專利名稱：應用于單克隆抗體篩選的大間距組織芯片的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種生物芯片，特別涉及能篩選用于免疫組織化學染色 的分泌單克隆抗體的雜交瘤的培養(yǎng)上清的大間距組織芯片。
背景技術：
隨著"人類基因組計劃"的完成，人類已經(jīng)進入"功能基因組計劃"，蛋 白質(zhì)組學是"功能基因組計劃"的重要研究內(nèi)容。蛋白質(zhì)結構和功能的多樣 性決定了蛋白質(zhì)組學研究的復雜性，尤其是新基因所編碼的蛋白質(zhì)的表達分 布規(guī)律、結構和功能的揭示對生物學家來說是極富挑戰(zhàn)性的。研究蛋白質(zhì)的 表達分布規(guī)律最常用的方法是免疫組織化學染色技術，它是利用特異性抗體 在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行 定性、定位、定量測定的一項技術。單克隆抗體由于其識別表位的均一性和 特異性以及制備抗體質(zhì)量的穩(wěn)定性，在免疫組織化學染色中的應用越來越受 到重視。免疫組織化學染色技術把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧 妙地結合起來，借助顯微鏡(包括光學顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的 顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測目的蛋白質(zhì)。免疫組織化學技術 中最為重要的是可特異識別目的蛋白質(zhì)的第一抗體，最常用的組織切片是石 蠟切片。由于石蠟切片制備過程中需要經(jīng)過福爾馬林固定、脫水及浸蠟等過 程，蛋白質(zhì)的空間構像常常發(fā)生改變，所以用酶聯(lián)免疫吸附試驗、流式細胞 術等方法篩選到的單克隆抗體常常不能識別這種改變的構像，故不能應用于免疫組織化學染色。因此，要獲得能應用于免疫組織化學染色的單克隆抗體， 最好選用免疫組織化學染色的方法來篩選，而常規(guī)的大體切片的染色需要消 耗大量的人力和時間，遠遠不能滿足單克隆抗體篩選的需要。 發(fā)明內(nèi)容
為了克服上述現(xiàn)有技術不足，本實用新型的目的在于提供一種應用于單 克隆抗體篩選的大間距組織芯片，該芯片可大大提高免疫組織化學染色的效 率，大大減少染色需要的人力和時間，從而滿足篩選分泌單克隆抗體的雜交 瘤的培養(yǎng)上清的需要。
本實用新型采取以下的技術方案 一種大間距組織芯片，包括32個來源 于相同組織的小組織樣本，每個樣本直徑為1.5毫米，這些小組織樣本構成
一個4行X8列的微陣列，在每行或每列中相鄰組織樣本之間的間距均為4
該組織芯片技術是將32個直徑1.5毫米的小組織樣本，以4x8陣列方式 包埋于一塊25mmX50mm的石蠟蠟塊中，然后進行切片。該實用新型可將 組織樣本集中于一張芯片上，有利于實驗條件的標準化，有效避免主觀原因 造成的實驗誤差。
本實用新型明顯減少每個組織樣本的處理時間，使得在較短時間內(nèi)完成 大量組織樣本的免疫組織化學染色成為可能，從而使數(shù)量眾多的、不同克隆 的單克隆抗體的篩選和陽性克隆的克隆化可以在同一天內(nèi)進行；將免疫組織 化學染色條件包括抗原修復、溫度、洗滌時間及所用試劑濃度均加以標準化， 保證了實驗結果的準確可靠；由于每張芯片上有32個組織樣本，可大大減少 組織切片管理的工作量；由于4行x8列的微陣列排列方式與單克隆抗體制備中使用的96孔板的布局相同，故96孔板中的單克隆抗體上清可以很方便地 加在芯片的相應的組織樣本上，最大限度地減少樣品間混淆的可能性。

圖l是本實用新型大間距組織芯片結構示意圖，A、組織樣本，B、 4毫 米組織樣本列間距，C、 4毫米組織樣本行間距；
圖2是用PAP疏水筆分隔每個組織樣本的示意圖，圖中的標號為，D、 組織樣本，E、 PAP疏水線；
圖3是大間距組織芯片應用示意圖，F(xiàn)、擬篩選的培養(yǎng)雜交瘤的96孔板， G、 32種(4列X8行)待測上清編號，H、加完待測上清后的大間距組織芯 片。
以下結合附圖對本實用新型的內(nèi)容作進一步的詳細說明。
具體實施方式

參見圖1、圖2、圖3所示，本實用新型的一種大間距組織芯片，包括 32個來源于相同組織的小組織樣本，每個樣本直徑為1.5毫米，這些小組織 樣本構成一個4行X8列的微陣列，在每行或每列中相鄰組織樣本之間的間 距均為4毫米，可以很方便的用PAP疏水筆分隔每個組織樣本，使得一張芯 片足夠檢測32個不同的單克隆抗體待測上清。
大間距組織芯片可用于免疫組織化學染色的能分泌單克隆抗體的雜交瘤 的培養(yǎng)上清的篩選，其方法和步驟是
1) 將大間距組織芯片脫蠟至水并進行抗原修復，抗原修復完成后以PAP 疏水筆分隔每個組織樣本(圖2);
2) 0.3%甲醇-雙氧水浸泡30分鐘消除內(nèi)源性過氧化物酶活性后用羊血清封閉30分鐘；
3) 將96孔板中的待測雜交瘤上清移入一塊新的96孔板，并依順序加在 大間距組織芯片相應的位置(圖3);
4) 依次滴加生物素標記的第二抗體和ABC復合物，DAB顯色后用蘇木 素襯染，中性樹膠封片后顯微鏡下觀察，確定陽性結果，將陽性克隆用有限 稀釋法進行克隆化。
權利要求1.一種應用于單克隆抗體篩選的大間距組織芯片，包括一載玻片，其特征在于，在載玻片上分布有32個來源于相同組織的小組織樣本，構成一個4行×8列的微陣列，每行中相鄰小組織樣本之間的間距為4毫米。
2. 根據(jù)權利要求1所述的應用于單克隆抗體篩選的大間距組織芯片，其 特征在于，每列中相鄰小組織樣本之間的間距為4毫米。
3. 根據(jù)權利要求1所述的應用于單克隆抗體篩選的大間距組織芯片，其 特征在于，每個小組織樣本直徑為1.5毫米。
專利摘要本實用新型公開了一種應用于單克隆抗體篩選的大間距組織芯片，該芯片包括一載玻片，在載玻片上分布有32個來源于相同組織的小組織樣本，構成一個4行×8列的微陣列，每行中相鄰小組織樣本之間的間距為4毫米。每列中相鄰小組織樣本之間的間距為4毫米。本實用新型可大大提高免疫組織化學染色的效率，大大減少染色需要的人力和時間，從而滿足篩選分泌單克隆抗體的雜交瘤的培養(yǎng)上清的需要。
文檔編號G01N33/577GK201368876SQ20092003176
公開日2009年12月23日 申請日期2009年1月20日 優(yōu)先權日2009年1月20日
發(fā)明者宋朝君, 琨 楊, 王福利, 金伯泉 申請人:中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學