專利名稱：檢測樣品微陣列中的分析物的方法和實施所述方法的裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉 及檢測樣品中目標(biāo)分析物的方法和實施該方法的裝置。
背景技術(shù)：
有各種各樣的技術(shù)，其尋求提供檢測樣品中生物分析物的方法。例如，美國專利號6，361，944、美國專利號6，506，564、美國專利號6，750，016和美國專利號6，767，702 公開了通過觀察寡核苷酸與核酸雜交時的顏色改變來檢測核酸的方法。Yguerabide等人(Journal of Cellular Biochemistry Supplement (細(xì)胞生物化學(xué)雜志 ±曾干Ij ) 37 71-81(2001))公開了共振光散射(RLS)顆粒作為標(biāo)記物用于分析物檢測的應(yīng)用。Foultier 等人(IEEProc. -Nanobiotechnol (電氣工程師學(xué)會學(xué)報-納米生物技術(shù))，第152卷，第1 號，2005年2月)公開了熒光標(biāo)記技術(shù)在視覺檢測樣品中目標(biāo)分析物的存在或不存在中的應(yīng)用。盡管可獲得這些不同的方法，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)通過光學(xué)手段檢測生物分析物往往是不令人滿意的。本發(fā)明旨在向公眾提供解決這種問題的改進(jìn)的方法，或至少一種備選方法。發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了一種使用電磁波或單色光檢測樣品中目標(biāo)分析物的方法，包括(a)通過至少一種電磁波或單色光照射樣品組，該樣品組包括潛在含有該目標(biāo)分析物的多個樣品，(b)檢測在被該電磁波或單色光或每種電磁波或單色光照射時由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的電磁波的強(qiáng)度，(c)記錄與由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的光強(qiáng)度相關(guān)的一個或多個數(shù)值組，其中該數(shù)值組或該數(shù)值組中的每一組與由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的每種各自的電磁波或單色光相關(guān)，(d)比較與該電磁波或單色光或每種電磁波或單色光相關(guān)的一個或多個數(shù)值組，(e)選擇具有較高信號的數(shù)值組或數(shù)值組之一，和(f) 基于從步驟(d)中選擇的數(shù)值組確定目標(biāo)分析物的存在或不存在。當(dāng)使用電磁波或單色光照射時，目標(biāo)分析物可以產(chǎn)生可檢測的電磁信號。該樣品可以使用含有信號增強(qiáng)劑的標(biāo)記物進(jìn)行預(yù)處理以增強(qiáng)反射、吸收或發(fā)出的電磁波的強(qiáng)度。通過比較一個或多個數(shù)值組，可使用最佳指示該目標(biāo)分析物的存在或不存在的數(shù)值組。在一個實施方案中，在上述步驟(a)中，樣品組可通過至少兩種電磁波或單色光進(jìn)行相繼照射。優(yōu)選地，該信號增強(qiáng)劑可以是納米_尺寸的顆粒。更特別地，該納米_尺寸的顆粒可以是金屬顆粒、納米_金顆粒或納米_銀顆粒。該納米_尺寸的顆?？赏ㄟ^分子結(jié)合與目標(biāo)分析物聯(lián)合。該方法可用于檢測生物學(xué)樣品中存在的目標(biāo)分析物；該目標(biāo)分析物可以是DNA或肽分子。優(yōu)選地，該單色光可具有380nm至750nm的頻率。在一個實施方案中，該單色光之一是藍(lán)色單色光，或具有范圍在IOnm至IOOOnm的波長的電磁波或單色光或電磁波或單色光之一。在其他實施方案中，該單色光或單色光之一可以是紫光、藍(lán)光、綠光、黃光、橙光或紅光。還在其他實施方案中，該電磁波或該電磁波之一可以是紫外線或紅外線，或可具有IOnm 至 380nm(紫外線)、380nm 至 450nm (紫光)、450nm 至 495歷(藍(lán)光)、495nm 至 57Onm (綠光)、57Onm 至 59Onm (黃光)、59Onm 至 62Onm (橙光)、62Onm 至 75Onm (紅光)或 75Onm 至 IOOOnm(紅外線)的波長。所選的該單色光可具有跨越這些范圍中的兩個的波長。在一個實施方案中，在確定目標(biāo)分析物存在或不存在之前，數(shù)值組之間相互比較。 然而，數(shù)值組可以以這種方式與預(yù)定的參比值相比較，即如果一個或多個數(shù)值組與參比值相比較具有更高的值，那么該比較將導(dǎo)致確定目標(biāo)分析物存在，反之亦然。在備選的實施方案中，數(shù)值組與照射一組用作陽性對照的樣品獲得的數(shù)值組相比較。如果該數(shù)值組或該多個數(shù)值組與來自陽性對照的數(shù)值組是相當(dāng)?shù)?，那么該比較將導(dǎo)致確定目標(biāo)分析物存在?；蛘呷绻摂?shù)值組或該多個數(shù)值組與來自作為陰性對照的數(shù)值組是相當(dāng)?shù)模敲丛摫容^將導(dǎo)致確定目標(biāo)分析物不存在。根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供了一種用于檢測在樣品微陣列中含有納米-尺寸的金-和/或銀-的檢測標(biāo)記物的方法，其中所述標(biāo)記物指示樣品中目標(biāo)分析物的存在或不存在，所述方法包括(a)使用至少兩種不同的電磁波或單色光相繼照射至少兩個樣品組， 該電磁波或單色光具有IOnm至IOOOOnm的波長，該樣品組包括包含至少一個潛在含有目標(biāo)分析物的樣品的第一樣品組，和用作陽性對照或陰性對照的第二樣品組，(b)檢測在使用每種電磁波或單色光照射時由每組所述樣品組反射、吸收或發(fā)出的光的強(qiáng)度，(c)記錄與由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的光強(qiáng)度相關(guān)的數(shù)值組，其中每個數(shù)值組對每組樣品組而言與每種單色光相關(guān)，(d)比較與所述樣品組和每種所述單色光相關(guān)的數(shù)值組；和(e)基于步驟 (d)中的比較確定目標(biāo)分析物的存在或不存在，其中所述單色光包括至少一種電磁波或單色光，該電磁波或單色光具有范圍在IOnm至IOOOnm的波長。通過比較，可使用最佳指示該目標(biāo)分析物的存在或不存在的數(shù)值組。在一個實施方案中，至少兩個樣品組可使用所述單色光之一進(jìn)行同時照射。優(yōu)選地，該樣品組可包括包含至少一個潛在含有目標(biāo)分析物的樣品的第一樣品組，用作陽性對照的第二樣品組，和用作陰性對照的第三樣品組。通過兩個比較，確定目標(biāo)分析物的存在或不存在的可靠性將得到增強(qiáng)。在一個具體實施方案中，雖然可使用任何合適的圖像捕獲手段，但是由樣品組反射、吸收或發(fā)出的光可通過CDC照相機(jī)進(jìn)行檢測。在一個實施方案中，在步驟(C)之后，提供了對每個樣品組中樣品的光強(qiáng)度取平均值和產(chǎn)生與每種單色光相關(guān)的至少兩個平均值的步驟，其中一個平均值與潛在含有分析物的樣品組相關(guān)，另一個平均值或其它平均值之一與用作陽性對照或陰性對照的樣品組相關(guān)。平均值的使用是有優(yōu)勢的，因為出于比較的目的它可提供更多有代表性的數(shù)字并且也可更方便地進(jìn)行比較。更特別地，可以提供對與潛在含有分析物的樣品組和用作陽性對照或陰性對照的樣品組相關(guān)的多個平均值的絕對值取差值的步驟，因此產(chǎn)生至少兩種差值， 其中每種差值與各自的單色光相關(guān)。在產(chǎn)生至少兩種差值后，提供將該差值與預(yù)定的差值比較的步驟。在另一個實施方案中，可以提供產(chǎn)生絕對值的至少兩種差值的步驟，其中該差值之一與潛在含有分析物的樣品組和用作陽性對照的樣品組相關(guān)的平均值的比較相關(guān)，并且另一個平均值或另一些平均值之一與潛在含有分析物的樣品組和用作陰性對照的樣品組相關(guān)的平均值的比較相關(guān)。通過這個步驟，可以提供產(chǎn)生絕對值的至少四種差值的步驟，該四種差值中的兩種與通過該單色光之一照射樣品組相關(guān)的值相關(guān)，而其他兩種與通過其它單色光之一照射樣品組相關(guān)的值相關(guān)。然后，可以提供在確定樣品中目標(biāo)分析物的存在或不存在時，確定使用所述至少四種差值中的哪兩種或至少哪兩種的步驟。 根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供了檢測樣品微陣列中的含有納米_尺寸的金-和/ 或銀-的檢測標(biāo)記物的方法，該標(biāo)記指示樣品中目標(biāo)分析物的存在或不存在，所述方法包括(a)使用至少兩種不同的預(yù)定單色光相繼照射至少兩個樣品組，該單色光具有不同的頻率，該樣品組包括包含至少一個潛在含有目標(biāo)分析物的樣品的第一樣品組，和用作陽性對照或陰性對照的第二樣品組，(b)檢測在使用每種電磁波或單色光照射時由每組樣品組反射、吸收或發(fā)出的光的強(qiáng)度，(c)記錄與由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的光強(qiáng)度相關(guān)的數(shù)值組，其中每個數(shù)值組對每組樣品組而言與每種單色光相關(guān)，(d)比較與所述樣品組和每種所述單色光相關(guān)的數(shù)值組，(e)在步驟(d)之后產(chǎn)生差值數(shù)據(jù)，(f)選擇具有最高值的差值數(shù)據(jù)，和(g)基于來自步驟(e)的具有最高值的差值數(shù)據(jù)確定目標(biāo)分析物的存在或不存在。在一個實施方案中，可通過具有IOnm至IOOOnm的波長的電磁波或單色光之一同時照射至少兩個樣品組。在另一個實施方案中，該樣品組可包括(a)包含至少一個潛在含有目標(biāo)分析物的樣品的第一樣品組，(b)用作陽性對照的第二樣品組和(c)用作陰性對照的第三樣品組。由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的光可通過CDC照相機(jī)或任何合適圖像捕獲手段進(jìn)行檢測。在另一個實施方案中，在步驟(C)之后，提供了對每個樣品組中樣品的光強(qiáng)度取平均值和產(chǎn)生與每種電磁波或單色光相關(guān)的至少兩個平均值的步驟，其中一個平均值與潛在含有分析物的樣品組相關(guān)，另一個平均值或其它平均值之一與用作陽性對照或陰性對照的樣品組相關(guān)?？梢蕴峁εc潛在含有分析物的樣品組和用作陽性對照或陰性對照的樣品組相關(guān)的多個平均值的絕對值取差值的步驟，因此產(chǎn)生至少兩種差值，其中每種差值與各自的單色光相關(guān)。也可以提供比較所述差值和預(yù)定的差值的步驟。在另一個實施方案中，提供了產(chǎn)生絕對值的至少兩種差值的步驟，其中該差值之一與潛在含有分析物的樣品組和用作陽性對照的樣品組相關(guān)的平均值的比較相關(guān)，并且另一種差值或另一些差值之一與潛在含有分析物的樣品組和用作陰性對照的樣品組相關(guān)的平均值的比較相關(guān)。然后可以存在產(chǎn)生絕對值的至少四種差值的步驟，該四種差值中的兩種與使用該單色光之一照射樣品組相關(guān)的值相關(guān)，且其他差值中的兩種與使用其它單色光之一照射樣品組相關(guān)的值相關(guān)。可以存在在確定樣品中目標(biāo)分析物的存在或不存在時，確定使用所述至少四種差值中的哪兩種或至少哪兩種的步驟。在優(yōu)選的實施方案中，樣品組可包括以微陣列格式排列的許多樣品。


現(xiàn)通過引用附圖僅通過示例性方式描述本發(fā)明，其中_圖1是樣品微陣列的圖示；圖2a和圖2b是在一些條件下樣品微陣列的照片；圖3a和圖3b是在一定條件下與圖2a和圖2b中的相同的樣品微陣列的照片；
圖4a和圖4b是在一些條件下與圖2a和圖2b中的相同的樣品微陣列的照片；
圖5a和圖5b是在一些條件下與圖2a和圖2b中的相同的樣品微陣列的照片；圖6a至6e是在一段時間內(nèi)所拍攝的樣品微陣列的照片；圖6f是一張表格，用作微陣列中樣品的定位的圖例；圖7包括圖像的信息和一張表格，該表格表明了當(dāng)通過不同顏色的光或不同頻率的光對微陣列進(jìn)行照射時的差別；和圖8至11中的每個圖與圖7是類似的，除了該信息涉及當(dāng)微陣列中的反應(yīng)在一段時間內(nèi)持續(xù)時在不同時間照射的微陣列。為了更好地說明，還附上一套彩色的圖1至11。本發(fā)明優(yōu)選實施方案的詳細(xì)描述已知在某種情況下檢測一些生物學(xué)樣品是很難的。例如，當(dāng)目標(biāo)生物學(xué)樣品的濃度非常低時，能夠可靠地檢測目標(biāo)樣品是尤其困難的。Yguerabide等人(Journal of Cellular Biochemistry Supplement (細(xì)胞生物化學(xué)雜志增刊)37 :71_81 (2001))提出使用共振光散射粒子作為超靈敏標(biāo)記物用于檢測生物物質(zhì)。美國專利號6，767，702提出了一種檢測核酸的方法。Foultier等人(IEE Proc. -Nanotechnology.(電氣工程師學(xué)會學(xué)報_納米生物技術(shù))，第152卷，第1號，2005年2月)比較了使用納米顆粒和銀增強(qiáng)作用來檢測DNA的不同方法。(這些文獻(xiàn)內(nèi)容的全文通過引用并入本申請中)。盡管可得到這些不同的方法，但是還沒有一種方法可普遍地能夠用來有效地和可靠地檢測各種各樣的生物學(xué)樣品。本發(fā)明試圖提供一種新的和用戶友好的檢測生物學(xué)物質(zhì)的方式。本發(fā)明現(xiàn)在將通過下列的非限制性的實施例和實驗進(jìn)行描述。通過介紹的方式，注意到本發(fā)明的實質(zhì)不是關(guān)于待檢測樣品的類型，而是關(guān)于檢測的方法。只要有關(guān)的樣品是通過或可通過信號增強(qiáng)劑標(biāo)記的，那么它可以是根據(jù)本發(fā)明檢測的對象。由此可見目標(biāo)樣品可以是DNA分子、肽分子或任何有機(jī)分子或無機(jī)分子，其可通過信號增強(qiáng)劑，例如納米_尺寸的顆粒、納米_金顆?；蚣{米_銀顆粒標(biāo)記。該信號增強(qiáng)劑優(yōu)選是納米_尺寸的顆粒。納米_尺寸的顆粒意指顆粒具有ΙΟ—9 級別的尺寸。實驗1在這個實驗中，目標(biāo)分析物是乙型肝炎病毒且信號增強(qiáng)劑是納米-尺寸的金顆粒。將使用納米-尺寸的金顆粒標(biāo)記的乙型肝炎病毒(HBV)探針用作陽性對照。特別地， 看圖1，顯示了芯片薄片上的樣品微陣列的示意圖。芯片薄片根據(jù)圖1所示的模式進(jìn)行點樣。特別地，將芯片薄片劃分為六個區(qū)域，即區(qū)域A至F。區(qū)域A、D和E是暗區(qū)且這些區(qū)域代表了具有乙型肝炎病毒探針的陽性對照的區(qū)域，該探針已通過信號增強(qiáng)劑標(biāo)記。淺灰色區(qū)即區(qū)域F用非特異的目標(biāo)物進(jìn)行加樣，其用作陰性對照。白區(qū)即區(qū)域B和C并不含有任何點樣的樣品，它們用作陰性對照。通過這種配置，陽性結(jié)果或較深的顏色應(yīng)在用HBV探針進(jìn)行點樣的區(qū)域中觀察到，而陰性結(jié)果或最少的顏色應(yīng)在其它區(qū)域中觀察到。第一個實驗的下一步是通過著眼于有效地和精確地確定HBV探針的存在或不存在，來確定任何研究HBV探針的存在的方法是否是有優(yōu)勢的。圖2a和圖2b是分別通過CDC 照相機(jī)和B/W CDC照相機(jī)拍攝的圖像，該圖像是當(dāng)與如上 所述的相同的樣品微陣列通過具有450nm至495nm波長的藍(lán)色光源進(jìn)行照射時拍攝的。圖3a和3b、圖4a和4b、圖5a和5b 與圖2a和2b是類似的，雖然不同的是圖像是在芯片薄片上的樣品微陣列分別通過白光、具有495nm至570nm波長的綠光和具有620至750nm波長的紅光的光源進(jìn)行照射時拍攝的。
首先看圖4a至4b，雖然區(qū)域A、D和E確實含有HBV探針并且應(yīng)當(dāng)產(chǎn)生具有明顯的陽性結(jié)果的圖像，但是如可以由該附圖中所見地，該圖像并不明顯。特別地，區(qū)域A、D和 E和區(qū)域B、C和F之間的反差并不高。因此，這意味著當(dāng)通過綠光照射樣品微陣列時，盡管 HBV探針(或可能含有HBV的真正樣品，或任何其它可以含有目標(biāo)分析物或生物制品的樣品)實際存在，但很難可靠地得出是否真正的存在所述目標(biāo)樣品的結(jié)論。換言之，對該特定樣品微陣列使用綠顏色并不是特別地可靠。 看圖5a至5b，同樣地，區(qū)域A、D和E確實含有HBV探針并應(yīng)當(dāng)產(chǎn)生明顯的陽性結(jié)果。顯示出和區(qū)域B、C、F相比，區(qū)域A、D和E確實顯示相對更高反差的紅點(當(dāng)和圖4a和 4b的相應(yīng)反差進(jìn)行比較時)。這意味著檢測HBV探針的存在使用紅光比使用綠光是具有相對優(yōu)勢的?？磮D3a和3b，同樣地，區(qū)域A、D和E確實含有HBV探針并應(yīng)當(dāng)產(chǎn)生明顯的陽性結(jié)果。顯示出和區(qū)域B、C、F相比，區(qū)域A、D和E確實顯示相對更高反差的紫色的點(當(dāng)和圖 4a和4b的相應(yīng)的反差進(jìn)行比較時，及當(dāng)與圖5a和5b進(jìn)行比較時和區(qū)域B、C、F相比具有類似的相應(yīng)反差)。這意味著當(dāng)與使用紅光進(jìn)行比較時，使用白光檢測HBV探針的存在是相似地有效的，但比使用綠光是更有效和有優(yōu)勢的?？磮D2a和2b，同樣地，區(qū)域A、D和E確實含有HBV探針并應(yīng)當(dāng)產(chǎn)生明顯的陽性結(jié)果。顯示出和區(qū)域B、C和F相比，區(qū)域A、D和E確實顯示最高反差的明顯的藍(lán)色的點(當(dāng)比較圖3a和3b、圖4a和4b和圖5a和5b的每個圖的區(qū)域A、D和E和區(qū)域B、C、F之間的相應(yīng)的反差比較時)。這表明在通過藍(lán)光、白光、綠光和紅光照射標(biāo)記有增強(qiáng)劑的HBV樣品之中，使用藍(lán)光來檢測HBV探針的存在是最有效的。實驗2圖6a至11顯示了與圖1至5b中所示的和如上所述的類似的實驗數(shù)據(jù)和結(jié)果。特別地，使用了芯片薄片并將其類似地劃分為六個區(qū)域，即區(qū)域A至F，其中樣品包括加載到其中的目標(biāo)分析物、陽性對照和/或陰性對照。區(qū)域A和D加載特異性探針。區(qū)域E和F 加載特異性探針但分別稀釋100倍和10倍。區(qū)域C加載非特異性探針且區(qū)域B僅加載緩沖液。圖例見圖6f。所述特異性探針與HBV探針類似。然而，與顯示于圖1至5b的實驗相比較，在本實驗中有許多差異。第一，允許反應(yīng)在芯片薄片上進(jìn)行，并且當(dāng)反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)行少于6分鐘(見圖6a)、約6分鐘(見圖6b)、在約10分鐘(見圖6c)、在約14分鐘(見圖 6d)和超過14分鐘(見圖6e)時，拍攝芯片薄片的圖像。原則上，隨著反應(yīng)進(jìn)行，將有一個時間范圍，在該時間范圍中分析物的存在的檢測和指示是特別明顯的。在這個特別的實驗中，芯片薄片在不同的時間通過白光進(jìn)行照射然后通過圖像捕獲手段捕獲相應(yīng)的圖像。該白色單色光是具有可見光范圍內(nèi)的波長的單色光的組合。除了在特定時間(例如圖6a至6f中所示的少于6分鐘)通過特定的光或單色光 (例如如圖6a至6f中所示的白色單色光)照射薄片芯片外，芯片薄片還通過其它單色光進(jìn)行相繼照射，并且捕獲相應(yīng)的芯片薄片圖像。圖7說明其它單色光包括紅外單色光、紅色單色光、橙色單色光、黃色單色光、綠色單色光和藍(lán)色單色光，它們的波長已在上面提到。圖7 還總結(jié)了數(shù)值數(shù)據(jù)，該數(shù)據(jù)反映由芯片薄片上的樣品反射或發(fā)出的電磁波或光的強(qiáng)度。特別地，還可檢測電磁波或光的吸收水平。因此，應(yīng)當(dāng)理解實際上當(dāng)檢測不到電磁波或光時， 那么它表明有關(guān)樣品已吸收了照射在其上的所有電磁波或光。備選地，很多時候當(dāng)電磁波或光被部分吸收時，吸收的程度可通過傳統(tǒng)的方法進(jìn)行測量。由此可見在電磁波或光被最少地吸收的情況下，將認(rèn)為吸收的水平是不顯著的。總之，本發(fā)明的步驟之一是檢測來自各個樣品的電磁波或光的發(fā)射、吸收或反射。既然其中僅加載有緩沖液的部分作為陰性對照，當(dāng)比較目標(biāo)分析物的數(shù)值數(shù)據(jù)和緩沖液的數(shù)值數(shù)據(jù)時，從該比較中產(chǎn)生的δ值(delta value)指示該目標(biāo)分析物的存在或不存在。圖7說明與使用藍(lán)色單色光相關(guān)的δ值將提供最好的結(jié)果，這表明在這個特定實驗中，使用藍(lán)色單色光檢測該分析物是最有效的。 圖8是與圖7類似的，雖然它顯示了該反應(yīng)已在芯片薄片上進(jìn)行了約6分鐘時拍攝的一系列圖像。值得注意的是與黃色單色光相關(guān)的S值是最高的，這表明在這個特定實驗中，使用黃色單色光在這個反應(yīng)時間檢測該分析物是最有效的。圖9是與圖7類似的，雖然它顯示了該反應(yīng)已在芯片薄片上進(jìn)行了約10分鐘時拍攝的一系列圖像。值得注意的是與橙色單色光和黃色單色光相關(guān)的S值是最高的，其中與橙色單色光相關(guān)的δ值高于與黃色單色光相關(guān)的δ值。這表明在這個特定實驗中，使用橙色單色光在這個反應(yīng)時間檢測該分析物是最有效的。圖10是與圖7類似的，雖然它顯示了該反應(yīng)已在芯片薄片上進(jìn)行了約14分鐘時拍攝的一系列圖像。值得注意的是與紅色單色光相關(guān)的S值是最高的，這表明在這個特定實驗中，使用紅色單色光在這個反應(yīng)時間檢測該分析物是最有效的。圖11是與圖7類似的，雖然它顯示了該反應(yīng)已在芯片薄片上進(jìn)行了超過14分鐘時拍攝的一系列圖像。值得注意的是與紅外線相關(guān)的S值是最高的，這表明在這個特定實驗中，使用紅外線在這個反應(yīng)時間檢測該目標(biāo)分析物是最有效的。從上面的實驗，可以得出結(jié)論在某些情況下使用某種單色光應(yīng)該是最有效的。然而，預(yù)測在特定時間使用哪種特定單色光卻是很難的。因此，在根據(jù)本發(fā)明的一個方面的優(yōu)選實施方案中，樣品可通過一定范圍的不同的預(yù)選的單色光進(jìn)行相繼照射。產(chǎn)生最佳S值的數(shù)據(jù)可用于確定目標(biāo)分析物的存在或不存在。在上面的實驗中，芯片薄片加載作為陽性對照和陰性對照的樣品。然而，在備選實施方案中，與陽性和/或?qū)φ盏闹迪鄬?yīng)的預(yù)先確定的值可用于比較目的。可提供合適的計算機(jī)軟件以實施比較的練習(xí)。如實驗1中所示，對芯片薄片上不同區(qū)域的反差進(jìn)行視覺測定。然而，在實驗2中， 檢測由樣品反射、吸收或發(fā)出的光強(qiáng)度然后數(shù)字化地轉(zhuǎn)換為數(shù)值數(shù)據(jù)。應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的某些特征(如通過上述實驗的方式解釋的)可在單個實施方案中組合提供。相反地，本發(fā)明的多種特征(如通過上述實驗的方式解釋的)為簡潔的原因在一個實驗的上下文中進(jìn)行了描述，但是可以單獨提供或以任何適當(dāng)?shù)膩喗M提供。
權(quán)利要求
1.一種使用電磁波或單色光檢測樣品中目標(biāo)分析物的方法，包括(i)使用至少一種電磁波或單色光照射樣品組，該樣品組包括潛在含有該目標(biāo)分析物的多個樣品；(ii)檢測在被該電磁波或單色光或每種電磁波或單色光照射時由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的電磁波的強(qiáng)度；(iii)記錄與由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的電磁波或光的強(qiáng)度相關(guān)的一個或多個數(shù)值組，其中所述數(shù)值組或所述數(shù)值組中的每一組與由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的各自的電磁波或單色光相關(guān)；(iv)比較與該電磁波或單色光或每種電磁波或單色光相關(guān)的一個或多個數(shù)值組； (ν)選擇具有較高信號的數(shù)值組之一；和(vi)基于從步驟(ν)中選擇的數(shù)值組確定目標(biāo)分析物的存在或不存在。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述樣品或所述樣品中的一些通過使用含有信號增強(qiáng)劑的檢測標(biāo)記物進(jìn)行預(yù)處理。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述目標(biāo)分析物通過含有信號增強(qiáng)劑的物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。
4.權(quán)利要求1的方法，包括，在步驟(i)中，使用至少兩種電磁波或單色光相繼照射所述樣品組。
5.權(quán)利要求2的方法，其中所述信號增強(qiáng)劑是納米-尺寸的顆粒。
6.權(quán)利要求5的方法，其中所述顆粒是金屬顆粒。
7.權(quán)利要求5的方法，其中所述納米-尺寸的顆粒是納米-金顆粒。
8.權(quán)利要求5的方法，其中所述納米-尺寸的顆粒是納米-銀顆粒。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述目標(biāo)分析物存在于生物學(xué)樣品中。
10.權(quán)利要求1的方法，其中所述單色光或所述單色光之一具有380nm至750nm的波長。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述單色光或所述單色光之一是藍(lán)色單色光，或所述電磁波或單色光或所述電磁波或單色光之一具有范圍在IOnm至IOOOnm的波長。
12.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(iv)中所述數(shù)值組之間相互比較，或與預(yù)定的參比值相比較。
13.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(iv)中所述數(shù)值組之間相互比較，或與照射用作陽性對照的樣品組獲得的數(shù)值組相比較。
14.權(quán)利要求1的方法，其中在步驟(iv)中所述數(shù)值組之間相互比較，或與照射用作陰性對照的樣品組獲得的數(shù)值組相比較。
全文摘要
一種用于檢測樣品微陣列中與含有納米-尺寸的金-和/或銀-的檢測標(biāo)記物相關(guān)的目標(biāo)分析物的方法，其中該標(biāo)記物指示樣品中目標(biāo)分析物的存在或不存在，所述方法包括(i)使用至少兩種不同的單色光相繼照射至少兩個樣品組，所述的樣品組包括(a)包含至少一個潛在含有目標(biāo)分析物的樣品的第一樣品組，和(b)用作陽性對照或陰性對照的第二樣品組，(ii)檢測當(dāng)使用每種所述單色光照射時由每組所述樣品組反射、吸收或發(fā)出的光的強(qiáng)度，(iii)記錄與由該樣品組反射、吸收或發(fā)出的光強(qiáng)度相關(guān)的數(shù)值組，其中每個數(shù)值組對每組樣品組而言與每種單色光相關(guān)，(iv)比較與所述樣品組和每種所述單色光相關(guān)的數(shù)值組；和(v)基于步驟(iv)中的比較確定目標(biāo)分析物的存在或不存在，其中所述單色光至少包括藍(lán)色單色光或具有范圍在10nm至100nm的頻率的單色光。還公開了用于執(zhí)行所述方法的裝置。
文檔編號G01N33/53GK102171568SQ200980139247
公開日2011年8月31日 申請日期2009年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月10日
發(fā)明者于常海, 劉樂庭 申請人:?？瞪萍加邢薰?br>