專利名稱：一種全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥制劑的質(zhì)量控制方法，特別是涉及一種用高效液相色譜法對全天 麻膠囊制劑指紋圖譜的構(gòu)建方法及其指紋圖譜。
背景技術(shù)：
中藥質(zhì)量控制是中藥現(xiàn)代化的重要內(nèi)容，指紋圖譜技術(shù)被認為是中藥質(zhì)量控制研 究的有效手段。中藥指紋圖譜能比較全面地反映中藥中化學物質(zhì)的種類與數(shù)量，是實現(xiàn)中 藥真實性、質(zhì)量可控性和產(chǎn)品穩(wěn)定性的可行模式，能更好地反映中藥的內(nèi)在品質(zhì)。隨著中藥 指紋圖譜及化學模式識別技術(shù)的發(fā)展，指紋圖譜技術(shù)已日益成為國內(nèi)外廣泛接受的中藥質(zhì) 量評價模式?；诙恐讣y圖譜技術(shù)的中藥質(zhì)量控制模式是以傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論體系為基礎(chǔ) 的綜合控制模式，體現(xiàn)了中醫(yī)藥整體治療的特色。定量指紋圖譜技術(shù)在原有指紋圖譜的方 法上賦予指紋圖譜大量的定性、定量信息共同應用于中藥質(zhì)量控制，對指紋圖譜中多個目 標成分尤其是有效成分進行準確定量，使中藥質(zhì)量控制更加準確，能更真實反映中藥的質(zhì) 量狀況和產(chǎn)品組成，產(chǎn)品的質(zhì)量和穩(wěn)定性更加可靠。全天麻膠囊是以天麻為主要原料的中藥制劑，具有平肝，息風的作用，主要用于肝 風上擾所致的眩暈、頭痛、肢體麻木等。天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛等酚類化合物 作為全天麻膠囊的活性成分，常作為含量測定中質(zhì)量控制指標性成分。隨著現(xiàn)代醫(yī)藥的高 速發(fā)展，現(xiàn)行《中國藥典》中全天麻膠囊的質(zhì)量控制標準已不能真實反映全天麻膠囊的內(nèi)在 品質(zhì)及批與批之間產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種全天麻膠囊指紋圖 譜的建立方法及其指紋圖譜，該方法用高效液相色譜法對全天麻膠囊種的多種指標成分進 行含量測定，獲得指紋圖譜，用于評價和控制全天麻膠囊的質(zhì)量，可以保證全天麻膠囊的質(zhì) 量穩(wěn)定性、一致性和可控性，從而確保全天麻膠囊的安全性和有效性。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案
本發(fā)明一種全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法全天麻膠囊用乙醇水溶液提取后濃縮， 加乙腈水溶液溶解，以天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛和巴利森苷為對照品，照高效 液相色譜法建立指紋圖譜。進一步的，上述全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法全天麻膠囊用質(zhì)量百分濃度為 10 80%的乙醇水溶液提取后濃縮至干品，干品加體積百分濃度為0. 5 5%的乙腈水溶 液溶解，以天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛和巴利森苷為對照品，對照品用體積百分 濃度為0. 5 5%的乙腈水溶液溶解，照高效液相色譜法建立指紋圖譜。前述方法中所述高效液相色譜法的色譜條件為=Synergi 4u Hydro-RP 80A柱為 色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1. Oml/min,柱溫28 45°C，檢測波長220 284nm。
4
具體的，前述全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法如下
(a)供試品溶液的制備稱取全天麻膠囊0.5 5. 0g，精密加入質(zhì)量百分濃度為10 80%的乙醇水溶液10 100ml，稱定重量，加熱回流提取0. 5 5h，放冷，再稱定重量，用 相同濃度的乙醇溶液補足減失重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液濃縮至干品后加體積百分濃度 為0. 5 5%的乙腈水溶液溶解，定容至10ml，搖勻，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶 液；
(b)對照品溶液的配制精密稱取天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛和巴利森苷對 照品各0. 5 5mg置IOml量瓶中，加體積百分濃度為0. 5 5%的乙腈水溶液溶解并定容 至刻度，再精密吸取10 500μ 1置5ml量瓶中，用相同濃度的乙腈溶液定容至刻度，微孔 濾膜過濾，取續(xù)濾液作為對照品溶液；
(c)色譜條件Synergi4u Hydro-RP 80A柱為色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為 質(zhì)量百分濃度0. 1 %的磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1. Oml/min,柱溫30 40°C，檢測波長 265 275nm ；
(d)測定精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到全天麻 膠囊的指紋圖譜。前述全天麻膠囊指紋圖譜的最佳建立方法如下
(a)供試品溶液的制備精密稱取全天麻膠囊1.Og,精密加入50%的乙醇溶液25ml， 稱定重量，加熱回流提取3h，放冷再稱定重量，用50%的乙醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾 過，取續(xù)濾液10ml，濃縮至干品后加2%乙腈溶液溶解并定容至10ml，搖勻，微孔濾膜過濾， 取續(xù)濾液作為供試品溶液；
(b)對照品溶液的配制精密稱取天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛和巴利森苷對 照品各Img置IOml量瓶中，2%乙腈溶液溶解并定容至刻度，再精密吸取100 μ 1置5ml量瓶 中，2%乙腈溶液定容至刻度，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為對照品溶液；
(c)色譜條件Synergi4u Hydro-RP 80A柱為色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為 0. 1%磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1. Oml/min,柱溫40°C，檢測波長270nm ；
(d)測定精密吸取供試品溶液5 40μ 1注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定， 得到全天麻膠囊的指紋圖譜。前述方法中所述微孔濾膜過濾是用0. 2 μ m的微孔濾膜過濾。前述方法中所述梯度洗脫的程序以如下體積比濃度配置進行
洗脫時間流動相A的比例流動相B的比例
O min2%98%
8 min2%98%
21 min8%92%
30 min12%88%
47 min25%75%。用前述方法建立的指紋圖譜中有33個特征共有峰，其中第7、10、22、26、27和29 號峰分別為天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛、巴利森苷B、巴利森苷C和巴利森苷，圖 譜總長度為65min。上述指紋圖譜中所述33個特征共有峰的平均保留時間(min)如下1號峰 4號峰 7號峰 10號峰 13號峰 16號峰 19號峰 22號峰 25號峰 28號峰 30號峰
1. 957 士 0. 24% 4. 034 士 1. 06% 8. 101 士 0. 64% 12. 997 士 0. 45% 15. 093 士 0. 43% 17. 198 士 0. 26% 21. 015士0. 37% 26. 189士0. 27% 30. 058士0.15% 39. 403士0.10% 45. 440士0. 06%
2 號峰2. 281 士0. 74% ； 5 號峰4. 354士 1. 56% ； 8 號峰10. 225士0. 48% ； 11 號峰13. 838士0. 34% ； 14 號峰15. 889士0. 27% 17 號峰18. 275士0. 24% 20 號峰21. 856士0. 55% 23 號峰27. 906士 1. 43% 26 號峰34. 886士0. 11%
29號峰40. 597士0. 68%
30號峰47. 550士0. 08%
3 號峰3. 010士 1. 13% ； 6 號峰4. 675士 1. 12% ； 9 號峰11. 545士0. 58% ； 12 號峰14. 662士0. 29% 15 號峰16. 817士0. 42% 18 號峰20. 580士0. 14% 21 號峰24. 871 士0. 14% 24 號峰28. 724士 1. 39% 27 號峰36. 798士0. 09% 30 號峰42. 923士0. 10% 30 號峰48. 326士0. 06%c與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果如下
(1)用本發(fā)明所提供的方法建立的全天麻膠囊HPLC指紋圖譜與對照圖譜的相似度均 大于0. 9，能有效的表征其質(zhì)量，有利于全面監(jiān)控產(chǎn)品的質(zhì)量。(2)指紋圖譜注重各特征峰的關(guān)聯(lián)性和指紋圖譜的整體面貌特征，避免了全天麻 膠囊質(zhì)量控制的單一性和片面性，減少了人為處理產(chǎn)品質(zhì)量達標的可能性。(3)本發(fā)明基于指紋圖譜用多指標成分控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證了產(chǎn)品質(zhì)量的長期穩(wěn) 定性，療效的安全性和可靠性。(4)本發(fā)明具有方便、快捷、穩(wěn)定、精密度高和重現(xiàn)性好等優(yōu)點，可準確可靠的控制 全天麻膠囊的質(zhì)量。


圖1是全天麻膠囊指紋圖譜；
圖2是10批次全天麻膠囊的指紋圖譜。
具體實施例方式
實施例1 全天麻膠囊基于指紋圖譜的質(zhì)量控制方法
儀器Prominenece UFLC超快速液相色譜儀系統(tǒng)，Agilent 1100高效液相色譜儀系 統(tǒng)，AE240十萬分之一電子天平，超純水機。試藥天麻素對照品、巴利森苷對照品、對羥基苯甲醇對照品，對羥基苯甲醛對照 品，乙腈(色譜純)，全天麻膠囊。供試品溶液的制備精密稱取本全天麻膠囊1. 0g，精密加入質(zhì)量百分濃度為50% 的乙醇水溶液25ml，稱定重量，加熱回流提取3h，放冷再稱定重量，用相同濃度乙醇溶液補 足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液10ml，濃縮至干品后加體積百分濃度為2%的乙腈水溶 液溶解并定容至IOml，搖勻，用0. 2 μ m微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。對照品溶液的配制精密稱取天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛和巴利森苷對 照品各Img置IOml量瓶中，用體積百分濃度為2%的乙腈水溶液溶解并定容至刻度，再精密 吸取100μ 1置5ml量瓶中，用相同濃度乙腈水溶液定容，用0. 2μπι微孔濾膜濾過，取續(xù)濾 液作為對照品溶液。色譜條件Synergi4u Hydro-RP 80A 柱(4. 6mmX 150mm，4 μ m )為色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為0. 1%磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1. Oml/min,柱溫40°C，檢測波長 270nm，梯度洗脫程序的體積濃度配置如下
洗脫時間流動相A的比例流動相B的比例
O min2%98%
8 min2%98%
21 min8%92%
30 min12%88%
47 min25%75%。測定精密吸取供試品溶液10 μ 1注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到 全天麻膠囊的指紋圖譜，如圖1所示。供試品指紋圖譜與全天麻膠囊標準指紋圖譜相似度應不低于0. 90，參照峰為7、 10、22、26、27和29號峰，分別為天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛、巴利森苷B、巴利森 苷C和巴利森苷，圖譜總長度為65min，具體各峰平均保留時間(min)為
1號峰 4號峰 7號峰 10號峰 13號峰 16號峰 19號峰 22號峰 25號峰 28號峰 30號峰
1. 957 士 0. 24% 4. 034 士 1. 06% 8. 101 士 0. 64% 12. 997 士 0. 45% 15. 093 士 0. 43% 17. 198 士 0. 26% 21. 015士0. 37% 26. 189士0. 27% 30. 058士0.15% 39. 403士0.10% 45. 440士0. 06%
2 號峰2. 281 士0. 74% ； 5 號峰4. 354士 1. 56% ； 8 號峰10. 225士0. 48% ； 11 號峰13. 838士0. 34% ； 14 號峰15. 889士0. 27% 17 號峰18. 275士0. 24% 20 號峰21. 856士0. 55% 23 號峰27. 906士 1. 43% 26 號峰34. 886士0. 11%
29號峰40. 597士0. 68%
30號峰47. 550士0. 08%
3 號峰3. OlO士 1. 13% ； 6 號峰4. 675士 1. 12% ； 9 號峰11. 545士0. 58% ； 12 號峰14. 662士0. 29% 15 號峰16. 817士0. 42% 18 號峰20. 580士0. 14% 21 號峰24. 871 士0. 14% 24 號峰28. 724士 1. 39% 27 號峰36. 798士0. 09% 30 號峰42. 923士0. 10% 30 號峰48. 326士0. 06%c實施例2 全天麻膠囊指紋圖譜的建立
采用實施例1所述方法測定共10個批次的全天麻膠囊(20080102、20080401、 20080603,20081001,20081205,20090302,20090405,2009050U2009060U20090602)o10個批次的全天麻膠囊的指紋圖譜如圖2所示。通過10批次全天麻膠囊HPLC圖譜的比較，進行相似度評價采用國家藥典委員 會“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004年A版)”對10批次全天麻膠囊進行相似度計 算，10批次全天麻膠囊與對照指紋圖譜(10批次全天麻膠囊生成的共有模式Si)相似度均 大于0.97 (表1)。表1全天麻膠囊相似度比較結(jié)果
權(quán)利要求
一種全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征在于全天麻膠囊用乙醇溶液提取后濃縮，加乙腈水溶液溶解，以天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛和巴利森苷為對照品，照高效液相色譜法建立指紋圖譜。
2.按照權(quán)利要求1所述全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征在于全天麻膠囊用 質(zhì)量百分濃度為10 80%的乙醇溶液提取后濃縮至干品，干品加體積百分濃度為0. 5 5%的乙腈水溶液溶解，以天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛和巴利森苷為對照品，對照 品用體積百分濃度為0. 5 5%的乙腈水溶液溶解，照高效液相色譜法建立指紋圖譜。
3.按照權(quán)利要求1或2所述全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征在于所述高效 液相色譜法的色譜條件為Synergi 4u Hydro-RP 80A柱為色譜柱，流動相A為乙腈，流動 相B為磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1. Oml/min,柱溫28 45°C，檢測波長220 284nm。
4.按照權(quán)利要求3所述全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征在于(a)供試品溶液的制備稱取全天麻膠囊0.5 5. Og，精密加入質(zhì)量百分濃度為10 80%的乙醇水溶液10 100ml，稱定重量，加熱回流提取0. 5 5h，放冷，再稱定重量，用 相同濃度的乙醇溶液補足減失重量，搖勻，過濾，取續(xù)濾液濃縮至干品后加體積百分濃度 為0. 5 5%的乙腈水溶液溶解，定容至10ml，搖勻，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶 液；(b)對照品溶液的配制精密稱取天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛和巴利森苷對 照品各0. 5 5mg置IOml量瓶中，加體積百分濃度為0. 5 5%的乙腈水溶液溶解并定容 至刻度，再精密吸取10 500μ 1置5ml量瓶中，用相同濃度的乙腈水溶液定容至刻度，微 孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為對照品溶液；(c)色譜條件Synergi4u Hydro-RP 80A柱為色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為 質(zhì)量百分濃度0. 1 %的磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1. Oml/min,柱溫30 40°C，檢測波長 265 275nm ；(d)測定精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定，得到全天麻 膠囊的指紋圖譜。
5.按照權(quán)利要求4所述全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征在于(a)供試品溶液的制備精密稱取全天麻膠囊1.Og,精密加入50%的乙醇溶液25ml， 稱定重量，加熱回流提取3h，放冷再稱定重量，用50%的乙醇溶液補足減失的重量，搖勻，濾 過，取續(xù)濾液10ml，濃縮至干品后加2%乙腈溶液溶解并定容至10ml，搖勻，微孔濾膜過濾， 取續(xù)濾液作為供試品溶液；(b)對照品溶液的配制精密稱取天麻素、對羥基苯甲醇、對羥基苯甲醛和巴利森苷對 照品各Img置IOml量瓶中，2%乙腈溶液溶解并定容至刻度，再精密吸取100 μ 1置5ml量瓶 中，2%乙腈溶液定容至刻度，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液作為對照品溶液；(c)色譜條件Synergi4u Hydro-RP 80A柱為色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為 0. 1%磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1. Oml/min,柱溫40°C，檢測波長270nm ；(d)測定精密吸取供試品溶液5 40μ 1注入液相色譜儀，照高效液相色譜法測定， 得到全天麻膠囊的指紋圖譜。
6.按照權(quán)利要求4或5所述全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征在于步驟(a)和 (b)中所述微孔濾膜過濾是用0. 2 μ m的微孔濾膜過濾。
7.按照權(quán)利要求3所述全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征在于所述梯度洗脫 的程序以如下體積比濃度配置進行洗脫時間流動相A的比例流動相B的比例·0 min2%98%·8 min2%98%·21 min8%92%·30 min12%88%·47 min25%75%。
8.按照權(quán)利要求4或5所述全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法，其特征在于所述梯度 洗脫的程序以如下體積比濃度配置進行洗脫時間流動相A的比例流動相B的比例·0 min2%98%·8 min2%98%·21 min8%92%·30 min12%88%·47 min25%75%。
9.權(quán)利要求1至8任一所述方法建立的全天麻膠囊指紋圖譜，其特征在于所述指紋 圖譜中有33個特征共有峰，其中第7、10、22、26、27和29號峰分別為天麻素、對羥基苯甲 醇、對羥基苯甲醛、巴利森苷B、巴利森苷C和巴利森苷，圖譜總長度為65min。
10.按照權(quán)利要求9所述的全天麻膠囊指紋圖譜，其特征在于所述33個特征共有峰 的平均保留時間如下·1號峰 4號峰 7號峰 10號峰 13號峰 16號峰 19號峰 22號峰 25號峰 28號峰 30號峰·1. 957 士 0. 24% 4. 034 士 1. 06% 8. 101 士 0. 64% ·12. 15. 17. 21. 26. 30. 39. 45.·997 士 0. 093 士 0. 198 士 0. 015 士 0. 189 士 0. 058 士 0. 403 士 0. 440 + 0.·45% 43% 26% 37% 27% 15% 10% 06%·2 號峰2. 281 士0. 74% ； 5 號峰4. 354士 1. 56% ； 8 號峰10. 225士0. 48% ； 11 號峰13. 838士0. 34% ；·3 號峰3. 010士 1. 13% ； 6 號峰4. 675士 1. 12% ； 9 號峰11. 545士0. 58% ； 12 號峰14. 662士0. 29%·14號峰 17號峰 20號峰 23號峰 26號峰 29號峰 30號峰·15. 889 士 0. 18. 275 士 0. 21. 856士0. 27. 906士 1. 34. 886士0. 40. 597 士0. 47. 550 士0.·27% 24% 55% 43% 11% 68% 08%·15號峰 18號峰 21號峰 24號峰 27號峰 30號峰 30號峰·16. 20, 24, 28, 36, 42, 48,·817 士 0. 580 士 0. 871 士 0. 724 士 1. 798 士 0. 923 士 0. 326 士 0.·42% 14% 14% 39% 09% 10% 06%,
全文摘要
本發(fā)明公開了一種全天麻膠囊指紋圖譜的建立方法及其指紋圖譜，該方法包括(a)供試品溶液的制備，(b)對照品溶液的配制，(c)色譜條件Synergi4uHydro-RP80A柱為色譜柱，流動相A為乙腈，流動相B為0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫，流速1.0ml/min，柱溫30～40℃，檢測波長265～275nm，(d)測定，得到全天麻膠囊的指紋圖譜。此方法測定的指紋圖譜重復性高，重現(xiàn)性好，相似度高，作為全天麻膠囊的質(zhì)量控制方法，能很好的控制全天麻膠囊的質(zhì)量，有利于全天麻膠囊產(chǎn)品的安全性和質(zhì)量的穩(wěn)定性。
文檔編號G01N30/06GK101972414SQ201010532518
公開日2011年2月16日 申請日期2010年11月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月5日
發(fā)明者劉智, 張秋生, 高翔 申請人:貴州益康制藥有限公司