專利名稱：用于膜分析的配有參照顯示部分的試驗(yàn)裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用特異結(jié)合反應(yīng)的用于膜分析的試驗(yàn)裝置。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，基于特異結(jié)合反應(yīng)檢測(cè)原理的試驗(yàn)裝置實(shí)際不需要使用者進(jìn)行技能性且耗時(shí)的程序，已越來(lái)越多地用于不同領(lǐng)域的試驗(yàn)，主要涉及臨床診斷、環(huán)境分析和食品衛(wèi)生控制。有多種類型試驗(yàn)裝置基于特異結(jié)合反應(yīng)的檢測(cè)原理。其中用于膜分析的側(cè)流型和流通型試驗(yàn)裝置已廣泛使用。在一種結(jié)構(gòu)中，常用的側(cè)流型試驗(yàn)裝置為條狀，并且包括多孔膜載體，液體可通過(guò)毛細(xì)管作用在載體內(nèi)轉(zhuǎn)移。將上面已固定能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的物質(zhì)(捕捉試劑)的檢測(cè)顯示部分提供到此膜載體的一部分上。另外，以能夠通過(guò)毛細(xì)管作用在膜載體內(nèi)轉(zhuǎn)移的方式，在條的膜載體上游提供能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的物質(zhì)，此物質(zhì)已用含酶(如過(guò)氧化物酶)或著色顆粒(如金膠體顆粒)的標(biāo)記物質(zhì)(標(biāo)記試劑)標(biāo)記。例如，在特異結(jié)合反應(yīng)為其中抗原為待測(cè)物質(zhì)的抗原-抗體反應(yīng)時(shí)，能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的抗體用作捕捉試劑，并且能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的標(biāo)記抗體用作標(biāo)記試劑。在此情況下，當(dāng)液體樣品被提供到其中已提供標(biāo)記試劑的條上游的部位時(shí)，液體樣品開(kāi)始與標(biāo)記試劑接觸，使標(biāo)記試劑溶解或分散。如果待測(cè)物質(zhì)存在于液體樣品，已溶解或分散的標(biāo)記試劑結(jié)合到此物質(zhì)，以便形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體?！皹?biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體被進(jìn)一步轉(zhuǎn)移到條下游，達(dá)到檢測(cè)顯示部分。在檢測(cè)顯示部分，“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體被檢測(cè)顯示部分中的捕捉試劑捕捉，以便形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)-捕捉試劑”夾心復(fù)合體。然后， 可目視觀察在檢測(cè)顯示部分中組成這種夾心復(fù)合體的標(biāo)記試劑的標(biāo)記物質(zhì)。為了確定待測(cè)物質(zhì)的存在與否，可通過(guò)任意方式進(jìn)行檢測(cè)，如顯色(參見(jiàn)專利文獻(xiàn)1至4)。在一種結(jié)構(gòu)中，常用的流通型試驗(yàn)裝置包括液體可通過(guò)的多孔膜載體。將上面已固定能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的物質(zhì)(捕捉試劑)的檢測(cè)顯示部分提供到此膜載體上表面的一部分，并將吸水工具提供到膜載體的下表面上。例如，在特異結(jié)合反應(yīng)為其中抗原為待測(cè)物質(zhì)的抗原-抗體反應(yīng)時(shí)，用作能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的捕捉試劑的抗體已固定到膜載體的上表面的一部分上。在此情況下，在液體樣品被提供到膜載體的上表面時(shí)，液體樣品通過(guò)膜載體，以便由吸收工具吸收。如果待測(cè)物質(zhì)存在于樣品中，待測(cè)物質(zhì)就會(huì)被提供到膜載體上表面的檢測(cè)顯示部分中固定的捕捉試劑捕捉，以便在檢測(cè)顯示部分中形成“待測(cè)物質(zhì)-捕捉試劑”復(fù)合體。能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的抗體已用含酶(如過(guò)氧化物酶)或著色顆粒(如金屬膠體顆粒)的標(biāo)記物質(zhì)(標(biāo)記試劑)標(biāo)記，隨后被提供到膜載體的上表面。 因此，使抗體能結(jié)合到已在檢測(cè)顯示部分捕捉的待測(cè)物質(zhì)。因此，在檢測(cè)顯示部分形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)-捕捉試劑”復(fù)合體。然后，可目視觀察在檢測(cè)顯示部分中組成這種夾心復(fù)合體的標(biāo)記試劑的標(biāo)記物質(zhì)。為了測(cè)定待測(cè)物質(zhì)的存在與否，可通過(guò)任意方式進(jìn)行檢測(cè)， 如顯色(參見(jiàn)專利文獻(xiàn)5至7)。可將參照顯示部分提供到以上試驗(yàn)裝置，所述參照顯示部分對(duì)操作者顯示指示合理試驗(yàn)完成的參照試驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)樣品中不存在待測(cè)物質(zhì)時(shí)，此參照顯示部分指示樣品和標(biāo)記試劑通過(guò)膜載體，即使在檢測(cè)顯示部分中檢測(cè)不到標(biāo)記物質(zhì)。例如，在檢測(cè)顯示部分中檢測(cè)不到待測(cè)物質(zhì)的情況下，如果能夠在參照顯示部分中證明樣品和標(biāo)記試劑通過(guò)膜載體， 就證明合理試驗(yàn)完成。另一方面，如果在參照顯示部分中不能證明樣品和標(biāo)記試劑通過(guò)膜載體或條，就可認(rèn)為由于某些原因?qū)е屡c樣品或標(biāo)記試劑相關(guān)的失效。這表明不合理試驗(yàn)完成。在此情況下，可認(rèn)為所得試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效。因此，要重新試驗(yàn)樣品。在很多情況下，已使用一種試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置包括允許對(duì)標(biāo)記試劑的抗原-抗體反應(yīng)的參照顯示部分。例如，在膜載體的參照顯示部分中固定的與待測(cè)物質(zhì)相同的物質(zhì)或與待測(cè)物質(zhì)相同的對(duì)標(biāo)記試劑具有免疫特異反應(yīng)性的物質(zhì)(參見(jiàn)專利文獻(xiàn)8)。然而，使用抗原-抗體反應(yīng)的參照試驗(yàn)可能受樣品中所含抗原的量、外來(lái)物質(zhì)類型、PH和其他因素影響。這導(dǎo)致在某些情況下在參照顯示部分中差的顯示靈敏性和不清晰顯示。因此， 期待具有顯示改善的穩(wěn)定性的參照顯示部分的試驗(yàn)裝置。有發(fā)明試驗(yàn)裝置，其中利用對(duì)標(biāo)記試劑為抗原-抗體反應(yīng)以外的反應(yīng)，在參照顯示部分中使用成色劑或指示劑。例如，提供具有參照顯示部分的側(cè)流型試驗(yàn)裝置，其中參照顯示部分經(jīng)構(gòu)造，以便通過(guò)使濾紙能吸收成色劑并使該濾紙干燥指示反應(yīng)完成，成色劑包括溴甲酚綠、2，5-二硝基苯酚或溴酚藍(lán)(參見(jiàn)專利文獻(xiàn)9)。在此情況下，在用水濕潤(rùn)成色劑時(shí)發(fā)生顯色，指示反應(yīng)完成。然而，在此方法的一種情況下，根據(jù)樣品的PH，不發(fā)生成色劑的正常顯色。在另一種情況下，即使發(fā)生正常顯色，在樣品通過(guò)參照顯示部分時(shí)，成色劑也會(huì)隨液體樣品流出。因此，不能穩(wěn)定進(jìn)行參照試驗(yàn)。另外，有一種側(cè)流型試驗(yàn)裝置，其中進(jìn)行參照試驗(yàn)，以便通過(guò)使濾紙能直接吸收用于染色的作為指示劑的染料指示反應(yīng)完成，染料包括苯并紅紫4B或剛果紅(參見(jiàn)專利文獻(xiàn)10)。然而，在此方法中，濾紙用于保持指示劑，因此，有必要使濾紙結(jié)合到試驗(yàn)裝置中。因此，增加試驗(yàn)裝置元件部分?jǐn)?shù)，得到復(fù)雜組合體。另外，鑒于專利文獻(xiàn)9和10中公開(kāi)的發(fā)明難點(diǎn)進(jìn)行了一個(gè)發(fā)明。該發(fā)明涉及一種側(cè)流型試驗(yàn)裝置，其中進(jìn)行參照試驗(yàn)，以便通過(guò)使膜載體能吸收指示劑并使該膜載體干燥指示反應(yīng)完成，指示劑包括在含酸低級(jí)醇溶液中溶解的酸性染料(包含至少一種曙紅B、曙紅Y、 焰紅染料B和溴酚藍(lán))(參見(jiàn)專利文獻(xiàn)11)。然而，在使用成色劑或指示劑的以上參照試驗(yàn)情況下，在液體樣品以合理方式通過(guò)膜載體時(shí)可證明反應(yīng)完成。然而，標(biāo)記試劑以合理方式通過(guò)膜載體不能被證明。發(fā)明公開(kāi)發(fā)明解決問(wèn)題由標(biāo)記抗體引起的抗原-抗體反應(yīng)用于包括特異結(jié)合反應(yīng)的膜分析的很多常規(guī)試驗(yàn)裝置的參照顯示部分?？乖?抗體反應(yīng)可能受樣品中所含抗原的量、外來(lái)物質(zhì)類型、PH 和其他因素影響。這導(dǎo)致在某些情況下在參照顯示部分中差的顯示靈敏性和不清晰顯示。 另外，在上面使用成色劑或指示劑的參照顯示部分不能表明標(biāo)記抗體以合理方式通過(guò)膜載體。本發(fā)明鑒于常規(guī)問(wèn)題產(chǎn)生。本發(fā)明的目的是提供一種具有參照顯示部分的試驗(yàn)裝置， 所述參照顯示部分以改善的精確度和穩(wěn)定性快速并且清晰地顯示合理試驗(yàn)完成。問(wèn)題解決方法由于對(duì)達(dá)到以上目的方法的深入研究，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，在用于包括特異結(jié)合反應(yīng)的膜分析的參照顯示部分使用陽(yáng)離子物質(zhì)允許快速和清晰顯示參照試驗(yàn)結(jié)果，從而以改善的穩(wěn)定性進(jìn)行參照試驗(yàn)。這使本發(fā)明得以完成。以下具體描述本發(fā)明。[1] 一種用于膜分析的試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置利用待檢物質(zhì)與固定在膜載體上的捕捉試劑和用標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記的試劑的特異結(jié)合反應(yīng)，所述裝置包括用于指示合理試驗(yàn)完成的在上面已固定用于捕捉標(biāo)記試劑的陽(yáng)離子聚合物的參照顯示部分。[2] [1]的試驗(yàn)裝置，其中所述參照顯示部分構(gòu)造成使膜載體能吸收陽(yáng)離子聚合物，并使膜干燥。[3][1]或[2]的試驗(yàn)裝置，其中所述特異結(jié)合反應(yīng)為抗原-抗體反應(yīng)。[4] [1]至[3]中任一項(xiàng)的試驗(yàn)裝置，其中所述陽(yáng)離子聚合物為聚合物化合物，其在主鏈或側(cè)鏈上具有氨基或亞氨基，具有0. 4meq/g至21meq/g的陽(yáng)離子電荷密度和300至 5, 000, 000的平均分子量。[5] [1]至W]中任一項(xiàng)的試驗(yàn)裝置，其中所述陽(yáng)離子聚合物為聚乙烯亞胺、聚烯丙基胺或其衍生物。[6] [1]至[5]中任一項(xiàng)的試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置為側(cè)流型試驗(yàn)裝置。[7] [6]的試驗(yàn)裝置，其中所述指示合理試驗(yàn)完成的參照顯示部分構(gòu)造成位于在上面已固定捕捉試劑的檢測(cè)顯示部分的下游。[8] [1]至[5]中任一項(xiàng)的試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置為流通型試驗(yàn)裝置。[9] [8]的試驗(yàn)裝置，其中所述指示合理試驗(yàn)完成的參照顯示部分構(gòu)造成在平面上提供，上面已固定捕捉試劑的檢測(cè)顯示部分位于該平面上。[10] 一種用于膜分析的證明合理試驗(yàn)完成的方法，所述方法利用待檢物質(zhì)與固定在膜載體上的捕捉試劑和用標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記的試劑的特異結(jié)合反應(yīng)，其中通過(guò)使標(biāo)記試劑結(jié)合到在參照顯示部分中固定的陽(yáng)離子聚合物，在膜上參照顯示部分檢測(cè)標(biāo)記試劑標(biāo)記時(shí)可證明合理試驗(yàn)完成。[11] [10]的方法，其中所述特異結(jié)合反應(yīng)為抗原-抗體反應(yīng)。[12] [10]或[11]的方法，其中所述陽(yáng)離子聚合物為聚合物化合物，其在主鏈或側(cè)鏈上具有氨基或亞氨基，具有0. 4meq/g至21meq/g的陽(yáng)離子電荷密度和300至5，000, 000 的平均分子量。[13] [10]至[12]中任一項(xiàng)的方法，其中所述陽(yáng)離子聚合物為聚乙烯亞胺、聚烯丙基胺或其衍生物。本說(shuō)明書(shū)包括日本專利申請(qǐng)?zhí)?008-214226的說(shuō)明書(shū)和/或附圖中公開(kāi)的部分或全部?jī)?nèi)容，所述申請(qǐng)為本申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)文件。發(fā)明效果根據(jù)本發(fā)明，參照試驗(yàn)結(jié)果可更快更清晰地顯示，基本不受樣品中所含抗原的量、 外來(lái)物質(zhì)類型、PH和其他因素影響。因此，可提供一種試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置包括與常規(guī)方法的情況比較具有改善精確性和穩(wěn)定性的參照顯示部分。另外，利用廉價(jià)的聚乙烯亞胺或聚烯丙基胺作為陽(yáng)離子物質(zhì)，可提供一種易制造試驗(yàn)裝置，所述裝置包括比常規(guī)方法的情況更快更清晰顯示結(jié)果的參照顯示部分。附圖簡(jiǎn)述

圖1顯示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的側(cè)流型試劑盒的頂視圖和橫截面視圖。圖2顯示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的流通型試劑盒(1型)的頂視圖和橫截面視圖。圖3顯示本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的流通型試劑盒O型)的頂視圖和橫截面視圖。參考數(shù)字說(shuō)明1 背片2 膜載體3 經(jīng)浸漬元件4 樣品提供元件5:吸水元件6 檢測(cè)顯示部分7 參照顯示部分8 塑料皮氏培養(yǎng)皿9 吸水墊10 膜載體11 檢測(cè)顯示部分12 參照顯示部分a =A型檢測(cè)顯示部分b =B型檢測(cè)顯示部分C:參照顯示部分發(fā)明最佳實(shí)施方式以下詳細(xì)描述本發(fā)明。本發(fā)明涉及用于膜分析的試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置基于與待測(cè)物質(zhì)的特異結(jié)合反應(yīng)的檢測(cè)原理，其中陽(yáng)離子物質(zhì)用于作為膜載體的膜上定位的參照顯示部分。試驗(yàn)裝置包含能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的捕捉試劑和能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的用標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記的標(biāo)記試劑。待測(cè)物質(zhì)與在試驗(yàn)裝置的檢測(cè)顯示部分提供的捕捉試劑和標(biāo)記試劑形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)-捕捉試劑”夾心復(fù)合體。另外，試驗(yàn)裝置提供有對(duì)操作者顯示合理試驗(yàn)完成的參照顯示部分。通過(guò)觀察參照顯示部分，操作者可證明合理試驗(yàn)執(zhí)行和完成。可將參照顯示部分稱為“反應(yīng)完成顯示部分”或“證實(shí)部分”。在本發(fā)明中使用的術(shù)語(yǔ)“特異結(jié)合” 表示兩種物質(zhì)之間的選擇反應(yīng)性。例如，該術(shù)語(yǔ)表示特異免疫反應(yīng)，如抗原-抗體反應(yīng)，特異反應(yīng)如受體及其配體之間的反應(yīng)，或特異結(jié)合。此試驗(yàn)裝置的實(shí)例包括流通型試驗(yàn)裝置和側(cè)流型試驗(yàn)裝置。在流通型試驗(yàn)裝置中，分析物穿過(guò)上述膜。在側(cè)流型試驗(yàn)裝置中，分析物展開(kāi)，并沿膜轉(zhuǎn)移。術(shù)語(yǔ)“膜分析”是指以下分析其中在膜類型載體上進(jìn)行至少一個(gè)反應(yīng)步驟，使得以上特異結(jié)合在載體上進(jìn)行。在本發(fā)明中待檢測(cè)的物質(zhì)的實(shí)例包括但不限于病毒，如流感病毒、腺病毒、RS病毒、撤￥、冊(cè)￥、!1(^、!11￥工8￥、諾如病毒(norovirus)、輪狀病毒和細(xì)小病毒或其成分或抗體； 細(xì)菌，如大腸埃希氏桿菌、沙門氏菌、葡萄球菌、彎曲桿菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、副溶血弧菌、沙眼衣原體、溶血性鏈球菌、釀膿鏈球菌、百日咳桿菌、幽門螺桿菌、鉤端螺旋體、梅毒密螺旋體、 龔地弓形蟲(chóng)、包柔氏螺旋體、炭疽和MRSA或其成分或抗體；一些物質(zhì)，如支原體脂、人轉(zhuǎn)鐵蛋白、人白蛋白、人免疫球蛋白、微球蛋白、CRP、肌鈣蛋白、β -葡聚糖和RF或其成分或抗體；肽激素，如人絨毛膜促性腺激素或其抗體；類固醇，如類固醇激素或其抗體；生理活性胺，如腎上腺素和嗎啡或其抗體；維生素，如維生素B或其抗體；前列腺素或其抗體；抗生素，如四環(huán)素或其抗體；細(xì)菌等產(chǎn)生的毒素或其抗體；多種腫瘤標(biāo)志物或其抗體；農(nóng)用化學(xué)品或其抗體；以及多核苷酸或寡核苷酸序列(與病原微生物衍生的核酸序列互補(bǔ))。術(shù)語(yǔ)“捕捉試劑”是指固定在膜上以結(jié)合到任何以上待測(cè)物質(zhì)的試劑。此試劑用于捕捉待測(cè)物質(zhì)。如果待測(cè)物質(zhì)為抗原，可用抗該抗原的抗體作為捕捉試劑。如果待測(cè)物質(zhì)為抗體，可用抗體結(jié)合的抗原作為捕捉試劑。另外，在使用其中存在配體-受體關(guān)系的物質(zhì)時(shí)，其中任何一個(gè)均可為待測(cè)物質(zhì)，而另一個(gè)可以為捕捉試劑。另外，如果待測(cè)物質(zhì)為核酸，則可用具有與該核酸序列互補(bǔ)并因此可與該核酸雜交的序列的核酸作為捕捉試劑。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“標(biāo)記試劑”是指通過(guò)使足夠標(biāo)記物質(zhì)結(jié)合到能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的物質(zhì)得到的綴合物。如果待測(cè)物質(zhì)為抗原，可用抗該抗原的抗體作為能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的物質(zhì)。如果待測(cè)物質(zhì)為抗體，可用該抗體結(jié)合的抗原作為能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的物質(zhì)。在使用其中存在配體-受體關(guān)系的物質(zhì)時(shí)，其中任何一個(gè)均可為待測(cè)物質(zhì)，而另一個(gè)可以為能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的物質(zhì)。另外，如果待測(cè)物質(zhì)為核酸，則可用具有與該核酸序列互補(bǔ)并因此可與該核酸雜交的序列的核酸作為能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的物質(zhì)?？墒褂萌魏我话阌糜谖镔|(zhì)標(biāo)記的標(biāo)記物質(zhì)。其實(shí)例包括金屬膠體顆粒，如金膠體顆粒；非金屬膠體顆粒，如硒膠體顆粒；樹(shù)脂物質(zhì)的顆粒，如有色膠乳顆粒；不溶性顆粒， 如染料膠體顆粒和有色脂質(zhì)體；催化顯色反應(yīng)的酶，如堿性磷酸酶和過(guò)氧化物酶；熒光染料；和放射性同位素。用于本發(fā)明的標(biāo)記物質(zhì)一般為市售產(chǎn)品。本發(fā)明檢測(cè)裝置的重要特征是陽(yáng)離子物質(zhì)用于參照顯示部分。通過(guò)使陽(yáng)離子物質(zhì)固定于膜載體上，可提供參照顯示部分。在此，通過(guò)使膜載體能吸收陽(yáng)離子物質(zhì)然后干燥， 可進(jìn)行陽(yáng)離子物質(zhì)在膜載體上的固定。假定陽(yáng)離子物質(zhì)保持強(qiáng)正電荷，以使到達(dá)其附近的兩性物(如蛋白質(zhì))帶負(fù)電荷，隨后，其通過(guò)負(fù)電荷和陽(yáng)離子物質(zhì)本身的正電荷之間的電作用捕捉該蛋白質(zhì)。這可能是因?yàn)閺?qiáng)陽(yáng)離子物質(zhì)附近的PH總是為堿性，這最終導(dǎo)致到達(dá)陽(yáng)離子物質(zhì)附近的兩性物(如蛋白質(zhì))帶負(fù)電荷。在本發(fā)明中使用的陽(yáng)離子物質(zhì)為強(qiáng)陽(yáng)離子性，達(dá)到能夠使到達(dá)其附近的兩性物帶負(fù)電荷的程度。與常規(guī)抗原-抗體反應(yīng)引起的標(biāo)記試劑結(jié)合不同，陽(yáng)離子物質(zhì)就結(jié)合方面而言沒(méi)有選擇性(即，特異性)。陽(yáng)離子物質(zhì)可吸收任何陰離子物質(zhì)或在堿性條件下帶負(fù)電荷的任何兩性物。即，對(duì)于其中陽(yáng)離子物質(zhì)用于參照顯示部分的本發(fā)明的裝置，能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的物質(zhì)，其能結(jié)合到標(biāo)記物質(zhì)，為陰
7離子物質(zhì)或在堿性條件下帶負(fù)電荷的兩性物。其實(shí)例為蛋白質(zhì)，如抗體。然而，有一個(gè)問(wèn)題是，結(jié)合標(biāo)記試劑可能受結(jié)合樣品中外來(lái)物質(zhì)抑制。通過(guò)施加足量陽(yáng)離子物質(zhì)，可很容易解決這一問(wèn)題。這是本發(fā)明的一個(gè)很重要的特征。通常，過(guò)量抗原、抗體等施加到膜載體傾向于影響結(jié)合體積或結(jié)合速率方面的特性。因此，待施加的抗體的量不能顯著增加。這可能是因?yàn)榭乖蚩贵w分子的表位或表位識(shí)別部位被不同抗原或抗體分子屏蔽。本發(fā)明利用電作用，因此，通過(guò)簡(jiǎn)單增加或減少待固定的陽(yáng)離子物質(zhì)的量，可控制結(jié)合體積。陽(yáng)離子聚合物、陽(yáng)離子表面活性劑等可用作待施加到參照顯示部分的陽(yáng)離子物質(zhì)。例如，待使用的陽(yáng)離子聚合物為聚合物化合物，其在主鏈或側(cè)鏈上具有氨基或亞氨基，具有0. 4meq/g至21meq/ g(優(yōu)選1. Omeq/g至21meq/g,更優(yōu)選4. Omeq/g至21meq/g)的陽(yáng)離子電荷密度，和300至 5，000, 000的平均分子量。此陽(yáng)離子聚合物的實(shí)例包括聚乙烯亞胺、聚烯丙基胺和聚乙烯基胺。聚乙烯亞胺的實(shí)例包括線形PEI和含伯胺、仲胺或叔胺的支化聚乙烯亞胺，并且可使用它們中的任何聚乙烯亞胺。另外，聚乙烯亞胺的分子量不受限制。也可包括經(jīng)過(guò)化學(xué)改性 (例如脫酰)的聚乙烯亞胺。另外，聚烯丙基胺的實(shí)例包括聚烯丙基胺衍生物，如聚(烯丙基雙胍-co-烯丙基胺)和聚(烯丙基-N-氨基甲?；一?co-烯丙基胺)。陽(yáng)離子表面活性劑的實(shí)例包括苯扎氯銨和十四烷基溴化三甲基銨?？墒褂靡陨衔镔|(zhì)的混合物。在以上實(shí)例中，就成本、容易生產(chǎn)和快速和清晰反應(yīng)性而言，聚乙烯亞胺或聚烯丙基胺合乎需要。 待固定的以上陽(yáng)離子物質(zhì)的量不受限制。然而，物質(zhì)以0.1%至10% (w/v)濃度制備。然后，將0. 1 μ 1至10 μ 1物質(zhì)加到側(cè)流型或流通型試驗(yàn)裝置的膜，隨后固定。在一種供選方法中，通過(guò)在部分試驗(yàn)裝置的膜上布置由化學(xué)改性帶正電荷的尼龍膜，使得它們相互重疊， 可給予此試驗(yàn)裝置參照顯示功能。以下描述本發(fā)明的試驗(yàn)裝置的具體實(shí)施方案。本發(fā)明的試驗(yàn)裝置可以為側(cè)流型裝置或流通型裝置。側(cè)流型試驗(yàn)裝置的結(jié)構(gòu)的具體實(shí)例顯示于圖1中。圖1所示試驗(yàn)裝置僅僅為實(shí)例， 因此，本發(fā)明的試驗(yàn)裝置就結(jié)構(gòu)或尺寸而言不限于圖1所示結(jié)構(gòu)。在圖1中，數(shù)字參數(shù)1、 2、3、4、5、6和7分別表示背片、膜載體、經(jīng)浸漬元件，樣品提供元件、吸水元件、檢測(cè)顯示部分和參照顯示部分。背片為由塑料等制成的片，并用于保持試驗(yàn)裝置結(jié)構(gòu)。膜載體2由帶狀硝化纖維素膜(具有5mm寬度和30mm長(zhǎng)度)組成。捕捉試劑固定在離開(kāi)膜載體2末端 7. 5mm的部位，層析展開(kāi)開(kāi)始側(cè)上(圖1中膜載體2的左端)，以便形成分析物檢測(cè)顯示部分6。可用包括物理吸附、化學(xué)結(jié)合等的已知方法作為在膜載體2上固定捕捉試劑的方法。 捕捉試劑以線形固定在膜載體2上，以便形成檢測(cè)顯示部分6。然而，也可以任何形式固定， 如圓形或方形。陽(yáng)離子物質(zhì)固定在離開(kāi)膜載體2上檢測(cè)顯示部分6的4. Omm的部位，以便形成分析物參照顯示部分7。與檢測(cè)顯示部分6的情況一樣，對(duì)于參照顯示部分7，可用包括物理吸附、化學(xué)結(jié)合等的已知方法作為在膜載體2上固定陽(yáng)離子物質(zhì)的方法。陽(yáng)離子物質(zhì)以線形固定在膜載體2上，以便形成參照顯示部分7。然而，也可以任何形式固定，如圓形或方形。如圖1的實(shí)例中所示，合乎需要地在上面已固定捕捉試劑的檢測(cè)顯示部分的下游形成參照顯示部分。在本發(fā)明的側(cè)流型試驗(yàn)裝置中，溶液流從樣品提供元件開(kāi)始，并移向吸水元件。在本文中，術(shù)語(yǔ)“上游”和“下游”根據(jù)此流的方向定義。硝化纖維素膜為膜載體2 的實(shí)例所描述。然而，可使用任何膜，只要其允許層析展開(kāi)試樣中所含的分析物，并且上述捕捉試劑和陽(yáng)離子物質(zhì)能夠固定在上面?？墒褂玫哪さ膶?shí)例包括其他纖維素膜、尼龍膜和玻璃纖維膜。經(jīng)浸漬元件3由用標(biāo)記試劑浸漬的元件組成。包含合成纖維的5mmX8mm大小的帶狀非織造織物用于經(jīng)浸漬元件3。然而，本發(fā)明不限于此。例如，也可使用纖維素織物(濾紙、硝化纖維素膜等)和含玻璃纖維、聚乙烯、聚丙烯等的多孔塑料織物。標(biāo)記試劑用標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記，并特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)。標(biāo)記物質(zhì)的實(shí)例包括但不限于色標(biāo)記物質(zhì)、酶標(biāo)記物質(zhì)和熒光標(biāo)記物質(zhì)。其中，通過(guò)視覺(jué)觀察檢測(cè)顯示部分6的顏色變化，就快速和方便測(cè)定而言，優(yōu)選使用色標(biāo)記物質(zhì)。除了金屬膠體(如金膠體或鉬膠體)外，色標(biāo)記物質(zhì)的實(shí)例還包括用著色劑(如紅色或藍(lán)色著色劑)染色的膠乳，如合成膠乳(例如，聚苯乙烯膠乳) 或天然橡膠膠乳。其中聚苯乙烯膠乳為特別優(yōu)選。通過(guò)用標(biāo)記試劑的懸浮體浸漬由含合成纖維等的以上非織造織物組成的元件，并使經(jīng)浸漬元件干燥，可制備經(jīng)浸漬元件3。如圖1 所示，膜載體2結(jié)合到背片1的中部。經(jīng)浸漬元件3的下游末端部分位于膜載體2末端部分之上或之下，在上面層析展開(kāi)開(kāi)始側(cè)(以后稱為“上游側(cè)”(即，圖1中的左側(cè))，而其相反側(cè)被稱為“下游側(cè)”(即，圖1中的右側(cè)))上，從而使得經(jīng)浸漬元件3連接到膜載體2。然后，使經(jīng)浸漬元件3的上游部分結(jié)合到背片1。如此可制備本發(fā)明的側(cè)流型試驗(yàn)裝置?？蓪D1中所示條狀裝置稱為“層析條”。在用抗原-抗體反應(yīng)捕捉待測(cè)物質(zhì)時(shí)，有時(shí)將該裝置稱為“免疫層析裝置”或“免疫層析條”。另外，如有必要，也可使樣品提供元件4的下游部分位于經(jīng)浸漬元件3的上表面上，使得它們相互重疊，并使樣品提供元件4的上游部分結(jié)合到背片1。也可使吸水元件5 的上游部分位于膜載體2的下游部分的上表面上，使得它們相互重疊，并使吸水元件5的下游部分結(jié)合到背片1。可使用的樣品提供元件4的實(shí)例包括由多孔聚乙烯、多孔聚丙烯等的多孔合成纖維組成的非織造織物；纖維素紙，如濾紙和棉織物；織造織物；和非織造織物。吸水元件5為提供到樣品提供元件4的液體樣品流達(dá)到的元件。樣品提供元件吸收并保持流動(dòng)樣品，使得分析物樣品從上游快速流到下游。因此，吸水元件5可由能夠快速吸收和保持液體的材料組成。此類材料的實(shí)例包括纖維素、玻璃纖維和由多孔塑料(如聚乙烯或聚丙烯)組成的非織造織物。具體地講，纖維素為最適合材料。另外，圖1中所示側(cè)流型免疫層析裝置可具有這樣一種結(jié)構(gòu)，其中層壓材料片結(jié)合到用于保護(hù)的膜載體2的表面，或者，其中試樣入口的開(kāi)口和測(cè)定窗的開(kāi)口在用于結(jié)合到殼的樣品提供元件4、檢測(cè)顯示部分6和參照顯示部分7的合適塑料殼上產(chǎn)生。在液體樣品被提供到樣品提供元件4時(shí)，該液體樣品透過(guò)樣品提供元件4，并通過(guò)毛細(xì)管作用轉(zhuǎn)移到經(jīng)浸漬元件3，然后，液體樣品溶解經(jīng)浸漬元件3中的標(biāo)記試劑。如果待測(cè)物質(zhì)存在于液體樣品中，則該物質(zhì)結(jié)合到標(biāo)記試劑，以便形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體。此“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體進(jìn)一步通過(guò)毛細(xì)管作用滲透，并轉(zhuǎn)移到膜載體2，以通過(guò)檢測(cè)顯示部分6。此時(shí)，檢測(cè)顯示部分6中的捕捉試劑捕捉“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體，以便形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)-捕捉試劑”夾心復(fù)合體。另外，不與待測(cè)物質(zhì)反應(yīng)的一部分標(biāo)記試劑在檢測(cè)顯示部分6中不被捕捉，被進(jìn)一步轉(zhuǎn)移到位于模載體2下游的參照顯示部分7。轉(zhuǎn)移到參照顯示部分7的標(biāo)記試劑部分被參照顯示部分7上固定的陽(yáng)離子物質(zhì)捕捉。在此情況下，液體樣品中的一部分陰離子物質(zhì)可能已結(jié)合到參照顯示部分7上的陽(yáng)離子物質(zhì)。然而，這不太可能影響捕捉標(biāo)記試劑。隨后檢測(cè)由檢測(cè)顯示部分6捕捉的標(biāo)記試劑的部分和由參照顯示部分7捕捉的部分?？筛鶕?jù)相關(guān)標(biāo)記方法選擇檢測(cè)標(biāo)記試劑的最適合方法。例如，在用酶標(biāo)記的情況下，提供底物用于顯色。在用熒光物質(zhì)或放射性同
9位素標(biāo)記的情況下，使用專用裝置進(jìn)行測(cè)定。在用有色顆粒(如金膠體顆?；蚰z乳顆粒) 標(biāo)記的情況下，通過(guò)視覺(jué)觀察確認(rèn)聚集圖像。在參照顯示部分7檢測(cè)標(biāo)記試劑的標(biāo)記時(shí)，這表明提供到樣品提供元件4的液體樣品已通過(guò)檢測(cè)顯示部分6，并達(dá)到參照顯示部分7。因此，可以確定已正常進(jìn)行分析。如果待測(cè)物質(zhì)存在于液體樣品中，則在檢測(cè)顯示部分6和參照顯示部分7中檢測(cè)到標(biāo)記試劑的標(biāo)記。如果待測(cè)物質(zhì)不存在于液體樣品中，則只在參照顯示部分7中檢測(cè)到標(biāo)記試劑的標(biāo)記。另外，在側(cè)流型裝置的另一個(gè)實(shí)施方案中有一種方法，其中樣品提供元件4直接位于膜載體上，使得它們相互重疊，在其間沒(méi)有經(jīng)浸漬元件3，并且液體樣品和標(biāo)記試劑預(yù)先混合，將混合物提供到樣品提供元件4。在液體樣品和標(biāo)記試劑預(yù)先混合時(shí)，液體樣品中的待測(cè)物質(zhì)形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體。下一步，將液體樣品和標(biāo)記試劑的混合物提供到樣品提供元件4。因此，液體樣品和標(biāo)記試劑的混合物滲透樣品提供元件4，并通過(guò)毛細(xì)管作用轉(zhuǎn)移到膜載體。轉(zhuǎn)移到膜載體的液體樣品和標(biāo)記試劑的混合物通過(guò)檢測(cè)顯示部分6。此時(shí)，液體樣品和標(biāo)記試劑的混合物中“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”通過(guò)檢測(cè)顯示部分6 中的捕捉試劑捕捉，以便形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)-捕捉試劑，，夾心復(fù)合體。另外，未由捕捉試劑捕捉的一部分“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體和未反應(yīng)部分標(biāo)記試劑進(jìn)一步轉(zhuǎn)移到位于檢測(cè)顯示部分6下游的參照顯示部分7，并捕捉于參照顯示部分7中。對(duì)于流通型裝置的具體實(shí)施方案，將圖2中所示的結(jié)構(gòu)描述為實(shí)例。圖2所示試驗(yàn)裝置僅僅為實(shí)例，因此，本發(fā)明的試驗(yàn)裝置就結(jié)構(gòu)、尺寸等而言不限于圖2所示結(jié)構(gòu)。在圖2中，數(shù)字參數(shù)8、9、10、11和12分別表示35mm塑料皮氏培養(yǎng)皿、吸水墊、膜載體、檢測(cè)顯示部分和參照顯示部分。將切成20mmX20mm大小的片的硝化纖維素膜(孔徑3 μ m, Toyo Roshi Kaisha, Ltd.)用于液體可滲透膜載體10。在上面已固定捕捉試劑的分析物檢測(cè)顯示部分11提供于膜載體10上。可用包括物理吸附、化學(xué)結(jié)合等的已知方法作為在膜載體 10上固定捕捉試劑的方法。捕捉試劑以圓形固定在膜載體10上，以便形成檢測(cè)顯示部分 11。然而，也可以任何形式固定，如線形或方形。上面已固定陽(yáng)離子物質(zhì)的參照顯示部分12 以這樣一種方式提供到膜載體10上，使得參照顯示部分12和檢測(cè)顯示部分11以其間一定距離存在于相同平面上。與檢測(cè)顯示部分11的情況一樣，可用包括物理吸附、化學(xué)結(jié)合等的已知方法作為在膜載體10上固定參照顯示部分12的方法。陽(yáng)離子物質(zhì)以圓形固定在膜載體10上，以便形成參照顯示部分12。然而，也可以任何形式固定，如線形或方形。硝化纖維素膜用于膜載體10。然而，可使用任何膜，只要它允許層析展開(kāi)試樣中所含的分析物，并且上述捕捉試劑和陽(yáng)離子物質(zhì)能夠固定在上面?？墒褂玫哪さ膶?shí)例包括其他纖維素膜和含非織造織物、棉纖維、塑料纖維(如尼龍或聚氨酯纖維)或其混合纖維的膜。將具有足夠尺寸(大于20mmX20mm尺寸的硝化纖維素膜)的吸水墊9放入塑料皮氏培養(yǎng)皿8中。另外， 膜載體10置于吸水墊9上，以便可以觀察在上面已滴加和固定試劑的面(上表面)。液體樣品加到膜載體10的上表面。膜載體10的上表面稱為樣品滴注面。吸水墊9為流動(dòng)的提供的液體樣品達(dá)到的元件。它作為吸水工具吸收和保持流動(dòng)樣品。對(duì)于與膜載體下表面接觸的吸水工具，從脫脂棉或?yàn)V紙得到的纖維可形成吸水墊，并如圖2的實(shí)例中所示使用。然而，可使用任何工具，如含吸水聚合物的藥物或吸真空器，只要它能夠吸收或吸出通過(guò)膜載體的液體。另外，在圖2所示的實(shí)例中，使用塑料皮氏培養(yǎng)皿。然而，試驗(yàn)裝置的結(jié)構(gòu)不限于塑料皮氏培養(yǎng)皿?？墒褂萌魏谓Y(jié)構(gòu)，只要能夠通過(guò)例如使它們結(jié)合到塑料裝置中保持膜載體和吸水工具。在液體樣品提供到膜載體10的上表面(樣品滴注面)時(shí)，該液體樣品通過(guò)膜，并由吸水墊9吸收。此時(shí)，如果待測(cè)物質(zhì)存在于液體樣品中，待測(cè)物質(zhì)就會(huì)被檢測(cè)顯示部分11 中的捕捉試劑捕捉，以便形成“待測(cè)物質(zhì)-捕捉試劑”復(fù)合體。下一步，能夠特異結(jié)合到待測(cè)物質(zhì)的用酶(如過(guò)氧化物酶)、熒光物質(zhì)、放射性同位素、著色顆粒(如金膠體顆粒或膠乳顆粒)等(標(biāo)記試劑)標(biāo)記的物質(zhì)提供到膜載體10的試劑滴注面，以使其能結(jié)合到已由檢測(cè)顯示部分11捕捉的待測(cè)物質(zhì)。因此，形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)-捕捉試劑”夾心復(fù)合體。 另外，一部分標(biāo)記試劑部分被參照顯示部分12中固定的陽(yáng)離子物質(zhì)捕捉。在此情況下，液體樣品中的一部分陰離子物質(zhì)可能已結(jié)合到參照顯示部分12中的陽(yáng)離子物質(zhì)。然而，這不太可能影響捕捉標(biāo)記試劑。隨后檢測(cè)由檢測(cè)顯示部分11捕捉的標(biāo)記試劑的部分和由參照顯示部分12捕捉的部分。可根據(jù)相關(guān)標(biāo)記方法選擇檢測(cè)標(biāo)記試劑的最適合方法。例如，在用酶標(biāo)記的情況下，提供底物用于顯色。在用熒光物質(zhì)或放射性同位素標(biāo)記的情況下，測(cè)定使用專用裝置。在用有色顆粒(如金膠體顆?；蚰z乳顆粒)標(biāo)記的情況下，通過(guò)視覺(jué)觀察確認(rèn)聚集圖像。如果待測(cè)物質(zhì)存在于液體樣品中，則在檢測(cè)顯示部分11和參照顯示部分12 兩者中均檢測(cè)到標(biāo)記試劑的標(biāo)記。如果待測(cè)物質(zhì)不存在于液體樣品中，則只在參照顯示部分12中檢測(cè)到標(biāo)記試劑的標(biāo)記。另外，在一種方法中使用流通型裝置的另一種結(jié)構(gòu)，其中液體樣品和標(biāo)記試劑預(yù)先混合，然后，混合物被提供到膜載體的樣品滴注面。在液體樣品和標(biāo)記試劑預(yù)先混合時(shí)， 液體樣品中的待測(cè)物質(zhì)形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體。下一步，將液體樣品和標(biāo)記試劑的混合物提供到膜載體的樣品滴注面。液體樣品和標(biāo)記試劑的混合物通過(guò)膜載體，并由吸水工具吸收。此時(shí)，液體樣品中的“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體由檢測(cè)顯示部分中的捕捉試劑捕捉。因此，形成“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)-捕捉試劑”夾心復(fù)合體。另外，一部分“標(biāo)記試劑-待測(cè)物質(zhì)”復(fù)合體和未反應(yīng)部分的標(biāo)記試劑捕捉于參照顯示部分。如果在參照顯示部分中檢測(cè)到標(biāo)記試劑的標(biāo)記，則表明提供到樣品滴注面的液體樣品已通過(guò)檢測(cè)顯示部分11和參照顯示部分12。因此，可以確定已正常進(jìn)行分析。由本發(fā)明的試驗(yàn)裝置檢測(cè)的液體樣品可選自以下實(shí)例臨床液體樣品，如尿、液狀糞便、血液、血清、上呼吸道涂片和吸出流體；環(huán)境得到的含水樣品；液體飲食，如飲用水； 和由微生物、固狀糞便、土壤、污泥、固體食物、環(huán)境成分等溶解或懸浮于液體得到的溶液和乳液及其上清液。
實(shí)施例下面參照以下實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明，雖然本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。實(shí)施例1 制造側(cè)流型試驗(yàn)裝置1.制備膠乳標(biāo)記試劑將具有0. 2 μ m平均粒徑的藍(lán)色聚苯乙烯膠乳顆粒(Ceradyne，Inc.)加入到預(yù)先用50mM MES緩沖液(pH 6.0)透析到0. 25% (w/v)最終濃度的抗腺病毒單克隆抗體溶液 (0.5mg/mL)。將生成物在37°C放置2小時(shí)，不時(shí)進(jìn)行攪拌。下一步，在4°C在5，000X g進(jìn)行離心15分鐘，以去除上清液。將補(bǔ)加0. 5% (w/v)BSA的三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH 7. 5)加到經(jīng)沉淀的膠乳顆粒，使得膠乳顆粒的體積調(diào)節(jié)到初始體積。使膠乳顆粒再次分散，并在4°C放置16小時(shí)。在4°C在5，OOOXg再次離心15分鐘，以去除上清液。使經(jīng)沉淀的膠乳顆粒在三羥甲基氨基甲烷緩沖液(PH 7. 5)中分散到0. 1% (w/v)最終濃度。如此得到膠乳標(biāo)記試劑。2.制備膠乳標(biāo)記試劑浸漬的元件將玻璃纖維濾紙(Whatman)切成5mmX IOmm大小的片。滴加以上1中制備的膠乳標(biāo)記試劑(5 μ L)，隨后在37°C干燥3小時(shí)。如此得到經(jīng)浸漬元件3。3.側(cè)流型試驗(yàn)裝置的組合體使用具有類似于圖1所示結(jié)構(gòu)的側(cè)流型試驗(yàn)裝置。用具有5mm(寬度)和30mm(長(zhǎng)度)大小的硝化纖維素膜片(Millipore)作為膜載體2。用正壓噴霧裝置(BioJet ；BioDot)將雜交瘤細(xì)胞系衍生的抗腺病毒單克隆抗體溶液(5. Omg/mL)(不同于以上1中所述的溶液)作為捕捉試劑施加到載體，以便形成離開(kāi)該載體1個(gè)長(zhǎng)軸端(指定為上游端，而其相反端稱為下游端)6mm的線。另外，將(w/v)聚乙烯亞胺P_70(Wako Pure Chemical hdustries，Ltd.)作為參照試劑施加到載體，以便在下游側(cè)形成離開(kāi)預(yù)先形成線4mm的線。隨后，將載體在37°C條件下干燥3小時(shí)。如此形成檢測(cè)顯示部分6和參照顯示部分7。下一步，使膜載體2以結(jié)合到與試劑施加面相反的面的方式結(jié)合到切成5毫米寬度的塑料背片I(BioDot)(在此情況下，背片1必須具有足夠剩余長(zhǎng)度，因?yàn)楸仨氃谀ぽd體 2的兩端單獨(dú)固定以上經(jīng)浸漬元件3和以下的吸水元件幻。隨后，經(jīng)浸漬元件3以經(jīng)浸漬元件3和膜載體2相互重疊Imm的方式結(jié)合到膜載體2上游側(cè)的背片1上。然后，以樣品提供元件4和經(jīng)浸漬元件3相互重疊9mm的方式，使作為樣品提供元件4的5mmX IOmm大小的濾紙片(Advantec Toyo Kaisha Ltd.)結(jié)合到背片。另外，以吸水元件5和膜載體相互重疊IOmm的方式，使作為吸水元件5的5mmX 30mm大小的厚濾紙(Whatman)結(jié)合到膜載體2下游側(cè)的背片1上。最后，將從兩端向外突出的背片的不需要部分切掉。如此得到圖 1中所示的側(cè)流型試驗(yàn)裝置。4.抗原檢測(cè)用含(w/v)Triton X-100和2% (w/v)鹽酸精氨酸的50mM三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH 8.0)作為展開(kāi)劑，并用腺病毒CF抗原(Denka Seiken Co.，Ltd.)作為分析物進(jìn)行模型試驗(yàn)。將腺病毒CF抗原用作為稀釋溶劑的展開(kāi)劑充分稀釋。如此制備液體樣品。將液體樣品(IOOyL)加到小試管中。將以上3中制備的側(cè)流型試驗(yàn)裝置插入試管，使得樣品提供元件4(在上游側(cè))向下放置。將試管豎直放在架中，并在室溫放置。另外，對(duì)于陰性對(duì)照，單獨(dú)用展開(kāi)劑(IOOyL)進(jìn)行類似試驗(yàn)。首先，使液體樣品透過(guò)樣品提供元件 4。隨后，使其與經(jīng)浸漬元件3中所含膠乳標(biāo)記的抗體混合，混合物通過(guò)毛細(xì)管作用透過(guò)膜載體2。使已透過(guò)的液體樣品和膠乳標(biāo)記抗體的混合物按次序通過(guò)檢測(cè)顯示部分6和參照顯示部分7，并最終由最接近下游端的吸水元件5吸收。如此完成反應(yīng)過(guò)程。在足以形成線信號(hào)的時(shí)間(在此實(shí)施例中為20分鐘)過(guò)去后，觀察在硝化纖維素膜上檢測(cè)顯示部分6和參照顯示部分7中出現(xiàn)的藍(lán)線的存在與否和線特征(如寬度和色調(diào))。因此，在其中已滲透液體樣品的試驗(yàn)裝置的檢測(cè)顯示部分6和參照顯示部分7中分別觀察到清晰的藍(lán)線。利用稀釋到1，000倍的含以上腺病毒CF抗原的溶液，可在檢測(cè)顯示部分6中證實(shí)陽(yáng)性信號(hào)。同時(shí)，在其中已只滲透展開(kāi)劑(用作陰性對(duì)照)的試驗(yàn)裝置的情況下，在參照顯示部分7中觀察到清晰的藍(lán)線，另一方面，在檢測(cè)顯示部分6中未顯示線。因此證明，由使膜載體吸收陽(yáng)離子物質(zhì)并使載體干燥形成的參照顯示部分也可顯示強(qiáng)色線，因此足夠作為參照顯示部分。在此，在實(shí)施例1中使用的試驗(yàn)裝置為利用抗原-抗體反應(yīng)的免疫層析條。可使此免疫層析條結(jié)合到塑料殼，所得產(chǎn)品可用作免疫層析裝置。實(shí)施例2 制造流通型試驗(yàn)裝置1.制備金膠體標(biāo)記試劑將預(yù)先用2mM硼酸鈉水溶液透析的抗A型或抗B型流感病毒NP單克隆抗體 (100yg/mL) (1體積)加到用碳酸鉀水溶液調(diào)節(jié)至pH 5. 5的金膠體溶液(BBI，粒徑:40nm ； 氯金酸濃度0.01% ( 八))(9體積)(最終濃度1(^8/1^)，隨后緩慢攪拌5分鐘。隨后向其中加入10% (w/v)BSA溶液(1體積)，隨后進(jìn)一步攪拌10分鐘。隨后，在4°C在14，OOOrpm 離心全部體積生成物30分鐘，以去除上清液。將(w/v)BSA和補(bǔ)加150mM氯化鈉的IOmM 三羥甲基氨基甲烷緩沖液(PH 8. 5)加到經(jīng)沉淀的金膠體顆粒，用于重新分散。稀釋分散體，使得在530nm的吸光度變?yōu)?. 0。最后，將以上述方式制備的等量金膠體標(biāo)記抗A型抗體和金膠體標(biāo)記抗B型抗體一起混合，以便得到金膠體標(biāo)記抗流感抗體。2.試劑施加到硝化纖維素膜使用具有類似于圖3所示結(jié)構(gòu)的流通型試驗(yàn)裝置。將硝化纖維素膜(孔徑3 μ m，Toyo Roshi Kaisha，Ltd.)切成20_X 20mm大小的片。用該片作為液體可滲透膜載體10。假定在此硝化纖維素膜中心畫(huà)出IOmmX IOmm大小的方塊，對(duì)應(yīng)于此方塊四個(gè)角的點(diǎn)從任意一個(gè)角開(kāi)始以順時(shí)針?lè)较蛴伞癮”、“b”、“c”和“d”表不?？笰型和抗B型流感病毒NP單克隆抗體，已分別從不同于以上1中所述抗體的雜交瘤細(xì)胞系得到，分別預(yù)先用IOmM磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)透析，以將濃度調(diào)節(jié)到:3mg/mL。將抗A型流感病毒NP單克隆抗體和抗B型流感病毒NP單克隆抗體分別以IyL 量滴加到硝化纖維素膜上的點(diǎn)“a”和“b”。因此形成A型檢測(cè)顯示部分“a”和B型檢測(cè)顯示部分“b”。隨后，將聚乙烯亞胺 P-70(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) (1 μ L) 滴加到點(diǎn)“c”，以便形成參照顯示部分“C”。不向余下的點(diǎn)“d”加抗體，將點(diǎn)“d”指定為空白，并作為標(biāo)記用于在試驗(yàn)完成后辨別點(diǎn)“a”、“b”和“C”的位置(或者，可用鉛筆等在點(diǎn) “d”標(biāo)上小記號(hào))。將上面已滴加試劑的硝化纖維素膜在37°C干燥3小時(shí)。3.流通型試驗(yàn)裝置的組合體將具有大于以上膜載體10尺寸(20mmX 20mm)的纖維素吸水墊9 (Vessel Inc.) 放入35mm直徑的塑料皮氏培養(yǎng)皿8中。另外，將膜載體10置于吸水墊9上，以便可觀察在上面已滴加試劑的面(上表面)。如此得到流通型免疫層析裝置。4.抗原檢測(cè)用含5% (w/v)BSA,5% (w/v) Triton X-100 和 2% (w/v)明膠的 IOmM磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)作為分析物稀釋劑。用已充分稀釋的A型流感病毒或B型流感病毒作為陽(yáng)性分析物。用以上分析物稀釋劑作為陰性分析物。將以上1中得到的金膠體標(biāo)記抗流感抗體與以1 4比用上述分析物稀釋劑稀釋的各分析物混合。將各生成物(ImL)滴加到以上3中得到的試驗(yàn)裝置的硝化纖維素膜上。 滴加緩慢地逐漸進(jìn)行，并在室溫放置膜載體10，直至在上面觀察不到液體。然后確定從金膠體得到的紅色點(diǎn)的存在與否。結(jié)果，A型流感病毒在A型檢測(cè)顯示部分“a”中在高至105pfu/mL檢測(cè)到，此部分對(duì)于B型流感病毒得到陰性結(jié)果。B型流感病毒在B型檢測(cè)顯示部分“b”中在高至l(fpfU/ mL檢測(cè)到，此部分對(duì)于A型流感病毒得到陰性結(jié)果。同時(shí)，在參照顯示部分“C”的情況下， 不考慮分析物類型或濃度，在任何情況下都形成強(qiáng)色斑點(diǎn)，因此，證明此部分足以作為參照顯示部分。實(shí)施例3 比較和檢驗(yàn)參照顯示試劑1.制備側(cè)流型試驗(yàn)裝置以實(shí)施例1中所述的方式，用以下7個(gè)類型試劑作為參照顯示部分所用的候選試劑制造側(cè)流型試驗(yàn)裝置。(1)3. Omg/mL兔抗小鼠免疫球蛋白抗體(Dako)常規(guī)方法(2) 1% (w/v)聚乙烯亞胺 P_70(Wako Pure Chemical Industries, Ltd.):陽(yáng)離子物質(zhì)(3)1% (w/v)聚烯丙基胺 HCl-IOS (Nitto Boseki Co.，Ltd.)陽(yáng)離子物質(zhì)(4) 1% (w/v)羧甲基纖維素(Wako Pure Chemical Industries,Ltd.)陰離子物質(zhì)(5) 1% (w/v)絲膠蛋白(Toyo Boseki Kabushiki Kaisha)陰離子物質(zhì)(6) 1% (w/v)聚乙二醇(Nacalai Tesque, Inc.)非離子物質(zhì)(7)1% (w/v)聚乙烯醇(Nacalai Tesque, Inc.)非離子物質(zhì)2.檢驗(yàn)方法如實(shí)施例1中那樣，用含(w/v) Triton X-100和2% (w/v)鹽酸精氨酸的50mM 三羥甲基氨基甲烷緩沖液(pH 8.0)作為展開(kāi)劑，用腺病毒CF抗原(Denka Seiken Co., Ltd.)作為分析物。用展開(kāi)劑作為稀釋溶劑充分稀釋腺病毒CF抗原。將稀釋100倍的分析物指定為強(qiáng)陽(yáng)性分析物。將稀釋500倍的分析物指定為弱陽(yáng)性分析物。如此制備液體樣品。按實(shí)施例1中所述的方式進(jìn)行試驗(yàn)。觀察到在各試驗(yàn)裝置的參照顯示部分7中出現(xiàn)的藍(lán)線的存在與否和線特征(如寬度和顏色)。3.結(jié)果和討論根據(jù)關(guān)于參照顯示部分7中線的形成、此線出現(xiàn)的時(shí)間和此線對(duì)檢測(cè)顯示部分6 中出現(xiàn)的線的影響的比較，檢驗(yàn)在相應(yīng)參照顯示部分7中已使用不同試劑的試驗(yàn)裝置(表 1)。作為在⑴的常規(guī)方法的情況下觀察的線與其他線(特別在⑵和⑶的情況下)比較的結(jié)果，陽(yáng)離子物質(zhì)得到的線顯示比(1)的常規(guī)方法情況下觀察到的更深且更清晰的色調(diào)。另外，線出現(xiàn)的時(shí)間短于(1)的情況。在涉及使用分別包含陰離子物質(zhì)或非離子物質(zhì)的參照試劑的其他情況下，不形成線，并且相關(guān)參照顯示部分7不合理起作用。在(5)中使用的絲膠蛋白為含陽(yáng)離子氨基酸殘基的蛋白質(zhì)。然而，該蛋白質(zhì)分子整體上帶負(fù)電荷。因此認(rèn)為絲膠蛋白在以上情況下不作為參照顯示試劑。另外，在使用任何以上參照顯示試劑時(shí)，證明對(duì)相應(yīng)檢測(cè)線沒(méi)有影響，與相關(guān)樣品中抗原濃度無(wú)關(guān)。這可能是因?yàn)閰⒄诊@示部分 7位于檢測(cè)顯示部分6下游。
[表1]
參照顯示試劑檢測(cè)線強(qiáng)度(強(qiáng)陽(yáng)性分析物)檢測(cè)線強(qiáng)度(弱陽(yáng)性分析物)參照線強(qiáng)度參照線出現(xiàn)的時(shí)間(3次檢測(cè)結(jié)果的平均值)參照線特征(1)++++++25 (秒)(2)+-H-+11 i"卜20細(xì)線，深色調(diào)(3)I I H++++15粗線，深色調(diào)(4)++++--(5)++++ x--(6)++++--(7)++++--陰性+:弱陽(yáng)性(可檢測(cè)為陽(yáng)性，即使具有淺色調(diào)，并缺乏線清晰度)++:陽(yáng)性(清晰陽(yáng)性)+++ 強(qiáng)陽(yáng)性(清晰陽(yáng)性，具有特別深的色調(diào))本文提到的所有公布、專利和專利申請(qǐng)均全文通過(guò)弓I用結(jié)合到本文中。
1權(quán)利要求
1.一種用于膜分析的試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置利用待檢物質(zhì)與固定在膜載體上的捕捉試劑和用標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記的試劑的特異結(jié)合反應(yīng)，所述試驗(yàn)裝置包括用于顯示合理試驗(yàn)完成的在上面已固定用于捕捉標(biāo)記試劑的陽(yáng)離子聚合物的參照顯示部分。
2.權(quán)利要求1的試驗(yàn)裝置，其中所述參照顯示部分構(gòu)造成使膜載體能吸收陽(yáng)離子聚合物，并使膜干燥。
3.權(quán)利要求1或2的試驗(yàn)裝置，其中所述特異結(jié)合反應(yīng)為抗原-抗體反應(yīng)。
4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的試驗(yàn)裝置，其中所述陽(yáng)離子聚合物為聚合物化合物，其在主鏈或側(cè)鏈上具有氨基或亞氨基，具有0. 4meq/g至21meq/g的陽(yáng)離子電荷密度和300至 5, 000, 000的平均分子量。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的試驗(yàn)裝置，其中所述陽(yáng)離子聚合物為聚乙烯亞胺、聚烯丙基胺或其衍生物。
6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置為側(cè)流型試驗(yàn)裝置。
7 權(quán)利要求6的試驗(yàn)裝置，其中所述指示合理試驗(yàn)完成的參照顯示部分構(gòu)造成位于在上面已固定捕捉試劑的檢測(cè)顯示部分的下游。
8.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置為流通型試驗(yàn)裝置。
9.權(quán)利要求8的試驗(yàn)裝置，其中所述指示合理試驗(yàn)完成的參照顯示部分構(gòu)造成在平面上提供，上面已固定捕捉試劑的檢測(cè)顯示部分位于所述平面上。
10.一種用于膜分析的證明合理試驗(yàn)完成的方法，所述方法利用待檢物質(zhì)與固定在膜載體上的捕捉試劑和用標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記的試劑的特異結(jié)合反應(yīng)，由此通過(guò)使標(biāo)記試劑能結(jié)合到在參照顯示部分固定的陽(yáng)離子聚合物，在膜上參照顯示部分檢測(cè)標(biāo)記試劑標(biāo)記時(shí)可證明合理試驗(yàn)完成。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述特異結(jié)合反應(yīng)為抗原-抗體反應(yīng)。
12.權(quán)利要求10或11的方法，其中所述陽(yáng)離子聚合物為聚合物化合物，其在主鏈或側(cè)鏈上具有氨基或亞氨基，具有0. 4meq/g至21meq/g的陽(yáng)離子電荷密度和300至5，000, 000 的平均分子量。
13.權(quán)利要求10至12中任一項(xiàng)的方法，其中所述陽(yáng)離子聚合物為聚乙烯亞胺、聚烯丙基胺或其衍生物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種具有參照顯示部分的試驗(yàn)裝置，所述參照顯示部分以改善的精確度和穩(wěn)定性快速并且清晰地顯示合理試驗(yàn)完成。這種試驗(yàn)裝置為用于膜分析的試驗(yàn)裝置，所述試驗(yàn)裝置利用待檢物質(zhì)與固定在膜載體上的捕捉試劑和用標(biāo)記物質(zhì)標(biāo)記的試劑的特異結(jié)合反應(yīng)，所述試驗(yàn)裝置包含用于顯示合理試驗(yàn)完成的在上面已固定用于捕捉標(biāo)記試劑的陽(yáng)離子聚合物的參照顯示部分。
文檔編號(hào)G01N33/543GK102197307SQ20098014276
公開(kāi)日2011年9月21日 申請(qǐng)日期2009年8月21日 優(yōu)先權(quán)日2008年8月22日
發(fā)明者前側(cè)恒男 申請(qǐng)人:電化生研株式會(huì)社