專利名稱：小分子代謝產(chǎn)物的測試方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種代謝產(chǎn)物的測試方法，尤其涉及一種小分子代謝產(chǎn)物的測試方法。
背景技術(shù)：
心血管疾病已成為許多國家的主要致死因素。在心血管疾病的發(fā)病過程中，血液、 尿液或其它分泌物中的一些蛋白質(zhì)、肽、糖類或其它小分子代謝產(chǎn)物濃度常發(fā)生顯著改變。 例如D 二聚體的出現(xiàn)意味著體內(nèi)有小血栓形成，D 二聚體的測定目前已廣泛用于深靜脈血栓和肺栓塞的排除診斷。小分子代謝產(chǎn)物，如血栓素B2，及其代謝產(chǎn)物2，3Dinor血栓素B2 的變化也可與血栓形成性疾病相關(guān)。從而測定其在血液中或尿液中濃度可用于相關(guān)疾病的診斷、預(yù)后或藥物治療效果觀察。目前，該類物質(zhì)的常用測定方法是HPLC，即高壓液相層析， 此測定方法需要復(fù)雜的儀器。HPLC分析是一種基于分子量大小(分子篩)或離子性質(zhì)(反相層析)的分析方法。由于HPLC不能分辨性質(zhì)類似的物質(zhì)，所以測定的特異性也較差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種測試準(zhǔn)確的小分子代謝產(chǎn)物的測試方法。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)方案是分子代謝產(chǎn)物的測試方法，包括如下步驟(1)、制備特異性抗體由于小分子代謝產(chǎn)物分子量很小，所以抗原性很弱，所以單克隆抗體制備時(shí)需要連接一個(gè)截體，這個(gè)截體的連接便小分子物質(zhì)的抗原大為提高；O)、將該單克隆抗體吸附到一個(gè)新疑的小顆粒上，這些小顆粒可以是乳膠或其他直徑在0. 01nm-50nm的圓球形物質(zhì)；(3)、樣本處理測定樣本加入一些沉淀劑，如PEG等，離心去除沉淀，因?yàn)檫@些沉淀物有可能干擾PGI2的濃度測定；(4)、將上述處理后的樣本加入濃度汁進(jìn)行濃度測定，根據(jù)在405nm或其他波長的讀數(shù)決定被測物質(zhì)PGI2的濃度。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是1、簡便不需要特殊儀器；2、快速能在4小時(shí)內(nèi)取得結(jié)果；3、特異性高干擾性小于5% ；4、靈敏性高靈敏度可達(dá)pg水平。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖
對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。(1)、將3mg純化的血栓素B2溶解于IOOul的乙醇，加而加入500ul的0. 1PBS，再加入5mg白蛋白混勻，然而加入5mg EDC，5分鐘后轉(zhuǎn)入透析袋，用10升PBS透析。
(2)、將上述IOOug等份注入兔或其它小動物內(nèi)，14天后注入第二次，44天后注入
第三次。60天后收集血液。(3)、抗體純化抗體純化是通過ftOtein A層析取得，將5ml左右血漿加入3ml左右ftOteinA樹脂，攪拌30分鐘后離心收集上清。(4)、特異性研究特異性研究是通過一系統(tǒng)可能存在的干擾物質(zhì)來實(shí)現(xiàn)的。(5)、抗體偶聯(lián)于微球?qū)?ml抗體加入5ml微球懸液，并加入偶聯(lián)劑，在4°C下混合至少10小時(shí)。(6)、標(biāo)準(zhǔn)品和抗原制備以血栓素不同濃度制備標(biāo)準(zhǔn)品，標(biāo)準(zhǔn)品濃度在 IOpg-IOOOpg之間。樣品制備10me血液或尿液沒加入2g PEG離心去除沉淀。并收集上清。(7)、將上述Iml標(biāo)準(zhǔn)品和Iml樣品加入抗體偶聯(lián)的微球，混合1小時(shí)后在405nm
讀數(shù)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)推算樣品含量。上述實(shí)施例僅供說明本發(fā)明之用，而并非是對本發(fā)明的限制，有關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的情況下，還可以作出各種變化和變型，因此所有等同的技術(shù)方案也應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范疇。
權(quán)利要求
1.分子代謝產(chǎn)物的測試方法，其特征在于包括如下步驟(1)、制備特異性抗體由于小分子代謝產(chǎn)物分子量很小，所以抗原性很弱，所以單克隆抗體制備時(shí)需要連接一個(gè)截體，這個(gè)截體的連接便小分子物質(zhì)的抗原大為提高；O)、將該單克隆抗體吸附到一個(gè)新疑的小顆粒上，這些小顆?？梢允侨槟z或其他直徑在0. 01nm-50nm的圓球形物質(zhì)；(3)、樣本處理測定樣本加入一些沉淀劑，如PEG等，離心去除沉淀，因?yàn)檫@些沉淀物有可能干擾PGI2的濃度測定；G)、將上述處理后的樣本加入濃度汁進(jìn)行濃度測定，根據(jù)在405nm或其他波長的讀數(shù)決定被測物質(zhì)PGI2的濃度。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種測試準(zhǔn)確的小分子代謝產(chǎn)物的測試方法，包括如下步驟(1)、制備特異性抗體由于小分子代謝產(chǎn)物分子量很小，所以抗原性很弱，所以單克隆抗體制備時(shí)需要連接一個(gè)截體，這個(gè)截體的連接便小分子物質(zhì)的抗原大為提高；(2)、將該單克隆抗體吸附到一個(gè)新疑的小顆粒上，這些小顆?？梢允侨槟z或其他直徑在0.01nm-50nm的圓球形物質(zhì)；(3)、樣本處理測定樣本加入一些沉淀劑，如PEG等，離心去除沉淀，因?yàn)檫@些沉淀物有可能干擾PGI2的濃度測定；(4)、將上述處理后的樣本加入濃度汁進(jìn)行濃度測定，根據(jù)在405nm或其他波長的讀數(shù)決定被測物質(zhì)PGI2的濃度。
文檔編號G01N33/577GK102253208SQ20101017374
公開日2011年11月23日 申請日期2010年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月17日
發(fā)明者王小良 申請人:王小良