專利名稱：檢測克倫特羅藥物殘留的膠體金試紙卡的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型屬于獸藥殘留的免疫化學(xué)速測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種克倫特羅藥物
檢測試紙卡。
背景技術(shù)：
克侖特羅(Clenbuterol)屬于P _興奮劑，近年來被非法添加到飼料中以提高脂肪型動物的瘦肉率和加速動物生長，因其添加劑量是治療劑量的5-10倍，以至于在動物體內(nèi)殘留量高而給消費者帶來危害。 目前克倫特羅殘留常用的檢測方法有兩種。 一種是色譜分析，如氣相色譜法(GC)，由于復(fù)雜的儀器設(shè)備和繁瑣的過程，不適合現(xiàn)場監(jiān)控和大量樣本篩查。另一種為免疫學(xué)方法，如酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。它的缺點是檢測時間長，費用較高，不利于在基層單位推廣使用。而且，這兩種方法都需要專業(yè)技術(shù)人員進行操作。

實用新型內(nèi)容本實用新型的目的提供一種靈敏度高、成本低、操作簡單、檢測時間短的試紙卡。 本實用新型的試紙卡包括塑料盒體和盒體內(nèi)的試紙條，塑料盒體上帶有加樣孔和
觀察窗，試紙條由底板、附著在底板上依次緊密相連的樣本吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜
和吸水墊等組成，與常規(guī)試紙條不同的是，其中的結(jié)合物釋放墊不是完全覆蓋在樣本吸收
墊之下，而是部分區(qū)域覆蓋于樣本吸收墊之下，結(jié)合物釋放墊的二分之一至三分之一區(qū)域
覆蓋于樣本吸收墊之下，優(yōu)選結(jié)合物釋放墊的三分之一區(qū)域覆蓋于樣本吸收墊之下。 這樣做的好處是可以延長檢測結(jié)果觀察時間，樣本吸收墊也可以將檢測液體充分
吸收與金標(biāo)抗體完全接觸充分反應(yīng)，再層析至反應(yīng)膜上進行反應(yīng)，可以有效的減少誤差。還
可以防止檢測樣本中一些干擾成份使金標(biāo)抗體中的蛋白失去活性，影響金標(biāo)抗體與包被原
的結(jié)合。 所述反應(yīng)膜上分別包被有克倫特羅_載體蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成的檢測線印跡"I "和包被羊抗鼠IgG構(gòu)成的質(zhì)控線印跡"I "，檢測線位于距離結(jié)合物釋放墊一側(cè)0. 5cm處，檢測線和質(zhì)控線平行。從而可以用于克倫特羅藥物的殘留檢測。 本實用新型試紙卡塑料盒體上帶有加樣孔和觀察窗，盒體內(nèi)試紙條的底板為可PVC板或者是其它硬質(zhì)而不吸水的材料；反應(yīng)膜可為硝酸纖維素膜或者醋酸纖維素膜；樣本吸收墊可由玻璃棉或聚酯材料制成；結(jié)合物釋放墊可由纖維制成，結(jié)合物釋放墊層包被有克倫特羅抗體_膠體金結(jié)合物。
偶聯(lián)克倫特羅載體蛋白可用卵血清蛋白、或人血清白蛋白、牛血清白蛋白、血藍(lán)蛋白等，在反應(yīng)膜上的檢測線印跡和質(zhì)控線的對照印跡組合排列可為"I I "[0010] 本實用新型試紙卡具有如下有益效果 1.特異性強，靈敏度高?？藗愄亓_快速檢測試紙卡以膠體金標(biāo)記高親和力的單克隆為基礎(chǔ)制備而成，金標(biāo)抗體中金顆粒與抗體分子之間無價健形成，二者通過異性電荷間的范德華力相結(jié)合，膠體金對單克隆特異性和親和力影響很小，且具有較高的標(biāo)記率。因此，快速檢測試紙卡具有較高的特異性和靈敏度。試紙卡檢測靈敏度可達5 i！ g/ml (g/g)。[0012] 2.操作簡便快速。使用快速檢測試紙卡時無需任何其它試劑，只要將樣本用滴管滴入試劑卡孔內(nèi)，滴加3滴(約100微升)，加樣后計時，5 8min內(nèi)觀察結(jié)果。[0013] 3.顯示檢測結(jié)果形象、直觀準(zhǔn)確?？焖贆z測試紙卡以顯示紅線色"I "及"I I "印跡作為檢測線的陽性和陰性標(biāo)記，即在硝酸纖維素膜上顯示一條紅線"I "印跡表示在被檢測樣本液中克倫特羅的含量大于等于5 g/ml (g/g)，兩條紅線"I I "印跡表示在被檢測樣本中克倫特羅含量低于5i!g/ml(iig/g)，結(jié)果判定形象、直觀、準(zhǔn)確、簡單明了，不容易出現(xiàn)結(jié)果誤判。 4.成本低，投資少。使用快速檢測試紙條，不需另配儀器設(shè)備及其他試劑，使現(xiàn)場檢測一步到位，成本低廉，投資少，見效快。 5.易于大范圍推廣應(yīng)用?？焖贆z測試紙卡操作簡單，能較好滿足不同層次人員的需要，如專業(yè)化驗、海關(guān)檢疫、衛(wèi)生防疫、質(zhì)量監(jiān)測、動物產(chǎn)品加工、集化養(yǎng)殖到個體養(yǎng)殖等，具有廣闊的市場前景和較大的經(jīng)濟、社會效益。

圖1為克倫特羅檢測試紙條結(jié)構(gòu)示意圖，其中，1、樣本吸收墊；2、結(jié)合物釋放墊；3、反應(yīng)膜；4、吸水墊；5、檢測線；6、質(zhì)控線；7、底板； 圖2為克倫特羅檢測試紙卡俯視結(jié)構(gòu)示意圖，其中，8、塑料盒體；9、加樣孔；10、觀
察窗； 圖3為克倫特羅快速檢測試紙卡陰性(圖3. a)、陽性(圖3. b)、無效(圖3. c)顯色示意圖，其中T檢測線，C為質(zhì)控線。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖做進一步說明[0020] 1、克倫特羅檢測試紙卡 樣本吸收墊(1)由玻璃棉制成，結(jié)合物釋放墊(2)為吸附有膠體金標(biāo)記的克倫特羅單克隆抗體的纖維層，反應(yīng)膜(3)為硝酸纖維素膜，吸水墊(4)為吸水材料層制成，檢測線(5)包被有克倫特羅-載體蛋白偶聯(lián)物，質(zhì)控線(6)包被有羊抗鼠IgG， PVC背襯(7)為支持層由塑料薄片條制成，在PVC背襯(7)上按順序粘附硝酸纖維素膜(3)、吸水墊(4)、結(jié)合物釋放墊(2)和樣本墊(l)，將樣本墊覆蓋在結(jié)合物釋放墊三分之一處，組成試紙條封裝于帶有加樣孔(9)和觀察窗(10)的特制的塑料盒體(8)中。[0022] 2、試紙卡的使用[0023] (1)樣本前處理[0024] 尿液 清亮尿液可直接取100 ii 1點樣，如尿液混濁，3000g以上室溫離心5min，取上清液100 ii 1點樣。[0026] 豬肉 稱取勻漿后的組織2g到離心管中，加入lml水振蕩混勻，在8(TC水浴中10min，取出冷卻至室溫，取上清液100 ill點樣。[0028] (2)用試紙卡檢測 將樣本用滴管滴入試劑卡孔內(nèi)，滴加3滴，加樣后計時，5 8min內(nèi)觀察結(jié)果。[0030] 3、檢測結(jié)果分析 克倫特羅在樣本中濃度高于5iig/ml(iig/g)時，膠體金標(biāo)記的克倫特羅抗體與克倫特羅藥物全部結(jié)合，從而在檢測區(qū)內(nèi)因為競爭反應(yīng)不會與克倫特羅偶聯(lián)抗原結(jié)合而不出現(xiàn)紅色條帶。陰性樣本在檢測過程中由于缺少抗體抗原競爭反應(yīng)，將會在檢測區(qū)與質(zhì)控區(qū)內(nèi)出現(xiàn)紅色條帶。 陽性當(dāng)質(zhì)控區(qū)顯示一條紅色條帶，而檢測區(qū)不顯色，快速檢測試紙卡以顯示紅線色"l"，判為陽性，如圖3.b圖所示。 陰性當(dāng)質(zhì)控區(qū)顯示一條紅色條帶，檢測區(qū)同時也顯示出一條紅色條帶，且檢測區(qū)顏色接近或淺于質(zhì)控區(qū)時，快速檢測試紙卡以顯示紅線色為"I I "，判為陰性，如圖3. a所示。 無效當(dāng)質(zhì)控區(qū)不顯示出紅色條帶，則無論檢測區(qū)顯示出紅色條帶與否，該試紙卡判為無效，如圖3.C所示。
權(quán)利要求一種檢測克倫特羅藥物殘留的膠體金試紙卡，其特征在于試紙卡包括塑料盒體和盒體內(nèi)的試紙條，試紙條由底板、附著在底板上依次緊密相連的樣本吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜和吸水墊，結(jié)合物釋放墊的二分之一至三分之一區(qū)域覆蓋于樣本吸收墊之下。
2. 如權(quán)利要求1所述的試紙卡，其特征在于塑料盒體上帶有加樣孔和觀察窗。
3. 如權(quán)利要求1所述的試紙卡，其特征在于結(jié)合物釋放墊的三分之一區(qū)域覆蓋于樣本 吸收墊之下。
4. 如權(quán)利要求1所述的試紙卡，其特征在于所述反應(yīng)膜上具有包被有克倫特羅_載體 蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成的檢測線和包被羊抗鼠IgG構(gòu)成的質(zhì)控線。
5. 如權(quán)利要求4所述的試紙卡，其特征在于所述的檢測線與質(zhì)控線平行。
6. 如權(quán)利要求4所述的試紙卡，其特征在于檢測線位于距離結(jié)合物釋放墊一側(cè)0. 5cm處。
7. 如權(quán)利要求1或2所述的試紙卡，其特征在于所述底板為PVC板，所述反應(yīng)膜為硝酸纖維素膜。
8. 如權(quán)利要求1或2所述的試紙卡，其特征在于所述的樣本吸收墊由玻璃棉或聚酯材 料制成，所述的結(jié)合物釋墊層由纖維制成。
9. 如權(quán)利要求1或2所述的試紙卡，其特征在于所述的結(jié)合物釋放墊為包被有克倫特 羅抗體-膠體金結(jié)合物。
專利摘要本實用新型提供了一種克倫特羅檢測試紙卡，包括塑料盒體和盒體內(nèi)的試紙條，試紙條由底板、附著在底板上依次緊密相連的樣本吸收墊、結(jié)合物釋放墊、反應(yīng)膜和吸水墊組成，結(jié)合物釋放墊的二分之一至三分之一區(qū)域覆蓋于樣本吸收墊之下。在反應(yīng)膜層上具備包被有克倫特羅-載體蛋白偶聯(lián)物構(gòu)成的檢測線和包被有羊抗鼠IgG構(gòu)成質(zhì)控線；結(jié)合物釋放墊包被有膠體金標(biāo)記的克倫特羅抗體。本實用新型試紙卡具有便攜性好，靈敏度高，誤差小、檢測時間短等特點，可以在組織及尿液樣本中克倫特羅殘留量的檢測中發(fā)揮重要作用。
文檔編號G01N33/558GK201489000SQ20092010854
公開日2010年5月26日 申請日期2009年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月1日
發(fā)明者萬宇平, 何方洋, 馮才偉, 馮才茂, 劉平, 劉福林, 張建軍, 朱亮亮, 李勇, 汪善良, 羅貴昆, 趙正苗, 陳煒琳 申請人:北京望爾康泰生物技術(shù)有限公司;北京望爾生物技術(shù)有限公司