專利名稱：用于肺栓塞的d-二聚體、肌鈣蛋白、nt-bnp原的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種診斷方法，特別是診斷對(duì)象的急性肺栓塞(PE)的方法，其包括測(cè) 定所述對(duì)象的樣本中源自纖維蛋白_纖維蛋白原的降解產(chǎn)物特別是D- 二聚體，鈉尿肽特別 是NT-BNP原(NT-proBNP)以及心臟肌鈣蛋白的量，并將所述量與參考量比較。進(jìn)一步地， 本發(fā)明還涉及區(qū)分對(duì)象的急性PE不同程度的方法，其包括測(cè)定所述對(duì)象的樣本中源自纖 維蛋白_纖維蛋白原的降解產(chǎn)物特別是D- 二聚體，鈉尿肽特別是NT-BNP原以及心臟肌鈣 蛋白的量，并將所述量與參考量比較。本發(fā)明還包括實(shí)施前述方法的設(shè)備和試劑盒。
背景技術(shù)：
PE可能是危及生命的需要住院的醫(yī)學(xué)事件。急性PE的特征性臨床癥狀包括呼吸 急性短促、衰竭樣狀況(collapse-like conditions)和胸痛。PE是由通常發(fā)生于股靜脈中 的血栓形成引起的。而且，血栓形成可能伴有進(jìn)一步的狀況如遺傳所致的凝血級(jí)聯(lián)缺陷或 腫瘤。作為血栓形成的結(jié)果，漂浮的血栓可能進(jìn)入并閉塞肺動(dòng)脈。血栓的大小決定了動(dòng) 脈閉塞的位置。肺動(dòng)脈閉塞導(dǎo)致右心的心室壓力和體積超負(fù)荷的增高，以及由此常常導(dǎo)致 左心功能較差和循環(huán)衰竭。PE可以是伴有前述臨床癥狀發(fā)生的特異事件(a singular event)，特別是在急診 患者的病例中，引起住院治療，或者也可能是多個(gè)較小PE的結(jié)果，由此只有最近的一個(gè)才 伴有所述臨床癥狀。后種情況在下文被稱為“多發(fā)性PE” ("multiple ΡΕ”)。肺栓塞(PE)是普遍的、嚴(yán)重的并常為致命性的健康問題。西方工業(yè)國(guó)家普通人群 中深靜脈血栓形成(DVT)和PE的每年發(fā)生率估計(jì)可能分別為0. 5%。至1. 0%。(van Beek EJR, ten Cate JW. The diagnosis of venous thromboembolism: an overview. In: Hull RD, Raskob GE, pineo GF, eds. Venous Thromboembolism: an evidence-based atlas. Armonkl: Futura Publishing Co, 1996: 93-9)。但是，如活檢研究所示，有大量未識(shí)別和 未治療的病例。因?yàn)镻E臨床表現(xiàn)很廣泛，所以診斷困難并且難以實(shí)施。急性PE最常見的 臨床癥狀是呼吸困難、胸痛和暈厥。這些癥狀和急性冠脈綜合征的癥狀類似。在內(nèi)科急診 病房大約30%的患者顯示胸痛和呼吸癥狀，其初看起來就指向了急性冠脈綜合征。但是， 多于50%的這些患者并未患有急性冠脈綜合征。這些患者所顯示的癥狀涉及心臟外原因， 主要是PE和其它肺部疾病所致。在有合理的PE臨床證據(jù)的患者中，一線診斷檢查如ECG、 胸部X線和血?dú)夥治霰硎緸樵u(píng)價(jià)PE的臨床可能性和患者的一般情況。通過測(cè)定D- 二聚體 的濃度可以診斷性排除PE (低水平表明排除PE)。但是，升高的D-二聚體水平是非特異性 的，并且在與止血的血管內(nèi)彌散性活化過程相關(guān)的狀況中，像炎癥反應(yīng)如感染、膿毒癥或惡 性腫瘤中也發(fā)現(xiàn)。PE的確診主要由胸部X線、肺閃爍成像、肺血管造影、增強(qiáng)造影、螺旋式計(jì) 算機(jī)斷層成像和超聲心動(dòng)圖確定。盡快開始治療是重要的。早期死亡率高且早期死亡率取決于疾病的嚴(yán)重性和伴隨 疾病的存在(特別是心血管疾病)。大約90%的死亡發(fā)生于癥狀出現(xiàn)后的2小時(shí)內(nèi)。住院期間未治療PE的死亡率是30 %，通過合理治療可以降低到約2 %至8 %。治療的成功基本上取決于根據(jù)疾病嚴(yán)重程度采取的早期治療措施的開始。因此， 對(duì)于每一個(gè)臨床疑似PE的病例，這種疑似應(yīng)通過診斷性和預(yù)測(cè)性措施加以澄清。另一方 面，上述的基礎(chǔ)是存在合適的診斷性檢測(cè)參數(shù)和檢測(cè)方法，其在允許診斷性和預(yù)測(cè)性估計(jì) 的同時(shí)適合于急診狀況。由于心臟生物標(biāo)記肌鈣蛋白和鈉尿肽的診斷/預(yù)測(cè)值的不確定性，它們未被包括 在治療指南中(抗凝、溶栓、血栓切除術(shù))。在臨床急診情況下，個(gè)體患者的合理治療的決定，除了診斷，還需要危險(xiǎn)分級(jí)和預(yù) 后評(píng)估。當(dāng)診斷明確時(shí)，關(guān)鍵的治療問題是用肝素抗凝是否是足夠的，或是否有必要施行另 外的措施如溶栓或血栓切除術(shù)。由于并發(fā)癥和副作用的危險(xiǎn)，即使沒有存在禁忌癥，溶栓和 血栓切除術(shù)也應(yīng)只在大塊PE的病例中使用。根據(jù)實(shí)際的指南，患者的血液動(dòng)力學(xué)情況對(duì)于分為危險(xiǎn)組I-IV (血液動(dòng)力穩(wěn)定以 復(fù)蘇)是很重要的。盡管D-二聚體已經(jīng)被確立為排除PE的主要診斷，但是目前尚無法使用 進(jìn)一步的標(biāo)記進(jìn)行進(jìn)一步的分類。因此，本發(fā)明根本的技術(shù)問題可以視為為適應(yīng)前述需要而提供的手段和方法。通 過在權(quán)利要求和下文中所表征的實(shí)施方案來解決技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明涉及在疑似患有急性PE的對(duì)象中診斷急性PE的方法，其包括
a)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中凝血和纖維蛋白溶解的血管內(nèi)活化的標(biāo)記物的量，所述標(biāo) 記物來自纖維蛋白_纖維蛋白原降解產(chǎn)物，優(yōu)選為D- 二聚體；
b)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中鈉尿肽，優(yōu)選NT-BNP原的量；
c)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中心臟肌鈣蛋白，優(yōu)選肌鈣蛋白T或肌鈣蛋白I，特別是肌鈣 蛋白T的量；
d)將步驟a)至c)中測(cè)定的量與參考量比較，從而確定所述診斷。本文所使用的診斷是指評(píng)估可能性，據(jù)此判斷一個(gè)對(duì)象患有本說明書中所提到的 疾病。如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的，該評(píng)估通常意圖不是100%的對(duì)象被正確診斷。但 是，該術(shù)語要求統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的部分對(duì)象可被診斷出患有所述疾病(如隊(duì)列研究或者病例 對(duì)照研究中的隊(duì)列)。一部分是否是在統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的可以由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員運(yùn)用熟 知的統(tǒng)計(jì)評(píng)價(jià)工具如可信區(qū)間測(cè)定、P值測(cè)定、t檢驗(yàn)、Mann-Whitney檢驗(yàn)等來確定而不需 要進(jìn)一步的勞動(dòng)?？稍斠?Dowdy 禾口 Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983。優(yōu)選的可信區(qū)間是至少90%、至少95%、至少97%、至少98%或至 少 99%。ρ 值優(yōu)選為 0. 1、0. 05、0. 01、0. 005 或 0.0001。根據(jù)本發(fā)明的診斷還包括監(jiān)測(cè)、確診、亞分類和預(yù)測(cè)相關(guān)疾病、癥狀或其危險(xiǎn)。監(jiān) 測(cè)涉及跟蹤已經(jīng)診斷的疾病或并發(fā)癥，如分析疾病進(jìn)展或具體治療對(duì)于疾病或并發(fā)癥進(jìn)展 的影響。確診涉及使用其它指示劑或標(biāo)記物強(qiáng)化或證實(shí)已經(jīng)進(jìn)行的診斷。亞分類涉及根據(jù) 已診斷的疾病的不同亞類進(jìn)一步確定診斷，如根據(jù)疾病的中度和重度形式確定。預(yù)測(cè)涉及 在其它癥狀或標(biāo)記物已經(jīng)變得明顯或顯著改變之前預(yù)測(cè)疾病或并發(fā)癥。本文所使用的術(shù)語“肺栓塞(PE)”是指一種伴有前述PE的臨床癥狀的疾病或狀況，即急性呼吸短促、衰竭樣狀況和/或胸痛，以及任選地，心臟右心室體積超負(fù)荷，其可能 伴隨左心供給不足。如本文所使用的，術(shù)語“對(duì)象”涉及動(dòng)物，優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，以及更優(yōu)選為人類。但 是，本發(fā)明考慮的是對(duì)象應(yīng)優(yōu)選地顯示PE的前述明顯的臨床癥狀。本發(fā)明的方法包括測(cè)定至少3個(gè)標(biāo)記物，其為測(cè)定步驟a)中凝血和纖維蛋白溶解 的血管內(nèi)活化的至少一個(gè)標(biāo)記物，步驟b)中心臟缺血和壞死的至少一個(gè)標(biāo)記物，和步驟c) 中心室體積和壓力超負(fù)荷的至少一個(gè)神經(jīng)體液標(biāo)記物。心臟肌鈣蛋白I和T是根據(jù)PE中增加的肺動(dòng)脈壓力致右心室壓力超負(fù)荷和缺氧 由此導(dǎo)致的右心室缺血、右心室損傷和肌細(xì)胞壞死的程度而釋放。在11%至50% PE患者 中發(fā)現(xiàn)心臟肌鈣蛋白I和T的血清濃度升高。因此，如此測(cè)定肌鈣蛋白僅提供有限的信息， 因?yàn)榛加蠵E的大部分患者(>50%)沒有肌鈣蛋白水平升高。另外，相比于急性冠脈綜合征 (“ACS”)，肌鈣蛋白水平在PE患者中只是中度提高，且是短期升高。但是，進(jìn)一步的局限性 在于肌鈣蛋白只在PE發(fā)生后的6至12小時(shí)開始釋放的事實(shí)。鈉尿肽的釋放是心室壁壓迫和體積超負(fù)荷的結(jié)果。因此，它們被確定為患有心室 功能不全(心衰)患者的診斷性和預(yù)測(cè)性標(biāo)記物。激素原BNP原是在心室肌細(xì)胞中合成的， 因此，作為發(fā)生心肌壁壓迫和體積超負(fù)荷后合成速度增加的結(jié)果，其在血清中的升高僅發(fā) 生在數(shù)小時(shí)以后。這些鈉尿肽(BNP和NT-BNP原)的血清或血漿濃度的提高與由PE中肺動(dòng) 脈壓力增高導(dǎo)致的右心室體積超負(fù)荷和功能不全有關(guān)。因此，進(jìn)一步的局限性在于鈉尿肽 也在其它與右心室體積超負(fù)荷相關(guān)的心臟外疾病中升高，如慢性肺疾病如COPD或原發(fā)性 肺動(dòng)脈高壓。因此，鈉尿肽，如肌鈣蛋白，當(dāng)單獨(dú)使用時(shí)(when interpreted alone),由于缺 乏特異性，只允許有限地預(yù)測(cè)和診斷PE。因?yàn)樾呐K標(biāo)記物對(duì)于住院死亡率有高的陰性預(yù)測(cè)價(jià)值，所以單獨(dú)將心臟肌鈣蛋 白或鈉尿肽用于PE患者的危險(xiǎn)分級(jí)，僅可鑒定具有低危險(xiǎn)的患者組。一個(gè)限制是截?cái)?值(cut-off value)。用于排除升高的PE危險(xiǎn)的BNP截?cái)嘀档陀谂懦呐K衰竭的截?cái)嘀?(100pg/ml)。即使血液動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定的顯示肌鈣蛋白或NT-BNP原水平升高的PE患者中，超 聲心動(dòng)圖檢測(cè)仍是為確定預(yù)后和選擇治療所必要的。但是，單獨(dú)使用鈉尿肽或肌鈣蛋白的 診斷過程的缺點(diǎn)在于不能將所有高危患者都成功地鑒定。測(cè)定D- 二聚體、鈉尿肽特別是NT-BNP原、心臟肌鈣蛋白或其它任何根據(jù)本發(fā)明在 本文提及的多肽的量，涉及測(cè)量濃度或量，優(yōu)選半定量地或定量地。測(cè)量可以直接或間接進(jìn) 行。直接測(cè)量涉及測(cè)量基于信號(hào)的多肽的量或濃度，所述信號(hào)獲自多肽本身和與樣本中呈 現(xiàn)的肽的分子數(shù)目直接相關(guān)的強(qiáng)度。這種信號(hào)(有時(shí)在本文指強(qiáng)度信號(hào))可以通過如測(cè)量多 肽具體物理或化學(xué)性質(zhì)的強(qiáng)度值來獲得。間接測(cè)量包括測(cè)量源自次級(jí)成分(即非多肽本身 的成分)或生物學(xué)讀出系統(tǒng)的信號(hào)，如可檢測(cè)的細(xì)胞反應(yīng)、配體、標(biāo)記或酶反應(yīng)產(chǎn)物。根據(jù)本發(fā)明，測(cè)定多肽的量可以通過測(cè)定樣本中肽的量的所有已知方法實(shí)現(xiàn)。所 述方法包括免疫分析設(shè)備和方法，其可應(yīng)用各種夾心、競(jìng)爭(zhēng)或其它測(cè)定格式中的標(biāo)記的分 子。所述測(cè)定將顯示指示多肽存在或缺失的信號(hào)。而且，信號(hào)的強(qiáng)度優(yōu)選地可以直接或間 接地(如反比例的)與樣本中存在的多肽的量相關(guān)。進(jìn)一步的合適的方法包括測(cè)量多肽特 異性的物理或化學(xué)性質(zhì)，如其準(zhǔn)確的分子量或核磁共振波譜(NMR譜)。所述方法包括優(yōu) 選地，生物傳感器、光學(xué)設(shè)備聯(lián)合免疫測(cè)定、生物芯片、分析設(shè)備如質(zhì)譜儀、NMR-分析儀或色譜設(shè)備。另外，方法包括微板式基于ELISA的方法、全自動(dòng)或機(jī)器人式的免疫測(cè)定(可在如 Elecsys 分析儀上獲得)、CBA (一種酶鈷結(jié)合法，可在如Roche-Hitachi 分析儀上獲得) 和乳膠凝集測(cè)定(可在如Roche-Hitachi 分析儀上獲得)。優(yōu)選地，測(cè)定多肽的量包括步驟(a)將能夠消除細(xì)胞反應(yīng)的細(xì)胞與肽接觸足夠 的時(shí)間，所述細(xì)胞的強(qiáng)度指示肽的量，(b)測(cè)量細(xì)胞反應(yīng)。為了測(cè)量細(xì)胞反應(yīng)，樣本或處理的樣本優(yōu)選地加入到細(xì)胞培養(yǎng)物中，且測(cè)量?jī)?nèi)部 和外部的細(xì)胞反應(yīng)。細(xì)胞反應(yīng)可包括報(bào)告基因的可測(cè)量的表達(dá)或物質(zhì)如肽、多肽或小分子 的分泌。表達(dá)或物質(zhì)將產(chǎn)生與肽的量相關(guān)的強(qiáng)度信號(hào)。優(yōu)選地，測(cè)定多肽的量還包括以下步驟測(cè)量獲自樣本中的多肽或肺表面活性蛋 白的特異性強(qiáng)度信號(hào)。如前所描述，該信號(hào)可以是以m/z觀測(cè)到的可變化的對(duì)多肽具有特異性的信號(hào)強(qiáng) 度，其是在對(duì)多肽特異的質(zhì)譜或NMR譜中觀測(cè)到的。進(jìn)一步地，測(cè)定多肽的量?jī)?yōu)選地包括步驟(a)將肽與特異性配體接觸，(b)(任選 地)去除未結(jié)合的配體，(C)測(cè)量結(jié)合配體的量。結(jié)合的配體將產(chǎn)生強(qiáng)度信號(hào)。根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合均包括共價(jià)和非共價(jià)結(jié)合。根據(jù) 本發(fā)明的配體可以是任何與本文描述多肽結(jié)合的化合物，如肽、多肽、核酸或小分子。優(yōu)選 的配體包括抗體、核酸、肽或多肽，如多肽的受體及其包含肽的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的片段，和適體 如核酸或肽適體。制備此類配體的方法是本領(lǐng)域公知的。例如，商業(yè)供應(yīng)商也提供合適的 抗體或適體的鑒定和生產(chǎn)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟悉開發(fā)此類具有更高親和力或特異性配 體的衍生物的方法。例如，隨機(jī)突變可以被引入核酸、肽或多肽。然后，這些衍生物可以根 據(jù)本領(lǐng)域已知的篩選過程，如噬菌體表面展示技術(shù)來檢測(cè)結(jié)合。如本文所提到的，抗體包括 多克隆和單克隆抗體，以及包括其片段如能夠結(jié)合抗原或半抗原的Fv、Fab和F(ab)2片段。 本發(fā)明還包括人源化雜交抗體，其中，顯示所需要的抗原-特異性的非人類供體抗體的氨 基酸序列與人類受體抗體的序列結(jié)合。供體序列應(yīng)經(jīng)通常包括至少供體的抗原結(jié)合氨基酸 殘基，但也可包括供體抗體的其它結(jié)構(gòu)性和/或功能性相關(guān)氨基酸殘基。這類雜交物可以 通過本領(lǐng)域熟知的幾種方法制備。優(yōu)選地，配體或試劑與多肽特異性結(jié)合。根據(jù)本發(fā)明的 特異性結(jié)合是指配體或試劑不應(yīng)實(shí)質(zhì)上與存在于待分析的樣本中的另一種肽、多肽或物質(zhì) 結(jié)合(“交叉反應(yīng)”)。優(yōu)選地，相比于，特異性結(jié)合的多肽應(yīng)以任何其它相關(guān)肽或多肽親和力 的至少3倍，更優(yōu)選至少10倍，以及甚至更優(yōu)選至少50倍被結(jié)合。非特異性結(jié)合可以被允 許，如果其仍能被明確區(qū)分和檢測(cè)，如根據(jù)Western印跡中它的大小或通過樣本中其相對(duì) 更高的豐度。配體的結(jié)合可以通過本領(lǐng)域已知的任何方法檢測(cè)量。優(yōu)選地，所述方法是半 定量或定量地。合適的方法如下描述。首先，配體的結(jié)合可以如通過NMR、質(zhì)譜或表面等離振子共振。直接測(cè)量。第二，如果配體也作為感興趣的肽或多肽的酶活性的底物，可測(cè)量酶反應(yīng)產(chǎn)物 ⑶口，蛋白酶的量可以通過如在Western印跡上測(cè)量已剪切的底物的量來測(cè)量)。或者，配體 可本身顯示酶的性質(zhì)，配體/多肽復(fù)合物或被多肽結(jié)合的配體可分別與合適的底物接觸， 通過強(qiáng)度信號(hào)的產(chǎn)生進(jìn)行檢測(cè)。對(duì)于酶的反應(yīng)產(chǎn)物的測(cè)量，優(yōu)選底物的量是飽和的。底物 也可在反應(yīng)前用可測(cè)量的標(biāo)簽標(biāo)記。優(yōu)選地，樣本與底物接觸足夠長(zhǎng)的時(shí)間。足夠長(zhǎng)的時(shí) 間是指產(chǎn)生可檢測(cè)的，優(yōu)選可測(cè)量的產(chǎn)物的量所必要的時(shí)間。可以測(cè)量出現(xiàn)指定(如可觀察的)量的產(chǎn)物所必要的時(shí)間，而不是測(cè)量產(chǎn)物的量。第三，配體可與標(biāo)記共價(jià)或非共價(jià)連接(coupled)，允許觀察和測(cè)量配體。標(biāo)記可 以通過直接或間接的方法進(jìn)行。直接標(biāo)記包括將標(biāo)簽直接(共價(jià)地或非共價(jià)地)連接到配 體。間接標(biāo)記涉及將第二配體結(jié)合(共價(jià)或非共價(jià)地)到第一配體。第二配體應(yīng)特異性地 結(jié)合到第一配體。所述第二配體可能與合適的標(biāo)記連接和/或是與第二配體結(jié)合的第三配 體的靶點(diǎn)。第二、第三或甚至更高級(jí)別(higher order)的配體的使用常常用于增強(qiáng)信號(hào)。 合適的第二和更高級(jí)別的配體可能包括抗體、第二抗體和熟知的鏈霉抗生物素-生物素系 統(tǒng)(Vector Laboratories, he)。配體或底物也可用一個(gè)或多個(gè)本領(lǐng)域已知的標(biāo)記來“標(biāo) 記”(“tagged”)。然后，此標(biāo)記可以是更高級(jí)別配體的靶點(diǎn)。合適的標(biāo)記包括生物素、異羥 基洋地黃毒苷(digoxygenin)、His標(biāo)記、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、FLAG、GFP、myc標(biāo)記、甲型 流感病毒血凝素(HA)、麥芽糖結(jié)合蛋白等等。在肽或多肽的情況下，標(biāo)記優(yōu)選在N末端和 /或C末端。合適的標(biāo)記是任何通過適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法可檢測(cè)到的標(biāo)記。典型的標(biāo)記包括金 顆粒、乳膠球、9，10-二氫吖啶酯、鄰苯二甲酰胼、釕、酶學(xué)活性的標(biāo)記、放射活性的標(biāo)記、磁 性標(biāo)記(如“磁性球”，包括順磁性或超順磁性標(biāo)記)，以及熒光標(biāo)記。酶學(xué)活性標(biāo)記包括如 辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、半乳糖苷酶、熒光素酶及其衍生物。用于檢測(cè)的合適的 底物包括二氨基聯(lián)苯胺(0々8)、3，3’-5，5’四甲基聯(lián)苯胺、NBT- BCIP (4-硝基氯化四氮唑 藍(lán)和5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸鹽，可以成品儲(chǔ)液購(gòu)自Roche Diagnostics)、CDP-Star (Amersham Biosciences)禾口 ECF (Amersham Biosciences)。合適的酶-底物組合可產(chǎn) 生有色的反應(yīng)產(chǎn)物、熒光或化學(xué)發(fā)光，其可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法進(jìn)行測(cè)量(如使用光敏 膠片或合適的照相系統(tǒng))。對(duì)于酶學(xué)反應(yīng)的測(cè)量，類似地應(yīng)用以上給出的標(biāo)準(zhǔn)。典型的熒 光標(biāo)記包括熒光蛋白(如GFP及其衍生物)、Cy3, Cy5、德克薩斯紅、熒光素和Alexa染料(如 Alexa 568)。更多的熒光標(biāo)記物可購(gòu)自如Molecular Probes (Oregon)。還可考慮用量子 點(diǎn)作為熒光標(biāo)記物。常用的放射性標(biāo)記物包括35S、125I、32P、33P等等。放射性標(biāo)記物可以通 過已知的適當(dāng)?shù)娜魏畏椒z測(cè)到，如光敏膠片或感光成像儀。根據(jù)本發(fā)明的合適的測(cè)量方 法還包括沉淀法(特別是免疫沉淀)、電化學(xué)發(fā)光法(產(chǎn)生電的化學(xué)發(fā)光)、RIA (放射免疫測(cè) 定)、ELISA (酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)、夾心酶免疫測(cè)試、電化學(xué)發(fā)光夾心免疫測(cè)定法(ECLIA)、離 解-增強(qiáng)的鑭系元素?zé)晒饷庖邷y(cè)定法(DELFIA)、閃爍接近測(cè)定法(SPA)、比濁法、濁度測(cè)定 法、乳膠增強(qiáng)比濁法或濁度測(cè)定法或固相免疫測(cè)試。更多的本領(lǐng)域已知的方法(如凝膠電 泳、2D凝膠電泳、SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、Western印跡法和質(zhì)譜法)可以單 獨(dú)使用或與上述標(biāo)記或其它檢測(cè)方法組合應(yīng)用。此外，優(yōu)選地，測(cè)定多肽的量包括(a)將含有針對(duì)上述特定多肽的配體的固體載 體與含有該多肽的樣本接觸以及(b)測(cè)量與載體結(jié)合的多肽的量。配體，優(yōu)選從核酸、肽、多肽、抗體和適體中選擇，優(yōu)選以固定化的形式存在于固 體載體上。制備固體載體的材料為本領(lǐng)域熟知的，并特別包括可購(gòu)得的柱形材料、聚苯乙 烯球、乳膠球、磁性球、膠狀金屬顆粒、玻璃和/或硅芯片和表層、硝酸纖維素條、膜、薄片、 duracytes、反應(yīng)托盤的孔和壁、塑料管等。配體或試劑可以與很多不同的載體結(jié)合。熟 知的載體的例子包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡萄糖、尼龍、 直鏈淀粉、天然或修飾的纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖和磁鐵礦。為了本發(fā)明的目的，載體 的性質(zhì)可以是可溶的或不可溶的。將所述配體固定/固定不動(dòng)(fixing/immobilizing)的合適方法是熟知的，且包括但不限于離子的、疏水的、共價(jià)的相互作用等等。也考慮 使用“懸浮陣列”作為根據(jù)本發(fā)明的陣列(Nolan JP，Sklar LA. (2002). Suspension array technology: evolution of the flat-array paradigm. Trends Biotechnol. 20(1) :9-12)。在這類懸浮陣列中，載體如微珠或微球存在于懸浮液中。陣列由不同的微珠 或微球(可能是標(biāo)記的，攜帶不同的配體)組成。生產(chǎn)此類陣列的方法是熟知的，例如基于固 相化學(xué)和光不穩(wěn)定的保護(hù)基(US 5，744，305)。術(shù)語“量”如本文使用的，優(yōu)選地包括D- 二聚體、鈉尿肽特別是NT-BNP原和心臟 肌鈣蛋白優(yōu)選肌鈣蛋白T或肌鈣蛋白I或本文提及的其它任何多肽的絕對(duì)量；D- 二聚體、 鈉尿肽特別是NT-BNP原和心臟肌鈣蛋白優(yōu)選肌鈣蛋白T或肌鈣蛋白I或本文提及的其它 任何多肽的相對(duì)量或濃度，以及與其相關(guān)的任何值或參數(shù)。這些值或參數(shù)包括通過直接測(cè) 量的獲自本文提及多肽的所有特異性物理或化學(xué)性質(zhì)的強(qiáng)度信號(hào)值，如質(zhì)譜或NMR譜中的 強(qiáng)度值。而且，包括的是由本說明書中另外描述的間接測(cè)量獲得的所有的值或參數(shù)，如對(duì)本 文提到的多肽或任何其它多肽響應(yīng)的從生物學(xué)讀出系統(tǒng)測(cè)定的表達(dá)水平，或獲自特異性結(jié) 合的配體的強(qiáng)度信號(hào)。應(yīng)該理解的是與前述量或參數(shù)相關(guān)的值也可以通過所有標(biāo)準(zhǔn)數(shù)學(xué)運(yùn) 算獲得。D- 二聚體是交聯(lián)的纖維蛋白降解產(chǎn)物，其具有約200 kDa的分子量。在血液凝結(jié) 期間，凝固和纖維蛋白溶解被活化，產(chǎn)生活性的絲氨酸蛋白酶——凝血酶和纖溶酶。凝血酶 從纖維蛋白原裂解出兩個(gè)纖維蛋白肽A分子。剩下的desAA纖維蛋白(desAAfibrin)單體 通過聚合形成可溶性纖維蛋白。經(jīng)由XIIIa因子的活性通過交聯(lián)，終產(chǎn)物是由纖維蛋白分 子形成的不可溶解的纖維蛋白凝塊。纖維蛋白和纖維蛋白原都是纖溶酶的底物，纖溶酶在 多個(gè)位點(diǎn)上水解精氨酸和賴氨酸鍵，產(chǎn)生了多種已知為纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物的 剪切產(chǎn)物，其中最小的是D-二聚體。D-二聚體來源于交聯(lián)的纖維蛋白并且表明存在凝血和 纖維蛋白溶解的血管內(nèi)活化。纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物，特別是D-二聚體的血漿濃 度在與凝血和纖維蛋白溶解相關(guān)的任何狀況中均升高，并且因此在DVT和PE中升高。纖維 蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物包括D-二聚體的血漿濃度的升高也可見于狀況如惡性疾病、妊 娠、術(shù)后患者、感染性疾病、膿毒癥，其均與凝血的血管內(nèi)活化有關(guān)。D-二聚體是具有高度敏 感性的標(biāo)記物，用于排除深靜脈血栓形成和PE，具有高度陰性預(yù)測(cè)價(jià)值(對(duì)于綜述見Stein 等人 0004)，Annals of Internal Medicine, 140(8)，589-602)。術(shù)語“D_ 二聚體”優(yōu)選 地與纖維蛋白降解產(chǎn)物有關(guān)，其包含兩個(gè)D單元間的交聯(lián)鍵。應(yīng)該理解的是所述降解產(chǎn)物 代表包含交聯(lián)D- 二聚體的分子的異質(zhì)種類(heterogeneous class),因?yàn)樗龇肿涌梢源?在范圍很廣的分子量且可以包含多種數(shù)目的所述基序(參見如Lippi和Guidi，2004, Clin Chem 50: 2150-2152)。因此，當(dāng)D-二聚體的濃度被確定時(shí)，不僅包括兩個(gè)交聯(lián)D單元的 分子的量被確定，而且含有一個(gè)或多個(gè)D-二聚體結(jié)構(gòu)域的更大的分子也被確定。優(yōu)選地， D- 二聚體的濃度使用對(duì)于D- 二聚體結(jié)構(gòu)域特異性的單克隆抗體確定。這些抗體是本領(lǐng)域 熟知的。參見如 Gaffney PJj Brasher Μ. Subunit structure of the plasmin-induced degradation products of cross-linked fibrin. Biochim. Biophys. Acta 1973； 295: 308 ； Stoetzer KEj Amiral J，Spanuth Ε. Assays of fibrin degradation products (D-dimer) and their clinical relevance. Haemostasis 1988； 18: 121-122; Knecht MFj Heinrich F， Spanuth Ε. Evaluation of plasma D-dimer in the course of
9fibrinolytic therapy of deep vein thrombosis and pulmonary embolism. Thrombosis Research 1992； 67: 213-220； Brill-Edwards P，Lee A. D-dimer testing in the diagnosis of acute venous thromboembolism. Thromb Haemost 1999； 688—94; Kulstad EBj Kulstad CEj Lovell EO. A rapid turbimetric D-dimer assay has high sensitivity for detection of pulmonary embolism in the ED. AmJ Emerg Med 2004; 22: 111-114; Ghanima W, Abdelnoor M，Holmen LO等人D-dimer level is associated with the extent of pulmonary embolism. Thromb Res 2007； 120: 281—88。術(shù)語纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)包括在纖維蛋白溶解的活化過程中通 過纖溶酶與纖維蛋白原以及不同形式的纖維蛋白的相互作用形成的產(chǎn)物。在此過程中，非 活性的原蛋白纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶，其是最重要的纖維蛋白溶解的酶，但并非纖維蛋白 特異性的。它可能也降解其它血漿蛋白，包括凝血因子和纖維蛋白原。纖溶酶和纖維蛋白 原之間反應(yīng)形成的第一產(chǎn)物被命名為X片段。X片段是可凝結(jié)的衍生物(MW = 240, 000 -260, 000 Da)，其接著被不對(duì)稱裂解成Y片段(MW = 150,000 Da)和D片段(MW = 100, 000 Da)。Y片段接著被裂解成第二個(gè)D片段和E片段(MW = 50，000 Da)。纖溶酶與不同形式 的纖維蛋白(可溶性纖維蛋白、非交聯(lián)纖維蛋白、交聯(lián)纖維蛋白)的相互作用通過中間產(chǎn)物 進(jìn)行，類似于對(duì)于纖維蛋白原所述的那些，因?yàn)槔w溶酶在纖維蛋白和纖維蛋白原上遵循相 同的結(jié)構(gòu)域間剪切模式。非交聯(lián)纖維蛋白(desAA纖維蛋白、纖維蛋白I ;desAABB纖維蛋白、 纖維蛋白II)接著產(chǎn)生X、Y、D、E片段。交聯(lián)纖維蛋白I和II由非常長(zhǎng)的聚合物組成，其中 亞單位是被異肽鍵共價(jià)連接。纖溶酶以隨機(jī)順序攻擊纖維蛋白這些聚合結(jié)構(gòu)中的亞單位， 產(chǎn)生原始聚合物的較小可溶性片段，其具有一定范圍分子量。這些結(jié)構(gòu)可以被降解成D-二 聚體片段即兩個(gè)共價(jià)結(jié)合的D-結(jié)構(gòu)域，和E片段。術(shù)語“鈉尿肽”包含心房鈉尿肽(ANP)型和腦鈉肽(BNP)型肽及其具有相同預(yù)測(cè)潛 能的變體。根據(jù)本發(fā)明的鈉尿肽包括ANP-型和BNP-型肽及其變體(參見如Bonow，1996， Circulation 93: 1946- 1950)。ANP-型肽包含前 ANP 原(pre_proANP)、ANP 原、NT-ANP 原 和ANP。BNP-型肽包含前BNP原、BNP原、NT-BNP原和BNP。前肽原(pre-pro-p印tide ) (在前BNP原情況中是134個(gè)氨基酸)包含短信號(hào)肽，其被酶學(xué)切割而釋放肽原(在BNP原 情況中是108個(gè)氨基酸)。肽原進(jìn)一步被切割成N末端肽原(NT-肽原，在NT-BNP原情況 中是76個(gè)氨基酸)和活性激素(在BNP情況中是32個(gè)氨基酸、在ANP情況中是觀個(gè)氨基 酸)。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的鈉尿肽是NT-ANP原、ANP和更優(yōu)選地，NT-BNP原、BNP和其變 體。ANP和BNP是活性激素，且具有比它們各自的非活性相關(guān)物NT-ANP原和NT-BNP原更短 的半衰期。BNP在血液中被快速地降解，而NT-BNP原作為完整分子在血液中循環(huán)，并且如此 被腎清除。NT-BNP原的體內(nèi)半衰期是120分鐘，比BNP的半衰期20分鐘長(zhǎng)(Smith 2000， J Endocrinol. 167: 239-46.)。用NT-BNP原進(jìn)行預(yù)分析更加地穩(wěn)固，其允許樣本被容易 地運(yùn)送至中央實(shí)驗(yàn)室(Mueller 2004，Clin Chem Lab Med 42: 942-4.)。血液樣本可以 在室溫下儲(chǔ)存數(shù)日或可以沒有回收損失地被郵寄或船運(yùn)。相反，BNP在室溫或4攝氏度下 保存 48 小時(shí)導(dǎo)致至少 20%濃度的損失。(Mueller loc. cit. ； Wu 2004，Clin Chem 50: 867-73.)。因此，取決于感興趣的時(shí)間過程或特性，測(cè)量活性或非活性形式的鈉尿肽都可以 是有優(yōu)勢(shì)的。根據(jù)本發(fā)明的最優(yōu)選的鈉尿肽是NT-BNP原或其變體。術(shù)語“NT-BNP原”(“NT-proBNP”)涉及包含優(yōu)選地在長(zhǎng)度上76個(gè)氨基酸相應(yīng)于人NT-BNP原分子N末端部分的多肽。人BNP和NT-BNP原的結(jié)構(gòu)已經(jīng)在現(xiàn)有技術(shù)中詳細(xì) 說明，如 WO 02/089657、WO 02/083913、Bonow 1996，New Insights into the cardiac natriuretic peptides. Circulation 93: 1946-1950。優(yōu)選地，本文使用的人NT-BNP原是 公開于 EP O 648 228 Bl 或 GeneBank 編號(hào) NP-002512. 1 ;GI :4505433 的人 NT-BNP 原。這 些現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)作為對(duì)其所公開的NT-BNP原的特異性序列和其變體的參考并入本文。根據(jù)本發(fā)明提到的NT-BNP原進(jìn)一步包含所述的對(duì)于上面討論的人NT-BNP特異序 列的等位的和其它的變體。具體地，考慮的是變體多肽，其在氨基酸水平上與人NT-BNP原 至少有60 % 一致，更優(yōu)選至少70 %，至少80 %，至少90 %、至少95%、至少98%或至少99% — 致。實(shí)質(zhì)上相似且還考慮的是蛋白水解的降解產(chǎn)物，其仍是通過診斷性手段或通過針對(duì)各 自全長(zhǎng)肽的配體來識(shí)別。還包括的是多肽變體，其相比于人NT-BNP原的氨基酸序列具有氨 基酸缺失、置換和/或添加，只要所述多肽具有NT-BNP原的性質(zhì)。如本文所指的NT-BNP原 性質(zhì)是重要的免疫學(xué)的和/或生物學(xué)性質(zhì)。優(yōu)選地，NT-BNP原變體具有可與NT-BNP原的 性質(zhì)相比的免疫學(xué)性質(zhì)(即抗原決定簇成分)。因此，變體應(yīng)可由前述方法或用于確定上述 提及的特異性人NT-BNP原序列的量的配體來識(shí)別。生物學(xué)和/或免疫學(xué)NT-BNP原性質(zhì) 可以通過描述于 Karl 等人(Karl 1999. Development of a novel, N-Terminal- proBNP (NT-proBNP) assay with a low detection limit. Scand J Clin Invest 59:177-181) 禾口 Yeo 等人(Yeo 2003. Multicenter evaluation of the Roche NT-proBNP assay and comparison to the Biosite Triage assay. Clinica Chimica Acta 338:107-115)的測(cè) 定法來檢測(cè)。變體還包括翻譯后修飾的NT-BNP原，如糖基化的、十四烷基化的或磷酸化的 變體。術(shù)語“心臟肌鈣蛋白”是指心臟細(xì)胞，優(yōu)選心內(nèi)膜下細(xì)胞表達(dá)的所有肌鈣蛋 白亞型。這些亞型在本領(lǐng)域被很好地表征，如描述于如Anderson 1995，Circulation Research, vol. 76, no. 4: 681-686 以及 Ferrieres 1998, Clinical Chemistry, 44: 487-493。優(yōu)選地，心臟肌鈣蛋白是指肌鈣蛋白T和/或肌鈣蛋白I，最優(yōu)選地是指肌鈣蛋 白T。應(yīng)該理解的是肌鈣蛋白的亞型可以在本發(fā)明的方法中一起被確定即同時(shí)地或連續(xù)地， 或單個(gè)地被確定即并不確定其它亞型。人肌鈣蛋白T和人肌鈣蛋白I的氨基酸序列公開于 Anderson, Ioc cit and Ferrieres 1998， Clinical Chemistry, 44: 487—493。術(shù)語“心臟肌鈣蛋白”也包含前述特異性肌鈣蛋白的變體，即優(yōu)選為肌鈣蛋白I的 變體，以及更優(yōu)選為肌鈣蛋白T的變體。這些變體具有至少與特異性心臟肌鈣蛋白相同的 基本生物學(xué)和免疫學(xué)性質(zhì)。具體地，它們具有相同的基本生物學(xué)的和免疫學(xué)性質(zhì)，如果它們 可以通過本說明書提到的相同的特異性分析檢測(cè)到，如使用特異性識(shí)別所述心臟肌鈣蛋白 的多克隆或單克隆抗體通過ELISA來進(jìn)行。而且，應(yīng)該理解的是如根據(jù)本發(fā)明提到的變體 應(yīng)具有不同的氨基酸序列，原因在于至少一個(gè)氨基酸置換、缺失和/或添加，其中變體的氨 基酸序列與特異性肌鈣蛋白的氨基酸序列仍優(yōu)選地至少50%、60%、70%、80%、85%、90%、92%、 95%、97%、98%或99% —致。變體可以是等位變體或其它任何種類特異性的同源物、旁系同源 物或直系同源物。另外，本文所指變體包括特異性心臟肌鈣蛋白或前述類型變體的片段，只 要這些片段具有如上述提到的基本免疫學(xué)和生物學(xué)性質(zhì)。這些片段可以是例如肌鈣蛋白的 降解產(chǎn)物。進(jìn)一步包括的是由于翻譯后修飾，如磷酸化或十四烷基化而產(chǎn)生的不同的變體。在本發(fā)明的上下文中特別優(yōu)選的肌鈣蛋白T測(cè)定是Elecsys 2010分析儀(Roche Diagnostics)，其具有 0. 001 ng/ml - 0.0015 ng/ml 檢測(cè)限度。根據(jù)本發(fā)明的變體還是肽或多肽，其在樣本收集后已經(jīng)被修飾，如通過標(biāo)記特別 是放射性或熒光標(biāo)記，共價(jià)地或非共價(jià)地連接到肽。術(shù)語“樣本”是指體液樣本，分離的細(xì)胞的樣本或是來源于組織或器官的樣本。體 液樣本可通過熟知的技術(shù)獲得，且優(yōu)選地包括血液、血漿、血清或尿液樣本。組織或器官樣 本可以通過如活檢從任何組織或器官獲得。分離的細(xì)胞可以通過分離技術(shù)如沉淀或細(xì)胞分 選從體液或組織或器官獲得。如本文使用的比較包括將包含于待分析樣本中的D-二聚體、鈉尿肽特別是 NT-BNP原和心臟肌鈣蛋白特別是肌鈣蛋白T或肌鈣蛋白I或其它任何本文提到的多肽的 量，與本說明書下面具體所指的合適的參考源的量比較。應(yīng)該理解為如本文使用的比較是 指相應(yīng)參數(shù)或值的比較，例如，將絕對(duì)量與絕對(duì)參考量比較，同時(shí)將濃度與參考濃度比較， 或?qū)@自檢測(cè)樣本的強(qiáng)度信號(hào)與參考樣本相同類型的強(qiáng)度信號(hào)比較。本發(fā)明的方法的步驟 (d)中提到的比較可以通過人工或計(jì)算機(jī)輔助來實(shí)施。對(duì)于計(jì)算機(jī)輔助的比較，可以將測(cè) 定的量的值與相應(yīng)合適參考的值比較，所述相應(yīng)合適參考的值被計(jì)算機(jī)程序儲(chǔ)存于數(shù)據(jù)庫(kù) 中。計(jì)算機(jī)程序可以進(jìn)一步評(píng)價(jià)比較的結(jié)果，即自動(dòng)地以合適的輸出格式提供對(duì)于本文提 到的疾病的鑒別診斷。術(shù)語“參考量”如本文使用是指允許通過上述提到的比較來評(píng)估對(duì)象是否患有PE 的量。因此，參考也可以來源于已知患有PE的對(duì)象。應(yīng)該理解的是，如果使用了來自患有 PE的對(duì)象的參考，所述測(cè)試對(duì)象的樣本中的NT-BNP原的量與所述參考量實(shí)質(zhì)地一致，應(yīng)視 為PE的指示。同樣地，如果使用了來自已知未患有PE的對(duì)象的參考，所述測(cè)試對(duì)象的樣本 中的NT-BNP原的量與所述參考量實(shí)質(zhì)地一致，應(yīng)視為未發(fā)生PE的指示?？蓱?yīng)用于個(gè)體對(duì)象 的參考量可以依賴于多種生理參數(shù)如年齡、性別或亞群而有所變化。因此，合適的參考量可 以通過本發(fā)明的方法，從待分析的參考樣本和測(cè)試樣本一起測(cè)定，即同時(shí)地或連續(xù)地測(cè)定。纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物的水平可以使用多種免疫測(cè)定技術(shù)測(cè)量。通常使 用的測(cè)量纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物的方法是使用包有單克隆抗體的乳膠顆粒的技 術(shù)，所述單克隆抗體是針對(duì)纖溶酶來源的纖維蛋白-纖維蛋白原X、Y、D和E片段上新抗原 的決定簇。在疑似患有PE的患者中，該病的患病率(prevalence)低。肺血管造影是PE診斷 的確定的準(zhǔn)則性標(biāo)準(zhǔn)，但是這種方法是侵入性的、昂貴的且常常難以解釋。當(dāng)用定量ELISA 或源自ELISA的方法測(cè)定時(shí)，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)D- 二聚體在急性PE中在截?cái)嘀?00 μ g/L是高度 敏感的。因此，低于此值的D-二聚體排除PE。另一方面，D-二聚體的特異性差。因?yàn)樵?眾多種臨床狀況如腫瘤、炎癥、感染、膿毒癥、壞死中，在存在凝血和纖維蛋白溶解的血管內(nèi) 活化的情況下，產(chǎn)生D-二聚體。所以D-二聚體水平高于500 yg/L對(duì)PE具有較差的陽 性預(yù)測(cè)價(jià)值，并且不能判定此病。因此，判定PE的診斷性算法包括肺血管造影、螺旋式計(jì) 算機(jī)斷層成像、下肢靜脈加壓超聲測(cè)量以及肺灌注和通氣閃爍掃描。對(duì)于PE的危險(xiǎn)分級(jí)， 超聲心動(dòng)圖允許評(píng)估右心室超負(fù)荷和功能不全。血液動(dòng)力學(xué)顯著的PE的超聲心動(dòng)圖表現(xiàn) 包括擴(kuò)張的、運(yùn)動(dòng)功能減退的右心室、擴(kuò)張的近段肺動(dòng)脈、不穩(wěn)定的流速和其它血液動(dòng)力的 異常。另一方面，血液動(dòng)力學(xué)性重要的PE超聲心動(dòng)圖不可能在正常的患者中出現(xiàn)(Wolfe MWj Feldstein MIj Parker JA等人Prognostic significance of right ventricularhypokinesis and perfusion lung scan defects in PE)。但是，超聲心動(dòng)圖有一些技術(shù)局限性，且不可能經(jīng)?？焖倮谩Ｋ荒苡糜谟倚氖?損傷和功能不全嚴(yán)重性的定量評(píng)估。而且，超聲心動(dòng)圖消耗時(shí)間且難以解釋。因此，為了 PE 的診斷和危險(xiǎn)分級(jí)，需要非侵入的且快速的診斷方法。
具體實(shí)施例方式根據(jù)本發(fā)明的方法包括測(cè)定至少3個(gè)標(biāo)記物，其為測(cè)定至少一個(gè)凝血和纖維蛋白 溶解的血管內(nèi)活化的標(biāo)記物、至少一個(gè)心臟缺血和壞死的標(biāo)記物和至少一個(gè)心室功能不全 的標(biāo)記物。凝血和纖維蛋白溶解的血管內(nèi)活化的標(biāo)記物可以從如纖維蛋白-纖維蛋白原降 解產(chǎn)物中選擇，特別是D-二聚體。肌鈣蛋白T或肌鈣蛋白I可以確定為缺血和壞死的標(biāo) 記物。心室功能不全的標(biāo)記物可以從神經(jīng)激素標(biāo)記物中選擇，如心房鈉尿肽(ANP)、腦鈉肽 (BNP)或各自肽原的N-末端片段NT-ANP原和NT-BNP原。本發(fā)明的標(biāo)記物(纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D- 二聚體、鈉尿肽特別 是NT-BNP原和心臟肌鈣蛋白特別是肌鈣蛋白T或肌鈣蛋白I)的量/水平表示個(gè)體是患有 病理生理狀態(tài)還是健康的，其可以通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法確定。一般來說，為了確定指示個(gè)體是患有病理生理狀態(tài)還是個(gè)體是健康的這樣的量/ 水平(“閾值”、“參考量”)，在包含健康個(gè)體和患有病理生理狀態(tài)的個(gè)體的合適的患者組中 確定相應(yīng)肽或多個(gè)肽的量/水平，其通過使用有效的分析方法用相應(yīng)的標(biāo)記物確定。用本 領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法收集并分析結(jié)果。然后，根據(jù)與具體閾值相關(guān)的患有 該病的需要的可能性，確定所獲得的閾值。例如，為了確定閾值，選擇中位值可能是有用的， 選擇健康的和/或非健康患者集合的第60、第70、第80、第90、第95或甚至第99百分位。個(gè)體是健康的還是患有某種病理生理狀態(tài)的診斷通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知 的已確立的方法來進(jìn)行。根據(jù)個(gè)體的病理生理狀態(tài)，方法有所不同。例如(如前面已經(jīng)提到的)判定PE的診斷性算法包括肺血管造影、螺旋式計(jì)算機(jī)斷 層成像、下肢靜脈加壓超聲測(cè)量、肺灌注和通氣閃爍掃描以及還有超聲心動(dòng)圖以評(píng)估右心 室超負(fù)荷和功能不全和血液動(dòng)力學(xué)異常。超聲心動(dòng)圖被用于評(píng)價(jià)各種心臟功能不全，如心 衰、心肌梗死和/或心肌病。因此，本發(fā)明還包括確定閾值水平的方法，所述閾值水平指示個(gè)體是否患有PE和 /或指示該病的嚴(yán)重性(級(jí)別)，其包括以下步驟在合適的患者群中測(cè)定合適的標(biāo)記物的水 平，標(biāo)記物一般是纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D- 二聚體、鈉尿肽特別是NT-BNP 原、和心臟肌鈣蛋白特別是肌鈣蛋白T或肌鈣蛋白I，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)方法收集數(shù)據(jù)和分析數(shù)據(jù) 并確定閾值。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D-二聚體的量大于閾值，結(jié)合心 臟肌鈣蛋白優(yōu)選肌鈣蛋白T或肌鈣蛋白I的量，以及結(jié)合鈉尿肽優(yōu)選為NT-BNP原的量大于 閾值(即參考量)可以表示PE的嚴(yán)重性。D-二聚體的優(yōu)選閾值是0，5 mg/L，心臟肌鈣蛋白 特別是心臟肌鈣蛋白T的優(yōu)選閾值是0，03 ng/mL。鈉尿肽特別是NT-BNP原的優(yōu)選閾值是 500 pg/mL。因此，對(duì)象具有提到的肽的量等于或大于引用的量即患有ΡΕ。應(yīng)理解的是前述 量可以由于統(tǒng)計(jì)學(xué)和測(cè)量誤差而變化。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，D-二聚體的量被測(cè)定，且根據(jù)該步驟的結(jié)果，可能顯示沒有必要去測(cè)量鈉尿肽和心臟肌鈣蛋白的量。這可以是當(dāng)測(cè)量到低量的D-二聚體的情 況，此時(shí)排除對(duì)象正患有PE。排除PE相應(yīng)的量是低于前面引用的閾值，S卩，低于500 yg/ L，低于500 μ g/L優(yōu)選10%、更優(yōu)選20%、甚至更優(yōu)選30%、特別是50%。由于本發(fā)明，不用使用技術(shù)性或侵入性診斷測(cè)量如血管造影、超聲心動(dòng)圖等就可 能對(duì)患有PE的個(gè)體確定可靠且簡(jiǎn)單的診斷并評(píng)估已確診PE患者的危險(xiǎn)。在本發(fā)明進(jìn)一步的優(yōu)選的實(shí)施方案中，確定PE的嚴(yán)重性也是可能的。根據(jù)疾病的 嚴(yán)重性，PE被分類為以下危險(xiǎn)組/嚴(yán)重性分級(jí)
危險(xiǎn)組I 癥狀性的非大塊PE，血液動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定，沒有右心室功能不全(收縮動(dòng)脈壓〉 100 mmHg)
危險(xiǎn)組II 亞大塊PE，血液動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定，右心室功能不全
危險(xiǎn)組III 大塊PE，休克和低血壓(收縮動(dòng)脈壓< 100 mmHg)，心率〉100/min
危險(xiǎn)組IV:需要復(fù)蘇
(JAL JC 獻(xiàn)Interdisziplinare S2-Leitlinie Diagnostik und Therapie der Bein- und Beckenvenen- Thrombose und der Lungenembolie. Phlebologie 2005； 34: 47-64)。在本申請(qǐng)中，術(shù)語“危險(xiǎn)組”和“嚴(yán)重性分級(jí)”可互換使用，其中這些術(shù)語是指PE的 嚴(yán)重性及其相關(guān)的危險(xiǎn)。已發(fā)現(xiàn)以下D-二聚體、肌鈣蛋白T和NT-BNP原的參考量是相應(yīng)危險(xiǎn)組的特征。確 診的PE患者根據(jù)以下算法被分配到相應(yīng)的組。1.)如果3個(gè)參數(shù)符合一個(gè)組的標(biāo)準(zhǔn)，該患者將被分配到該組
(實(shí)例=D- 二聚體800 μ g/L ；肌鈣蛋白 T 0. 01 ng/ml ；NT-BNP 原:300 pg/ml)。2.)如果3個(gè)參數(shù)中的2個(gè)符合一個(gè)組的標(biāo)準(zhǔn)，該患者將被分配到該組
(實(shí)例 1 :D- 二聚體2500 μ g/L ；肌鈣蛋白 T 0. 08 ng/ml ；NT-BNP 原:3000 pg/ml，將 被分配到危險(xiǎn)組II)
(實(shí)例 2 :D-二聚體2500 μ g/L ；肌鈣蛋白 T 0. 4 ng/ml ；NT-BNP 原:3000 pg/ml，將被 分配到危險(xiǎn)組III)。3.)如果所有3個(gè)參數(shù)符合3個(gè)不同組的標(biāo)準(zhǔn)，該患者將被分配到具有最高值參 數(shù)的那一組
(實(shí)例 1 =D- 二聚體700 μ g/L ；肌鈣蛋白 T 0. 2 ng/ml ；NT-BNP 原:6000 pg/ml，將被 分配到危險(xiǎn)組IV)
(實(shí)例 2 :D-二聚體17000 μ g/L ；肌鈣蛋白 T 0. 02 ng/ml ；NT-BNP 原:3000 pg/ml，將 被分配到危險(xiǎn)組IV)。危險(xiǎn)組I D- 二聚體 肌鈣蛋白T : NT-BNP 原 危險(xiǎn)組II D- 二聚體 肌鈣蛋白T :
500 至 <2000 μ g/L < 0.03 ng/ml < 500 pg/ml
2000 至 <6000 μ g/L 彡 0. 03 ng/mlNT-BNP 原 危險(xiǎn)組III D- 二聚體 肌鈣蛋白T NT-BNP 原 危險(xiǎn)組IV D- 二聚體 肌鈣蛋白T NT-BNP 原
彡 500 pg/ml
>12000 μ g/L > 0. 1 ng/ml >5000 pg/ml。
6000 - 12000 μ g/L > 0. 1 ng/ml 彡 500 pg/ml因此，本發(fā)明的這種變體中，本發(fā)明的方法是將個(gè)體分類到不同危險(xiǎn)組/不同嚴(yán) 重性級(jí)別的方法，包括如診斷PE的方法中的步驟a)、b)、c)和d)，且其中步驟d)包括將所 述個(gè)體分類的步驟(代替確定診斷)。該方法也可以被稱為診斷PE的嚴(yán)重性。因此，本發(fā)明包括將患有PE的個(gè)體分類為不同危險(xiǎn)組的方法，其中所述個(gè)體優(yōu)選 地顯示D-二聚體的水平(量)彡500 μ g/L，以及其中所述方法包括以下步驟
bi)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中鈉尿肽的量；
ci)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中心臟肌鈣蛋白的量；
di)將步驟bi)至di)中測(cè)定的量與參考量比較并將所述個(gè)體分類。應(yīng)該理解的是前述量可以由于統(tǒng)計(jì)學(xué)和測(cè)量誤差以及癥狀出現(xiàn)后經(jīng)過的時(shí)間而 變化(通過清除機(jī)制測(cè)定濃度的生物學(xué)時(shí)間過程)。有利的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)提到的存在于對(duì)象的樣本中的肽的量允許對(duì)所述癥狀的原因 進(jìn)行鑒別診斷，即，可以診斷PE嚴(yán)重性是否屬于I、II、III或IV級(jí)。由于本發(fā)明，對(duì)象和特 別是急診患者可以被更簡(jiǎn)便和更可靠地診斷，且隨后根據(jù)所述鑒別診斷的結(jié)果被治療。因此，上文和下文所做的術(shù)語解釋和定義應(yīng)用于在本說明書和權(quán)利要求中表征所 有的實(shí)施方案。在本發(fā)明范圍內(nèi)的多肽的量可以同時(shí)地或連續(xù)地被測(cè)定，優(yōu)選為同時(shí)地。如本文使用，“同時(shí)地”被理解為所有標(biāo)記物的量在基本相同或完全相同的時(shí)間被 測(cè)定?？梢詫?duì)同一樣本測(cè)定所有標(biāo)記物?？蛇x地，所有標(biāo)記物可以在不同樣本中測(cè)定。但 是，所述不同樣本應(yīng)從同一對(duì)象在同一時(shí)間獲取。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明還包括決定患有PE的對(duì)象的治療的方法，其包括 以下步驟
a)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D-二聚體的量；
b)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中鈉尿肽的量；
c)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中心臟肌鈣蛋白的量；
d)將步驟a)至c)中測(cè)定的量與參考量比較，從而確定所述決定。步驟d)中采取的決定優(yōu)選地在根據(jù)測(cè)量的肽的值將所述個(gè)體分類為不同嚴(yán)重性 級(jí)別中后確定。根據(jù)本發(fā)明的治療優(yōu)選地根據(jù)PE的嚴(yán)重性包括以下治療措施
危險(xiǎn)組I 用肝素抗凝,溶枠,特別是用尿激酶、鏈激酶和重組組織型纖溶酶原激活劑 (rTPA)來溶栓
15危險(xiǎn)組II 如果不存在禁忌癥，用肝素抗凝，溶栓，特別是用尿激酶、鏈激酶和MMM 織型纖溶酶原激活劑(rTPA)來溶栓
危險(xiǎn)組III 用肝素抗凝,溶栓,特別是用尿激酶、鏈激酶和重組組織型纖溶酶原激活 劑(rTPA)來溶栓
危險(xiǎn)組IV 用肝素抗凝,溶枠,特別是用尿激酶、鏈激酶和重組組織型纖溶酶原激活劑 (rTPA)來溶栓,或血栓切除術(shù)。因此，“纖溶劑”是優(yōu)選使用的，其句,括尿激_、鏈激_和重纟目纟目織型纖溶_原激活 劑(rTPA)及其具有相同牛理功能的變體。根據(jù)本發(fā)明的肝素包含未分段肝素(UFH)、低分 子量肝素(LMWH)、肝素類似物及其變體。在本發(fā)明的該變體的一個(gè)實(shí)施方案中，D-二聚體的量被測(cè)定，且根據(jù)該步驟的結(jié) 果，可能顯示沒有必要去測(cè)量鈉尿肽和心臟肌鈣蛋白的量。這可以是當(dāng)測(cè)量到低于截?cái)嘀?500 μ g/L的D-二聚體的量的情況，此時(shí)排除對(duì)象正患有PE，該對(duì)象因此不需要心臟治療。 排除PE的相應(yīng)的量是低于前面引用的閾值，即低于500 μ g/L。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明還包括監(jiān)測(cè)患有PE的對(duì)象的治療的方法，其包括 如前述的決定治療的方法的步驟，以及另外的步驟
e)再次測(cè)定在先前決定方法中已測(cè)定的肽的量。該方法可以包括根據(jù)測(cè)定的值調(diào)整治療。例如，根據(jù)I至IV級(jí)之一具有一個(gè)PE 嚴(yán)重性級(jí)別的對(duì)象可以被重新分配到不同的級(jí)別中，包括相應(yīng)的治療的調(diào)整，如前面所述。本發(fā)明還涉及適于實(shí)施本發(fā)明的方法的設(shè)備，其包括
a)測(cè)定D-二聚體的量的裝置；
b)測(cè)定鈉尿肽特別是NT-BNP原的量的裝置；以及
c)測(cè)定心臟肌鈣蛋白的量的裝置。 如本文使用的術(shù)語“設(shè)備”涉及裝置系統(tǒng)，包括至少前述裝置，其操作上相互連接 以允許進(jìn)行預(yù)測(cè)。與本發(fā)明的方法相關(guān)，測(cè)定所述多肽量的優(yōu)選裝置和實(shí)施與參考量比較 的裝置在上文公開。如何以操作方式連接這些裝置將取決于包括在設(shè)備中的裝置的類型。 例如，當(dāng)應(yīng)用自動(dòng)測(cè)定肽量的裝置時(shí)，由所述自動(dòng)操作裝置獲得的數(shù)據(jù)可以通過如計(jì)算機(jī) 程序處理，以診斷或在本文提到的疾病間進(jìn)行鑒別。優(yōu)選地，在這種情況中，這些裝置被包 括在單一設(shè)備中。因此，所述設(shè)備可以包括測(cè)量樣本中肽量的分析單元以及處理得到的數(shù) 據(jù)用于鑒別診斷的計(jì)算機(jī)單元?？蛇x地，當(dāng)使用如測(cè)試條(test stripes)的裝置測(cè)定肽量 時(shí)，診斷裝置可以包括對(duì)照條或表，其將測(cè)定的量與已知的量進(jìn)行配對(duì)，所述已知量相應(yīng)于 (i)急性或慢性肺栓塞和(ii)單發(fā)或多發(fā)的肺栓塞。測(cè)試條優(yōu)選地和配體連接，配體特異 性地結(jié)合鈉尿肽或肺表面活性蛋白。條或設(shè)備優(yōu)選地包括檢測(cè)所述肽與所述配體結(jié)合的裝 置。優(yōu)選的用于檢測(cè)的裝置公開于涉及上述本發(fā)明方法的相關(guān)的實(shí)施方案中。在這種情況 中，由于用戶手冊(cè)中給出的指導(dǎo)和解釋，系統(tǒng)用戶將量的測(cè)定結(jié)果與其診斷性值結(jié)合在一 起，所以裝置被操作地連接。在這種實(shí)施方案中，裝置可以分離的設(shè)備出現(xiàn)，且優(yōu)選地被包 裝在一起成為試劑盒(a kit)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識(shí)到如何連接這些裝置而不需要 進(jìn)一步的勞動(dòng)。優(yōu)選的設(shè)備是那些能被沒有專業(yè)臨床醫(yī)生的特定知識(shí)的人使用的設(shè)備，如， 測(cè)試條或電子設(shè)備，其只需加載樣本。結(jié)果可以用參數(shù)的診斷性原始數(shù)據(jù)，優(yōu)選地以絕對(duì)或 相對(duì)量的輸出形式給出。應(yīng)該理解的是這些數(shù)據(jù)將需要臨床醫(yī)生的解釋。但是，還可考慮的是專業(yè)系統(tǒng)設(shè)備，其中輸出包括處理過的診斷性原始數(shù)據(jù)，不需要專業(yè)臨床醫(yī)生就能解釋。 進(jìn)一步優(yōu)選的設(shè)備包括根據(jù)本發(fā)明的方法上面提到的分析單元/設(shè)備(如生物傳感器、陣 列、連接特異性識(shí)別多肽的配體的固體載體、等離子表面共振設(shè)備、NMR光譜儀、質(zhì)譜儀等) 或評(píng)價(jià)單元/設(shè)備。“適于實(shí)施”應(yīng)被理解為設(shè)備能夠自動(dòng)地實(shí)施上面提到的方法。對(duì)于這種適應(yīng)，考 慮的是設(shè)備包含用于比較測(cè)定的多肽量和參考量之間的實(shí)施的規(guī)則，所述參考量可以也是 通過設(shè)備從參考樣本中測(cè)定的或可以實(shí)際上是儲(chǔ)存值。另外，設(shè)備可以包括用于測(cè)定至少 2個(gè)不同樣本(即第一個(gè)和第二個(gè)時(shí)間點(diǎn)的樣本)之間多肽量顯著降低的實(shí)施的規(guī)則。這些 規(guī)則在設(shè)備中的應(yīng)用優(yōu)選地通過算法實(shí)現(xiàn)，所述算法以在計(jì)算機(jī)或數(shù)據(jù)處理單元上運(yùn)行的 可存儲(chǔ)程序代碼形式提供。最后，本發(fā)明涉及實(shí)施本發(fā)明方法的試劑盒，其包括
a)測(cè)定纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D-二聚體的量的裝置；
b)測(cè)定鈉尿肽特別是NT-BNP原的量的裝置；和
c)測(cè)定心臟肌鈣蛋白量的裝置；
d)實(shí)施上述方法的說明書。術(shù)語“試劑盒”如本文使用是指前述裝置的集合，優(yōu)選地，分別提供或在單一容器 內(nèi)提供。所述容器還優(yōu)選地包含實(shí)施本發(fā)明方法的說明書。因此，本發(fā)明涉及包含用于測(cè) 量相應(yīng)多肽的裝置或試劑的試劑盒。這類裝置或試劑可以是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的任 何合適的裝置或試劑。這類裝置或試劑的實(shí)例及它們的使用方法已經(jīng)在本說明書中給出。 例如，合適的試劑可以是任何種類的配體或抗體，其能夠特異性地結(jié)合上文提到的多肽。試 劑盒也可以包括任何其它成分，其在測(cè)定相應(yīng)生物標(biāo)記物的量的內(nèi)容中被認(rèn)為合適的，如 合適的緩沖液、過濾器等。優(yōu)選地，試劑盒可以另外包括說明書，如用于解釋任何與本發(fā)明 方法提供的診斷相關(guān)的測(cè)定結(jié)果的用戶手冊(cè)。具體地，這些手冊(cè)可以包括用于將測(cè)定的多 肽量分配到診斷種類(即單發(fā)性或多發(fā)性肺栓塞或者急性或慢性肺栓塞)的信息。細(xì)節(jié)將 在本說明書中別處找到。另外地，這種用戶手冊(cè)可以提供關(guān)于正確使用試劑盒成分用于測(cè) 定相應(yīng)生物標(biāo)記物的量的指導(dǎo)。用戶手冊(cè)可以以紙或電子形式提供如儲(chǔ)存在⑶或⑶ROM 上。本發(fā)明還涉及所述試劑盒在根據(jù)本發(fā)明的任何方法中的使用。在本說明書中引用的所有參考對(duì)于它們?nèi)抗_內(nèi)容和本發(fā)明中特別提到的公 開內(nèi)容都通過參考并入本文。
實(shí)施例以下實(shí)施例僅說明本發(fā)明。無論如何，不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍。在本 研究中，相應(yīng)多肽的量是在血液樣本中測(cè)量的。為了測(cè)定NT-BNP原和肌鈣蛋白T，使用 Elecsysm^Hi (Roche Diagnostics, Germany)。D_二聚體水平在枸櫞酸鈉血菜樣本中使 用 STA LIATEST D-Di (STAGO, France)禾口 Tina-quant (a) D-Dimer (Roche Diagnostics, Germany)測(cè)定。實(shí)施例1 確診PE患者中的多標(biāo)記物方法?？偣?2位疑似PE的患者包括在本研究中。患者顯示出升高的D-二聚體濃度，其高于截?cái)嘀?00 yg/L。通過肺血管造影確定PE的診斷。測(cè)定D- 二聚體、鈉尿肽NT-ANP原和NT-BNP原、以及肌鈣蛋白T和高敏感性 肌鈣蛋白T用于危險(xiǎn)分級(jí)。結(jié)果顯示于表1。根據(jù)D- 二聚體、肌鈣蛋白T和NT-BNP原的 濃度，如果3個(gè)值中2個(gè)符合以下標(biāo)準(zhǔn)，患者被分為危險(xiǎn)組I - IV: 危險(xiǎn)組I中的患者 D- 二聚體500 - <2000 μ g/L 肌鈣蛋白T :< 0. 03 ng/ml NT-BNP 原<500 pg/ml 危險(xiǎn)組II中的患者 D- 二聚體2000 - <6000 μ g/L 肌鈣蛋白T 彡0. 03 ng/ml NT-BNP 原彡 500 pg/ml 危險(xiǎn)組III中的患者 D- 二聚體6000 - 12000 μ g/L 肌鈣蛋白T > 0.1 ng/ml NT-BNP 原彡 500 pg/ml 危險(xiǎn)組IV中的患者 D- 二聚體> 12000 μ g/L 肌鈣蛋白T > 1.0 ng/ml NT-BNP 原>5000 pg/ml。
表 1
在危險(xiǎn)分級(jí)中的D- 二聚體、NT-BNP原和肌鈣蛋白T以及確診PE患者的治療決定
權(quán)利要求
1.在對(duì)象中診斷急性肺栓塞PE的方法，其包括a)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D-二聚體的量；b)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中鈉尿肽的量；c)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中心臟肌鈣蛋白的量；d)將步驟a)至c)中測(cè)定的量和參考量比較，從而確定所述診斷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述參考量如下D- 二聚體 500 μ g/L ；肌鈣蛋白 T 0. 03 ng/ml ；NT-BNP 原 125 pg/ml。
3.將患有PE的個(gè)體分類為不同危險(xiǎn)組的方法，其中所述個(gè)體優(yōu)選地顯示D-二聚體的 量> 500 μ g/L，以及其中所述方法包括以下步驟bi)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中鈉尿肽的量；ci)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中心臟肌鈣蛋白的量；di)將步驟bi)至di)中測(cè)定的量與參考量比較并且將所述個(gè)體分類。
4.權(quán)利要求3的方法，其中以下肽的量指示PE嚴(yán)重性的相應(yīng)程度 危險(xiǎn)組I D-二聚體 500 - <2000 μ g/L;肌鈣蛋白 T < 0.03 ng/ml ； NT-BNP 原 < 500 pg/ml 危險(xiǎn)組II D-二聚體 2000 - <6000 μ g/L;肌鈣蛋白 T 彡 0.03 ng/ml ;NT_BNP 原彡 500 pg/ml 危險(xiǎn)組III D- 二聚體 6000 - 12000 μ g/L ；肌鈣蛋白 T> 0. 1 ng/ml ；NT-BNP 原彡 500 pg/ml 危險(xiǎn)組IV D-二聚體〉12000 μ g/L;肌鈣蛋白 T> 1.0 ng/ml ;ΝΤ_ΒΝΡ 原〉5000 pg/ml。
5.權(quán)利要求1至4的任一項(xiàng)的方法，其中所述樣本是血液、血清或血漿。
6.權(quán)利要求1至5的任一項(xiàng)的方法，其中所述對(duì)象是人類。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的方法，其中所述鈉尿肽是NT-BNP原。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的方法，其中所述心臟肌鈣蛋白是肌鈣蛋白T或肌鈣蛋 白I。
9.決定患有PE的對(duì)象的治療的方法，包括以下步驟a)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D-二聚體的量；任 選地，取決于步驟a)的結(jié)果，b)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中鈉尿肽的量；c)測(cè)定試樣所述對(duì)象的樣本中心臟肌鈣蛋白的量；d)將步驟a)至c)中測(cè)定的量與參考量比較，從而確定所述決定，優(yōu)選地，根據(jù)測(cè)量的 肽的值將所述個(gè)體分類為不同危險(xiǎn)組后確定所述決定。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述治療包括用肝素、尿激酶、鏈激酶、重組組織型 纖溶酶原激活劑給藥和/或進(jìn)行血栓切除術(shù)。
11.監(jiān)測(cè)患有PE的對(duì)象的治療的方法，其包括根據(jù)權(quán)利要求9至10任一項(xiàng)的方法的 步驟，以及另外的步驟e)再次測(cè)定肽的量。
12.適于實(shí)施本發(fā)明的方法的設(shè)備，其包括a)測(cè)定纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D-二聚體的量的裝置；b)測(cè)定鈉尿肽特別是NT-BNP原的量的裝置；以及c)測(cè)定心臟肌鈣蛋白的量的裝置。
13.適于實(shí)施本發(fā)明的方法的試劑盒，其包括a)測(cè)定纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D-二聚體的量的裝置；b)測(cè)定鈉尿肽特別是NT-BNP原的量的裝置；c)測(cè)定心臟肌鈣蛋白的量的裝置；d)實(shí)施上述方法的說明書。
全文摘要
本發(fā)明涉及在疑似患有急性PE患者中診斷急性PE的方法，其包括a)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中纖維蛋白-纖維蛋白原降解產(chǎn)物特別是D-二聚體的量；b)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中鈉尿肽量；c)測(cè)定所述對(duì)象的樣本中心臟肌鈣蛋白量；d)將步驟a)至c)中測(cè)定的量與參考量比較，從而確定所述診斷。還包括的是決定診斷為PE的患者的治療的方法以及監(jiān)測(cè)所述治療的方法。本發(fā)明還包括用于實(shí)施前述方法的設(shè)備和試劑盒。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102124345SQ200980131584
公開日2011年7月13日 申請(qǐng)日期2009年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月13日
發(fā)明者伊萬迪克 B., 斯帕努特 E. 申請(qǐng)人:霍夫曼-拉羅奇有限公司