專利名稱：一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥注射劑的檢測方法，具體涉及一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法。
背景技術(shù)：
5-羥甲基糠醛(又名5-羥甲基-2-糠醛、羥甲基糠醛、5-羥甲基呋喃甲醛或5-羥甲基卩夫[!南甲酸)，英文名 5-hydroxymethyl-2-furfural、5-hydroxymethyl-furfural 或 5-HMF，是一種化學(xué)物質(zhì)。注射劑中特別是含糖的注射劑往往含有雜質(zhì)5-羥甲基糠醛。一些中藥注射劑中因含有糖類物質(zhì)也可能存在雜質(zhì)5-羥甲基糠醛，其原因在于中藥提取物中含量大量的糖類物質(zhì)，高溫下果糖、葡萄糖及其它糖類物質(zhì)均易脫水，進(jìn)一步生成5-羥甲基糠醛及聚合物，可能給機(jī)體帶來過敏、刺激性。其形成過程中受多種因素的影響，在酸性條件下，加熱的時(shí)間和溫度是首要因素。不論是中藥的炮制過程還是注射液的高溫滅菌過程均能使5-HMF 的含量呈規(guī)律性變化，有時(shí)其含量的增加與滅菌溫度、時(shí)間成正比。另外，高溫狀態(tài)下，存在溶液的電解質(zhì)價(jià)數(shù)越高，分解產(chǎn)生的5-HMF量越多ω。目前5-HMF研究主要集中在檢測牛乳、果汁、蜂蜜、酒類和藥物中5-HMF的含量，其含量的多少是反映這些物品內(nèi)在質(zhì)量的重要指標(biāo)。有研究利用結(jié)腸致癌劑造模的45F344雄性大鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)糖進(jìn)行加熱后如能產(chǎn)生含量為的5-HMF，就有可能引發(fā)并促進(jìn)結(jié)腸小囊異常生長(ACF)m。另有研究顯示5-HMF還可產(chǎn)生一定程度的基因毒性，推測其機(jī)制可能為5-HMF在體內(nèi)經(jīng)過硫化和氯化的過程而產(chǎn)生的致突變作用[5]。此外，5-HMF對(duì)人體橫紋肌和內(nèi)臟有毒副作用。5-HMF 由靜脈入血后會(huì)產(chǎn)生副作用[6]。故在中國藥典[7]、中國醫(yī)院制劑規(guī)范[8]中分別限定了葡萄糖、果糖注射液中5-HMF的含量。有關(guān)5-HMF的藥理作用一直以來存有爭議，有報(bào)道5-HMF 有一定程度的毒副作用，但近年來研究表明其還具有抗氧化、改善血液流變學(xué)等對(duì)人體有利的作用。5-HMF的檢測方法和含量測定方法的研究也較多，其在處有最大吸收。 UV-可見分光光度法[9]是較為普遍的測定方法。近年來HPLC的應(yīng)用克服了 5-HMF和其他成分在同一波長處084nm)有吸收的問題，從而能夠更準(zhǔn)確的測定其含量和控制注射液的質(zhì)量。由于中藥注射液和含糖的注射劑是臨床常用的制劑，其質(zhì)量的優(yōu)劣直接關(guān)系到人民的身體健康，因此藥典中對(duì)其相關(guān)雜質(zhì)含量作出了明確規(guī)定。如5-羥甲基糠醛(5HMF) 的含量，一直以來，生產(chǎn)中對(duì)5-HMF的控制或工藝上掌握不好，嚴(yán)重超標(biāo)。因此控制注射劑中雜質(zhì)5-羥甲基糠醛的含量是一項(xiàng)重要課題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法，該方法簡捷、快速、準(zhǔn)確，可以適用于任何可能含有5-羥甲基糠醛的注射劑，包括注射液，注射乳劑和粉末注射劑等，例如生脈注射液、葡萄糖大輸液、注射用益氣復(fù)脈凍干制劑等，特別適合于注射用益氣復(fù)脈凍干制劑。本發(fā)明的注射劑中5-羥甲基糠醛含量測定方法，經(jīng)過以下步驟(1)注射劑預(yù)處理配成樣品溶液；(2)5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液的配制；(3)采用高效液相色譜法對(duì)樣品和對(duì)照品進(jìn)行測定；(4)計(jì)算樣品中5-羥甲基糠醛的含量。其中所述預(yù)處理包括注射劑配成溶液過大孔吸附樹脂，用醇洗脫，得到洗脫溶液，所述的大孔吸附樹脂優(yōu)選聚苯乙烯類樹脂，更優(yōu)選ftOElu^SPE、Cleanert SPE, Strata -X或AB_8樹脂。所述醇選自乙醇和甲醇，優(yōu)選40%甲醇。優(yōu)選的預(yù)處理方法如下；取注射劑(若為粉末劑則用水溶解，若為液體制劑則直接上樣)，上預(yù)先處理好的大孔吸附樹脂，用少量水沖洗，棄取流出液；再以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOml量瓶中至刻度后，混勻后用0. 45um濾膜過濾，取濾液供分析用。本發(fā)明所述的方法，用高效液相色譜檢測時(shí)，對(duì)照品上樣時(shí)優(yōu)選用甲醇作溶劑。本發(fā)明所述的方法，優(yōu)選用兩瓶注射用益氣復(fù)脈凍干制劑作為樣品。本發(fā)明所述的方法，大孔吸附樹脂柱的參數(shù)優(yōu)選為內(nèi)徑6 8mm，柱高5cm，速度為 lml/mlο本發(fā)明所述的方法，其中步驟(3)對(duì)樣品和對(duì)照品進(jìn)行測定時(shí)采用symmetryR，色譜柱，規(guī)格為250mm*4. 5mm ；5 μ ；檢測波長為觀4歷；柱溫為30°C ；以甲醇-水為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，
權(quán)利要求
1.一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法，經(jīng)過以下步驟1)注射劑預(yù)處理配成樣品溶液；2)5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液的配制；3)采用高效液相色譜法對(duì)樣品和對(duì)照品進(jìn)行測定；4)計(jì)算樣品中5-羥甲基糠醛的含量；其中所述預(yù)處理包括過大孔吸附樹脂。
2 如權(quán)利要求1的方法，其特征在于其中所述預(yù)處理包括注射劑配成溶液過大孔吸附樹脂，用醇洗脫，得到洗脫溶液。
3.如權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述預(yù)處理包括取注射劑配成溶液過大孔吸附樹月旨，用水沖洗，棄取流出液；再以甲醇洗脫，洗脫液收集于IOml量瓶中至刻度后，混勻后用 0. 45um濾膜過濾，取濾液供分析用。
4.如權(quán)利要求3的方法，其特征在于所述甲醇為40%甲醇。
5.如權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述的大孔吸附樹脂是聚苯乙烯類樹脂，選自 ProElut SPE、Cleanert SPE、Strata -X 或 AB-8 樹脂。
6.如權(quán)利要求1的方法，其特征在于步驟(2)對(duì)照品溶液的配制采用甲醇作溶劑。
7.如權(quán)利要求1的方法，其特征在于所述的注射劑是任何含有5-羥甲基糠醛的注射齊 ，包括注射液，注射乳劑和粉末注射劑。
8.如權(quán)利要求7的方法，其中所述的注射劑選自生脈注射液、葡萄糖大輸液或注射用益氣復(fù)脈凍干制劑，其預(yù)處理方法如下取注射劑，用水溶解，過大孔吸附樹脂，用少量水沖洗，棄取流出液；再以40%甲醇洗脫，洗脫液收集于IOml量瓶中至刻度后，混勻后用0. 45um 濾膜過濾，取濾液供測定用。
9.如權(quán)利要求8的方法，其特征在于其中所述的大孔吸附樹脂是AB-8樹脂，樹脂柱內(nèi)徑6 8mm，柱高5cm，速度為lml/ml，測定時(shí)采用symmetryR，色譜柱，規(guī)格為250mm*4. 5mm ； 5μ ；檢測波長為284nm;柱溫為30°C ；以甲醇-水為流動(dòng)相進(jìn)行以下梯度洗脫，時(shí)間，分鐘流量水甲醇
10.如權(quán)利要求1的方法，其特征在于，測定注射用益氣復(fù)脈凍干制劑中5-羥甲基糠醛的含量采用以下步驟，(1)儀器WatersAlliance高效液相色譜儀，包括洸95 Separations Module四元泵、 在線真空脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱，Waters四96 二極管陣列檢測器，Empower 2色譜工作站；(2)色譜條件色譜柱為Water's sysmmetryE(4. 5mmX250mm, 5um)柱，柱溫30°C；流動(dòng)相為甲醇-水， 流速1. Oml/min，檢測波長284nm，進(jìn)樣量為10 μ 1 ；
全文摘要
本發(fā)明涉及一種注射劑中5-羥甲基糠醛含量的測定方法，該方法經(jīng)過以下步驟1)注射劑預(yù)處理配成樣品溶液；2)5-羥甲基糠醛對(duì)照品溶液的配制；3)采用高效液相色譜法對(duì)樣品和對(duì)照品進(jìn)行測定；4)計(jì)算樣品中5-羥甲基糠醛的含量；其中所述預(yù)處理包括過大孔吸附樹脂。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102466658SQ201010541638
公開日2012年5月23日 申請(qǐng)日期2010年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月12日
發(fā)明者蘭淑玲, 葉正良, 周大錚, 周學(xué)謙, 楊悅武 申請(qǐng)人:天津天士力之驕藥業(yè)有限公司