專利名稱：羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及利用高效液相色譜法對羥丙基-β -環(huán)糊精進(jìn)行質(zhì)量控制的方法，即測定雜質(zhì)β-環(huán)糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的方法。
背景技術(shù)：
羥丙基-β -環(huán)糊精(HP- β -⑶)是目前備受矚目的β _環(huán)糊精(β -⑶)衍生物之一，其水溶性高、腎毒性低，不參與生物體內(nèi)代謝，也不蓄積，基本上沒有溶血性和刺激性。 ΗΡ-β -CD可以增加難溶性藥物的水溶性、增加藥物穩(wěn)定性和生物利用度、促進(jìn)藥物釋放、降低藥物毒副作用等。在藥物研究領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用。對于ΗΡ-β -CD，目前廣泛采用的合成方法是利用β -CD與環(huán)氧丙烷反應(yīng)，產(chǎn)物中的雜質(zhì)主要是殘留的β _⑶和副產(chǎn)物1，2-丙二醇。歐洲藥典第6版第1版增補(bǔ)版(ΕΡ6. 1)和美國藥典/國家處方集(USP32-NF27) 記載的HP- β -⑶的質(zhì)量控制方法，采用長度300mm，直徑3. 9mm的苯基硅烷鍵合硅膠柱，流動(dòng)相為水，示差折光檢測器檢測。該色譜柱作為一種專用色譜柱，價(jià)格昂貴，售價(jià)約為5500 元。在35°C條件下以純水作流動(dòng)相，在1.5mL/min的流速下，色譜柱的柱效降低較快。柱效過低則無法實(shí)現(xiàn)對各組分的有效分離和檢測，造成色譜柱壽命縮短，檢測成本升高。馬學(xué)琴等對歐洲藥典的方法進(jìn)行了改進(jìn)，采用普通的苯基柱(長度250mm，直徑 4.6mm)，以甲醇-水(1 10)作流動(dòng)相，示差折光檢測器(馬學(xué)琴等，羥丙基-β -環(huán)糊精的雜質(zhì)檢測，中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2006，37(1) :36-38)。由該文獻(xiàn)第37頁的

圖1可以看到， β -CD與1，2-丙二醇的色譜峰的峰型對稱性較差，1，2-丙二醇與前面雜質(zhì)峰不能達(dá)到有效分離，且不能同時(shí)檢測⑶與1，2-丙二醇之間的未知雜質(zhì)。上述兩種色譜方法，檢測了 ΗΡ-β-⑶中的兩種主要雜質(zhì)，而在經(jīng)過合成得到的 HP-β-CD中，還含有其他雜質(zhì)，ΕΡ6. 1和馬學(xué)琴的方法均未明確其是何物質(zhì)，ΕΡ6. 1僅僅是將總雜質(zhì)的含量限定為1.0%。藥物中雜質(zhì)的存在會(huì)影響藥品穩(wěn)定性，增加毒副作用，對人體健康產(chǎn)生不利影響。 對于廣泛應(yīng)用于制藥領(lǐng)域的HP-β -CD，對未知雜質(zhì)的定性有利于更好的控制ΗΡ-β -CD的質(zhì)量，從而保證在其應(yīng)用于藥品中后獲得更加安全有效的產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種簡便快捷、專屬性好、靈敏度高的HP-β -CD的質(zhì)量控制方法。采用苯基硅烷鍵合硅膠色譜柱，以乙腈/水為流動(dòng)相，檢測器為示差折光檢測器或蒸發(fā)光散射檢測器。當(dāng)采用示差折光檢測器時(shí)(稱為方法一)，可以同時(shí)檢測3種雜質(zhì) β -⑶、1，2-丙二醇和1，2_丙二醇聚合物，實(shí)現(xiàn)了 3種雜質(zhì)與HP-β -⑶的有效分離和雜質(zhì)的同時(shí)定量檢測?，F(xiàn)有技術(shù)沒有關(guān)于1，2-丙二醇聚合物檢測方法的任何報(bào)道；采用蒸發(fā)光散射檢測器時(shí)(稱為方法二)，可以檢測β-CD。
方法一HP- β -⑶的質(zhì)量控制方法，利用高效液相色譜法測定HP- β -⑶中β -⑶、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量，它包括(1)、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑 (4. 6X150-250mm)；流動(dòng)相乙腈-水體積比0-20 100-80，不包括0 100，優(yōu)選為
2-7 98-93，更好為4 96 ；示差折光檢測器；(2)、對照品溶液的制備精密稱取β-⑶和1，2-丙二醇對照品，配成二者濃度分別在0. 06-1. 5和0. 08-2. 5mg/mL的對照品溶液，二者濃度優(yōu)選為0. 1-1. 5mg/mL和 0. 1-2. 5mg/mL,更好的濃度分別為 0. 3mg/mL 和 0. 5mg/mL ；(3)、供試品溶液的制備精密稱取HP-β-⑶，配成濃度為10-300mg/mL的供試品溶液，優(yōu)選為50-200mg/mL，更好為100mg/mL ；(4)、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-100 μ L，優(yōu)選為 5-50 μ L，更好為各20 μ L，注入液相色譜儀，測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算β -⑶、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量。柱溫20-40°C;流速0. 5-2. OmL/min ；各雜質(zhì)的定性分別配置⑶對照品溶液和1，2_丙二醇對照品溶液，用來確定樣品溶液中雜質(zhì)⑶和1，2_丙二醇的色譜峰的位置，分別見附圖1-3。在β-⑶和1， 2_丙二醇的峰之間還存在其他未知雜質(zhì)峰。采用以下兩種方法對未知雜質(zhì)進(jìn)行了定性1、利用液相色譜相對保留時(shí)間定性色譜條件用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑 (4. 6 X 250mm)；柱溫30°C ；流動(dòng)相乙腈-水體積比為4 96 ；流速1. OmL/min ；示差折光檢測器；分別精密吸取對樣品溶液與聚丙二醇200溶液各20μ L注入液相色譜儀。樣品中的未知雜質(zhì)與聚丙二醇200溶液中部分主峰保留時(shí)間基本一致。由此確定樣品溶液得到的色譜圖中，⑶和1，2_丙二醇之間的雜質(zhì)峰為1，2_丙二醇聚合物。2、利用液相色譜-質(zhì)譜定性樣品中的未知雜質(zhì)與聚丙二醇200溶液部分主峰保留時(shí)間基本一致，提取未知雜質(zhì)峰保留時(shí)間處的質(zhì)量數(shù)信息，與聚丙二醇200溶液中部分主峰的質(zhì)量數(shù)信息一致。結(jié)合產(chǎn)品工藝特點(diǎn)，確定色譜圖中⑶和1，2_丙二醇之間的未知雜質(zhì)峰為1，2-丙二醇聚合物。以1，2-丙二醇為對照品，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算1，2-丙二醇聚合物的含量。以下的1-6為方法一的方法學(xué)驗(yàn)證試驗(yàn)，色譜條件為苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4. 6X 250mm)；柱溫30°C ；流動(dòng)相乙腈-水體積比為5 95 ；流速lmL/min ；示差折光檢測器；進(jìn)樣量為20 μ L。1、專屬性試驗(yàn)專屬性是指指在樣品介質(zhì)在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下， 采用的方法能正測定出被測物的特性。由附圖5可見，樣品經(jīng)強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、強(qiáng)氧化劑、高溫、光照破壞試驗(yàn)，各雜質(zhì)峰與
3-^、1，2-丙二醇和1，2-丙二醇聚合物實(shí)現(xiàn)了良好的分離，可以滿足對三者進(jìn)行定量檢測。2、檢測限
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檢測限是指試樣中被測物能被檢測出的最低量。將對照品溶液稀釋，進(jìn)行檢測限的測定，按3倍信噪比計(jì)算。β -CD檢測限濃度為 20 μ g/mL, 1,2-丙二醇檢測限濃度為26 μ g/mL。3、線性線性系指在設(shè)計(jì)的范圍內(nèi)，測試結(jié)果與試樣中被測物濃度直接呈正比關(guān)系的程度。取β-⑶與1，2_丙二醇適量，精密稱定，分別制成含β-^0.0505、0.2021、
0.3031,0. 5052,0. 7578,1. 5156mg/mL ；含 1，2_ 丙二醇 0. 0498,0. 2989,0. 4981,0. 7471、
1.2452,2. 4905mg/mL的溶液。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ L注入液相色譜儀。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程，結(jié)果見表1-2。表1 β -⑶線性關(guān)系考察結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種羥丙基- β _環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是利用高效液相色譜法測定羥丙基-β -環(huán)糊精中β -環(huán)糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量，它包括(1)、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4.6X150-250mm)； 流動(dòng)相乙腈-水體積比0-20 100-80，不包括0 100，示差折光檢測器；(2)、對照品溶液的制備精密稱取β-環(huán)糊精和1，2-丙二醇對照品，配成二者濃度分別在0. 06-1. 5和0. 08-2. 5mg/ml的對照品溶液；(3)、供試品溶液的制備精密稱取羥丙基-β-環(huán)糊精，配成濃度10-300mg/ml的供試品溶液；(4)、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-100μ 1，注入液相色譜儀， 測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算β-環(huán)糊精、1，2_丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丙基環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(1)中流動(dòng)相乙腈-水的體積比為2-7 98-93。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的羥丙基_β _環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是流動(dòng)相乙腈-水的體積比為4 96。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丙基環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(2)中對照品溶液中β _環(huán)糊精、1，2丙二醇的濃度分別為0. 1-1. 5mg/ml,0. 1-2. 5mg/ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是對照品溶液中 β -環(huán)糊精、1，2丙二醇的濃度分別為0. 3mg/ml，0. 5mg/ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丙基環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(3)中供試品溶液濃度為50-200mg/ml。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是供試品溶液濃度為 100mg/ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的羥丙基環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(4)中分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-50 μ 1注入液相色譜儀。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1注入液相色譜儀。
10.一種羥丙基_ β _環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是利用高效液相色譜法測定羥丙基-β-環(huán)糊精中β-環(huán)糊糊的含量，它包括(1)、色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用苯基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4X150-250mm)；流動(dòng)相乙腈-水體積比0-20 100-80，不包括0 100 ；蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管的溫度為 85-120°C，氣體流量為 1. 5-3. 6L/min ；(2)、對照品溶液的制備精密稱取β-環(huán)糊精對照品，配成濃度0. 05-2. Omg/ml的對照品溶液；(3)、供試品溶液的制備精密稱取羥丙基-β-環(huán)糊精，配成濃度10-300mg/ml的供試品溶液；(4)、測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2-100μ1，注入液相色譜儀， 測定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算環(huán)糊精的含量。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(1)中流動(dòng)相乙腈-水的體積比為2-7 98-93。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的羥丙基環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是流動(dòng)相乙腈-水的體積比為4 96。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(1)中蒸發(fā)光散射檢測器漂移管的溫度為100-120°C。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(1)中蒸發(fā)光散射檢測器的氣體流量為2-3. 3L/min。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是蒸發(fā)光散射檢測器的氣體流量為2. 8L/min。
16.根據(jù)權(quán)利要求10所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(2)中對照品溶液中β “環(huán)糊精濃度為0. 1-1. 5mg/ml。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是對照品溶液中β -環(huán)糊精濃度為0. 3mg/ml。
18.根據(jù)權(quán)利要求10所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(3)中供試品溶液濃度為20-250mg/ml。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是供試品溶液濃度為100mg/ml。
20.根據(jù)權(quán)利要求10所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是(4)中分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-50 μ 1注入液相色譜儀。
21.根據(jù)權(quán)利要求20所述的羥丙基-β-環(huán)糊精的質(zhì)量控制方法，其特征是分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20 μ 1注入液相色譜儀。
全文摘要
本發(fā)明提供了高效液相色譜法對羥丙基-β-環(huán)糊精進(jìn)行質(zhì)量控制的方法，包括對β-環(huán)糊精、1，2-丙二醇、及1，2-丙二醇聚合物的含量測定。方法簡便快捷、專屬性好、靈敏度高，不僅實(shí)現(xiàn)了對羥丙基-β-環(huán)糊精中的兩種主要雜質(zhì)β-環(huán)糊精和1，2-丙二醇得含量測定，還明確了另一種雜質(zhì)-1，2-丙二醇聚合物，實(shí)現(xiàn)了3種雜質(zhì)與羥丙基-β-環(huán)糊精的有效分離和雜質(zhì)的同時(shí)定量檢測。
文檔編號G01N30/02GK102375032SQ201010252278
公開日2012年3月14日 申請日期2010年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月10日
發(fā)明者宋倩男, 崔欣艷, 張素娟, 曲剛, 杜艷玲, 梁敏, 王世霞, 申東民 申請人:石藥集團(tuán)中奇制藥技術(shù)(石家莊)有限公司