專利名稱：水稻愈傷組織質(zhì)量評(píng)價(jià)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水稻質(zhì)量評(píng)價(jià)技術(shù)領(lǐng)域，更具體涉及水稻愈傷組織質(zhì)量評(píng)價(jià)方法。該 方法適用于所有水稻。
背景技術(shù)：
在水稻組織培養(yǎng)以及其他物種的組織培養(yǎng)研究過程中，我們要進(jìn)行培養(yǎng)基對(duì)愈傷 組織的生長率和生長質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估，為培養(yǎng)基篩選和設(shè)計(jì)提供依據(jù)，對(duì)生長率進(jìn)行評(píng)價(jià)很 容易進(jìn)行，只要計(jì)算愈傷繼代前后的重量比值即可，但是對(duì)愈傷質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)就要有相應(yīng) 的模型，在此之前還沒有這種模型被建立。這就給培養(yǎng)基的綜合評(píng)估帶來了問題。所以本 發(fā)明是建立了愈傷組織評(píng)價(jià)的模型，主要對(duì)愈傷組織質(zhì)量相關(guān)的四個(gè)形狀進(jìn)行評(píng)估、統(tǒng)計(jì)， 將愈傷組織的質(zhì)量進(jìn)行量化，這樣就有利于對(duì)愈傷組織的質(zhì)量進(jìn)行量化評(píng)比，使得我們對(duì) 培養(yǎng)基的研究更為嚴(yán)謹(jǐn)，方便。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是在于提供了一種水稻愈傷組織質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，該方法首次建立了 水稻愈傷組織的評(píng)價(jià)模型，評(píng)價(jià)結(jié)果和轉(zhuǎn)基因效率基本一致，模型的建立有利于實(shí)驗(yàn)和生 產(chǎn)的評(píng)估，比較和質(zhì)量控制。本評(píng)價(jià)模型得分低于70以下愈傷組織質(zhì)量較差，分化率不高， 也很難進(jìn)行轉(zhuǎn)基因操作；得分在70-90之間的愈傷組織已經(jīng)適合分化，可以得到較高的分 化率，仍得不到較高的轉(zhuǎn)化率，很難轉(zhuǎn)化成功，得分大于90的愈傷組織適合農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化操 作，也有最高的分化率。為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施一種水稻愈傷組織質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，其步驟是1)、本評(píng)估系統(tǒng)以愈傷組織顆粒，愈傷組織色澤，愈傷組織是否水化，愈傷組織是 否有分化趨勢(shì)共四個(gè)指標(biāo)做為評(píng)價(jià)指標(biāo)。2)、顆粒指標(biāo)(P)愈傷組織顆粒根據(jù)愈傷組織生長的具體情況分為1，顆粒散 碎，硬度低；2，顆粒致密，硬度高。3)、如步驟2)所描述顆粒散碎定義為愈傷組織的直徑小于3mm，容易松散，不緊 密，并且愈傷組織表面毛刺狀不平滑，切片特征為愈傷組織斷裂處較多，愈傷組織邊緣不清 晰，切片觀察如圖.U。顆粒致密定義為愈傷組織直徑大于3mm的顆粒，顆粒致密硬度高 不宜松散，愈傷組織表面光滑狀，切片觀察為細(xì)胞致密，胞質(zhì)密度高，愈傷組織邊緣清晰，愈 傷組織組織的外層細(xì)胞結(jié)構(gòu)明顯。4)、愈傷組織色澤指標(biāo)(C)根據(jù)愈傷組織生長的具體情況分為五個(gè)等級(jí)，1，蒼 白；2，黃白；3，黃；4，深黃；5，褐。如果一塊愈傷組織上有一點(diǎn)出現(xiàn)黑(褐)點(diǎn)，則這塊愈傷 組織的整體色澤特征定義為”褐”，如果愈傷組織上有一點(diǎn)出現(xiàn)蒼白特征，這塊愈傷組織整 體特征將定義為”蒼白”。愈傷組織具有蒼白特征則往往和水化特征相連，愈傷組織質(zhì)地變 軟，細(xì)胞死亡。
5)、如步驟4)所描述的5個(gè)顏色指標(biāo)，以R，G，B顏色系統(tǒng)定義如下表觀察光源 為日光燈管，色溫6500度，亮度5001ux ；
權(quán)利要求
1. 一種水稻愈傷組織質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，其步驟是1)、本評(píng)估系統(tǒng)以愈傷組織顆粒，愈傷組織色澤，愈傷組織是否水化，愈傷組織是否有 分化趨勢(shì)共四個(gè)指標(biāo)做為評(píng)價(jià)指標(biāo)；2)、顆粒指標(biāo)(P):愈傷組織顆粒根據(jù)愈傷組織生長的具體情況分為a、顆粒散碎，硬 度低；b、顆粒致密，硬度高；3)、如步驟2)所描述顆粒散碎定義為愈傷組織的直徑小于3mm，容易松散，不緊密， 并且愈傷組織表面毛刺狀不平滑，切片為愈傷組織斷裂處多，愈傷組織邊緣不清晰，切片觀 察，顆粒致密定義為愈傷組織直徑大于3mm的顆粒，顆粒致密硬度高，愈傷組織表面光滑 狀，切片觀察為細(xì)胞致密，胞質(zhì)密度高，愈傷組織邊緣清晰，愈傷組織組織的頂層細(xì)胞結(jié)構(gòu) 明顯；4)、愈傷組織色澤指標(biāo)(C)根據(jù)愈傷組織生長的具體情況分為五個(gè)等級(jí)，a、蒼白；b、 黃白；C、黃；d、深黃；e、褐，一塊愈傷組織上出現(xiàn)黑點(diǎn)，這塊愈傷組織的整體色澤特征定義 為褐，愈傷組織上有出現(xiàn)蒼白特征，這塊愈傷組織整體特征將定義為蒼白，愈傷組織有蒼白 特征則往往和水化特征相連，愈傷組織質(zhì)地變軟，細(xì)胞死亡；5)、如步驟4)所描述的5個(gè)顏色指標(biāo)，以R，G，B顏色系統(tǒng)定義如下表觀察光源為日 光燈管，色溫:6500度，亮度500Iux ；6)、愈傷組織水化(H):a、愈傷組織水化愈傷組織出現(xiàn)發(fā)白，發(fā)軟，慘白死亡的現(xiàn)象； 切片特征為愈傷組織的表面層愈傷組織糜散；b、愈傷組織無水化愈傷組織堅(jiān)硬沒有出現(xiàn) 水軟的現(xiàn)象，切片觀察可見愈傷組織表層細(xì)胞層清晰，有明顯的表層致密層結(jié)構(gòu)；7)、愈傷組織有分化趨勢(shì)(D):a、愈傷組織有長出根狀分化的特征，切片觀察為愈傷組 織表層愈傷組織的致密層變薄或消失，愈傷組織內(nèi)部有跟源基發(fā)生；b、愈傷組織正常無分 化趨勢(shì)切片觀察愈傷組織表層有明顯的致密層愈傷組織，愈傷組織內(nèi)部細(xì)胞大小和結(jié)構(gòu) 均勻，沒有明顯的區(qū)域結(jié)構(gòu)，愈傷組織分化趨勢(shì)使得下一步的繼代開始容易褐化，有分化趨 勢(shì)的愈傷組織轉(zhuǎn)基因沒有效率，侵染后很快死亡；8)、顆粒指標(biāo)(P)的權(quán)重系數(shù)Pc= 15 ；愈傷組織色澤(C)的權(quán)重系數(shù)Cc = 25 ；愈傷組 織水化(H)的權(quán)重系數(shù)Hc = 40 ；愈傷組織分化趨勢(shì)(D)的權(quán)重系數(shù)Dc = 20 ；Pc+Cc+Hc+Dc =100 ；9)、顆粒系數(shù)(P)的狀態(tài)，顆粒散碎的得分系數(shù)Pl= 0 ；顆粒致密的得分系數(shù)P2 = 1， 散碎顆粒所占的比值Plp，致密顆粒所占的比值P2p ；Plp+P2p = 1 ；10)、愈傷組織色澤指標(biāo)(C)的得分系數(shù)定義為C1= -1 ；C2 = 0. 75 ；C3 = 1 ;C4 = 0， 75 ；C5 = -1 ；Cl到C5分別代表蒼白，黃白，黃，深黃，褐五種狀態(tài)的得分系數(shù)，這5種狀態(tài)所 占的比例分別定義為:Clp, C2p，C3p，C4p，C5p。C lp+C2p+C3p+C4p+C5p = 1 ；11)、愈傷組織水化指標(biāo)(H)的得分系數(shù)H1= -1 ；H2 = 1，Hl為水化愈傷組織的得分 系數(shù)，H2為未水化愈傷組織的得分系數(shù)。這兩種狀態(tài)的愈傷組織所占比例分別定義為Hlp， H2p ；Hlp+H2p = 1 ；12)、愈傷組織分化指標(biāo)(D)的得分系數(shù)D1= -1 ；D2 = 1，Dl為有分化趨勢(shì)的愈傷組 織的得分系數(shù)，H2為未出現(xiàn)分化趨勢(shì)的愈傷組織的得分系數(shù)，這兩種狀態(tài)的愈傷組織所占 比例分別定義為:Dlp, D2p。Dlp+D2p = 1 ；13)、愈傷組織質(zhì)量得分的計(jì)算CS = (Pl*Plp+P2*P2p)*Pc+ (Cl*Clp+C2*C2p+C3*C3p+C4*(^p+C5*C5p)*Cc+(Hl*Hlp+H 2氺H2p)氺Hc+(D1氺Dlp+D2氺D2p)氺Dc ；14)步驟1 描述的CS值低于70以下愈傷組織質(zhì)量較差，分化率不高，很難進(jìn)行轉(zhuǎn) 基因操作；得分在70-90之間的愈傷組織已經(jīng)適合分化，得到高的分化率，得不到高的轉(zhuǎn)化 率，很難轉(zhuǎn)化成功，得分90分以上的愈傷組織適合農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化操作，也有最高的分化率。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種水稻愈傷組織質(zhì)量評(píng)價(jià)方法，其步驟是1)本評(píng)估系統(tǒng)以愈傷組織顆粒；2)顆粒指標(biāo)；3)所描述顆粒散碎；4)愈傷組織色澤指標(biāo)；5)所描述的5個(gè)顏色指標(biāo)；6)愈傷組織水化；7)愈傷組織有分化趨勢(shì)；8)顆粒指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)Pc＝15；9)顆粒系數(shù)的狀態(tài)；10)愈傷組織色澤指標(biāo)的得分系數(shù)；11)愈傷組織水化指標(biāo)的得分系數(shù)；12)愈傷組織分化指標(biāo)的得分系數(shù)13)愈傷組織質(zhì)量得分的計(jì)算；14)描述的CS值低于70以下愈傷組織質(zhì)量較差，得分90分以上的愈傷組織適合農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化操作，有最高的分化率。建立了水稻愈傷組織的評(píng)價(jià)模型，評(píng)價(jià)結(jié)果和轉(zhuǎn)基因效率一致，有利于實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)的評(píng)估，比較和質(zhì)量控制。
文檔編號(hào)G01N15/02GK102081031SQ20091027296
公開日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2009年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月27日
發(fā)明者李陽, 李陽生 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)