù).N彡10CV = S/X*100%將得到的這些試驗(yàn)結(jié)果按照下式計(jì)算出相對(duì)極差
權(quán)利要求
1.一種利用酶比色法及酶聯(lián)法技術(shù)的半乳糖濃度測(cè)定方法，其測(cè)定的技術(shù)原理是根據(jù) 下述三個(gè)酶的系列催化反應(yīng)完成半乳糖+腺苷三磷酸半乳糖激酶腺苷二磷酸+半乳糖ι-磷酸 腺苷二磷酸+磷酰胺氨激酶腺苷三磷酸+氧 氨+乙醛酸+還原型輔酶甘氨酸脫氫酶甘氨酸+水+輔酶
2.一種半乳糖的測(cè)定方法，其特征在于該方法的步驟如下 2. 1樣品準(zhǔn)備2. 1. 1標(biāo)準(zhǔn)樣品的制備將一定量的半乳糖溶于水或緩沖液中，再將其濃度調(diào)整到100微摩爾/升； 2. 1.2待測(cè)樣品預(yù)處理液體待測(cè)樣品直接測(cè)試，無須預(yù)處理；將一定量的固體待測(cè)樣品像制備標(biāo)準(zhǔn)樣品一樣 溶于水或緩沖液中； 2. 1.3空白樣品所述的水或緩沖液作為空白樣品，其半乳糖濃度為0微摩爾/升； 2. 2試劑溶液的制備分別移取或稱取緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、半乳糖激酶、氨激酶、甘氨酸脫氫酶、腺 苷三磷酸、磷酸胺與乙醛酸，然后將它們混合均勻，用水溶解得到所述的試劑溶液，它們的 濃度分別是 20-500mmol/L、0. 001_7mol/L、0. 1-0. 35mmol/L, 1000-80000U/L, 1000-80000U/ L、1000-80000U/L、l-100mmol/L、l-100mmol/L 與 l-lOOmmol/L ；2. 3待測(cè)樣品與在步驟2. 2)得到的試劑溶液按照體積比1/10至1/500進(jìn)行混合，在溫 度15-45°C下反應(yīng)5-60分鐘，在主波長(zhǎng)340nm與副波長(zhǎng)405nm(如果受儀器限制，可以不設(shè) 副波長(zhǎng))下進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定其吸光度隨時(shí)間的變化；2. 4在與步驟2. 3)同樣的條件下測(cè)定步驟2. 1. 1)標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度隨時(shí)間的變化； 2. 5在與步驟2. 3)同樣的條件下測(cè)定在步驟2. 1. 3)使用的水或緩沖液作為空白溶液 的吸光度隨時(shí)間的變化；2.6數(shù)據(jù)處理由步驟2. 3-2. 5)所述測(cè)定的主波長(zhǎng)340nm的吸光度隨時(shí)間的變化，根據(jù)下式計(jì)算得到 半乳糖的含量ΔΑ(樣品)-ΔΑ (空白)半乳糖含量=-χ標(biāo)準(zhǔn)濃度(μπιοΙ/L )ΔΑ (標(biāo)準(zhǔn))-ΔΑ (空白)式中ΔΑ(樣品)表示步驟2. 3)得到的待測(cè)樣品的吸光度變化； ΔΑ(空白)表示步驟2. 5)得到的空白溶液的吸光度變化； 八八(標(biāo)準(zhǔn))表示步驟2. 4)標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度變化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的測(cè)定方法，其特征在于使用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定時(shí)，待 測(cè)樣品、所述標(biāo)準(zhǔn)樣品與所述空白樣品由該分析儀在設(shè)定條件下自動(dòng)取樣，然后在下述條 件下進(jìn)行測(cè)定測(cè)定方法為終點(diǎn)法，溫度37°C，反應(yīng)時(shí)間10分鐘，測(cè)試主波長(zhǎng)340nm，測(cè)試副波長(zhǎng)405m，被測(cè)半乳糖樣品與試劑的體積比例為1/10-1/500，反應(yīng)方向?yàn)樨?fù)反應(yīng)，延遲時(shí) 間0分鐘，檢測(cè)時(shí)間5分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的測(cè)定方法，其特征在于，所述的穩(wěn)定劑是一種或多種選 自氯化鈉、乙二醇、丙二醇、甘油或雙乙酸鈉、疊氮鈉等防腐劑的穩(wěn)定劑；所述的緩沖液是一 種或多種選自三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液、磷酸鹽緩沖液、咪唑-鹽酸緩沖液、磷 酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、硼砂-鹽酸緩沖液、甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液、巴比妥鈉-鹽酸 緩沖液、硼酸-硼砂緩沖液、二乙醇胺緩沖液或“PBS”緩沖液的緩沖液；所述的還原型輔酶 是一種或多種選自NADPH、NADH或thio_NADH的還原型輔酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的測(cè)定方法，其特征在于 5. 1所述的試劑溶液配制成如下單劑試劑它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、磷酸胺、乙醛酸、半乳糖激酶、 氨激酶與甘氨酸脫氫酶組成的；·5. 2所述的試劑溶液配制成如下雙劑試劑試劑1，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、磷酸胺與乙醛酸組成的；試劑2，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、半乳糖激酶、氨激酶與甘氨酸脫氫酶組成的； 其中還原型輔酶、半乳糖激酶、氨激酶、甘氨酸脫氫酶、腺苷三磷酸、磷酸胺、乙醛酸在 試劑1或試劑2中的位置是不限定的。·5.3所述的試劑配制成如下三劑試劑試劑1，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、還原型輔酶、腺苷三磷酸、磷酸胺與乙醛酸組成的；試劑2，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑、氨激酶與甘氨酸脫氫酶組成的； 試劑3，它是由所述的緩沖液、穩(wěn)定劑與半乳糖激酶組成的；其中還原型輔酶、半乳糖激酶、氨激酶、甘氨酸脫氫酶、腺苷三磷酸、磷酸胺、乙醛酸在 試劑1、試劑2或試劑3中的位置是不限定的。
6.一種半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒，其特征在于6. 1它由下述粉狀試劑組成，在使用時(shí)用水將它們?nèi)芙獾玫骄哂邢率鰸舛确秶目芍?接使用的液體試劑20-500mmol/L 0.001-7mol/L 0.1-0. 35mmol/L 1000-80000U/L 1000-80000U/L 1000-80000U/L l-100mmol/L l-100mmol/L l-100mmol/Lo6. 2根據(jù)權(quán)利要求6. 1所述的半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒，其特征在于它有 組成如下的試劑1 緩沖液 穩(wěn)定劑 還原型輔酶 半乳糖激酶 氨激酶甘氨酸脫氫酶 腺苷三磷酸 磷酸胺 乙醛酸緩沖液20—500mmol／L穩(wěn)定劑0．001-7mol／L還原型輔酶0．1-0．35mmol／L腺苷三磷酸1-lOOmmol／L磷酸胺1-lOOmmol／L乙醛酸1-lOOmmol／L；組成如下的試劑2緩沖液20—500mmol／L穩(wěn)定劑0．001-7mol／L半乳糖激酶1000—80000u／L氨激酶1 000—80000u／L甘氨酸脫氫酶1000—80000u／L。6.3根據(jù)權(quán)利要求6．1所述的半乳糖診斷／測(cè)定試劑盒，其特征在于它有組成如下的試劑l緩沖液20—500mmol／L穩(wěn)定劑0．001-7mol／L還原型輔酶0．1-0．35mmol／L腺苷三磷酸1-100mm01／L磷酸胺1-100mm01／L乙醛酸1-lOOmmol／L；組成如下的試劑2緩沖液20—500mmol／L穩(wěn)定劑0．001-7mol／L氨激酶1 000—80000u／L甘氨酸脫氫酶1000—80000u／L；組成如下的試劑3緩沖液20—500mmol／L穩(wěn)定劑0．001-7mol／L半乳糖激酶1000—80000u／L。
全文摘要
本發(fā)明涉及利用酶比色法及酶聯(lián)法技術(shù)的半乳糖含量的測(cè)定方法、試劑的組成及成分，還涉及一種半乳糖診斷/測(cè)定試劑盒。本發(fā)明的測(cè)定方法靈敏度高、誤差小，因此本發(fā)明的測(cè)定方法與試劑盒可以廣泛地應(yīng)用于臨床/食品檢驗(yàn)。
文檔編號(hào)G01N21/33GK102081097SQ20091023200
公開日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2009年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月30日
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