專(zhuān)利名稱(chēng)：一種檢測(cè)人乳中免疫球蛋白IgG含量的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種分析檢測(cè)人乳中蛋白的方法，特別是一種檢測(cè)人乳中免疫球蛋白 IgG含量的方法，屬于檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
人免疫球蛋白IgG是人體血清免疫球蛋白的主要成分，占總的免疫球蛋白的 70-75% ，人乳中含量在10-340mg/L，分子量約150KDa，含糖2 3% 。 IgG分子由4條肽鏈 組成。其中分子量為2.5萬(wàn)(23kDa)的肽鏈，稱(chēng)輕鏈(L鏈)，分子量為5萬(wàn)的肽鏈(50 60kDa)，稱(chēng)重鏈(H鏈)。輕鏈與重鏈之間通過(guò)二硫鍵(-S-S-)相連接。人免疫球蛋白IgG 具有是抗菌、抗毒性和抗病毒作用。 目前，國(guó)內(nèi)外檢測(cè)人免疫球蛋白IgG主要方法為ELISA法、蛋白芯片和SDS電泳 法。這些方法均有操作復(fù)雜、時(shí)間較長(zhǎng)、準(zhǔn)確度低等缺點(diǎn)。鑒于以上方法的缺點(diǎn)，本專(zhuān)利發(fā) 明了將利用毛細(xì)管電泳快速檢測(cè)人免疫球蛋白IgG含量的方法。毛細(xì)管電泳儀是一類(lèi)包括 電泳、色譜及其交叉內(nèi)容的液相微分離技術(shù)。方法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，檢測(cè)到出結(jié)果時(shí)間僅為 lh左右。 現(xiàn)有技術(shù)《毛細(xì)管電泳法快速測(cè)定保健食品中免疫球蛋白G》，王茜，《分析化學(xué)研 究簡(jiǎn)報(bào)》，2006年8月34巻，1161-1164，公開(kāi)了一種類(lèi)似于本發(fā)明的測(cè)試方法，但其檢測(cè)方 法檢測(cè)人乳中免疫球蛋白IgG得到的結(jié)果具有較低的檢出率，同時(shí)使用的設(shè)有涂層的毛細(xì) 管極大地增加了測(cè)試的成本。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種人乳中免疫球蛋白IgG含量的檢測(cè)方法，實(shí)現(xiàn)快速，準(zhǔn)確的檢 測(cè)人乳中的免疫球蛋白IgG含量。 本發(fā)明還提供了一種人乳中免疫球蛋白IgG含量的檢測(cè)方法，解決了現(xiàn)有技術(shù)用 于人乳免疫球蛋白IgG含量檢測(cè)中出現(xiàn)的檢出率偏低的問(wèn)題。 本發(fā)明還提供了一種人乳中免疫球蛋白IgG含量的檢測(cè)方法，使用的樣品緩沖液 可以有效地分散人乳中免疫球蛋白IgG。 本發(fā)明還提供了一種人乳中免疫球蛋白IgG含量的檢測(cè)方法，省去了測(cè)試過(guò)程中 使用設(shè)有涂層的毛細(xì)管，在保證檢出率的基礎(chǔ)上，極大地降低了測(cè)試成本。
本發(fā)明提供了一種檢測(cè)人乳免疫球蛋白IgG含量的檢測(cè)方法，包括如下步驟(l) 將人免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品溶于樣品緩沖液，制備得到所述標(biāo)準(zhǔn)品的多個(gè)不同含量標(biāo)準(zhǔn) 溶液，并利用所述分析儀對(duì)所述標(biāo)準(zhǔn)溶液分別檢測(cè)分析后得到檢測(cè)結(jié)果，根據(jù)所述標(biāo)準(zhǔn)溶 液的濃度與對(duì)應(yīng)的所述檢測(cè)結(jié)果繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)離心處理人乳樣品后，利用所述高 壓毛細(xì)管電泳分析儀對(duì)所述樣品進(jìn)行檢測(cè)；(3)將所述樣品的檢測(cè)結(jié)果與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線比 對(duì)，得到所述樣品中人免疫球蛋白IgG的含量。 在本發(fā)明的再一種具體實(shí)施方式
中，所述步驟(1)中所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定時(shí)所述
3標(biāo)準(zhǔn)溶液的檢測(cè)結(jié)果與所述標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的線性范圍應(yīng)選擇在4mg/ml 0. 25mg/ml，配制 五種濃度的所述標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別為4mg/ml、2mg/ml、lmg/ml、0. 5mg/ml、0. 25mg/ml，搖勻后檢 測(cè)分析，得出所述標(biāo)準(zhǔn)曲線。 在本發(fā)明的再一種具體實(shí)施方式
中，把所述檢測(cè)中離心管的容量為1. 5ml 2ml， 離心速度為2000 5000r/min，離心時(shí)間為2 15min，離心溫度控制在5 20。C，將所述 樣品與所述緩沖液按l : 1 10的比例加入所述離心管中，搖勻之后精確提取10 100ul 加入樣品管中，超聲波清洗1 10min。 在本發(fā)明的再一種具體實(shí)施方式
中，所述的樣品緩沖液為140 160mmol/L三 甲基氨基甲烷，40 60mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，6 8mol/L尿素，2 4mg/ml的二硫 基蘇糖醇，甲基羥乙基纖維素0. 02% 0. 1% (0. 2 lmg/ml)，所述樣品緩沖液的pH值為 8. 5±0. 3。
在本發(fā)明的再一種具體實(shí)施方式
中，所述高壓毛細(xì)管電泳檢測(cè)參數(shù)如下檢測(cè)溫
度控制在25 4(TC之間，毛細(xì)管柱直徑50 75iim、長(zhǎng)度500 600mm，紫外光檢測(cè)器，壓
力進(jìn)樣，壓力為0. 1 1. Opsi，時(shí)間為ls 15s，工作電壓為15 25kV。 在本發(fā)明的再一種具體實(shí)施方式
中，所述的毛細(xì)管柱未設(shè)涂層。 在本發(fā)明的再一種具體實(shí)施方式
中，電泳緩沖液pH為2. 0 3. O，所述電泳緩沖液
的成分為檸檬酸。 在本發(fā)明的再一種具體實(shí)施方式
中，計(jì)算所述樣品檢測(cè)結(jié)果的方法如下所述樣 品的檢測(cè)結(jié)果為樣品分離的圖譜，運(yùn)用所述高壓毛細(xì)管電泳儀所帶的分析軟件，積分所述 圖譜各峰的面積，計(jì)算出所述樣品濃度。 本發(fā)明標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程相關(guān)系數(shù)> 0.98，其線性范圍在0. 25mg/ml 4mg/ml，最低檢出限為lng，最低檢出濃度為0. Olmg/ml 。精確度達(dá)90%以上，柱子回收率達(dá) 到90%以上，樣品回收率達(dá)70%以上。線性回歸相關(guān)系數(shù)為0. 9963，最低檢出限為lng，最 低檢出含量為0.01mg/ml，標(biāo)準(zhǔn)樣品回收率達(dá)93X。能有效檢測(cè)出樣品中的人乳中免疫球 蛋白IgG的含量。 使用本發(fā)明方法中的樣品緩沖液，可以有效的分散樣品中的蛋白質(zhì)，同時(shí)可以有 效的防止蛋白質(zhì)吸附在未設(shè)涂層的毛細(xì)管柱壁上。和現(xiàn)有技術(shù)其他領(lǐng)域中使用高壓毛細(xì)管 電泳儀檢測(cè)蛋白的方法直接轉(zhuǎn)用到人乳中免疫球蛋白IgG的檢測(cè)相比，本發(fā)明具有較高的 檢出率，同時(shí)由于使用未設(shè)涂層的毛細(xì)管，極大地降低了測(cè)試的成本。
具體實(shí)施方式

實(shí)施例1 毛細(xì)管電泳溫度控制在25°C ，使用直徑為50 ii m、長(zhǎng)度為500mm的未涂層石英毛細(xì)
管柱，紫外線檢測(cè)器，壓力進(jìn)樣，壓力為O. lpsi，時(shí)間為15s，工作電壓為15kV。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定利用人乳免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品配制濃度分別為4mg/ml、2mg/
ml、lmg/m1、0. 5mg/ml、0. 025mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。搖勻后使用高壓毛細(xì)管電泳分析，積分后的
峰面積分別為65214、35621、15201、7685、434，利用軟件得出標(biāo)準(zhǔn)曲線線性回歸相關(guān)系數(shù)為
0. 9965，最低檢出限為2ng，最低檢出含量為0. 02mg/ml，標(biāo)準(zhǔn)樣品回收率達(dá)91 % ，重復(fù)性達(dá)
95%。
處理樣品緩沖液配置方法140m mol/L三甲基氨基甲烷緩沖液中加40mmol/L乙 二胺四乙酸二鈉，6mol/L尿素，處理樣品時(shí)添加2mg/g的二巰基蘇糖醇，甲基羥乙基纖維素 0. 02%或者0. 2mg/ml，使用氫氧化鈉溶液把pH值調(diào)至8. 2。
電泳緩沖液的配置方法檸檬酸緩沖液，pH值為3. 0。 檢測(cè)步驟為把奶樣品加入1. 5ml的離心管中，在2000r/min離心條件下離心 15min，離心溫度為5°C 。準(zhǔn)確提取樣品10ul置1. 5ml離心管中(或其他容器)，提取100ul 樣品緩沖液加入1. 5ml離心管中稀釋11倍，使用漩渦混合器混勻。精確提取10ul處理樣 品加入樣品管中，放置于超聲波清洗機(jī)lmin，之后使用毛細(xì)管電泳儀測(cè)定。
樣品定量讀數(shù)根據(jù)樣品分離的圖譜，運(yùn)用毛細(xì)管電泳儀所帶的分析軟件，積分人 乳免疫球蛋白IgG的峰面積為359，利用分析軟件自動(dòng)套入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程內(nèi)計(jì)算出試樣濃 度為0. 023mg/ml，再乘稀釋倍數(shù)11，即得實(shí)際濃度為0. 25mg/ml，所以該人乳樣品含有的人 乳免疫球蛋白IgG濃度為0. 25g/L。
實(shí)施例2 毛細(xì)管電泳溫度控制在4(TC，使用直徑為75iim、長(zhǎng)度為600mm的未涂層石英毛細(xì)
管柱，紫外線檢測(cè)器，壓力進(jìn)樣，壓力為l.Opsi，時(shí)間為ls，工作電壓為25kV。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定利用人乳免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品配制濃度分別為4mg/ml、2mg/
ml、lmg/m1、0. 5mg/ml、0. 025mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。搖勻后使用高壓毛細(xì)管電泳分析，積分后的
峰面積分別為，54721、23154、13265、5124、211，利用軟件得出標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸相關(guān)系數(shù)
為0. 9942，最低檢出限為lng，最低檢出含量為0. 01mg/ml，標(biāo)準(zhǔn)樣品回收率達(dá)92%。 處理樣品緩沖液配置方法160mmol/L三甲基氨基甲烷緩沖液中加60mmol/L乙二
胺四乙酸，8mol/L尿素，處理樣品時(shí)添加4mg/g 二硫基蘇糖醇，甲基羥乙基纖維素O. 1%或
者lmg/ml。使用0. 1M氫氧化鈉調(diào)至pH值為8. 8。 電泳緩沖液的配置方法檸檬酸緩沖液，pH值為3. 0。 檢測(cè)步驟為把人乳樣品加入2ml的離心管中，在5000r/min離心條件下離心 2min，溫度25°C。準(zhǔn)確提取樣品100ul置入2ml離心管(或其他容器)，提取100ul樣品緩 沖液加入2ml離心管，稀釋2倍，并使用漩渦混合器混勻。精確提取100ul處理樣品加入樣 品管中，放置于超聲波清洗機(jī)10min，之后使用毛細(xì)管電泳儀測(cè)定。 樣品定量讀數(shù)根據(jù)樣品分離的圖譜，運(yùn)用毛細(xì)管電泳儀所帶的分析軟件，積分人 乳免疫球蛋白IgG的峰面積為1327，利用分析軟件自動(dòng)套入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程內(nèi)計(jì)算出試樣濃 度為0. lmg/ml，再乘稀釋倍數(shù)2，即得實(shí)際濃度為0. 20mg/ml，所以該人乳樣品中含有的人 乳免疫球蛋白IgG濃度為0. 20g/L。
實(shí)施例3 毛細(xì)管電泳溫度控制在30°C ，使用直徑為60 ii m、長(zhǎng)度為500mm的未涂層石英毛細(xì)
管柱，紫外線檢測(cè)器，壓力進(jìn)樣，壓力為0. 8psi，時(shí)間為6s，工作電壓為25kV。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定利用人乳免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品配制濃度分別為8mg/ml、4mg/
ml、lmg/ml、0. 25mg/ml、0. Olmg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。搖勻后使用高壓毛細(xì)管電泳分析，積分后的
峰面積分別為，125412、61245、13658、3956、1532，利用軟件得出標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸相關(guān)系
數(shù)為0. 9994，最低檢出限為lng，最低檢出含量為0. Olmg/ml，標(biāo)準(zhǔn)樣品回收率達(dá)95% 。 處理樣品緩沖液配置方法150mmol/L三甲基氨基甲烷緩沖液中加50mmol/L乙二胺四乙酸，7mol/L尿素，處理樣品時(shí)添加3mg/g二硫基蘇糖醇，甲基羥乙基纖維素O. 05%或
者0. 5mg/ml。使用0. 1M氫氧化鈉調(diào)至pH值為8. 5。 電泳緩沖液的配置方法檸檬酸緩沖液，pH值為2. 0。 檢測(cè)步驟為把人乳樣品加入1. 8ml的離心管中，在3000r/min離心條件下離心 8min，溫度15°C。準(zhǔn)確提取樣品lOul置入1. 8ml離心管(或其他容器)，提取40ul樣品緩 沖液加入1. 8ml離心管，稀釋5倍，并使用漩渦混合器混勻。精確提取40ul處理樣品加入 樣品管中，放置于超聲波清洗機(jī)5min，之后使用毛細(xì)管電泳儀測(cè)定。 樣品定量讀數(shù)根據(jù)樣品分離的圖譜，運(yùn)用毛細(xì)管電泳儀所帶的分析軟件，積分人 乳免疫球蛋白IgG的峰面積為1491，利用分析軟件自動(dòng)套入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程內(nèi)計(jì)算出試樣濃 度為0. 038mg/ml，再乘稀釋倍數(shù)5，即得實(shí)際濃度為0. 19mg/ml，所以該人乳樣品中含有的 人乳免疫球蛋白IgG濃度為0. 19g/L。 實(shí)施例4對(duì)比涂層和未涂層毛細(xì)管檢測(cè)得到的樣品中IgG含量 毛細(xì)管電泳溫度控制在25°C，使用直徑為50 y m、長(zhǎng)度為500mm的涂層石英毛細(xì)管
柱，紫外線檢測(cè)器，壓力進(jìn)樣，壓力為O. lpsi，時(shí)間為15s，工作電壓為15kV。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定利用人乳免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品配制濃度分別為4mg/ml、2mg/
ml、lmg/m1、0. 5mg/ml、0. 02mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。搖勻后使用高壓毛細(xì)管電泳分析，積分后的
峰面積分別為63241、29354、14352、7452、352，利用軟件得出標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸相關(guān)系數(shù)
為0. 9970，最低檢出限為2ng，最低檢出含量為0. 02mg/ml，標(biāo)準(zhǔn)樣品回收率達(dá)90% ，重復(fù)率
為91%。 處理樣品緩沖液配置方法、檢測(cè)步驟為均同與實(shí)例1。 樣品定量讀數(shù)根據(jù)樣品分離的圖譜，運(yùn)用毛細(xì)管電泳儀所帶的分析軟件，積分人 乳免疫球蛋白IgG的峰面積為316，利用分析軟件自動(dòng)套入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程內(nèi)計(jì)算出試樣濃 度為0. 022mg/ml，再乘稀釋倍數(shù)11，即得實(shí)際濃度為0. 24mg/ml，所以該人乳樣品含有的人 乳免疫球蛋白IgG濃度為0. 24g/L。 實(shí)例l和實(shí)例4使用的測(cè)試樣品相同。未涂層毛細(xì)管檢出值于涂層毛細(xì)管檢出值 相當(dāng)，前者為檢出0. 25mg/ml，后者檢出含量為0. 24mg/ml。未涂層毛細(xì)管柱子重復(fù)性高于 涂層毛細(xì)管柱子重復(fù)性，其中未涂層毛細(xì)管的重復(fù)性為96%和涂層毛細(xì)管重復(fù)性為90%。 涂層毛細(xì)管柱子2000元/根(2009年市場(chǎng)價(jià))能檢測(cè)200-500個(gè)樣品，而未涂層毛細(xì)管柱 子300元/根(2009年市場(chǎng)價(jià))能檢測(cè)500-1000個(gè)樣品。由此可見(jiàn)，本發(fā)明的檢測(cè)方法在 保證測(cè)試準(zhǔn)確的前提下，可以有效降低測(cè)試成本。 實(shí)施例5使用背景技術(shù)中公開(kāi)的測(cè)試方法直接轉(zhuǎn)用到人乳中免疫球蛋白IgG含量 的測(cè)試 毛細(xì)管電泳溫度控制在25°C ，使用直徑為50 i！ m、長(zhǎng)度為370mm的有涂層石英毛細(xì) 管柱，紫外線檢測(cè)器，壓力進(jìn)樣，壓力為O. 5Mpa，時(shí)間為10s，工作電壓為15kV。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定配制2mg/ml的人乳免疫球蛋白IgM標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別移取5、 10、 20、 30、40及60 ii L IgM標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于500 y L樣品管中，用樣品緩沖液稀釋成100、 200、 400、600、800、1200mg/L IgM工作液，用外標(biāo)法定量，得到峰面積(A)與質(zhì)量濃度(C， mg/L) 的線性關(guān)系；線性范圍為0. 05 2mg/ml ;檢出限為0. 00625mg/ml。 處理樣品緩沖液配置方法5mmol/L H3B03緩沖液(0. 5mol/L LiOH調(diào)pH = 8. 7)。
電泳緩沖液的配置方法50mmol/L 1(28407+658/1聚乙二醇20000 (lmol/CsOH調(diào)pH 10. 0)。 檢測(cè)步驟為空白樣品中添加IgG標(biāo)準(zhǔn)品至0. 2mg/ml。稱(chēng)取200ul樣品于2ml離 心管，加入200ul樣品緩沖液，渦旋混勻后，以13000r/min離心10min，取上清液直接分析。
樣品定量讀數(shù)根據(jù)樣品分離的圖譜，運(yùn)用毛細(xì)管電泳儀所帶的分析軟件，積分人 乳免疫球蛋白IgG的峰面積為6513，利用分析軟件自動(dòng)套入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程內(nèi)計(jì)算出試樣濃 度為0. 090mg/ml，再乘稀釋倍數(shù)2，即濃度為0. 18mg/ml，而樣品的實(shí)際濃度為0. 2mg/ml，由 此可見(jiàn)背景技術(shù)中公開(kāi)的檢測(cè)方法其檢出率為90%。
實(shí)施例6 毛細(xì)管電泳溫度控制在25°C ，使用直徑為50 i！ m、長(zhǎng)度為370mm的有涂層石英毛細(xì)
管柱，紫外線檢測(cè)器，壓力進(jìn)樣，壓力為O. 5Mpa，時(shí)間為10s，工作電壓為15kV。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定利用人乳免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品配制濃度分別為4mg/ml、2mg/
ml、lmg/ml、0. 5mg/ml、0. Olmg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。搖勻后使用高壓毛細(xì)管電泳分析，積分后的
峰面積分別為25124、 12254、6388、3452、 157利用軟件得出標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸相關(guān)系數(shù)為
0. 9982，最低檢出限為lng，最低檢出含量為0. 01mg/ml，標(biāo)準(zhǔn)樣品回收率達(dá)94% ，重復(fù)率能
達(dá)96%。 處理樣品緩沖液配置方法140mmol/L三甲基氨基甲烷緩沖液中加40mmol/L乙 二胺四乙酸二鈉，6mol/L尿素，處理樣品時(shí)添加2mg/g的二巰基蘇糖醇，甲基羥乙基纖維素 0. 02%或者0. 2mg/ml，使用氫氧化鈉溶液把pH值調(diào)至8. 2。
電泳緩沖液的配置方法檸檬酸緩沖液，pH值為3. 0。 檢測(cè)步驟為空白樣品中添加IgG標(biāo)準(zhǔn)品至0. 2mg/ml。稱(chēng)取200ul樣品于2ml離 心管，加入200ul樣品緩沖液，渦旋混勻后，以13000r/min離心10min，取上清液直接分析。
樣品定量讀數(shù)根據(jù)樣品分離的圖譜，運(yùn)用毛細(xì)管電泳儀所帶的分析軟件，積分人 乳免疫球蛋白IgG的峰面積為3582，利用分析軟件自動(dòng)套入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程內(nèi)計(jì)算出試樣濃 度為0. 091mg/ml，再乘稀釋倍數(shù)2，即得濃度為0. 182mg/ml，而樣品的實(shí)際濃度為0. 2mg/ ml，由此可見(jiàn)對(duì)比文獻(xiàn)公開(kāi)的檢測(cè)方法其檢出率為91%。 實(shí)施例6使用的是本發(fā)明的檢測(cè)方法，只是使用的測(cè)試樣品是與實(shí)施例5相同的 加入IgG標(biāo)準(zhǔn)品的空白樣品。對(duì)比實(shí)施例5和實(shí)施例6可以看出，本發(fā)明較背景技術(shù)中公 開(kāi)的檢測(cè)方法具有較高的檢出率。
實(shí)施例7 毛細(xì)管電泳溫度控制在25°C ，使用直徑為50 i！ m、長(zhǎng)度為370mm的有涂層石英毛細(xì) 管柱，紫外線檢測(cè)器，壓力進(jìn)樣，壓力為O. 5Mpa，時(shí)間為10s，工作電壓為15kV。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定配制2mg/ml的人乳免疫球蛋白IgM標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別移取5、 10、 20、 30、40及60 ii L IgM標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于500 y L樣品管中，用樣品緩沖液稀釋成100、 200、 400、600、800、1200mg/L IgM工作液，用外標(biāo)法定量，得到峰面積(A)與質(zhì)量濃度(C， mg/L) 的線性關(guān)系；線性范圍為0. 05 2mg/ml ;檢出限為0. 00625mg/ml。 處理樣品緩沖液配置方法140m mol/L三甲基氨基甲烷緩沖液中加40mmol/L乙 二胺四乙酸二鈉，6mol/L尿素，處理樣品時(shí)添加2mg/g的二巰基蘇糖醇，甲基羥乙基纖維素 0. 02%或者0. 2mg/ml，使用氫氧化鈉溶液把pH值調(diào)至8. 2。
電泳緩沖液的配置方法32mmo1檸檬酸，20mmo1檸檬酸三鈉，O. 05%羥丙甲基纖 維素，6mol/L尿素，用水稀釋到pH值為3. 0。 檢測(cè)步驟為空白樣品中添加IgG標(biāo)準(zhǔn)品至0. 2mg/ml。稱(chēng)取200ul樣品于2ml離 心管，加入200ul樣品緩沖液，渦旋混勻后，以13000r/min離心10min，取上清液直接分析。
樣品定量讀數(shù)根據(jù)樣品分離的圖譜，運(yùn)用毛細(xì)管電泳儀所帶的分析軟件，積分人 乳免疫球蛋白IgG的峰面積為7237，利用分析軟件自動(dòng)套入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程內(nèi)計(jì)算出試樣濃 度為0. lmg/ml，再乘稀釋倍數(shù)2，即得濃度為0. 2mg/ml，檢出率為100%。除使用的樣品緩 沖液和電泳緩沖液不同于實(shí)施例5(背景技術(shù)中公開(kāi)的現(xiàn)有技術(shù))以外，其他的實(shí)驗(yàn)條件完 全相同，而最終的測(cè)試結(jié)果顯示，使用本發(fā)明的樣品緩沖液和電泳緩沖液可以有效的提升 樣品測(cè)量結(jié)果的檢出率。 樣品緩沖液中，甲基羥乙基纖維素用量的表述使用的百分含量和濃度含量均滿(mǎn)足 本發(fā)明的需要。 上文所列出的一系列的詳細(xì)說(shuō)明僅僅是針對(duì)本發(fā)明的可行性實(shí)施例的具體說(shuō)明， 它們并非用以限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡未脫離本發(fā)明技藝精神所作的等效實(shí)施例或變更 均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
一種檢測(cè)人乳中免疫球蛋白IgG含量的方法，包括如下步驟(1)將人免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品溶于樣品緩沖液，制備得到所述標(biāo)準(zhǔn)品的多個(gè)不同含量標(biāo)準(zhǔn)溶液，并利用高壓毛細(xì)管電泳分析儀對(duì)所述標(biāo)準(zhǔn)溶液分別檢測(cè)分析后得到檢測(cè)結(jié)果，根據(jù)所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度與對(duì)應(yīng)的所述檢測(cè)結(jié)果繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)離心處理人乳樣品后，利用所述高壓毛細(xì)管電泳分析儀對(duì)所述樣品進(jìn)行檢測(cè)；(3)將所述樣品的檢測(cè)結(jié)果與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，得到所述樣品中人免疫球蛋白IgG的含量。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中，所述步驟(1)中所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定時(shí)，所述標(biāo) 準(zhǔn)曲線的線性范圍應(yīng)選擇在4mg/ml 0. 25mg/ml，配制五種濃度的所述標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別為 4mg/ml 、2mg/ml 、 lmg/ml 、0. 5mg/ml 、0. 25mg/ml ，檢測(cè)分析后，得出所述標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述離心處理中離心管的容量為1. 5ml 2ml， 離心速度為2000 5000r/min，離心時(shí)間為2 15min，離心溫度為5 20。C，所述樣品與 所述緩沖液按l : 1 10的比例加入所述離心管中，離心后精確提取10 100ul加入樣 品管中，超聲波清洗1 10min。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述的樣品緩沖液為140 160mmol/L三甲基 氨基甲烷，40 60mmol/L乙二胺四乙酸二鈉，6 8mol/L尿素，2 4mg/ml的二硫基蘇 糖醇，甲基羥乙基纖維素O. 02% 0. 1%或者0. 2 lmg/ml，所述樣品緩沖液的pH值為 8. 5±0. 3。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述高壓毛細(xì)管電泳儀檢測(cè)參數(shù)如下檢測(cè)溫度控制在25 4(TC之間，毛細(xì)管柱直徑50 75 ii m、長(zhǎng)度500 600mm，紫外光檢測(cè)器，壓 力進(jìn)樣，壓力為0. 1 1. Opsi，時(shí)間為ls 15s，工作電壓為15 25kV。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中，所述的毛細(xì)管柱未設(shè)涂層。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，電泳緩沖液pH為2. 0 3. 0，所述電泳緩沖液的 成分為檸檬酸。
8. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的方法，其中，計(jì)算所述樣品檢測(cè)結(jié)果的方法如下所述樣品的 檢測(cè)結(jié)果為分離的圖譜，運(yùn)用所述高壓毛細(xì)管電泳儀所帶的分析軟件，積分所述圖譜各峰 的面積，計(jì)算出所述樣品濃度。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)人乳中成分的方法，特別是一種檢測(cè)人乳免疫球蛋白IgG含量的檢測(cè)方法，包括(1)將人免疫球蛋白IgG標(biāo)準(zhǔn)品溶于樣品緩沖液，制備得到所述標(biāo)準(zhǔn)品的多個(gè)不同含量標(biāo)準(zhǔn)溶液，并利用高壓毛細(xì)管電泳分析儀對(duì)所述標(biāo)準(zhǔn)溶液分別檢測(cè)分析后得到檢測(cè)結(jié)果，根據(jù)所述標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度與對(duì)應(yīng)的所述檢測(cè)結(jié)果繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)離心處理人乳樣品后，利用所述高壓毛細(xì)管電泳分析儀對(duì)所述樣品進(jìn)行檢測(cè)；(3)將所述樣品的檢測(cè)結(jié)果與所述標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)，得到所述人乳樣品中人免疫球蛋白IgG的含量。本發(fā)明具有檢出結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性高，成本低廉的特點(diǎn)。
文檔編號(hào)G01N27/447GK101793866SQ20101013443
公開(kāi)日2010年8月4日 申請(qǐng)日期2010年3月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月29日
發(fā)明者劉衛(wèi)星, 孫國(guó)慶, 康小紅 申請(qǐng)人:內(nèi)蒙古蒙牛乳業(yè)(集團(tuán))股份有限公司