專利名稱：一組特異性多肽及其在制備肺癌早期診斷試劑中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一組特異性多肽，還涉及該組多肽在制備肺癌早期診斷試劑中的用途。
背景技術(shù)：
血清多肽組譜圖(簡稱多肽圖)是指通過質(zhì)譜技術(shù)快速分析獲得的血清中多肽 (蛋白質(zhì))組的精確質(zhì)量數(shù)的譜圖。在譜圖中以精確質(zhì)量數(shù)標(biāo)識的多肽(蛋白質(zhì))峰在必要時可進(jìn)一步通過生物質(zhì)譜分析獲得蛋白質(zhì)序列。血清多肽圖可在數(shù)分鐘時間內(nèi)通過微量血液的生物質(zhì)譜分析獲得，已在惡性腫瘤早期診斷中顯示出了良好前景，預(yù)兆了醫(yī)學(xué)分子診斷領(lǐng)域的一次重要突破，為腫瘤患者早期發(fā)現(xiàn)帶來了福音。血清多肽圖作為一種全新的診斷方法，已經(jīng)取得了令人振奮的進(jìn)展。Petricoin博士等科研人員應(yīng)用血清多肽圖技術(shù)成功地對早期卵巢癌進(jìn)行了診斷。(Emanuel FP, Ardekani AM, Hitt ΒΑ, et al. Use of proteomic patterns in serum to identify ovarian cancer. Lancet 2002 ；359 572-7.)他們利用生物質(zhì)譜技術(shù)分析健康對照組和疾病組血清多肽組的組成模式，并基于這些模式尋找差異點(diǎn)進(jìn)行臨床卵巢癌的檢測。該方法檢測卵巢癌顯著優(yōu)于傳統(tǒng)的CA125檢測，特別是對早期卵巢癌(I期)的診斷也十分成功，提示此項(xiàng)技術(shù)還可望用于卵巢癌的早期或預(yù)警檢測。美國斯坦福大學(xué)的Soltys通過血清多肽組圖譜技術(shù)對鱗狀上皮細(xì)胞癌進(jìn)行診斷(Soltys SG, Le QT, Shi G，et al. The Use of Plasma Surface-Enhanced Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry Proteomic Patterns for Detection of Head and Neck Squamous Cell Cancers. Clinical Cancer Research 2004 ； 10 :4806-4812.) ；2005 年臺灣大學(xué) Cheng AJ 等在 Clinical Chemistry 上發(fā)表了他們利用血清多肽組圖譜技術(shù)對口腔癌進(jìn)行診斷的結(jié)果。此外，JCI.Mollecular&Cellular ftOteomics等雜志最近也發(fā)表了系列的通過血清多肽圖技術(shù)對疾病進(jìn)行診斷的研究結(jié)果 (Villanueva J, Shaffer DR, Philip J, et al. Differential exoprotease activities confer tumor-specific serum peptidome patterns. J Clin Invest 2006 ；116 :271-284. Villanueva J, Martorella AJ, Lawlor K, et al. Serum peptidome patterns that distinguish metastatic thyroid carcinoma from cancer-free controls are unbiased by gender and age. Mol Cell Proteomics 2006;5:1840-1852·)。以上表明，利用多肽圖技術(shù)對臨床上一些重大和疑難疾病進(jìn)行診斷已經(jīng)初露曙光，前景廣闊。但是多肽圖技術(shù)作為腫瘤診斷工具，在技術(shù)上還存在瓶頸。概括起來有兩方面第一，血清多肽組快速分離和制備技術(shù)。它需要滿足快速性、有效性、穩(wěn)定性、標(biāo)準(zhǔn)化和通量化，才能真正符合未來臨床診斷的需要；第二，多肽圖中疾病特征峰的識別、鑒定和模型建立。它不同于單個疾病標(biāo)志物的應(yīng)用，而是數(shù)十甚至逾百個血清多肽的不斷組合的變化。這樣復(fù)雜的改變必須依靠生物信息學(xué)工具的應(yīng)用，才可能識別出各種復(fù)雜疾病特征性的多肽組變化模式。在此基礎(chǔ)上，才能獲得標(biāo)準(zhǔn)化的多肽圖疾病診斷模型，用于臨床診斷和鑒別診斷，以及重大疾病的臨床前預(yù)警。
與其它技術(shù)比較癌癥的早期發(fā)現(xiàn)對于其治療和控制至關(guān)重要。目前如CT、核磁共振、腫瘤特異性抗原檢測等診斷方法在臨床上還未能達(dá)到惡性腫瘤早期發(fā)現(xiàn)所需的靈敏度。高通量的基因組技術(shù)可以快速篩查癌細(xì)胞中的基因改變，如DNA芯片技術(shù)實(shí)現(xiàn)了在全基因組水平分析檢測癌變過程中基因的異?；罨蚋淖儭５恍┡c腫瘤發(fā)生發(fā)展相關(guān)的改變可能與基因水平異常無關(guān)，而與基因表達(dá)產(chǎn)物——蛋白質(zhì)的改變直接相關(guān)。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)廣泛用于在體液中單個、特異性已知的標(biāo)志物的檢測，但在臨床上應(yīng)用還依賴于新的標(biāo)志物發(fā)現(xiàn)。血清多肽組技術(shù)使用復(fù)合的標(biāo)志物較單個標(biāo)志物更為可靠和有效，而且所反映的不僅僅是傳統(tǒng)概念上的腫瘤標(biāo)志物。多肽組的疾病相關(guān)改變，可能是蛋白質(zhì)過量表達(dá)和蛋白質(zhì)異常表達(dá)在血清中的反映，也可能是在疾病狀態(tài)下機(jī)體整體機(jī)能反應(yīng)的體現(xiàn)，而且隨著疾病的發(fā)生和發(fā)展被修飾或移除。通過質(zhì)譜分析獲得的多肽圖需要數(shù)字化并經(jīng)成熟的生物信息學(xué)分析工具進(jìn)行診斷，可與一個細(xì)胞或一個組織或一個機(jī)體在“正?！睏l件下的參考圖譜進(jìn)行比較，從而鑒別疾病樣本的血清多肽組圖譜。腫瘤是威脅人類健康的第一大殺手，而且發(fā)病年齡越來越提前。大多數(shù)腫瘤患者在發(fā)現(xiàn)時多已處于晚期，因此早期診斷顯得十分重要，對患者的愈后與生存意義重大，理論和現(xiàn)實(shí)意義明顯。血清多肽圖技術(shù)在癌癥早期診斷中已經(jīng)顯示的價值超過了傳統(tǒng)的標(biāo)志物檢測，在腫瘤早期診斷方面?zhèn)鞒隽肆钊苏駣^的信息，給相對沉寂的腫瘤診斷領(lǐng)域帶來了可以寄托的希望。到目前為止，尚未見到血清多肽圖技術(shù)用于肺癌早期診斷的報道。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決肺癌早期診斷的問題，本發(fā)明公開了一組特異性多肽，其氨基酸序列如序列表中的序列1- 所示，各多肽的氨基酸序列及分子量M/Z如下表所示。
權(quán)利要求
1. 一組特異性多肽，其特征在于各多肽的氨基酸序列如下所示序列表中序列號氨基酸序列M/Z序列1VETRTIVRFNRPFLMUVPTDTQNrFFMSKVTNPKQA4355.17序列2LVETRTIVRFNRPFLMIIVPTDTQNIFFMSKVTNPKQA4468.33序列3SALVETRTIVRFNRPFLMIIVPTDTQNIFFMSKVTNPKQA4626.48序列4AELQEGARQKLHELQEKLSPLGEEM(CH3)RDRA3378.77序列5GNTEGLQKSLAELGGHLDQQVEEFR2756.98序列6RNGFKSHALQLNNRQI1897.14序列7DDPDAPLQPVTPLQLFEGRRN2379.63序列8GLEEELQFSLGSKINVKVGGNS2306.57序列9PITVTVP VEVSRKNPKFMETVAEKALQEYRKKHREE4269.95序列10AVPPNNSNAAEDDLPTVELQGVVPR2603.84序歹丨J 11SSSYSKQFTSSTSYNRGDSTFESKSY (CH3)2948.02序列12SSSYSKQFTSSTSYNRGDSTFESKSYKMADEAGSEADH GTHSTK4786.97序列13SSSYSKQFTSSTSYNRGDSTFESKSYKMADEAGSEADH5904.23EGTHSTKRGHAKSRPV序列14DEAGSEADHEGTHSTKRGHA2093.08序列15DEAGSEADHEGTHSTKRGHAKSRP2561.64序列16DSGEGDFLAEGGGVR1537.58序列17ADSGEGDFLAEGGGVR1466.50序列18NLGHGHKHERDQGHGHQ1945.02序列19KHNLGHGHKHERDQGHGHQ2210.34序列20HRIHWESASLL1349.53序列21THRIHWESASLL1450.63序列22SKITHRIHWESASLL1779.04序列23GHGLGHGHEQQHGLGHGHKF2128.27序列24SRQLGLPGPPDVPDHAAYHPF2272.52序列SSRQLGLPGPPDVPDHAAYHPF2359.60序列26PGVLSSRQLGLPGPPDVPDHAAYHPF2726.06序列27MNFRPGVLSSRQLGLPGPPDVPDHAAYHPF3274.73序列28SARLNSQRLVFNRPFLMFIVDNNILFLGKVNRP3891.62序列29PNHFRPAGLPEKY1526.73
2.權(quán)利要求1所述特異性多肽在制備肺癌早期診斷試劑中的用途。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述用途，其特征在于利用權(quán)利要求1所述特異性多肽建立腫瘤血清多肽圖數(shù)據(jù)庫，確定正常組與腫瘤之間的差異表達(dá)多肽組，建立診斷模型。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述用途，其中診斷模型的診斷準(zhǔn)確率在90%以上。
全文摘要
本發(fā)明公開了一組特異性多肽，多肽的氨基酸序列如序列表中序列1-29所示，還公開了上述特異性多肽在制備肺癌早期診斷試劑中的用途。本發(fā)明的特異性多肽是通過血清多肽圖結(jié)合生物信息學(xué)軟件進(jìn)行比較分析、識別差異表達(dá)的多肽，進(jìn)而應(yīng)用質(zhì)譜分析鑒定的。利用本發(fā)明公開的特異性多肽，可以制備肺癌早期診斷試劑，具有廣闊的應(yīng)用前景。
文檔編號G01N33/50GK102558329SQ201010581548
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月10日
發(fā)明者何昆, 張學(xué)敏, 李愛玲, 王娜, 王杰 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物醫(yī)學(xué)分析中心