專利名稱：一種小鼠巨噬細胞的Giemsa染色方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種Giemsa的染色方法，具體涉及一種小鼠巨噬細胞的Giemsa的染 色方法。
背景技術(shù)：
光學(xué)顯微鏡仍是目前觀察細胞形態(tài)使用的最普遍和方便的工具。但大多數(shù)細胞在 可見光下幾乎是透明的，不經(jīng)染色在光學(xué)顯微鏡下無法看清結(jié)構(gòu)。染色可使細胞不同結(jié)構(gòu) 顯示區(qū)別的顏色特征，便于直接觀察細胞的生物學(xué)特征。Giemsa染液由天青和伊紅組成，細胞中的堿性物質(zhì)與酸性染料伊紅結(jié)合，呈粉紅 色；酸性物質(zhì)與堿性染料天青結(jié)合，呈紫藍色；中性物質(zhì)可與兩種染料同時結(jié)合，呈淡紫 色。Giemsa染色法能將細胞核和細胞質(zhì)同時染色，操作簡便快捷，但染料配制技術(shù)和 染色條件不易準確掌握。

發(fā)明內(nèi)容
為克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，本發(fā)明的目的是提供一種小鼠巨噬細胞的Giemsa染 色方法，經(jīng)該方法染色后的細胞，胞核和胞質(zhì)界限清晰可見。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用了一下技術(shù)方案一種小鼠巨噬細胞的Giemsa染色方法，包括以下實施步驟1)細胞培養(yǎng)；2)細胞預(yù)處理；3) Giemsa 染色；進一步的，所述步驟1的細胞培養(yǎng)過程如下將小鼠巨噬細胞用含10% FBS的 RPMI培養(yǎng)基于37°C、5% CO2的條件下培養(yǎng)，隔日傳代。進一步的，所述步驟2的細胞預(yù)處理過程如下將培養(yǎng)至對數(shù)生長期的小鼠巨噬 細胞用胰酶消化后，于含10% FBS的RPMI培養(yǎng)基中以1500r/min的轉(zhuǎn)速離心5min后洗滌 2次，將細胞濃度調(diào)整為IX 105個/ml，加入鋪有小圓玻片的24孔板中，每孔1ml，在37°C、 5% CO2的條件下平衡12h待用。進一步的，所述步驟3的Giemsa染色過程如下取出平衡12h后的小圓玻片，烘 干，甲醇固定3min，將Giemsa染液PH值調(diào)制到7. 0-7. 4之間并過濾，過濾后的Giemsa染液 對小圓玻片上的小鼠巨噬細胞進行染色，染色3min后用1 XPBS緩沖液沖洗，用吸水紙吸干 后油鏡下觀察并攝片。優(yōu)選的，所述小圓玻片以濃鹽酸、洗潔精、濃硫酸依次浸泡處理24h，每次浸泡后用 單蒸水沖洗；再用無水乙醇浸泡2h，三蒸水洗3遍后放溫箱烘干；最后高壓滅菌30min后干 燥保存，在使用前將處理過的小圓玻片放入24孔板中，紫外燈滅菌30min。本發(fā)明的有益效果是利用本發(fā)明的Giemsa染色方法可以明顯的區(qū)分出被染色后的細胞核和細胞質(zhì)。以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細的描述。
具體實施例方式一種小鼠巨噬細胞的Giemsa染色方法1.材料的準備
1)小鼠巨噬細胞，由浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院嚴杰教授惠贈。2)培養(yǎng)基和主要液體配制含10% FBS 的 RPMI 1640 細胞培養(yǎng)基每 IOOOml 含有 RPMI 1640 900ml，胎牛血 清(fetal bovine serum, FBS) 100ml，另含 L-谷氨酰胺 2mmol/L，青霉素 100U/ml，鏈霉素 100U/ml ；D-Hank' s 緩沖液=NaCl 8. 0g, KCl 0. 40g, Na2HP04 · 12H20 0. 135g, KH2P04 0. 06g，NaHC03 0. 35g，pH 7. 2，加雙蒸水定容至1L，高壓滅菌；Giemsa染色原液Giemsa粉0. 5g，純甘油33ml，甲醇33ml。先將Giemsa粉置于 研缽中加少量甘油，充分研磨呈無顆粒的糊狀后再將全部甘油加入，放56°C溫箱中2h，加 甲醇過濾后保存于棕色瓶中。染色工作液1份原液加9份甲醇，使用前過濾；IXPBS 緩沖液NaCl 8. 0g,KCl 0.2g，KH2P04 0. 24g,Na2HP04 1.44g，用 HCl 調(diào)至 pH 7. 4，加雙蒸水定容至1L，高壓滅菌，4°C預(yù)冷。3)主要試劑和儀器RPMI 1640干粉為美國Gibco公司產(chǎn)品；FBS購自杭州賽樂生物科技有限公司， 56°C滅活30min之后使用。胰酶細胞消化液購自杭州碧云天生物技術(shù)研究所；HeraeusBB16UV型CO2培養(yǎng)箱系德國Heraeus公司產(chǎn)品；倒置顯微鏡為日本 Olympus公司產(chǎn)品。2.染色1)細胞培養(yǎng)；2)細胞預(yù)處理；3) Giemsa 染色；進一步的，所述步驟1的細胞培養(yǎng)過程如下將小鼠巨噬細胞用含10% FBS的 RPMI培養(yǎng)基于37°C、5% CO2的條件下培養(yǎng)，隔日傳代。進一步的，所述步驟2的細胞預(yù)處理過程如下將培養(yǎng)至對數(shù)生長期的小鼠巨噬 細胞用胰酶消化后，于含10% FBS的RPMI培養(yǎng)基中以1500r/min的轉(zhuǎn)速離心5min后洗滌 2次，將細胞濃度調(diào)整為IX 105個/ml，加入鋪有小圓玻片的24孔板中，每孔1ml，在37°C、 5% CO2的條件下平衡12h待用。進一步的，所述步驟3的Giemsa染色過程如下取出平衡12h后的小圓玻片，烘 干，甲醇固定3min，將Giemsa染液PH值調(diào)制到7. 0-7. 4之間并過濾，過濾后的Giemsa染液 對小圓玻片上的小鼠巨噬細胞進行染色，染色3min后用1 XPBS緩沖液沖洗，用吸水紙吸干 后油鏡下觀察并攝片。優(yōu)選的，所述小圓玻片以濃鹽酸、洗潔精、濃硫酸依次浸泡處理24h，每次浸泡后用 單蒸水沖洗；再用無水乙醇浸泡2h，三蒸水洗3遍后放溫箱烘干；最后高壓滅菌30min后干燥保存，在使用前將處理過的小圓玻片放入24孔板中，紫外燈滅菌30min
權(quán)利要求
一種小鼠巨噬細胞的Giemsa染色方法，包括以下實施步驟1)細胞培養(yǎng)；將小鼠巨噬細胞用含10％FBS的RPMI培養(yǎng)基于37℃、5％CO2的條件下培養(yǎng)，隔日傳代；2)細胞預(yù)處理；將培養(yǎng)至對數(shù)生長期的小鼠巨噬細胞用胰酶消化后，于含10％FBS的RPMI培養(yǎng)基中以1500r/min的轉(zhuǎn)速離心5min后洗滌2次，將細胞濃度調(diào)整為1×105個/ml，加入鋪有小圓玻片的24孔板中，每孔1ml，在37℃、5％CO2的條件下平衡12h待用；3)Giemsa染色；其特征在于所述Giemsa染色的過程如下取出平衡12h后的小圓玻片，烘干，甲醇固定3min，將Giemsa染液PH值調(diào)制到7.0-7.4之間并過濾，過濾后的Giemsa染液對小圓玻片上的小鼠巨噬細胞進行染色，染色3min后用1×PBS緩沖液沖洗，用吸水紙吸干后油鏡下觀察并攝片。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小鼠巨噬細胞的Giemsa染色方法，其特征在于所述小圓玻 片以濃鹽酸、洗潔精、濃硫酸依次浸泡處理24h，每次浸泡后用單蒸水沖洗；再用無水乙醇 浸泡2h，三蒸水洗3遍后放溫箱烘干；最后高壓滅菌30min后干燥保存，在使用前將處理過 的小圓玻片放入24孔板中，紫外燈滅菌30min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種小鼠巨噬細胞的Giemsa染色方法，包括以下實施步驟1)細胞培養(yǎng)；2)細胞預(yù)處理；3)Giemsa染色；Giemsa染色的最適條件為小圓玻片用前處理烘干后，甲醇固定3min，過濾的中性染液(pH7.0～7.4)染色3min，1×PBS緩沖液洗滌。利用本發(fā)明的Giemsa染色方法可以明顯的區(qū)分出被染色后的細胞核和細胞質(zhì)。
文檔編號G01N1/30GK101825533SQ201010187760
公開日2010年9月8日 申請日期2010年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月1日
發(fā)明者儲元元, 吳淑燕, 黃瑞 申請人:蘇州大學(xué)