專利名稱：一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物檢測領(lǐng)域，公開了一種利用免疫化的超順磁納米粒子和免疫化 的熒光量子點快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法。
背景技術(shù)：
食源性致病菌快速檢測一直是研究關(guān)注的焦點，《中華人民共和國食品安全法》于 2009年2月28日在第十一屆全國人民代表大會常務(wù)委員會第七次會議通過。食源性致病 菌快速檢測是采用微生物學(xué)、化學(xué)、生物化學(xué)、生物物理、免疫學(xué)的方法對食品及其加工、貯 藏等環(huán)境中的致病菌進(jìn)行分離、檢測、鑒定和計數(shù)。現(xiàn)在廣泛使用的檢測方法主要有三種平皿培養(yǎng)分離計數(shù)法，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) (polymerase chain reaction，PCR)與焚光 PCR 檢驗方法。阪崎腸桿菌(又稱阪崎氏腸桿菌)是腸桿菌科的一種，1980年由黃色陰溝腸桿菌 更名為阪崎腸桿菌。阪崎腸桿菌能引起嚴(yán)重的新生兒腦膜炎、小腸結(jié)腸炎和茵血癥，死亡率 高達(dá)50%以上。目前，微生物學(xué)家尚不清楚阪崎腸桿菌的污染來源，但許多病例報告表明嬰 兒配方粉是目前發(fā)現(xiàn)的主要感染渠道。阪崎腸桿茵的生物學(xué)性狀及其對人群的健康危害受 到人們的關(guān)注并被報告。阪崎腸桿菌是奶粉(乳)制品中新發(fā)現(xiàn)的一種致病菌。由其引發(fā)的嬰兒、早產(chǎn)兒腦 膜炎、敗血癥及壞死性結(jié)腸炎散發(fā)和暴發(fā)的病例已在全球相繼出現(xiàn)。多份研究報告表明嬰 兒配方奶粉是當(dāng)前發(fā)現(xiàn)致嬰兒、早產(chǎn)兒腦膜炎、敗血癥和壞死性結(jié)腸炎的主要感染渠道，在 某些情況下，由阪崎腸桿菌引發(fā)疾病而導(dǎo)致的死亡率可達(dá)40% 80%。阪崎腸桿菌已引起 世界多國相關(guān)部門的重視。據(jù)報道，國外乳業(yè)巨頭曾因此被召回。在美國FDA2002年在本 土某一些國際乳業(yè)巨頭生產(chǎn)的嬰兒配方奶粉中檢出阪崎腸桿菌后，2003年又一家國際乳業(yè) 巨頭公司主動召回在美國生產(chǎn)的一批檢出極微量阪崎腸桿菌的罐裝早產(chǎn)兒特殊配方奶粉， 阪崎腸桿菌從此成為世界矚目的焦點。但是國內(nèi)企業(yè)鮮有自查能力，原因是國內(nèi)以前還沒 有專門的檢測手段，而去買一套以前國內(nèi)從未有過的檢測設(shè)備也不是馬上就可辦到的。傳統(tǒng)的平皿培養(yǎng)分離鑒定法是應(yīng)用微生物檢驗的增菌培養(yǎng)、分離、生化鑒定等方 法對奶粉中可能存在的食源性致病菌進(jìn)行定性和定量的檢驗。其特點是穩(wěn)定可靠，是目前 最成熟，使用最廣泛，作為基準(zhǔn)的檢驗方法，但是存在檢測時間長，過程繁瑣，對操作人員技 術(shù)要求高以及對特定血清型難以分離鑒定的問題。PCR聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction，PCR)是一種分子生物學(xué)技術(shù)， 用于放大特定的DNA片段?？煽醋魃矬w外的特殊DNA復(fù)制。樣品(經(jīng)前處理增菌后)，采 用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒提取DNA，以提取的DNA為模版進(jìn)行PCR擴(kuò)增。通過瓊脂糖凝 膠電泳檢驗PCR產(chǎn)物是否有特征條帶，從而對樣品中是否污染食源性致病菌進(jìn)行快速檢驗 用PCR技術(shù)檢測有害微生物具有特異性強(qiáng)、靈敏度高和操作簡便、省時等優(yōu)點。熒光PCR在 普通PCR基礎(chǔ)上加入一條特異的寡核苷酸熒光探針，對PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，實時在線監(jiān) 控反應(yīng)過程，結(jié)合相應(yīng)的軟件可以對產(chǎn)物進(jìn)行分析，計算待測樣品的初始模版，可以通過測定放射性強(qiáng)度考查樣品中微生物數(shù)量。但是PCR反應(yīng)受樣品情況的影響比較大，特別在食 源性有害微生物檢查中，食品中的成分(糖類、酸類，油脂等物質(zhì))會干擾反應(yīng)的正常進(jìn)行。 而檢測的環(huán)境，中間處理環(huán)節(jié)也會帶來一些PCR反應(yīng)抑制劑。從而使PCR反應(yīng)呈現(xiàn)較高的 假陽性和假陰性率。為了對我國食品安全作出貢獻(xiàn)，豐富致病菌檢測方法，提高對食源性致病菌的檢 測速度，為可能出現(xiàn)的食品安全問題提供應(yīng)對方法，需要對現(xiàn)有技術(shù)做出改進(jìn)，研發(fā)了“磁 性分離熒光標(biāo)記定性定量檢測乳粉中阪崎腸桿菌”方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法。一種快速測篩選阪崎腸桿菌的方法，步驟包括(1)向待測樣品中加入免疫化超順磁納米粒子，15 35V混合反應(yīng)10 60min， 使免疫化超順磁納米粒子與阪崎腸桿菌發(fā)生特異性結(jié)合；(2)在外加磁場吸引作用下，收集免疫化的超順磁納米粒子，洗滌后加入免疫化熒 光量子點，15 35°C混合反應(yīng)10 60min，使之與載于免疫化超順磁納米粒子的致病微生 物阪崎腸桿菌發(fā)生特異性結(jié)合；(3)利用外加磁場吸引作用下收集載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿菌與免 疫化熒光量子點結(jié)合物，洗滌后定性或定量熒光檢測；所述免疫化超順磁納米粒子為以四氧化三鐵納米粒子為內(nèi)核，以二氧化硅為外 殼，表面偶聯(lián)特異性抗體的磁性粒子；所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗 阪崎腸桿菌單克隆抗體；所述的免疫化熒光量子點為與聯(lián)特異性抗體連接的量子點，所述的特異性抗體為 抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎腸桿菌單克隆抗體。步驟(2)和(3)所述的外加磁場為2000 6500Gs。所述免疫化超順磁納米粒子的制備方法包括(i)將包裹二氧化硅的四氧化三鐵磁性納米粒子與N-(2_氨基乙基)_3_氨基丙基 三甲基硅烷反應(yīng)，得到表面氨基化的磁性納米粒子；N-(2-氨基乙基)-3_氨基丙基三甲基 硅烷與包裹二氧化硅的四氧化三鐵納米粒子比例0. 05 0. lml/g，所述的包裹二氧化硅的 四氧化三鐵磁性納米粒子粒徑為50nm 150nm ；可通過現(xiàn)有技術(shù)制備包裹二氧化硅的四氧化三鐵磁性納米粒子，例如，制備 Y "Fe203磁核，再通過反相微乳液法對磁核、"Fe203進(jìn)行包裹并煅燒。(ii)將表面氨基化的磁性納米粒子分散于pH 7. 25 7. 5、并且戊二醛質(zhì)量濃度 為 2%的磷酸緩沖液中，將特異性抗體與步驟(i)所得表面氨基化的磁性納米粒子偶 聯(lián)，得到免疫化的磁性納米粒子；所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎 腸桿菌單克隆抗體。所述的表面氨基化的磁性納米粒子與抗阪崎腸桿菌多克隆抗體的重量比為 1 (0. 004 0. 04)；所述的表面氨基化的磁性納米粒子與抗阪崎腸桿菌單克隆抗體的重量比為 1 (0. 001 0. 02)。
所述免疫化熒光量子點的制備方法包括如下步驟(A)將pH 7. 25 7. 5、含有交聯(lián)劑的磷酸緩沖液的與表面修飾有羧基的量子點混 合，反應(yīng)5 20min以活化羧基；交聯(lián)劑優(yōu)選為1_ (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺 鹽酸鹽，濃度為10mg/ml至50mg/ml ；(B)加入保護(hù)劑反應(yīng)20 60min ；保護(hù)劑優(yōu)選為N_羥基硫代琥珀酰亞胺；(C)加入特異性抗體混合，反應(yīng)0. 5 4hr，除去未反應(yīng)的特異性抗體，收集免疫化 熒光量子點；所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎腸桿菌單克隆抗體；所述抗阪崎腸桿菌多克隆抗體與量子點的比例為1 (4X 105 4X 106)mmoml/ mg ；所述抗阪崎腸桿菌單克隆抗體與量子點的比例為1 (1X105 2X106)mmoml/ mg。量子點，又可稱為納米晶，是一種由II-VI族或III-V族元素組成的納米顆粒。量 子點的粒徑一般介于1 lOnm之間，由于電子和空穴被量子限域，連續(xù)的能帶結(jié)構(gòu)變成具 有分子特性的分立能級結(jié)構(gòu)，受激后可以發(fā)射熒光?；诹孔有?yīng)，量子點在太陽能電池， 發(fā)光器件，光學(xué)生物標(biāo)記等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。其具有傳統(tǒng)熒光染料和鑭系配合物 無法比擬的熒光特性更寬的激發(fā)光譜、更窄的發(fā)射光譜、更長的壽命等。本方法首先制備具有超順磁性的四氧化三鐵納米粒子，在納米粒子表面包裹二氧 化硅，然后表面修飾氨基，使之能與抗體結(jié)合，具有生物相容性。然后將特異性的抗體偶聯(lián) 在磁性顆粒表面，使之能與樣品中被檢微生物食源性致病菌阪崎腸桿菌發(fā)生特異性結(jié)合。載有致病微生物阪崎腸桿菌的免疫化超順磁納米粒子在外加磁場的作用下，向磁 極方向聚集，利用外加磁場(2000 6500Gs)吸附磁性粒子收集上述免疫化超順磁納米粒 子，棄去檢樣混合液；在此基礎(chǔ)上，將被特異性抗體偶聯(lián)的免疫化熒光量子點加入到濃集后 的反應(yīng)體系中，使之與載于磁性顆粒的致病微生物阪崎腸桿菌發(fā)生特異性結(jié)合。提供外加 磁場，被載于磁性顆粒并且偶聯(lián)有熒光量子點的目標(biāo)微生物阪崎腸桿菌向磁極方向聚集， 棄去檢樣混合液，利用外加磁場(2000 6500Gs)吸附磁性粒子收集磁性粒子，可進(jìn)行熒光 定性定量檢測。若樣品中含有阪崎腸桿菌，通過上述方法，可將免疫化的熒光量子點(間 接)連接到免疫化超順磁納米粒子，經(jīng)過磁性收集，進(jìn)行熒光檢測；復(fù)合物結(jié)構(gòu)免疫化熒 光量子點_阪崎腸桿菌_免疫化超順磁納米粒子。本方法不僅能從各種樣本中迅速分離目標(biāo)菌，同時加以高效富集，且分離后的細(xì) 菌經(jīng)快速的熒光標(biāo)記，既能通過熒光顯微鏡定性鑒定，又能被熒光分光光度計定量的檢測。 整個檢測過程僅需2個小時，操作方便、簡單，可靠性好，對配套設(shè)備要求低。


圖1為載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿菌與免疫化熒光量子點結(jié)合物在 紫外激發(fā)下的2為載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿菌與免疫化熒光量子點結(jié)合物在 可見光激發(fā)下的圖
具體實施例方式實施例1 免疫化超順磁性納米磁珠的制備以及抗體的連接1.磁核Y_Fe203的合成及其包裹用二次蒸餾水分別配制FeS04 7H20和FeCl3 6H20的溶液及NaOH溶液，將所配 兩種鐵鹽溶液混合。使鐵鹽的混合溶液中Fe2+離子的濃度為0. 15mol/L,，F(xiàn)e3+的濃度為 0. 25mol/L，NaOH溶液的濃度為2. 5mol/L。在劇烈攪拌下將上述配置好的NaOH溶液緩緩滴 加到混合鐵鹽溶液中，將所得的沉淀在60°C陳化2小時，用二次蒸餾水將沉淀物清洗3 5 次，過濾后在60°C 70°C干燥24h，在瑪瑙研缽中研磨后即為產(chǎn)物，干燥并室溫保存?zhèn)溆?。由于磁核Y_Fe203的分散性不好，粒徑也不均勻，且易于和其它物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，所 以必須對磁核進(jìn)行包裹，來得到化學(xué)性能穩(wěn)定、分散性好的核殼型磁珠。采用反相微乳液法 對磁核Y-Fe203進(jìn)行包裹，將TritonX-100、正己醇、環(huán)己烷按照1 1 2 1 1 10 的體積比例混合均勻，超聲使其形成穩(wěn)定的微乳液體系，向其中再加入磁性Y_Fe203納米 粒子，并用超聲分散，取質(zhì)量濃度為25% 35%濃氨水，滴至體系中至分散均勻，繼續(xù)向體 系中緩慢滴加正硅酸乙酯(TE0S)。反應(yīng)完后，向體系中加入丙酮或者靜置過夜使粒子陳化。磁性分離后，用乙醇來洗 滌粒子，在400°C的條件下煅燒粒子，以去除粒子表面的有機(jī)物，收集二氧化硅包裹的磁性 納米粒子(其粒徑為50 150nm)，干燥并室溫保存?zhèn)溆谩?.表面氨基化磁性納米粒子的制備及其免疫化取lOOmg的二氧化硅包裹的磁性納米粒子分散于400ml甲醇/丙三醇的混合溶液 (甲醇與丙三醇的體積比為1 1)中，同時加入100至lOOOul的蒸餾水，超聲使納米粒子 在混合體系中分散均勻，向攪拌體系中加入6ml N-(2-氨基乙基)-3_氨基丙基三甲基硅 烷，反應(yīng)完成后3000Gs磁場下磁性分離，分別用乙醇和蒸餾水洗滌3次，得到表面修飾了伯 氨基的磁性納米粒子，置于真空干燥箱中干燥，干燥后取出并室溫保存?zhèn)溆谩Ｈ∩鲜鲋苽涞谋砻婀δ芑判约{米粒子100mg分散于磷酸緩沖溶液中(pH = 7. 4， O.Olmol/L)。向體系中加入戊二醛溶液(終濃度為1.5%)。反應(yīng)lh后，用上述緩沖液洗 滌反應(yīng)后的磁性納米粒子2次以去除過量的戊二醛溶液，并向體系中加入抗阪崎腸桿菌多 克隆抗體，繼續(xù)反應(yīng)4 6h，磁性納米粒子表面的氨基與抗體上的氨基連接，形成免疫化超 順磁納米粒子。3000GS磁場下磁性分離后，將得到的粒子重新分散于緩沖溶液中，4°C保存實施例2熒光量子點與抗體的連接將1-(3_ 二甲氨基丙基)_3_乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDAC)作為交聯(lián)劑，N_羥 基硫代琥珀酰亞胺(NHSS)作為保護(hù)劑，將表面修飾有羧基的量子點(QDs-COOH)與抗體 (Ab)上的末端氨基交聯(lián)反應(yīng)生成酰胺鍵，得到免疫化的量子點?？贵w與量子點的摩爾比為 1 10 至 1 30。具體做法為40ul羧基修飾的量子點(發(fā)紅色光)(5. 2 X 10_6mol)加入到 80ul (0. 01mol/L, pH = 7. 4)無菌磷酸緩沖液中，3mg的EDAC加入到溶液中(最終濃度為 15mg/mL)，并在室溫下渦流lOmin，來充分活化功能化量子點表面上的羧基，然后向上述溶 液中加入lmg的NHSS，并在室溫條件下渦流30min，充分反應(yīng)后加入80ul (2mg/mL)抗阪崎 腸桿菌多克隆抗體，渦流lOmin，充分反應(yīng)2h，制備免疫化的量子點，最后通過超濾濃縮離心管去除未反應(yīng)的抗體，收集所制的免疫化的量子點并4°C保存?zhèn)溆?。實施?:樣品的檢測將實施例1所制備的免疫化的超順磁性納米粒子分散在磷酸鹽緩沖液(0. Olmol/ L，pH = 7. 2)中，濃度為50mg/ml，取50ul滴入3ml不同濃度(103 105cfu/ml)的阪崎腸桿 菌菌液樣品液中，室溫?fù)u床振蕩充分反應(yīng)0.5h，在外加磁場(3000Gs)的作用下，收集免疫 化的超順磁納米粒子，用磷酸鹽緩沖液(0. 01mol/L,pH = 7. 2)洗滌2 3次，定容至0. 2ml 體系。然后向洗滌后的體系中分別滴加50ul的實施例2所制備的免疫化的熒光量子點， 在室溫?fù)u床下振蕩0. 5h，使阪崎腸桿菌表面上的抗原與量子點上連接的抗阪崎腸桿菌多克 隆抗體充分免疫結(jié)合，在外加磁場(3000GS)的作用下，收集被載于磁性顆粒并且偶聯(lián)有熒 光量子點的目標(biāo)微生物阪崎腸桿菌，用磷酸鹽緩沖液(0. 01mol/L, pH = 7. 2)洗滌3 4次， 最終分別定容至lOOul體系中。然后使用熒光顯微鏡定性檢測，結(jié)果如圖1和圖2所示，免疫化的超順磁性納米粒 子與阪崎腸桿菌及免疫化熒光量子點形成復(fù)合物，載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿 菌與免疫化熒光量子點結(jié)合物在可見光或紫外光下會產(chǎn)生熒光。 也可以通過熒光分光光度計定量檢測。實施例1、2中的抗阪崎腸桿菌多克隆抗體可用三分之一用量的抗阪崎腸桿菌單 克隆抗體代替，結(jié)果相同，抗體濃度均為lmg/ml。結(jié)果判定和報告結(jié)果判定結(jié)合發(fā)熒光菌體的形態(tài)、熒光亮度與菌量綜合判定。陽性及可疑陽性結(jié)果菌體紅色熒光亮度為+，菌體形態(tài)特征符合阪崎腸桿菌，且 多數(shù)視野中均能檢出數(shù)個菌體。陰性結(jié)果無紅色與綠色熒光，或菌形模糊，為陰性。報告方法量子點熒光鏡檢結(jié)果為陰性報告為“未檢出阪崎腸桿菌”。量子點熒光鏡檢結(jié)果為陽性或可疑陽性結(jié)果結(jié)果記錄中出現(xiàn)陽性或可疑陽性結(jié) 果，均應(yīng)按依照國家標(biāo)準(zhǔn)對陽性結(jié)果及可疑陽性結(jié)果進(jìn)行培養(yǎng)法檢查，并根據(jù)培養(yǎng)法檢查 結(jié)果做報告。
權(quán)利要求
一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟包括(1)向待測樣品中加入免疫化超順磁納米粒子，15～35℃混合反應(yīng)10～60min，使免疫化超順磁納米粒子與阪崎腸桿菌發(fā)生特異性結(jié)合；(2)在外加磁場吸引作用下，收集免疫化超順磁納米粒子，洗滌后加入免疫化熒光量子點，15～35℃混合反應(yīng)10～60min，使之與載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿菌發(fā)生特異性結(jié)合；(3)利用外加磁場作用吸附收集載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿菌與免疫化熒光量子點結(jié)合物，洗滌后定性或定量熒光檢測；所述免疫化超順磁納米粒子為以四氧化三鐵納米粒子為內(nèi)核，以二氧化硅為外殼，表面偶聯(lián)特異性抗體的磁性粒子；所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎腸桿菌單克隆抗體；所述的免疫化熒光量子點為與聯(lián)特異性抗體連接的量子點，所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎腸桿菌單克隆抗體。
2.權(quán)利要求1所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，所述免疫化超 順磁納米粒子的制備方法包括(i)將包裹二氧化硅的四氧化三鐵磁性納米粒子分散在有機(jī)溶劑中，與N-(2-氨基 乙基)_3_氨基丙基三甲基硅烷反應(yīng)，得到表面氨基化的磁性納米粒子；N-(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲基硅烷與包裹二氧化硅的四氧化三鐵納米粒子比例為0. 05 0. lml/ g ；(ii)將表面氨基化的磁性納米粒子分散于PH7. 25 7. 5、并且戊二醛質(zhì)量濃度為 2%的磷酸緩沖液中，將特異性抗體與步驟(i)所得表面氨基化的磁性納米粒子偶聯(lián)，得到免疫化超順磁納米粒子；所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎 腸桿菌單克隆抗體；所述的表面氨基化的磁性納米粒子與抗阪崎腸桿菌多克隆抗體的重量比為 1 (0. 004 0. 04)；所述的表面氨基化的磁性納米粒子與抗阪崎腸桿菌單克隆抗體的重量比為 1 (0. 001 0. 02)。
3.權(quán)利要求1所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，所述免疫化熒 光量子點的制備方法包括如下步驟(A)將pH7. 25 7. 5、含有10 50mg/ml交聯(lián)劑的磷酸緩沖液的與表面修飾有羧基 的量子點混合，反應(yīng)5 20min以活化羧基；(B)加入保護(hù)劑反應(yīng)20 60min；(C)加入特異性抗體混合，反應(yīng)0.5 4hr，除去未反應(yīng)的特異性抗體，收集免疫化熒光量子點；所述的特異性抗體為抗阪崎腸桿菌多克隆抗體或抗阪崎腸桿菌單克隆抗體； 所述抗阪崎腸桿菌多克隆抗體與量子點的比例為1 (4X 105 4X 106)mmol/mg ； 所述抗阪崎腸桿菌單克隆抗體與量子點的比例為1 (1X105 2X106)mmol/mg。
4.權(quán)利要求2所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(i)所述的 包裹二氧化硅的四氧化三鐵磁性納米粒子粒徑為50nm至150nm。
5.權(quán)利要求3所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟㈧所述的 交聯(lián)劑為1- (3- 二甲氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽，濃度為10 50mg/ml。
6.權(quán)利要求3—種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(B)所述的保護(hù) 劑為N-羥基硫代琥珀酰亞胺。
7.權(quán)利要求1所述一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，其特征在于，步驟(2)和(3) 所述的外加磁場為2000 6500Gs。
全文摘要
本發(fā)明公開一種快速檢測篩選阪崎腸桿菌的方法，向待測樣品中加入免疫化超順磁納米粒子，使免疫化超順磁納米粒子與阪崎腸桿菌發(fā)生特異性結(jié)合；收集免疫化超順磁納米粒子，洗滌后加入免疫化熒光量子點，使之與載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿菌發(fā)生特異性結(jié)合；再利用外加磁場作用吸附收集載于免疫化超順磁納米粒子的阪崎腸桿菌與免疫化熒光量子點結(jié)合物，洗滌后定性或定量熒光檢測。本方法能從各種樣本中迅速分離目標(biāo)菌，同時加以高效富集，操作方便、簡單，可靠性好，對配套設(shè)備要求低。
文檔編號G01N33/533GK101865919SQ201010165329
公開日2010年10月20日 申請日期2010年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2010年4月29日
發(fā)明者孟謹(jǐn), 支援, 沈鶴柏, 韓奕奕, 顧鳴 申請人:上海師范大學(xué)