專利名稱：一種在同一體系中檢測(cè)IgM抗體和IgG抗體的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體外檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種在免疫檢測(cè)樣本時(shí)在同一反應(yīng)體系中測(cè)定樣本中針對(duì)某種抗原的IgM抗體和IgG抗體的方法和相應(yīng)的試劑盒。
背景技術(shù)：
在臨床實(shí)驗(yàn)室診斷中，有很多是通過(guò)檢測(cè)機(jī)體產(chǎn)生的針對(duì)某種細(xì)菌或病毒IgM抗體和IgG抗體來(lái)確認(rèn)其感染或曾經(jīng)感染，比如弓形蟲(chóng)，巨細(xì)胞病毒(CMV)等。目前檢測(cè)人體針對(duì)某種病原體的IgM抗體和IgG抗體，是通過(guò)兩個(gè)試劑盒來(lái)實(shí)現(xiàn)的，這樣在臨床使用過(guò)程中，試劑的消耗量，所需病人的樣本量及檢測(cè)工作量都較大。因此，本領(lǐng)域的這項(xiàng)在同一反應(yīng)體系中測(cè)定樣本中IgM抗體和IgG抗體的方法，能大大降低目前的人力物力財(cái)力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一種能在同一反應(yīng)體系中測(cè)定樣本中針對(duì)某種抗原的IgM 抗體和IgG抗體的方法，從而節(jié)省臨床檢測(cè)更為簡(jiǎn)便的、更為省時(shí)，也更為經(jīng)濟(jì)。在本發(fā)明的第一方面，提供了一種在同一體系中檢測(cè)IgM抗體和IgG抗體的方法， 包括以下步驟(a)將待測(cè)樣品與第一抗原溶液混合，其中所述的第一抗原溶液含有1-50種不同的抗原，所述的每一種抗原偶聯(lián)于不同的微球而形成式I所示的第一抗原-微球的二元復(fù)合物，Ag-bead (I)式中，Ag表示抗原，bead表示微球，-表示抗原與微球之間的共價(jià)鍵；從而使待測(cè)樣品中的抗體與所述抗原形成“抗體_抗原_微球”三元復(fù)合物，其中所述的“抗體_抗原_微球”三元復(fù)合物包括“ IgM抗體-抗原-微球”三元復(fù)合物”和“ IgG 抗體_抗原_微球”三元復(fù)合物；(b)將步驟(a)形成的溶液與第二抗體溶液混合，其中所述的第二抗體溶液含有 1-50種不同的帶有可檢測(cè)信號(hào)的第二抗體，所述的每一種第二抗體分別是針對(duì)該抗原的 IgM抗體的抗體，從而形成“第二抗體-IgM抗體-抗原-微球”的IgM抗體四元復(fù)合物；(c)檢測(cè)IgM抗體四元復(fù)合物中不同微球的可檢測(cè)信號(hào)，從而確定待檢測(cè)樣品中各IgM抗體的存在與否，附加條件是待測(cè)樣品與第一抗原溶液和第二抗體溶液的混合，可依次進(jìn)行，也可同時(shí)進(jìn)行；(d)將步驟(C)檢測(cè)后的形成的溶液與第三抗體溶液混合，其中所述的第三抗體溶液含有1-50種不同的帶有可檢測(cè)信號(hào)的第三抗體，所述的每一種第三抗體分別是針對(duì)該抗原的IgG抗體的抗體，從而形成“第三抗體-IgG抗體-抗原-微球”的IgG抗體四元復(fù)合物；
(e)檢測(cè)IgG抗體四元復(fù)合物中不同微球的可檢測(cè)信號(hào)，從而確定待檢測(cè)樣品中各IgG抗體的存在與否。在另一優(yōu)選例中，所述的第二抗體帶有的可檢測(cè)信號(hào)和第三抗體帶有的可檢測(cè)信號(hào)是相同的或不同的。在另一優(yōu)選例中，所述的可檢測(cè)信號(hào)是熒光信號(hào)。在另一優(yōu)選例中，所述的微球是平均粒徑為2-10 μ m、且染上不同熒光的聚苯烯微球。在另一優(yōu)選例中，所述的抗原包括病毒抗原、腫瘤抗原、細(xì)菌抗原、寄生蟲(chóng)抗原等。在另一優(yōu)選例中，所述的抗原包括弓形蟲(chóng)抗原、風(fēng)疹病毒抗原、巨細(xì)胞病毒抗原、 甲肝病毒抗原、乙肝病毒抗原、丙肝病毒抗原、單純皰疹病毒抗原。在另一優(yōu)選例中，所述的第一抗原溶液含有2-30種不同的抗原，更佳地含有3-20 種不同的抗原。在另一優(yōu)選例中，在所述的第二抗體溶液和第三抗體溶液中，各第二抗體和第三抗體的濃度為0. l-200ug/ml。在另一優(yōu)選例中，步驟(c)和(e)中用Luminex xMAP法進(jìn)行檢測(cè)。在另一優(yōu)選例中，在步驟(c)和(e)中包括將測(cè)定的可檢測(cè)信號(hào)與質(zhì)控或標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，從而確定待檢測(cè)樣品中抗體的存在與否，和/或數(shù)量。在另一優(yōu)選例中，所述的第二抗體帶有的可檢測(cè)信號(hào)和第三抗體帶有的可檢測(cè)信號(hào)是相同的，并且在步驟(e)中包括步驟將步驟(e)中測(cè)得的可檢測(cè)信號(hào)的讀數(shù)減去步驟 (c)中測(cè)得的可檢測(cè)信號(hào)的讀數(shù)，作為判斷IgG抗體存在與否，和/或數(shù)量的依據(jù)。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種用于在同一體系中檢測(cè)IgM抗體和IgG抗體的試劑盒，它包括以下組分(a’)第一容器以及裝于該容器中的第一抗原溶液，其中所述的第一抗原溶液含有 1-50種不同的抗原，所述的每一種抗原偶聯(lián)于不同的微球而形成式I所示的第一抗原_微球的二元復(fù)合物，Ag-bead (I)式中，Ag表示抗原，bead表示微球，-表示抗原與微球之間的共價(jià)鍵；(b’)第二容器以及裝于該容器中的第二抗體溶液，其中所述的第二抗體溶液含有 1-50種不同的帶有可檢測(cè)信號(hào)的第二抗體，所述的每一種第二抗體分別是針對(duì)該抗原的 IgM抗體的抗體，從而形成“第二抗體-IgM抗體-抗原-微球”的IgM抗體四元復(fù)合物；(c’)第三容器以及裝于該容器中的第三抗體溶液，其中所述的第三抗體溶液含有 1-50種不同的帶有可檢測(cè)信號(hào)的第三抗體，所述的每一種第三抗體分別是針對(duì)該抗原的 IgG抗體的抗體，從而形成“第三抗體-IgG抗體-抗原-微球”的IgG抗體四元復(fù)合物。在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒還包括(d’ )用作質(zhì)控的標(biāo)準(zhǔn)液、或質(zhì)控液。應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再
--累述。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明人經(jīng)過(guò)廣泛而深入的研究，首次在同一反應(yīng)體系中通過(guò)兩種帶可檢測(cè)信號(hào)的抗體抗IgM抗體的抗體和抗IgG抗體的抗體，并且通過(guò)兩次采集可檢測(cè)信號(hào)，實(shí)現(xiàn)了在同一反應(yīng)體系中測(cè)定樣本中針對(duì)某種抗原的IgM抗體和IgG抗體。本發(fā)明方法可以大大降低目前的人力物力財(cái)力，并且操作簡(jiǎn)單，適應(yīng)面廣。本發(fā)明方法也適用于同時(shí)針對(duì)多個(gè)抗原的IgM抗體和IgG抗體。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抗IgM抗體的抗體”，指可特異性結(jié)合于IgM抗體的一種抗體。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抗IgG抗體的抗體”，指可特異性結(jié)合于IgG抗體的一種抗體。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“抗原”指具有免疫原性的物質(zhì)，例如蛋白質(zhì)、多肽。代表性的抗原例子包括(但并不限于)病毒抗原、腫瘤抗原、細(xì)菌抗原、寄生蟲(chóng)抗原等。例如，弓形蟲(chóng)抗原(如弓形蟲(chóng)外殼蛋白)、風(fēng)疹病毒抗原、巨細(xì)胞病毒抗原(巨細(xì)胞病毒的外殼蛋白)、甲肝病毒抗原、乙肝病毒抗原、丙肝病毒抗原、單純皰疹病毒抗原?；驹?a)免疫夾心法的原理免疫夾心法的原理是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。在檢測(cè)針對(duì)某種抗原的IgM抗體和IgG抗體時(shí)，通常分為兩個(gè)試劑盒。檢測(cè)針對(duì)某種抗原的IgM抗體時(shí)，常規(guī)的做法是將抗原固定于固相載體，然后加入待測(cè)樣本，待測(cè)樣本中的IgM抗體會(huì)與固定于固相載體上的抗原結(jié)合，洗滌后再與標(biāo)有酶的抗IgM抗體的抗體反應(yīng)，洗滌，最后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光或酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測(cè)信號(hào)。檢測(cè)針對(duì)某種抗原的IgG抗體時(shí)，常規(guī)的做法是將抗原固定于固相載體，然后加入待測(cè)樣本，待測(cè)樣本中的IgG抗體會(huì)與固定于固相載體上的抗原結(jié)合，洗滌后再與標(biāo)有酶的抗IgG抗體的抗體反應(yīng)，洗滌，最后進(jìn)行化學(xué)發(fā)光或酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測(cè)信號(hào)。(b) Luminex xMAP 法的原理Luminex xMAP是一個(gè)非常靈活的多功能技術(shù)平臺(tái)。其原理是把微小的乳膠顆粒 (Beads，簡(jiǎn)稱為“微球”)分別染成不同的熒光色，然后再把針對(duì)不同檢測(cè)物的蛋白(如抗原抗體)以共價(jià)方式結(jié)合到特定顏色的微球上。應(yīng)用時(shí)，先把針對(duì)不同檢測(cè)物的、用不同顏色編碼的微球混合，再加入被檢測(cè)物(被測(cè)物可以是血清中的抗原、抗體、或酶等)。在懸液中的微球與被檢測(cè)物特異性地結(jié)合，并加上熒光標(biāo)記。然后，微球成單列通過(guò)兩束激光，一束判定微球的顏色從而決定被測(cè)物的特異性(定性)；另一束測(cè)定微球上的熒光標(biāo)記強(qiáng)度從而決定被測(cè)物的量(定量)，所得到的數(shù)據(jù)經(jīng)電腦處理后可以直接用來(lái)判斷結(jié)果。在一個(gè)優(yōu)選例中，充分利用了抗原固定在不同流動(dòng)微球(Beads)的特點(diǎn)，同時(shí)優(yōu)化藻紅蛋白(PE)標(biāo)記的抗IgM抗體的抗體或抗IgG抗體的抗體的濃度，將交聯(lián)了抗原的微球溶液與血清樣本或標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品液、PE標(biāo)記的抗IgM抗體的抗體抗IgG抗體的抗體溶液依次或同時(shí)一并加入反應(yīng)容器中，從而發(fā)生以下反應(yīng)①微球上的抗原與血清或標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品液中針對(duì)該抗原的IgM抗體和IgG抗體結(jié)合，形成“ IgM抗體-抗原-微球”復(fù)合物或“ IgG抗體-抗原-微球”復(fù)合物；②PE標(biāo)記的抗IgM抗體的抗體或抗IgG抗體的抗體與血清或標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品液中相應(yīng)的IgM抗體或IgG抗體結(jié)合，最終形成“PE標(biāo)記的抗IgM抗體的抗體-IgM抗體-抗原-微球”復(fù)合物或“ΡΕ標(biāo)記的抗IgG抗體的抗體-IgG抗體-抗原-微球”復(fù)合物。在液相中即可通過(guò)Luminex χΜΑΡ檢測(cè)復(fù)合物的熒光，進(jìn)行定性或定量分析。在Lumin ex檢測(cè)儀上，這些微球被微量液體傳送系統(tǒng)排成單列，通過(guò)兩束激光，一束判定微球的編碼從而決定被測(cè)IgM抗體或IgG抗體是針對(duì)何種抗原的；另一束測(cè)定微球上PE的熒光強(qiáng)度，經(jīng)數(shù)據(jù)處理得出被測(cè)IgM抗體或IgG抗體的含量。關(guān)于Luminex χΜΑΡ的技術(shù)平臺(tái)詳細(xì)資料，請(qǐng)參見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)(1) Journal ofImmunological Methods, 227 :41_52 ； (2)www. luminexcorp. com。(c)同一體系中檢測(cè)IgM抗體和IgG抗體方法的原理在本發(fā)明方法中，首先在1種熒光編碼的微球(稱為1號(hào)球)上以共價(jià)鍵方式交聯(lián)某種抗原；加入血清樣本或標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品液后，1號(hào)微球上的抗原與血清或標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品液中相應(yīng)的IgM抗體和IgG抗體結(jié)合。這時(shí)，再加入PE標(biāo)記的抗IgM抗體的抗體，此時(shí)1號(hào)微球上的抗原與IgM抗體結(jié)合部分形成“ 1號(hào)熒光編碼微球_抗原_血清相應(yīng)IgM抗體-PE標(biāo)記的抗IgM抗體的抗體” 四元復(fù)合物。在Luminex檢測(cè)儀上，熒光編碼的微球被微量液體傳送系統(tǒng)排成單列，通過(guò)兩束激光，一束判定微球的編碼從而決定被測(cè)IgM抗體是針對(duì)哪種抗原的；另一束測(cè)定微球上 PE的熒光強(qiáng)度，經(jīng)數(shù)據(jù)處理得出被測(cè)IgM抗體的含量。隨后，再在反應(yīng)體系中加入PE標(biāo)記的抗IgG抗體的抗體，此時(shí)1號(hào)微球上的抗原與IgG抗體結(jié)合部分形成“ 1號(hào)熒光編碼微球_抗原_血清相應(yīng)IgG抗體-PE標(biāo)記的抗IgG 抗體的抗體”四元復(fù)合物。在Luminex檢測(cè)儀上，熒光編碼的微球被微量液體傳送系統(tǒng)排成單列，通過(guò)兩束激光，一束判定微球的編碼從而決定被測(cè)抗體是針對(duì)哪種抗原的；另一束測(cè)定微球上PE的熒光強(qiáng)度。該熒光強(qiáng)度減去前次測(cè)IgM抗體時(shí)的熒光強(qiáng)度，即為IgG抗體的熒光強(qiáng)度。經(jīng)數(shù)據(jù)處理得出被測(cè)IgG抗體的含量。值得注意的是，以上給出的是第二抗體(抗IgM抗體)和第三抗體(抗IgG抗體) 帶有的相同的可檢測(cè)信號(hào)(即PE標(biāo)記)的情況。顯然，當(dāng)?shù)诙贵w(抗IgM抗體)和第三抗體(抗IgG抗體)帶有的不同的可檢測(cè)信號(hào)時(shí)，可以直接根據(jù)第三抗體的可檢測(cè)信號(hào)的讀數(shù)來(lái)判斷抗IgG抗體的存在與否和/或數(shù)量。以下，以檢測(cè)風(fēng)疹病毒抗體為例，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的相關(guān)操作細(xì)節(jié)?？乖?微球復(fù)合物在本發(fā)明中，抗原_微球復(fù)合物具有式(I)結(jié)構(gòu)Ag-bead (I)式中，Ag表示抗原，bead表示微球，-表示第一抗體與微球之間的共價(jià)鍵；抗原與微球的偶連不同抗原與微球共價(jià)交聯(lián)的詳細(xì)操作程序可用常規(guī)方法，例如按照Luminex公司的產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)或網(wǎng)站=WWW. luminexcorp. com中所述的方法進(jìn)行偶連，從而得到不同微球與相應(yīng)抗原形成偶連物Ag-Bead。取一定量的Ag-Beads，稀釋至一定濃度就可得到抗原-微球懸液(簡(jiǎn)稱為A液)?？笽gM抗體的抗體和抗IgG抗體的抗體的標(biāo)記(二抗的標(biāo)記)
雖然在這里所用的抗IgM抗體的抗體和抗IgG抗體的抗體可用各種本領(lǐng)域已知的可檢測(cè)信號(hào)進(jìn)行標(biāo)記。然而，優(yōu)選的是用熒光信號(hào)進(jìn)行標(biāo)記，尤其是通過(guò)生物素-親和素連接方式標(biāo)記PE。在一優(yōu)選例中，抗體的生物素(Biotin)標(biāo)記方法如下取抗IgM抗體的抗體 (antilgM)透析純化后加入生物素二甲基亞砜(DMSO)溶液，避光反應(yīng)，透析去除未反應(yīng)的生物素，保存?zhèn)溆??？笽gG抗體的抗體(anti IgG)也用以上方法標(biāo)記。然后取一定量的生物素標(biāo)記的抗IgM抗體的抗體或抗IgG抗體的抗體，加入親和素(Str印tavidin)標(biāo)記的PE，使生物素與Sti^ptavidin結(jié)合，生成帶熒光素標(biāo)記的抗體 (即PE-antilgM或PE-antilgG，其中PE表示藻紅蛋白)，得到抗體溶液(簡(jiǎn)稱為C液)。質(zhì)控或標(biāo)準(zhǔn)為了消除假陽(yáng)性和假陰性，宜在檢測(cè)過(guò)程中設(shè)置質(zhì)控。比如在檢測(cè)風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體和風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體的試劑盒中，用風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體和風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體的標(biāo)準(zhǔn)品配制一定濃度范圍內(nèi)的溶液。此外，為了獲得定量結(jié)果，可以在檢測(cè)過(guò)程中設(shè)置含已知濃度的多個(gè)風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體和風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體的標(biāo)準(zhǔn)品。例如，風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體和風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體標(biāo)準(zhǔn)(STDn，n = 0 5)和質(zhì)控品(質(zhì)控1、質(zhì)控2)溶液的配制可按下表配制表1 風(fēng)疹I(lǐng)gM抗體和風(fēng)疹I(lǐng)gG抗體標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)控品溶液配制表
權(quán)利要求
1.一種在同一體系中檢測(cè)IgM抗體和IgG抗體的方法，其特征在于，包括以下步驟(a)將待測(cè)樣品與第一抗原溶液混合，其中所述的第一抗原溶液含有1-50種不同的抗原，所述的每一種抗原偶聯(lián)于不同的微球而形成式I所示的第一抗原-微球的二元復(fù)合物，Ag-bead (I)式中，Ag表示抗原，bead表示微球，-表示抗原與微球之間的共價(jià)鍵；從而使待測(cè)樣品中的抗體與所述抗原形成“抗體-抗原-微球”三元復(fù)合物，其中所述的“抗體_抗原_微球”三元復(fù)合物包括“ IgM抗體-抗原-微球”三元復(fù)合物”和“ IgG抗體-抗原-微球”三元復(fù)合物；(b)將步驟(a)形成的溶液與第二抗體溶液混合，其中所述的第二抗體溶液含有1-50 種不同的帶有可檢測(cè)信號(hào)的第二抗體，所述的每一種第二抗體分別是針對(duì)該抗原的IgM抗體的抗體，從而形成“第二抗體-IgM抗體-抗原-微球”的IgM抗體四元復(fù)合物；(c)檢測(cè)IgM抗體四元復(fù)合物中不同微球的可檢測(cè)信號(hào)，從而確定待檢測(cè)樣品中各IgM 抗體的存在與否，附加條件是待測(cè)樣品與第一抗原溶液和第二抗體溶液的混合，可依次進(jìn)行，也可同時(shí)進(jìn)行；(d)將步驟(c)檢測(cè)后的形成的溶液與第三抗體溶液混合，其中所述的第三抗體溶液含有1-50種不同的帶有可檢測(cè)信號(hào)的第三抗體，所述的每一種第三抗體分別是針對(duì)該抗原的IgG抗體的抗體，從而形成“第三抗體-IgG抗體-抗原-微球”的IgG抗體四元復(fù)合物；(e)檢測(cè)IgG抗體四元復(fù)合物中不同微球的可檢測(cè)信號(hào)，從而確定待檢測(cè)樣品中各IgG 抗體的存在與否。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第二抗體帶有的可檢測(cè)信號(hào)和第三抗體帶有的可檢測(cè)信號(hào)是相同的或不同的。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的可檢測(cè)信號(hào)是熒光信號(hào)。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的微球是平均粒徑為2-10μ m、且染上不同熒光的聚苯烯微球。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的抗原包括病毒抗原、腫瘤抗原、細(xì)菌抗原、寄生蟲(chóng)抗原等。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述的第二抗體溶液和第三抗體溶液中， 各第二抗體和第三抗體的濃度為0. l-200ug/mL·
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(c)和(e)中用LuminexxMAP法進(jìn)行檢測(cè)。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(c)和(e)中包括將測(cè)定的可檢測(cè)信號(hào)與質(zhì)控或標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，從而確定待檢測(cè)樣品中抗體的存在與否，和/或數(shù)量。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的第二抗體帶有的可檢測(cè)信號(hào)和第三抗體帶有的可檢測(cè)信號(hào)是相同的，并且在步驟(e)中包括步驟將步驟(e)中測(cè)得的可檢測(cè)信號(hào)的讀數(shù)減去步驟(c)中測(cè)得的可檢測(cè)信號(hào)的讀數(shù)，作為判斷IgG抗體存在與否，和/或數(shù)量的依據(jù)。
10.一種用于在同一體系中檢測(cè)IgM抗體和IgG抗體的試劑盒，其特征在于，它包括以下組分(a’ )第一容器以及裝于該容 器中的第一抗原溶液，其中所述的第一抗原溶液含有 1-50種不同的抗原，所述的每一種抗原偶聯(lián)于不同的微球而形成式I所示的第一抗原_微球的二元復(fù)合物， Ag-bead (I)式中，Ag表示抗原，bead表示微球，-表示抗原與微球之間的共價(jià)鍵； (b’ )第二容器以及裝于該容器中的第二抗體溶液，其中所述的第二抗體溶液含有 1-50種不同的帶有可檢測(cè)信號(hào)的第二抗體，所述的每一種第二抗體分別是針對(duì)該抗原的 IgM抗體的抗體，從而形成“第二抗體-IgM抗體-抗原-微球”的IgM抗體四元復(fù)合物；(C’ )第三容器以及裝于該容器中的第三抗體溶液，其中所述的第三抗體溶液含有 1-50種不同的帶有可檢測(cè)信號(hào)的第三抗體，所述的每一種第三抗體分別是針對(duì)該抗原的 IgG抗體的抗體，從而形成“第三抗體-IgG抗體-抗原-微球”的IgG抗體四元復(fù)合物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種在同一體系中檢測(cè)IgM抗體和IgG抗體的方法。具體地，本發(fā)明方法包括步驟(a)將待測(cè)樣品與第一抗原溶液混合，形成“抗體-抗原-微球”三元復(fù)合物；(b)將步驟(a)形成的溶液與第二抗體溶液混合，形成“第二抗體-IgM抗體-抗原-微球”的IgM抗體四元復(fù)合物；(c)檢測(cè)并確定待檢測(cè)樣品中各IgM抗體的存在與否；(d)將步驟(c)檢測(cè)后的形成的溶液與第三抗體溶液混合，形成“第三抗體-IgG抗體-抗原-微球”的IgG抗體四元復(fù)合物；(e)檢測(cè)并確定待檢測(cè)樣品中各IgG抗體的存在與否。本發(fā)明方法可簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地同時(shí)定性和定量檢測(cè)同一樣品中針對(duì)某抗原的IgM抗體和IgG抗體。
文檔編號(hào)G01N33/53GK102375052SQ20101025483
公開(kāi)日2012年3月14日 申請(qǐng)日期2010年8月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月17日
發(fā)明者喬健, 朱冬青, 梁敏銳, 鄒和建, 陳向軍, 顧悅?cè)A 申請(qǐng)人:復(fù)旦大學(xué)附屬華山醫(yī)院