專利名稱：一種以離子液體作為添加劑的反向微乳毛細(xì)管電動色譜分析化妝品中的糖皮質(zhì)激素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，公開了采用以離子液體作為添加劑在反向電壓下，利用微乳毛細(xì)管電動色譜法測定化妝品中糖皮質(zhì)激素的方法。
背景技術(shù)：
糖皮質(zhì)激素(Corticosteroids),是由腎上腺皮質(zhì)分泌的一類留體激素,具有調(diào)節(jié)糖、脂肪和蛋白質(zhì)的生物合成和代謝的作用，有重要的生理活性，如抗炎及抗過敏，降低毛細(xì)血管壁和細(xì)胞膜的通透性，減少炎性滲出等作用。在一些化妝品中添加少量糖皮質(zhì)激素能增加抗過敏的療效并能提高皮膚的嫩白程度，長期使用該類物質(zhì)易使皮膚產(chǎn)生激素依賴癥。短時間使用激素可使皮膚保濕，恢復(fù)彈性，減少皺紋或治療粉刺，促進(jìn)毛發(fā)生長。但長期使用含有激素的化妝品會導(dǎo)致很多副作用，如皮膚長期接觸糖皮質(zhì)激素易導(dǎo)致皮膚變薄、發(fā)紅、發(fā)癢，出現(xiàn)血糖升高、高血壓、骨質(zhì)疏松、胎兒畸形、免疫功能下降等現(xiàn)象。皮膚長期接觸有些激素甚至能引發(fā)細(xì)胞癌、乳腺癌、卵巢癌等疾病。我國的化妝品規(guī)范中規(guī)定化妝品中不得添加激素類物質(zhì)。這就需要高效快速的方法來檢測其含量，這對于化妝品的質(zhì)量控制有重要意義。關(guān)于糖皮質(zhì)激素的測定方法有高效液相色譜法、LC-MS, GC-MS、毛細(xì)管電動色譜法和薄層色譜法等。其中高效液相色譜是最常用的方法，但是該方法需要比較復(fù)雜的樣品預(yù)處理過程去除基質(zhì)，且液相色譜儀及液相色譜柱價格昂貴，儀器的運(yùn)行成本也比較高。因而有必要建立一種簡單、快速、靈敏度高且成本低的檢測方法。離子液體(ILs)是一種新型的綠色溶劑，由特定陽離子和陰離子構(gòu)成，在室溫或近于室溫下呈液態(tài)的熔鹽體系，可以和有機(jī)溶劑、水混溶或不溶形成兩相或多相反應(yīng)體系。作為一類新型的綠色溶劑，離子液體具有非常廣泛的應(yīng)用前景。離子液體良好的熱穩(wěn)定性、化學(xué)穩(wěn)定性和溶解性使其非常適合用作色譜固定相，既可以用來分離極性物質(zhì)，也可以用來分離非極性物質(zhì)。在毛細(xì)管電動色譜方法中也常利用離子液體作為添加劑來改善分離度。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明的首要目的在于提供一種以離子液體作為添加劑，利用反向微乳毛細(xì)管電泳(MEEKC)法測定化妝品中三種結(jié)構(gòu)相似的糖皮質(zhì)激素(氫化可的松，潑尼松，醋酸氫化可的松)的方法，該方法樣品處理簡單、樣品用量少、方法經(jīng)濟(jì)快速、具有優(yōu)良的分離度和靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的目的通過下列的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)以離子液體作為添加劑，在反向電壓下，利用合適的微乳體系同時分離分析三種糖皮質(zhì)激素，達(dá)到同時檢測的目的。該方法的檢測步驟如下(I)精密稱取氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松各14. Omg, 17. Omg, 16. Omg,置于10. OOmL容量瓶中，加甲醇超聲溶解后，冷卻至室溫，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻后即得。避光4°C保存。使用時根據(jù)需要稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。(2)在反向電壓下利用經(jīng)典的微乳體系，以磷酸二氫鈉(pH. 2. 2)作為緩沖液，在低電滲流條件下用微乳毛細(xì)管電動色譜法(MEEKC)分離分析三個物質(zhì)。再以離子液體作為添加劑的微乳毛細(xì)管電動色譜法(IL-MEEKC)分離分析三個激素，得到標(biāo)準(zhǔn)譜圖。(3)采用離子液體作為添加劑的微乳毛細(xì)管電動色譜法，在最佳檢測條件下，對樣品的提取液進(jìn)行分析，獲得樣品的毛細(xì)管電泳圖。(4)根據(jù)氫化可的松，醋酸氫化 可的松，潑尼松的校正曲線方程，計算出步驟(3)中化妝品樣品中的氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松含量。所述最佳檢測條件為微乳液的組成為SDS 2.4% (界/界)，正丁醇6.6% (w/w)，正辛烷0. 5 % (w/w),35mmol/L I-甲基-3-正丁基四氟化硼(BMM-BF4)，20mmoI/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH =
2.2)。微乳毛細(xì)管電動色譜條件采用低pH條件有效地抑制了電滲流，建立起低電滲流體系。在分析中采用的運(yùn)行條件為在反相電壓條件下，以含離子液體BMIM-BF4的微乳液作為運(yùn)行液，運(yùn)行電壓_20kV(檢測端位于正電壓一端)，運(yùn)行溫度20°C，檢測波長250nm。步驟(3)中化妝品樣品預(yù)處理過程按照以下步驟進(jìn)行稱取2. OOOg化妝品，力口A 25. OOmL甲醇，超聲助溶30min，過濾定容于50. OOmL。所有溶液進(jìn)入毛細(xì)管前均經(jīng)過0. 45um過濾膜過濾，經(jīng)超聲脫氣后使用。對毛細(xì)管進(jìn)行如下處理毛細(xì)管在使用時，分別用0. lmol/LHCl、超純水、0. Imol/LNaOH、超純水、運(yùn)行緩沖液沖洗lOmin。兩次MEEKC樣品分析運(yùn)行期間，分別用0. lmol/L NaOH、超純水、運(yùn)行緩沖液沖洗5min，以獲得良好的分離檢測重現(xiàn)性。在最佳的檢測條件下，氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松在9分鐘內(nèi)達(dá)到基線分離，顯示了良好的分離選擇性和靈敏度。三個物質(zhì)在該方法的線性范圍分別為5-400 y g/mL、5-400 u g/mL 和 5-800 u g/mL,檢出限為 0. 9 y g/mL、0. 9 u g/mL 和 I. 2 y g/mL (S/N = 3)，遷移時間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別小于4. 8%和3. I %。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)，具有如下的優(yōu)點(diǎn)及有益效果(I)本發(fā)明為化妝品的質(zhì)量控制提供技術(shù)支持，檢測快速；(2)環(huán)境友好，經(jīng)濟(jì)環(huán)保，所用的緩沖液多為水相，無需消耗大量的有機(jī)溶劑，比液相色譜更環(huán)保，更有利于檢測者的身體健康；(3)分析成本低，所需樣品和溶劑都很少，檢測一個樣品消耗的緩沖溶液不到lmL，且不需要特殊的色譜柱，僅使用普通的空心毛細(xì)管柱，價格比一般的色譜柱要低好幾倍，使用方便；


圖I為標(biāo)準(zhǔn)品混合液的微乳毛細(xì)管電動色譜圖，其中I為氫化可的松和潑尼松，2為醋酸氫化可的松。圖2為標(biāo)準(zhǔn)品的混合液的圖離子液體微乳毛細(xì)管電動色譜圖，其中I為氫化可的松，2為潑尼松，3為醋酸氫化可的松。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。所需的儀器裝置為CAPEL105高效毛細(xì)管電泳系統(tǒng)，配有紫外檢測器；未涂層石英毛細(xì)管(0 75iimX65cm，有效長度50cm)。所需試劑氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)品，十二烷基硫酸鈉(SDS)，磷酸二氫鈉(NaH2PO4)，I-甲基-3-正丁基 四氟化硼(BMM-BF4)，磷酸，乙腈，甲醇，0. lmol/L HCl，0. lmol/L NaOH,超純水,所用緩沖液及樣品溶液均經(jīng)過0. 45 y m過濾膜過濾后使用。I)最佳檢測條件的確定(I)微乳運(yùn)行液的配制用超純水分別配制濃度為120mmoI/LNaH2PO4和100mmol/L I-甲基_3_正丁基四氟化硼(BMM-BF4)母液。a.利用濃度為 120mmol/L NaH2POjP IOOmmoI/L BMM-BF4母液，配制 SDS分別為質(zhì)量比 6. 6%，3. 3%，3. 0%，2. 8%，2. 4% 的 15mmol/L 磷酸二氫鈉(pH = 2. 2)-正丁醇 6. 6%(w/w)_正辛烷0. 5% (w/w)MEEKC緩沖液。用5mmol/L氫氧化鈉和磷酸調(diào)節(jié)pH為2. 2。超聲30min即得不同濃度的透明穩(wěn)定的微乳溶液。b.利用濃度為 120mmol/L NaH2POjP IOOmmoI/L BMM-BF4母液，配制 SDS分別為質(zhì)量比 6. 6%，3. 3%，3. 0%，2. 8%，2. 4% 的 15mmol/L 磷酸二氫鈉(pH = 2. 2)-正丁醇 6. 6%(w/w)_ 正辛烷 0. 5% (w/w) -25mmol/L BMIM-BF4 的 IL-MEEKC 緩沖液。用 5mmol/L 氫氧化鈉和磷酸調(diào)節(jié)pH為2. 2。超聲30min即得不同濃度的透明穩(wěn)定的微乳溶液。c.利用濃度為120mmol/L NaH2PO4母液，配制磷酸二氫鈉濃度分別為10mmol/L、15mmol/L、20mmol/L 和 30mmol/L 的 SDS 質(zhì)量比 2. 4% -正丁醇 6. 6% (w/w)-正辛燒 0. 5%(w/w) -25mmol/L BMIM-BF4的IL-MEEKC緩沖液。用5mmol/L氫氧化鈉和磷酸調(diào)節(jié)pH為2. 2。超聲30min即得不同濃度的透明穩(wěn)定的微乳溶液。d.利用濃度為 120mmol/L NaH2PO4 和 IOOmmo I/L BMIM-BF4 母液，配制 BMM-BF4 分別為 10mmol /I,、15mmol/L、25mmol/L、35mmol/L 和 SOmmoI /I,的 SDS 質(zhì)量比 2. 4 -正丁醇6.6% (w/w)_正辛烷0.5% (w/w)-20mmol/L磷酸二氫鈉緩沖液的IL-MEEKC緩沖液。用5mmol/L氫氧化鈉和磷酸調(diào)節(jié)pH為2. 2。超聲30min即得不同濃度的透明穩(wěn)定的微乳溶液。(2)標(biāo)準(zhǔn)品的配制精密稱取氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松各14. Omg, 17. Omg, 16. Omg,置10. OOmL容量瓶中，加甲醇超聲溶解后，冷卻至室溫，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻后即得。避光4°C保存。使用時根據(jù)需要稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。運(yùn)行電壓_20kV，檢測波長250nm。(3) MEEKC法分離分析氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松將步驟(2)中的氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行微乳毛細(xì)管電動色譜法分析，在進(jìn)樣壓力為3kPa，進(jìn)樣時間15s、檢測波長250nm，檢測溫度為20°C條件下，在 SDS 的質(zhì)量比為 6.6%，3.3%，3.0%，2.8%，2.4% 的 15mmol/L 磷酸二氫鈉(pH =
2.2)-正丁醇6. 6% (w/w)_正辛烷0. 5% (w/w)的MEEKC緩沖液之間調(diào)節(jié)SDS的質(zhì)量比，在反向15-20kV之間調(diào)節(jié)分離電壓。綜合峰形對稱、分離度好、重現(xiàn)性好等檢測條件為最佳檢測條件，發(fā)現(xiàn)用經(jīng)典的微乳體系無法使這三個結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)很好地實(shí)現(xiàn)分離。(4) IL-MEEKC法分離分析氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松
將步驟(2)中的氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行離子液體微乳毛細(xì)管電動色譜檢測，檢測波長250nm，檢測電壓_20kV，檢測溫度為20°C，在SDS的質(zhì)量比為6. 6%-2. 4%之間的15mmol/L磷酸二氫鈉(pH = 2. 2)-正丁醇6. 6 % (w/w)-正辛烷0. 5% (w/w)-25mmol/L BMIM-BF4的IL-MEEKC緩沖液之間調(diào)節(jié)SDS的質(zhì)量比，在磷酸二氫鈉濃度分別為10mmol/L-30mmol/L之間的SDS質(zhì)量比2. 4% -正丁醇6. 6% (w/w)-正辛烷0.5% (w/w)-25mmol/LIL-MEEKC運(yùn)行緩沖液中調(diào)節(jié)磷酸二氫鈉的濃度，在BMM-BF4 濃度為 10mmol/L-50mm ol/L 之間的 SDS 質(zhì)量比 2. 4% -正丁醇 6. 6% (w/w)_ 正辛烷0. 5% (w/w)-20mmol/L磷酸二氫鈉的IL-MEEKC緩沖液中調(diào)節(jié)BMM-BF4濃度，在反向電壓15-25kV之間調(diào)節(jié)分離電壓。根據(jù)峰形對稱、分離度高、分析時間短、重現(xiàn)性好等條件選擇了最佳檢測條件微乳液的組成為SDS 2. 4% (w/w)，正丁醇6. 6% (w/w)，正辛烷0. 5%(w/w),35mmol/L 1_甲基_3_正丁基四氟化硼(BMM-BF4)，20mmo I/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH= 2.2)。進(jìn)樣壓力為3kPa，進(jìn)樣時間15s，運(yùn)行電壓-20kV(檢測端位于正電壓一端)，運(yùn)行溫度20°C，檢測波長250nm。2)氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)品的微乳毛細(xì)管電動色譜同時分離檢測將氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別在在最佳MEEKC條件和IL-MEEKC條件下進(jìn)行分離分析，電泳譜圖分別如圖I、圖2所示。3)校正曲線的制定將氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)品溶液分別稀釋為400i! g/mL、200 u g/mL、100 u g/mL、25 u g/mL、10 u g/mL、5 u g/mL、2 u g/mL 的氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)。在最佳檢測條件下，對上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析。以分析物濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制校正曲線，獲得校正曲線方程、線性相關(guān)系數(shù)，線性范圍和檢測下限如表I所示。表I三種糖皮質(zhì)激素的線性范圍和檢出限。表I氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松的線性范圍和檢出限
mmEEmi線性方程相關(guān)系數(shù)檢出限
AnalyteLinear range (ng/mL) Regression equationR2LOD(S/N=3)
____(Hg/mL)
L0Q42」 麗百麗'^5j0400 ——099709
潑尼松5.0-400y = 3.38xl03* -0.810.9990.9
醋酸氫化可的松5.0-800y =1.26x10^+ 1.210.9981.24)重現(xiàn)性實(shí)驗在最佳檢測條件下，考察重現(xiàn)性分別吸取濃度為IOii g/mL、50 ii g/mL、IOOii g/mL的氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松在一天內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣測定5次，記錄遷移時間和峰面積，考察日內(nèi)精密度。再將上述三份濃度每天進(jìn)行檢測，連續(xù)檢測5天，記錄遷移時間和峰面積，考察日間精密度。氫化可的松，醋酸氫化可的松的遷移時間和峰面積的日內(nèi)精密度在3. 1% 4. 4%和2. 4% 3. 6%之間，曰間精密度分別為4. 1% 5. 4%和3. 1% 4. 8%之間。5)實(shí)際樣品檢測加標(biāo)樣品提取液的制備稱取2. OOOg不同品牌的化妝品乳液、霜劑、爽膚水和洗面奶，加入25. OOmL甲醇，超聲助溶30min，過濾定容于50. OOmL。所有溶液進(jìn)入毛細(xì)管前均經(jīng)過0. 45 i! m過濾膜過濾，經(jīng)超聲脫氣后使用。得到空白樣品提取液。取空白提取液2mL，將氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)品加入到空白溶液中，分別配制成濃度為20 y g/mL>60 u g/mL的加標(biāo)樣品提取液。根據(jù)電泳圖譜和步驟3)所得的校正曲線方程，計算得到回收率和RSD見表2。按上述優(yōu)化實(shí)驗方法對某品牌化妝品中的乳液、霜劑、爽膚水和洗面奶進(jìn)行測定，平行測定3次。按照實(shí)驗方法進(jìn)行回收率實(shí)驗(見表2)，每個添加水平平行測試3次，結(jié)果可知，三個物質(zhì)的回收率在91 % 105 %之間，其RSD均小于4. 3 %，說明建立的方法具有良好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。表2回收率實(shí)驗結(jié)果
~加.標(biāo)量回收率相對標(biāo)準(zhǔn)偏差￥均回收率
AnalyteAddedRecovery */%RSD/%Average
/((ig/mL)(n=3)recovery*/%
一~20~105 _4.3~" 102"
60973.7
潑尼松201024.097
60923.1
醋酸氫化可的松20972.794
60913.6^Recovery = (Found-Background)/AddedX 100%。在實(shí)驗過程中，為保證獲得較高的信號響應(yīng)和較好的檢測重現(xiàn)性，需對毛細(xì)管進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚砻?xì)管在使用時，分別用0. lmol/L HCl、超純水、0. Imol/LNaOH、超純水、運(yùn)行緩沖液沖洗lOmin。兩次MEEKC樣品分析運(yùn)行期間，分別用0. lmol/L NaOH、超純水、運(yùn)行緩沖液沖洗5min，以獲得良好的分離檢測重現(xiàn)性。
權(quán)利要求
1.一種以離子液體作為添加劑的反向微乳毛細(xì)管電動色譜同時分析化妝品中的三種糖皮質(zhì)激素的方法， 其特征在于包括如下步驟 (1)準(zhǔn)確稱取氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松各14.Omg, 17. Omg, 16. Omg,置于.10.OOmL容量瓶中，加甲醇超聲溶解后，冷卻至室溫，再加甲醇稀釋至刻度，搖勻后即得。避光4°C保存。制成待測標(biāo)準(zhǔn)品混合液，使用時根據(jù)需要稀釋成不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)液。在普通MEEKC和IL-MEEKC模式下，在最佳檢測條件下，對氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行毛細(xì)管電泳分析。得到標(biāo)準(zhǔn)譜圖。
(2)采用IL-MEEKC方法在最佳檢測條件下，對樣品的空白提取液和加標(biāo)提取液進(jìn)行分析。
(3)根據(jù)氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松的校正曲線方程，計算出步驟(2)中不同加標(biāo)樣品中氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松的回收率。
所述最佳檢測條件為 微乳液的組成為=SDS 2.4% ( / )，正丁醇6.6% (w/w)，正辛烷 0. 5% (w/w), 35mmol/L I-甲基-3-正丁基四氟化硼(BMM-BF4)，20mmol/L磷酸二氫鈉緩沖液(pH = 2. 2)。進(jìn)樣壓力為3kPa，進(jìn)樣時間15s，運(yùn)行電壓_20kV(檢測端位于正電壓一端)，運(yùn)行溫度20°C，檢測波長250nm。
根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種同時分離分析化妝品中的氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松的方法，其特征在于步驟(2)化妝品中的氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松的樣品預(yù)處理過程按照以下步驟進(jìn)行稱取2. OOOg不同品牌的化妝品乳液、霜劑、爽膚水和洗面奶，加入25. OOmL甲醇，超聲助溶30min，過濾定容于50. OOmL。所有溶液進(jìn)入毛細(xì)管前均經(jīng)過0. 45 y m過濾膜過濾，經(jīng)超聲脫氣后使用，得到空白樣品提取液。取空白提取液.2mL,將氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松標(biāo)準(zhǔn)品加入到空白溶液中，分別配制成濃度為..20 u g/mL、60 u g/mL的加標(biāo)樣品提取液。
根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種以離子液體作為添加劑的反向微乳毛細(xì)管電動色譜同時分析化妝品中的三種糖皮質(zhì)激素(醋酸氫化可的松，潑尼松)的方法，其特征在于對毛細(xì)管進(jìn)行如下處理 毛細(xì)管在使用時，分別用0. lmol/L HC1、超純水、0. lmol/L NaOH、超純水、運(yùn)行緩沖液沖洗lOmin。兩次MEEKC樣品分析運(yùn)行期間，分別用0. lmol/L NaOH、超純水、運(yùn)行緩沖液沖洗5min，以獲得良好的分離檢測重現(xiàn)性。
根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種以離子液體作為添加劑的反向微乳毛細(xì)管電動色譜同時分析化妝品中的三種糖皮質(zhì)激素(氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松)的方法，其特征在于在最佳的富檢測條件下，氫化可的松，醋酸氫化可的松，潑尼松在9分鐘之內(nèi)能達(dá)到基線分離。遷移時間和峰面積的日內(nèi)精密度在3. I % 4. 4%和2. 4% 3. 6%之間，日間精密度分別為4. 1% 5. 4%和3. 1% 4. 8%之間。檢出限為0.9-1.2iig/mL(S/N = 3)，加標(biāo)加收率在91% 105%之間。
全文摘要
本發(fā)明屬于分析檢測技術(shù)領(lǐng)域，公開了采用以離子液體作為添加劑，在反向電壓下利用微乳毛細(xì)管電動色譜法測定化妝品中糖皮質(zhì)激素(氫化可的松，潑尼松，醋酸氫化可的松)的方法。該方法采用IL-MEEKC對化妝品的提取液進(jìn)行分析檢測，獲得氫化可的松，潑尼松，醋酸氫化可的松的電泳譜圖，根據(jù)校正曲線方程可以計算出三個物質(zhì)的濃度。本發(fā)明能夠同時分析檢測化妝品中氫化可的松、潑尼松、醋酸氫化可的松的濃度。方法簡單、快速和高效；所用的緩沖液主要是水溶液，無需大量使用有機(jī)溶劑，污染小，環(huán)境友好；所需溶劑和樣品用量小，使用的空心毛細(xì)管柱價格便宜，分析成本低。
文檔編號G01N30/02GK102706971SQ20101057972
公開日2012年10月3日 申請日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者劉瑛, 陳新 申請人:江南大學(xué)