專利名稱：EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體聯(lián)檢免疫層析試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及生物技術領域，尤其是涉及 -種EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗體免 疫層析聯(lián)檢試劑盒。
背景技術：
鼻咽癌(NPC)是上皮細胞來源地惡性腫瘤，在世界各地廣泛存在。在我國南方，特 別是珠江三角洲及香港地區(qū)，是世界上鼻咽癌的高發(fā)區(qū)。我國約有80%以上的健康成人是 EB病毒攜帶者。在東南亞和北非也有較高的發(fā)病率。早期鼻咽癌放療后5年生存率可達 80-90%，而晚期鼻咽癌的生存率僅為20% 。因此加強鼻咽癌的二級預防，即早發(fā)現(xiàn)、早診斷 和早治療是提高鼻咽癌患者存活率的關鍵。 鼻咽癌的發(fā)生與EB病毒(Epstein-Barr， EBV)感染密切相關，通過檢測EBV的抗 體早期診斷NPC是提高NPC患者存活率的一個重要手段。 研究表明，鼻咽癌病人在臨床癥狀出現(xiàn)平均前三年時，就可觀察到其血清中多種 抗EB病毒抗原抗體的含量顯著升高，因而目前臨床上篩査鼻咽癌患者最常用的手段即免 疫血清學檢測EB病毒感染。其中臨床....匕普遍使用的檢測指標有EA-IgG、VCA-IgA等。由于 不同鼻咽癌病人的抗體譜不完全相同，因此多種抗原抗體的聯(lián)合檢測可進一步提高其診斷 性能。有實驗表明，多種抗體聯(lián)檢的敏感度和特異性均較抗體單檢有所提高，而且可以用于 鼻咽癌高發(fā)區(qū)健康人群篩査的風險評估。 目前在臨床上應用的對血清EB病毒抗體的檢測方法常為免疫熒光法和免疫酶標 法。免疫熒光法檢測EB抗體雖靈敏度和特異性較好，但是其結果判斷帶有主觀性，不易標 準化。ELISA與熒光法比較更快速方便，且易于標準化，但是耗時較長。 如何高效快速的對多種EB病毒的抗體進行檢測，是目前研究的一個熱點。膠體金 免疫層析法在ELISA基礎上應運而生，其原理是以硝酸纖維素膜為載體，利用毛細管作用 及吸水作用，使抗原和抗體的反應在一個特殊的層析裝置上，以標本通過層析方式在膜上 前進的方式快速的完成檢測過程。此方法檢測抗體簡單快速，不需其他儀器設備，幾分鐘即 可用肉眼觀察檢測結果，目前已在臨床檢測中取得了廣泛的應用，且在整個免疫學檢測范 圍內也有廣泛的應用。采用膠體金免疫層析技術聯(lián)合檢測EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗體， 雖在臨床上有很高的實用檢測意義，但目前尚未有將膠體金免疫層析技術應用于EB病毒 抗體的聯(lián)合檢測。

發(fā)明內容本實用新型的目的在于提供一種EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體聯(lián)檢免疫層析試劑
.品.o 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明可采取下述技術方案 本實用新型所述的EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗體免疫層析聯(lián)檢試劑盒，包括聯(lián)檢 反應試紙條,所述試紙條包括PVC基板，貼覆在PVC基板中部的硝酸纖維素膜，以及劃于硝酸纖維素膜上的包被有EB病毒的EA純化抗原蛋白、VCA純化抗原蛋白和質控物羊抗鼠IgG 抗體的點樣線，在所述硝酸纖維素膜(2)下端粘貼有膠體金墊，膠體金墊F端粘貼有樣品 墊；在所述PVC基板的吸水端粘貼有棉漿板。 將試紙條置于帶有卡蓋的卡體內，在所述卡蓋上對應于點樣線的位置處開設有觀 察窗口 ，對應于棉漿板位置處開設有加樣孔，就變成了卡式試劑盒。 卡式試劑盒的卡體可以為條形卡體、方形卡體或扇形卡體。 當為條形卡體時，包被有EB病毒的EA純化抗原蛋白、VCA純化抗原蛋白和質控物 羊抗鼠I gG抗體的三條平行點樣線位于同一硝酸纖維素膜上。 當為方形卡體或扇形卡體時，包被有EB病毒的EA純化抗原蛋白、VCA純化抗原蛋 白點樣線分別與質控物羊抗鼠IgG抗體的點樣線組合，在兩個硝酸纖維素膜上劃平行線。 本實用新型中的試劑盒利用了膠體金免疫層析的原理,使EA病毒的兩種抗原、抗 體在同一層析裝置(硝酸纖維素膜)上進行反應,并通過肉眼觀查各條線的顯色情況，從而 對EA病毒的EA-IgG、 VCA-IgA抗體進行檢測。 本實用新型所述的試劑盒同ELISA試劑盒相比，其優(yōu)點在于 1、同時檢測多種抗體EB病毒兩種抗體的聯(lián)合檢測提高了檢測的靈敏度和特異
性，對鼻咽癌的診斷有很好的臨床意義。 2、反應時間短整個實驗可在3-5分鐘內即可完成，適合大規(guī)模的快速血檢。該試
劑盒僅有兩歩檢測步驟，但敏感度卻與需卜2小時完成的ELISA接近。 3、檢測過程中不需其他儀器設備，因此檢測結果也不受儀器的影響，同時不受反
應環(huán)境的影響，加入膠體金標記物即可顯色,操作簡便。 本實用新型試劑盒與傳統(tǒng)膠體金試劑盒相比，其優(yōu)點在于 1 、同時檢測EB病毒的兩種抗原，靈敏度和特異性均較單檢高。 本實用新型中試劑盒利用膠體金免疫層析技術的原理，在同一裝置上實現(xiàn)了對兩 種EB病毒抗體的同時檢測，操作簡便、迅速、準確，可適用于大規(guī)模血液檢查，更有利于鼻 咽癌患者的早期發(fā)現(xiàn)和診斷。

圖1是本實用新型條式試劑盒的結構示意圖。 圖2、圖3、圖4是本實用新型卡式試劑盒的結構示意圖。
具體實施方式
實施例1 : 如圖1所示，本實用新型EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體免疫層析聯(lián)檢試劑盒，包括 聯(lián)檢反應試紙條，所述試紙條包括PVC基板1 ，貼覆在PVC基板1中部的硝酸纖維素膜2，以 及劃于硝酸纖維素膜上的包被有EB病毒的EA純化抗原蛋白、VCA純化抗原蛋白和質控物羊 抗鼠IgG抗體的點樣線3，在所述硝酸纖維素膜(2)下端粘貼有膠體金墊，膠體金墊Rl粘 貼有樣品墊；在所述PVC基板1的吸水端粘貼有棉漿板,在其上、下端貼色標膜和Mark線；使用時,將試紙條標志線一端插入待檢標本中(浸入時標本液面不要超過箭頭指示線)； 20min后肉眼觀察結果，質控線無論EB病毒抗體陽性或陰性均顯色，若質控線不顯色說明 本檢測試紙失效；觀察相應檢測線位置有無紅色線條,檢測線呈紅色或淺紅色證明EB病毒 抗體在體內呈陽性，檢測線不顯色判為陰性。 實施例2 : 本實用新型EB病毒EA-IgG、 VCA-IgA抗體免疫層析聯(lián)檢試劑盒，包括置于卡體內 的試紙條，所述試紙條包括PVC基板1，貼覆在PVC基板1中部的硝酸纖維素膜2，以及劃于 硝酸纖維素膜上的包被有EB病毒的EA純化抗原蛋白、VCA純化抗原蛋白和質控物羊抗鼠 IgG抗體的點樣線3，在所述硝酸纖維素膜(2)下端粘貼有膠體金墊，膠體金墊下端粘貼有 樣品墊；在所述PVC基板1的吸水端粘貼有棉漿板；在所述卡體的卡蓋4 ....匕對應于點樣線 3的位置處開設有觀察窗口 5,對應于棉漿板位置處開設有加樣孔6,根據(jù)實際情況，所述卡 體可以為條形、方形、扇形或其他幾何形狀。 當為條形卡體時，如圖2所示，包被有EB病毒的EA純化抗原蛋白、VCA純化抗原
蛋白和質控物羊抗鼠IgG抗體的三條平行點樣線位于同一硝酸纖維素膜上。 當為方形卡體或扇形卡體時，如圖3、4所示，包被有EB病毒的EA純化抗原蛋白、
VCA純化抗原蛋白點樣線分別與質控物羊抗鼠IgG抗體的點樣線組合，在兩個硝酸纖維素
膜上劃平行線。 使用時，取出試劑盒，平放于操作臺上，用一次性塑料滴管在加樣端加入待測標本 (血清、血漿或全血)80 y 1 ;20min后肉眼觀察結果，質控線無論EB病毒抗體陽性或陰性均 顯色,若質控線不顯色說明本檢測試紙失效；觀察相應檢測線位置有無紅色線條，檢測線呈 紅色或淺紅色證明EB病毒抗體在體內呈陽性,檢測線不顯色判為陰性。
權利要求一種EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體免疫層析聯(lián)檢試劑盒，包括聯(lián)檢反應試紙條，其特征在于所述試紙條包括PVC基板(1)，貼覆在PVC基板(1)中部的硝酸纖維素膜(2)，以及劃于硝酸纖維素膜上的包被有EB病毒的EA純化抗原蛋白、VCA純化抗原蛋白和質控物羊抗鼠IgG抗體的點樣線(3)，在所述硝酸纖維素膜(2)下端粘貼有膠體金墊，膠體金墊下端粘貼有樣品墊；在所述PVC基板的吸水端粘貼有棉漿板。
2. 根據(jù)權利要求1所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體免疫層析聯(lián)檢試劑盒，其特征 在于所述試紙條置于帶有卡蓋(4)的卡體內，在所述卡蓋(4)....匕對應于點樣線(3)的位置 處開設有觀察窗口 (5),對應于棉漿板位置處開設有加樣孔(6)。
3. 根據(jù)權利要求2所述的EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體免疫層析聯(lián)檢試劑盒，其特征 在于所述卡體為條形卡體、方形卡體或扇形卡體。
專利摘要本實用新型公開了一種EB病毒EA-IgG、VCA-IgA抗體免疫層析聯(lián)檢試劑盒，包括聯(lián)檢反應試紙條，所述試紙條包括PVC基板，貼覆在PVC基板中部的硝酸纖維素膜，以及劃于硝酸纖維素膜上的包被有EB病毒的EA純化抗原蛋白、VCA純化抗原蛋白和質控物羊抗鼠IgG抗體的點樣線，在所述硝酸纖維素膜下端粘貼有膠體金墊，所述膠體金墊下端粘貼有樣品墊；在所述PVC基板的吸水端粘貼有棉漿板。本實用新型的試劑盒利用了膠體金免疫層析的原理，使EA病毒的兩種抗原、抗體在同一層析裝置(硝酸纖維素膜)上進行反應，并通過肉眼觀查各條線的顯色情況，從而對EA病毒的EA-IgG、VCA-IgA抗體進行檢測。
文檔編號G01N33/569GK201464479SQ200920091660
公開日2010年5月12日 申請日期2009年7月17日 優(yōu)先權日2009年7月17日
發(fā)明者付光宇, 劉功成, 吳學煒, 張銀, 李奎, 李桂林, 李靜輝, 王菁, 苗擁軍, 項立紅 申請人:鄭州安圖綠科生物工程有限公司