專利名稱：非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治龇捌湓噭┖械闹谱鞣椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于診斷分析技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
有關(guān)免疫分析法的具體操作方法以及商業(yè)化的試劑盒產(chǎn)品很多，試劑盒產(chǎn)品中待測樣品的流動一般是在親水性固相載體(吸水介質(zhì))中進(jìn)行，在吸水介質(zhì)的側(cè)向?qū)游龅倪^程中定性或定量地檢測待測物。吸水介質(zhì)通常由層析材料構(gòu)成，例如濾紙、硝酸纖維素膜、尼龍膜、無紡布等，吸水介質(zhì)與樣品中的流動相接觸作用，然而將流動相里的組份分離的同時也會吸收其中的部分組分，被吸收的組分中也包括待測的組分，因而導(dǎo)致定性檢測的靈敏度大大降低，同時，也導(dǎo)致容易出現(xiàn)陰性結(jié)果，需要二次檢測篩除陰性結(jié)果，無法一次性得到準(zhǔn)確的結(jié)果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一方面提供了一種非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治龇?，該分析法是在樣品的?cè)向?qū)游鲞^程中對樣品進(jìn)行分析，其特征在于所述側(cè)向?qū)游鲞^程的固相載體為非親水性固相載體，其由親水性固相載體經(jīng)封閉處理而成；所述分析法包括標(biāo)記步驟以及隨后的捕獲步驟，所述標(biāo)記步驟包括對所述樣品中的待測物進(jìn)行特異性標(biāo)記的步驟，在該步驟中待測物與第一標(biāo)記物結(jié)合形成復(fù)合物，同時樣品中混入已知物-第二標(biāo)記物復(fù)合物；所述捕獲步驟包括分別在不同的區(qū)域捕獲所述待測物-第一標(biāo)記物的復(fù)合物和已知物-第二標(biāo)記物的復(fù)合物的步驟，且捕獲的同時顯色。本發(fā)明另一方面提供了一種非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治鲈噭┖?，其特征在?該試劑盒包括一被固定在固態(tài)底板上的側(cè)向流動膜裝置，該裝置按樣品流動方向依次包括加樣區(qū)、標(biāo)記區(qū)、捕獲區(qū)、吸收區(qū)，所述的加樣區(qū)、標(biāo)記區(qū)、捕獲區(qū)的固相載體為非親水性固相載體，其由親水性固相載體經(jīng)封閉處理而成；所述的吸收區(qū)能夠吸引裝置中的樣品朝吸收區(qū)定向流動；所述的標(biāo)記區(qū)裝載了已知物-第二標(biāo)記物復(fù)合物、能與流經(jīng)的樣品中的待測物特異性結(jié)合的第一標(biāo)記物；所述第一標(biāo)記物的顯色基團(tuán)的顯色結(jié)果與所述第二標(biāo)記物的不同；所述的捕獲區(qū)的固相載體包括對照部分和測試部分；所述的對照部分包被固定了能夠特異性結(jié)合所述已知物-第二標(biāo)記物的復(fù)合物的試劑，且結(jié)合后顯色；所述的測試部分包被固定了能夠特異性結(jié)合所述待測物-第一標(biāo)記物的復(fù)合物的試劑，且結(jié)合后顯色。上述試劑盒在使用時，將樣品加到樣品區(qū)后，樣品在吸收區(qū)的吸引下流向標(biāo)記區(qū)， 在標(biāo)記區(qū)待測物與其標(biāo)記物相互結(jié)合，形成待測物-第一標(biāo)記物復(fù)合物，同時樣品中混入了標(biāo)記區(qū)已裝載的已知物-第二標(biāo)記物復(fù)合物；樣品進(jìn)入捕獲區(qū)后，在捕獲區(qū)中的不同區(qū)域已知物-第二標(biāo)記物復(fù)合物和待測物-第一標(biāo)記物復(fù)合物分別被捕獲，且顯示不同的顏色；多余的樣品被吸附帶吸收。在捕獲區(qū)讀取結(jié)果時，一方面對照部分與測試部分的顏色比較有助于確定測試部分的顏色變化，更重要的是可以觀察并篩去陰性結(jié)果，當(dāng)對照部分顯示預(yù)計的顏色時，測試部分的顏色就可以被認(rèn)為是有效的，是準(zhǔn)確的陽性結(jié)果；檢測快速、一步到位。上述技術(shù)方案的試劑盒中，加樣區(qū)、標(biāo)記區(qū)、捕獲區(qū)均采用經(jīng)封閉處理制得的非親水性固相載體，側(cè)向?qū)游龅倪^程中，樣品中的組分不會因被吸收而流失，大大提高了檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度。同時，發(fā)明人經(jīng)過大量的研究試驗發(fā)現(xiàn)，只有采用這種經(jīng)封閉處理獲得的非親水性固相載體，才能夠?qū)崿F(xiàn)上述的一步分析(獲得準(zhǔn)確結(jié)果)。優(yōu)選的，所述的封閉劑為動物血清或者表面活性劑的溶液。優(yōu)選的，所述的封閉劑為甲基化BSA溶液。優(yōu)選的，所述的親水性固相載體由無紡布材料組成。優(yōu)選的，所述的對照部分包被固定了能夠特異性結(jié)合所述已知物-第二標(biāo)記物的復(fù)合物中的標(biāo)記物部分的試劑；所述的測試部分包被固定了能夠特異性結(jié)合所述待測物-第一標(biāo)記物的復(fù)合物中的待測物部分的試劑。優(yōu)選的，所述的測試部分包被固定的試劑為能夠特異性結(jié)合所述待測物的抗體或抗體活性部分。優(yōu)選的，所述與已知物和待測物特異性結(jié)合的標(biāo)記物可以為有色微球、血紅細(xì)胞、 膠體金或含染料的脂質(zhì)體的形式。在本發(fā)明的一個具體實施方式
中，所述已知物的標(biāo)記物為有色微球，已知物為親和素或其衍生物；所述的對照部分包被固定的試劑為能夠特異性結(jié)合已知物的生物素或生物素衍生物。在本發(fā)明的一個具體實施方式
中，所述的待測物為絨毛膜促性腺激素(hCG)，所述捕獲區(qū)的測試部分包被固定了兔抗hCG。采用本發(fā)明的非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治龇椒捌湓噭┖校c現(xiàn)有技術(shù)相比， 檢測快速、一步到位，大大提高了檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度。


附圖1為本發(fā)明的非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治鲈噭┖械氖疽鈭D。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例來進(jìn)一步闡述非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治鲈噭┖小Ｈ鐖D1所示，非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治鲈噭┖械氖疽鈭D。該試劑盒包括一被固定在固態(tài)底板上的側(cè)向流動膜裝置，該裝置按樣品流動方向依次包括加樣區(qū)、標(biāo)記區(qū)、捕獲區(qū)、吸收區(qū)(所有區(qū)均固定在一整塊固態(tài)底板上)。各個區(qū)的具體制備如下1、加樣區(qū)的制備；加樣區(qū)采用了經(jīng)封閉處理的無紡布。將吸水性材料無紡布轉(zhuǎn)化成非吸水性介質(zhì)的具體步驟將lOmg/mL的甲基化BSA溶液刷在無紡布材料(布墊)的表面，室溫放置5分鐘后，放入-70°C凍干瓶中冷凍至少1小時。然后放入冷凍干燥機(jī)中冷凍過夜。將封閉處理好的布墊切割成IOmmX7. 5mm的長方形。至此，加樣區(qū)制備完成。2、標(biāo)記區(qū)的制備；對照部分標(biāo)記物的制備取0. 5mL藍(lán)色微球，按2. 5% (w/v)的濃度懸浮，然后用甘氨酸-鹽緩沖液(GBQ洗2次。微球GBS溶液超聲粉碎10分鐘后，微離心3分鐘。沉淀的微球用0. 5mL偶聯(lián)溶液重新懸浮，溶液超聲粉碎10分鐘后，室溫旋轉(zhuǎn)過夜。偶聯(lián)溶液是含0. 4mg/mL的鏈霉素和0. 2mg/mL的甲基化BSA的GBS溶液。微球溶液離心3分鐘，棄上清，沉淀用0. 5mL 10mg/mL的甲基化BSA重懸浮，室溫繼續(xù)垂直旋轉(zhuǎn)4小時，離心。棄上清，沉淀用微球儲存液洗3次，溶液是50mM Tris溶液，pH 8，含lmg/mL甲基化BSA。將微球用儲存液制成1 %的微球溶液。此溶液流經(jīng)捕獲區(qū)，與含生物素的對照部分反應(yīng)。測試部分標(biāo)記物的制備取0. 5mL紅色微球，用ImL甘氨酸-鹽緩沖液(GBS)洗2 次。微球GBS溶液超聲粉碎10分鐘后，微離心3分鐘。沉淀的微球用0.5mL偶聯(lián)溶液重新懸浮，超聲粉碎10分鐘后，室溫旋轉(zhuǎn)過夜。偶聯(lián)溶液是含0. 8mg/mL的單克隆抗hCG抗體和 0. 2mg/mL的甲基化BSA的GBS溶液。微球溶液離心3分鐘，棄上清，沉淀用0. 5mL 10mg/mL的甲基化BSA重懸浮，室溫繼續(xù)垂直旋轉(zhuǎn)4小時，離心。棄上清，沉淀用微球儲存液洗3次，溶液是50mM Tris溶液，pH 8，含lmg/mL甲基化BSA。將微球用儲存液制成1 %的微球溶液。此溶液流經(jīng)捕獲區(qū)，與含生兔抗hCG的測試部分反應(yīng)。標(biāo)記區(qū)的制備用甲基化BSA溶液將測試微球和對照微球混合稀釋，測試微球濃度為0.06%，對照微球濃度為0.02%。攪拌均勻。將混合溶液加到無紡布墊上。室溫放置 5分鐘后，放入-70°C凍干瓶中冷凍至少1小時。然后放入冷凍干燥機(jī)中冷凍過夜。將封閉處理好的布墊切割成IOmmX7. 5mm的長方形。至此，標(biāo)記區(qū)制備完成。3、捕獲區(qū)的制備；捕獲區(qū)的材料使用硝酸纖維素膜，孔徑8-12 μ m。測試區(qū)寬度是2cm，噴涂2mg/mL 兔抗hCG的Tris溶液，噴膜機(jī)參數(shù)設(shè)為壓力閥472千帕，容器壓力34千帕，流速15秒/滴， 圖表速度500mm/分鐘。在與測試區(qū)平行的0. 3cm處是對照區(qū)，噴0. 6mg/mL生物素-兔IgG 的Tris溶液。噴好的膜在空氣中干燥10-30分鐘后，放到含封閉緩沖液的托盤上，室溫放置15分鐘。取出膜，干燥，轉(zhuǎn)移到含洗滌緩沖液(50mM Tris-馬來酸，pH 5.4)的盤中，室溫放置5分鐘。取出，空氣中干燥后儲存在干燥器中，備用。4、試劑盒的組裝捕獲區(qū)為20mmX 7. 5mm條，貼在雙面膠的中央。雙面膠大小為700mmX 17mm。標(biāo)記區(qū)與捕獲區(qū)相鄰，貼在雙面膠上，兩墊有Imm的重疊。加樣區(qū)緊鄰標(biāo)記區(qū)粘貼，兩者的布墊有Imm重疊。捕獲區(qū)的遠(yuǎn)端是吸收區(qū)，兩者的布墊有Imm重疊。粘貼好的測試條貼在700 X 17mm, Imm厚的不透明白色塑料板上。測試條表面用塑料槽覆蓋，測試條在塑料槽的中部，捕獲區(qū)保留在可見的部分，加樣孔在樣品區(qū)的上部。5、組裝后的試劑盒檢測hCG (絨毛膜促性腺激素)將組裝好的試劑盒平放于桌面，在樣品區(qū)加2滴樣品，每滴大約30μ L。樣品依次流經(jīng)加樣區(qū)、標(biāo)記區(qū)、捕獲區(qū)，多余的樣品在吸附區(qū)被吸收。一分鐘內(nèi)，就可在捕獲區(qū)的對照部分看到藍(lán)色的質(zhì)控線。經(jīng)多次試驗發(fā)現(xiàn)，如果樣品中有hCG，且濃度在50mIU/mL以上時，在捕獲區(qū)可以觀察到紅色線。 本發(fā)明的非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治鲈噭┖胁⒉痪窒抻谏鲜龅膶嵤├?，凡根?jù)本發(fā)明的精神實質(zhì)所作的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治龇?，該分析法是在樣品的?cè)向?qū)游鲞^程中對樣品進(jìn)行分析，其特征在于所述側(cè)向?qū)游鲞^程的固相載體為非親水性固相載體，其由親水性固相載體經(jīng)封閉處理而成；所述分析法包括標(biāo)記步驟以及隨后的捕獲步驟，所述標(biāo)記步驟包括對所述樣品中的待測物進(jìn)行特異性標(biāo)記的步驟，在該步驟中待測物與第一標(biāo)記物結(jié)合形成復(fù)合物，同時樣品中混入已知物-第二標(biāo)記物復(fù)合物；所述捕獲步驟包括分別在不同的區(qū)域捕獲所述待測物-第一標(biāo)記物的復(fù)合物和已知物-第二標(biāo)記物的復(fù)合物的步驟，且捕獲的同時顯色。
2.一種非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治鲈噭┖?，其特征在于該試劑盒包括一被固定在固態(tài)底板上的側(cè)向流動膜裝置，該裝置按樣品流動方向依次包括加樣區(qū)、標(biāo)記區(qū)、捕獲區(qū)、 吸收區(qū)，所述的加樣區(qū)、標(biāo)記區(qū)、捕獲區(qū)的固相載體為非親水性固相載體，其由親水性固相載體經(jīng)封閉處理而成；所述的吸收區(qū)能夠吸引裝置中的樣品朝吸收區(qū)定向流動；所述的標(biāo)記區(qū)裝載了已知物-第二標(biāo)記物復(fù)合物、能與流經(jīng)的樣品中的待測物特異性結(jié)合的第一標(biāo)記物；所述第一標(biāo)記物的顯色基團(tuán)的顯色結(jié)果與所述第二標(biāo)記物的不同；所述的捕獲區(qū)的固相載體包括對照部分和測試部分；所述的對照部分包被固定了能夠特異性結(jié)合所述已知物-第二標(biāo)記物的復(fù)合物的試劑，且結(jié)合后顯色；所述的測試部分包被固定了能夠特異性結(jié)合所述待測物-第一標(biāo)記物的復(fù)合物的試劑，且結(jié)合后顯色。
3.如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述的封閉劑為動物血清或者表面活性劑的溶液。
4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述的封閉劑為甲基化BSA溶液。
5.如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述的親水性固相載體由無紡布材料組成。
6.如權(quán)利要求2-5中任意一項所述的試劑盒，其特征在于所述的對照部分包被固定了能夠特異性結(jié)合所述已知物-第二標(biāo)記物的復(fù)合物中的標(biāo)記物部分的試劑；所述的測試部分包被固定了能夠特異性結(jié)合所述待測物-第一標(biāo)記物的復(fù)合物中的待測物部分的試劑。
7.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于所述的測試部分包被固定的試劑為能夠特異性結(jié)合所述待測物的抗體或抗體活性部分。
8.如權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于所述與已知物和待測物特異性結(jié)合的標(biāo)記物可以為有色微球、血紅細(xì)胞、膠體金或含染料的脂質(zhì)體的形式。
9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于所述已知物的標(biāo)記物為有色微球，已知物為親和素或其衍生物；所述的對照部分包被固定的試劑為能夠特異性結(jié)合已知物的生物素或生物素衍生物。
10.如權(quán)利要求2-6中任意一項所述的試劑盒，其特征在于所述的待測物為絨毛膜促性腺激素(hCG)，所述捕獲區(qū)的測試部分包被固定了兔抗hCG。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種非吸水性膜側(cè)向?qū)游鲆徊椒治龇捌湓噭┖?，該試劑盒的加樣區(qū)、標(biāo)記區(qū)、捕獲區(qū)的固相載體為非親水性固相載體，其由親水性固相載體經(jīng)封閉處理而成；標(biāo)記區(qū)裝載了已知物-第二標(biāo)記物復(fù)合物、能與流經(jīng)的樣品中的待測物特異性結(jié)合的第一標(biāo)記物；第一標(biāo)記物的顯色基團(tuán)的顯色結(jié)果與第二標(biāo)記物的不同；捕獲區(qū)的固相載體包括對照部分和測試部分；對照部分包被固定了能夠特異性結(jié)合已知物-第二標(biāo)記物的復(fù)合物的試劑，且結(jié)合后顯色；測試部分包被固定了能夠特異性結(jié)合待測物-第一標(biāo)記物的復(fù)合物的試劑，且結(jié)合后顯色。本發(fā)明的分析法及其試劑盒，與現(xiàn)有技術(shù)相比，檢測快速、一步到位，并且大大提高了檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度。
文檔編號G01N33/52GK102192979SQ201010118988
公開日2011年9月21日 申請日期2010年3月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月8日
發(fā)明者李紀(jì)陽 申請人:蘇州浩歐博生物醫(yī)藥有限公司