專利名稱：清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥檢測技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測的方法。
背景技術(shù)：
慢性支氣管炎是一種常見的慢性非特異性呼吸系統(tǒng)疾病，主要臨床特征為反復(fù)發(fā)作的咳嗽、咳痰或伴有喘息。慢支發(fā)病率高，多見于4 0歲以上的中老年人，病情反復(fù)，可 并發(fā)阻塞性肺氣腫，甚至肺動脈高壓、肺原性心臟病，嚴(yán)重影響患者的勞動能力和生活質(zhì) 量。該病在正常人群中的發(fā)病率4%，50歲以上的發(fā)病率則可升高為16%，年齡越大， 發(fā)病率越高，嚴(yán)重危害人們的健康。西醫(yī)治療慢支主要是選用地塞米松、慶大霉素、糜蛋白酶、肝素等超聲霧化， 注射抗生素稀釋痰液，但是長期使用有可能出現(xiàn)呼吸道出血，腎功能損害等不良反應(yīng)。 對于慢性支氣管炎的防治，歷來為中醫(yī)藥界較為重視的研究課題。中醫(yī)辨證認為慢支主要是久咳不已，反復(fù)發(fā)作，導(dǎo)致肺、脾、腎三臟功能失 調(diào)所致。急性發(fā)作期以痰熱證為主，慢性遷延期以痰濕證為多。清肺止咳平喘口服液的處方為
麻黃135g石膏405g桑葉135g苦杏仁135g甘草90g 輔料蔗糖200g;苯甲酸3g;枸櫞酸適量。清肺止咳平喘平喘口服液處方由傳統(tǒng)著名方劑麻杏石甘湯加減而成，麻杏石甘 湯具有配伍嚴(yán)謹、藥味精練的特點，其主要功效為辛涼宣泄、清肺平喘。主治中醫(yī)太陽 病。太陽病是外感病的初期階段證候，癥狀表現(xiàn)于自頭部頂背及全身肌表，由于風(fēng)寒之 邪外襲、營衛(wèi)失和、經(jīng)氣不利、陽氣抗邪于表，從而病邪侵襲反肺，肺氣失宣、肺衛(wèi)功 能失調(diào)，導(dǎo)致惡寒發(fā)熱、煩躁口咳、喘促氣逆、咳嗽痰盛。清肺止咳平喘口服液在麻杏石甘湯組方的基礎(chǔ)上，增加桑葉。其選藥組方要點 概述如下本方主治病癥是由風(fēng)熱襲肺、或風(fēng)寒郁而化熱、壅遏于肺所致。肺中熱盛、 氣逆津傷，所以有汗而身熱不解、喘逆氣急、口渴喜飲、脈滑而數(shù)，方用麻黃為君，能 宣肺而泄邪熱，是“火郁發(fā)之”之義，但其性溫，故配伍辛大寒之石膏為臣藥，用量倍 于麻黃，使宣肺而不助熱，清肺而不留邪，肺氣肅降有權(quán)、喘急可平，是相知為用。桑 葉疏散風(fēng)熱、清肺潤燥，以助解表宣肺之力，與石膏同為臣藥。杏仁降肺氣，而平喘 咳，用為佐藥，助麻黃、石膏、桑葉清肺平喘。甘草既能益氣和中，又與石膏合而生津 治咳，更能調(diào)和于寒溫宣降之間，所以為佐、使藥。綜觀全方，配伍嚴(yán)謹、相互為用， 達到宣肺清熱、平喘止咳之功效，從而該藥主治功用確切肯定。清肺止咳平喘口服液用于治療慢性支氣管炎急性發(fā)作(風(fēng)邪化熱壅肺證)，我 們進行了以先聲咳喘寧口服液為陽性對照的清肺止咳平喘口服液用于治療慢性支氣管炎 急性發(fā)作(風(fēng)邪化熱壅肺癥)的II期、III期臨床試驗。II期臨床試驗結(jié)果表明以先聲 咳喘寧口服液為陽性對照組，清肺止咳平喘口服液為試驗組，兩組治療前后各訪視點氣 管炎癥狀體征積分和中醫(yī)癥候積分均明顯下降，兩組差別比較無統(tǒng)計學(xué)意義。各癥狀評 分治療后均明顯下降，但各癥狀評分下降值兩組差別比較均無統(tǒng)計學(xué)意義。III期臨床試驗結(jié)果表明先聲咳喘寧口服液為陽性對照組，以清肺止咳平喘口服液為試驗組，兩組 治療后各訪視點氣管炎癥狀體征積分和中醫(yī)證候積分均明顯下降，第3天和第5天試驗組 下降程度優(yōu)于對照組，兩組所有癥狀治療后均明顯改善，其中，對咳嗽、咯痰、喘息、 干啰音4個癥狀的改善在第3天和第5天試驗組均不同程度地優(yōu)于對照組。通過對不良 事件分析，本次試驗無不良事件發(fā)生。本結(jié)果表明試驗藥物安全性良好。因此，清肺止咳平喘口服液治療慢性支氣管炎療效確切，安全性良好?？梢员?免慢性支氣管炎急性發(fā)作期使用廣譜抗生素，易導(dǎo)致二重感染或產(chǎn)生耐藥菌株；避免應(yīng) 用強的鎮(zhèn)咳劑，如可待因等。以免抑制中樞及加重呼吸道阻塞和炎癥，導(dǎo)致病情惡化等。中藥制劑成分復(fù)雜，藥效成分的鑒別、含量檢測方法的建立是新藥研發(fā)的重要 工作，是制劑質(zhì)量控制的關(guān)鍵內(nèi)容，在檢測手段上從傳統(tǒng)的光度法、滴定法、理化鑒別 法轉(zhuǎn)變?yōu)楝F(xiàn)在的薄層色譜法、氣相色譜法、液相色譜法、指紋圖譜法等。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法。本發(fā)明的目的按照下述方案實現(xiàn)
清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法，包括有效成分含量檢測和主要成份鑒別檢測， 其中有效成分檢測以鹽酸麻黃堿含量為指標(biāo)，成分鑒別選擇麻黃、桑葉、甘草為檢測對 象；
所述有效成分含量檢測采用高效液相色譜法測定制劑中鹽酸麻黃堿含量，其色譜條 件為以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液5: 95為流動相；檢 測波長為207nm，理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應(yīng)不低于3000 ；
有效成分含量檢測對照品溶液的制備方法為精密稱取鹽酸麻黃堿對照品15mg， 置50ml量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置50ml量瓶中，用水 稀釋至刻度，搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加入0.25g/10ml高碘酸溶液lml、 0.25mol/L氫氧化鈉溶液2.5ml，搖勻，放置30分鐘，用0.5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至 7,加流動相至刻度，搖勻，即得；
有效成分含量檢測供試品溶液的制備方法精密量取口服液10ml，加5mol/L氫氧化 鈉溶液120ml，搖勻，加氯化鈉7.5g，超聲處理30分鐘，靜置冷卻，再加入水50ml，蒸 餾，用預(yù)先盛有0.5mol/L鹽酸溶液5ml的IOOml量瓶收集蒸餾液近95ml，加水至刻度， 搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加入0.25g/10ml高碘酸溶液lml、0.25mol/L氫氧 化鈉溶液2.5ml，搖勻，放置30分鐘，用0.5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7，加流動相至 刻度，搖勻，即得；
成分鑒別采用薄層色譜法，先制備樣品溶液和對照藥材溶液，兩種溶液分別點于同 一硅膠G薄層板上，比對顯色情況；
所述麻黃藥效成分的鑒別方法為取口服液5ml，加濃氨溶液0.5ml，再加乙醚40ml 超聲提取30分鐘，取乙醚層，60°C水浴揮干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶 液；取麻黃對照藥材1.5g，同法制成對照藥材溶液；另取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲 醇制成每Iml含1.5mg的溶液，作為對照品溶液，吸取上述三種溶液各6μ1，分別點于同 一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以 茚三酮試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在 與對照藥材，對照品色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的斑點，則制劑中麻黃藥效成分 麻黃堿存在。所述甘草藥效成分的鑒別方法為取口服液5ml，加乙酸乙酯振搖提取2次，合 并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液，另取甘草對照藥 材lg，加乙醇回流30分鐘提取2次，每次30ml，合并乙醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇 5ml使溶解，作為對照藥材溶液，吸取供試品溶液，對照藥材溶液各5μ1，分別點于同一 用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸_水為展開劑， 展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜 中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的斑點，則制劑中甘草藥效成分甘 草酸存在。所述桑葉成分的鑒別方法為取口服液5ml，加乙酸乙酯振搖提取2次，合并 乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取桑葉對照藥材 2g，用乙醇回流提取2次，每次30 ml、30分鐘，合并乙醇液，水浴蒸干，殘渣加甲醇 5ml使溶解，作為對照藥材溶液；吸取上述兩種溶液各7.5ul，分別點于同一硅膠G薄層 板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸的上層溶液為展開劑，展開、取出、晾干，噴以1%三氯 化鋁乙醇溶液，在紫外燈(365nm)下觀察，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的 位置上，如顯相同顏色的熒光斑點，則制劑中桑葉藥效成分存在。本發(fā)明通過試驗研究建立了薄層色譜法和高效液相色譜法測定制劑的藥效成 分，實現(xiàn)了對新藥制劑清肺止咳平喘口服液的定性及定量的產(chǎn)品檢測，確保藥效成分的 穩(wěn)定性，并有利于生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。為患者提供安全、有效的治療呼吸系統(tǒng)疾病的 藥物提供保障。本發(fā)明的特點主要是通過對色譜條件的優(yōu)選、供試品、對照品制備方法的試 驗，建立了制劑中主要藥效成分鹽酸麻黃堿含量的高效液相色譜分析方法，通過方法學(xué) 試驗研究表明準(zhǔn)確度試驗的平均回收率為97.75%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD:2.28% ；精密 度試驗的RSD:0.78%;線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)Y=0.9999;專屬性試驗考察無陰性干 擾。試驗證明所建立的方法準(zhǔn)確度高、專屬性強、重現(xiàn)性良好，可以有效的控制最終制 劑產(chǎn)品質(zhì)量。
具體實施例方式
制劑中主要藥效成分鹽酸麻黃堿含量測定采用高效液相色譜法，以十八烷基硅烷 鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液(5: 95)為流動相；檢測波長為207nm。 理論板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應(yīng)不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取鹽酸麻黃堿對照品15mg，置50ml量瓶中，用水溶 解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，精密 量取5ml，置25ml量瓶中，加入高碘酸溶液(0.25g— 10ml) 1ml、0.25mol/L氫氧化鈉 溶液2.5ml，搖勻，放置30分鐘，用0.5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7，加流動相至刻 度，搖勻，即得(每Iml含鹽酸麻黃堿12昭)。供試品溶液的制備精密量取本品10ml，力卩5mol/L氫氧化鈉溶液120ml，搖 勻，加氯化鈉7.5g，超聲處理(功率120W,頻率40kHz) 30分鐘，靜置冷卻，再加入水50ml，蒸餾，用預(yù)先盛有0.5mol/L鹽酸溶液5ml的100ml量瓶收集蒸餾液近95ml，力口 水至刻度，搖勻。精密量取5ml，置25ml量瓶中，照對照品溶液的制備項下的方法，自 “加入高碘酸溶液”起，至“加流動相至刻度”，依法操作，搖勻，濾過，取續(xù)濾液， 即得。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μ1，注入液相色譜儀，測定。本發(fā) 明每IOml含麻黃以鹽酸麻黃堿(C1QH15N0.HC1)計，不得少于0.50mg。成分鑒別 1、麻黃鑒別取本品5ml，加濃氨溶液0.5ml，再加乙醚40ml超聲提取(功率120W, 頻率40kHz) 30分鐘，取乙醚層，60°C水浴揮干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶 液。取麻黃對照藥材1.5g，同法制成對照藥材溶液。另取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲 醇制成每Iml含1.5mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述三種溶液各6μ1，分別點于同 一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20: 5: 0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰， 供試品色譜中，在與對照藥材，對照品色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的斑點，則制 劑中麻黃藥效成分麻黃堿存在。2、甘草鑒別取本品5ml，加乙酸乙酯振搖提取2次(30ml，30ml)，合并 乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草對照藥材 Ig,加乙醇回流30分鐘提取2次，每次30ml，合并乙醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇5ml 使溶解，作為對照藥材溶液。吸取供試品溶液，對照藥材溶液各5μ1，分別點于同一用 1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15: 1: 1: 2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清 晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的斑點，則制劑中 甘草藥效成分甘草酸存在。3、桑葉鑒別取本品5ml，加乙酸乙酯振搖提取2次(30ml，30ml)，合并 乙酸乙酯提取液，蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取桑葉對照藥材 2g，用乙醇回流提取2次，每次30 ml、30分鐘，合并乙醇液，水浴蒸干，殘渣加甲醇 5ml使溶解，作為對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各7.5ul，分別點于同一硅膠G薄層 板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)的上層溶液為展開劑，展開、取出、晾干， 噴以1%三氯化鋁乙醇溶液，在紫外燈(365nm)下觀察。供試品色譜中，在與對照藥 材色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的熒光斑點，則制劑中桑葉藥效成分存在。
權(quán)利要求
1.清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法，包括有效成分含量檢測和主要成份鑒別檢 測，其中有效成分檢測以鹽酸麻黃堿含量為指標(biāo)，成分鑒別選擇麻黃、桑葉、甘草為檢 測對象。
2.如權(quán)利要求1所述的清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法，其特征在于有效成分含量 檢測采用高效液相色譜法測定制劑中鹽酸麻黃堿含量，其色譜條件為以十八烷基硅烷 鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸溶液5 : 95為流動相；檢測波長為207nm，理論 板數(shù)按鹽酸麻黃堿峰計算應(yīng)不低于3000。
3.如權(quán)利要求1或2所述的清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法，其特征在于有效成 分含量檢測對照品溶液的制備方法為精密稱取鹽酸麻黃堿對照品15mg，置50ml量瓶 中，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取10ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度， 搖勻，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加入0.25g/10ml高碘酸溶液lml、0.25mol/L氫氧 化鈉溶液2.5ml，搖勻，放置30分鐘，用0.5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7，加流動相至 刻度，搖勻，即得。
4.如權(quán)利要求1或2所述的清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法，其特征在于有效成 分含量檢測供試品溶液的制備方法精密量取口服液10ml，加5mol/L氫氧化鈉溶液 120ml，搖勻，加氯化鈉7.5g，超聲處理30分鐘，靜置冷卻，再加入水50ml，蒸餾，用 預(yù)先盛有0.5mol/L鹽酸溶液5ml的IOOml量瓶收集蒸餾液近95ml，加水至刻度，搖勻， 精密量取5ml，置25ml量瓶中，加入0.25g/10ml高碘酸溶液lml、0.25mol/L氫氧化鈉溶 液2.5ml，搖勻，放置30分鐘，用0.5mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至7，加流動相至刻度， 搖勻，即得。
5.如權(quán)利要求1所述的清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法，其特征在于成分鑒別采 用薄層色譜法，先制備樣品溶液和對照藥材溶液，兩種溶液分別點于同一硅膠G薄層板 上，比對顯色情況。
6.如權(quán)利要求5所述的清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法，其特征在于麻黃藥效成 分的鑒別方法為取口服液5ml，加濃氨溶液0.5ml，再加乙醚40ml超聲提取30分鐘， 取乙醚層，60°C水浴揮干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；取麻黃對照藥材 1.5g，同法制成對照藥材溶液；另取鹽酸麻黃堿對照品適量，加甲醇制成每Iml含1.5mg 的溶液，作為對照品溶液，吸取上述三種溶液各6μ1，分別點于同一羧甲基纖維素鈉為黏 合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾干，噴 以茚三酮試液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材，對照品色 譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的斑點，則制劑中麻黃藥效成分麻黃堿存在。
7.如權(quán)利要求5所述的清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法，其特征在于甘草藥效成分 的鑒別方法為取口服液5ml，加乙酸乙酯振搖提取2次，合并乙酸乙酯提取液，蒸干， 殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液，另取甘草對照藥材lg，加乙醇回流30分鐘提 取2次，每次30ml，合并乙醇提取液，蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為對照藥材溶 液，吸取供試品溶液，對照藥材溶液各5μ1，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅 膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸_水為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10% 硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的 位置上，如顯相同顏色的斑點，則制劑中甘草藥效成分甘草酸存在。
8.如權(quán)利要求5所述的清肺止咳平喘口服液質(zhì)量檢測方法，其特征在于桑葉成分的鑒別方法為取口服液5ml，加乙酸乙酯振搖提取2次，合并乙酸乙酯提取液，蒸干，殘 渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取桑葉對照藥材2g，用乙醇回流提取2次， 每次30 ml、30分鐘，合并乙醇液，水浴蒸干，殘渣加甲醇5ml使溶解，作為對照藥材溶 液；吸取上述兩種溶液各7.5ul，分別點于同一硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲 酸的上層溶液為展開劑，展開、取出、晾干，噴以1 %三氯化鋁乙醇溶液，在紫外燈 (365nm)下觀察，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，如顯相同顏色的 熒光斑點，則制劑中桑葉藥效成分存在。
全文摘要
本發(fā)明是一種清肺止咳平喘口服液的質(zhì)量檢測方法，通過對色譜條件的優(yōu)選及供試品、對照品制備方法的試驗，建立了制劑中主要藥效成分鹽酸麻黃堿含量的高效液相色譜分析方法；通過對色譜分離系統(tǒng)的優(yōu)化，展開劑配比的調(diào)整、硅膠板及顯色劑、顯色條件的選擇，建立了制劑中麻黃、甘草、桑葉的薄層色譜鑒別方法，通過方法學(xué)試驗研究表明所建立的方法準(zhǔn)確度高、專屬性強、重現(xiàn)性良好，通過對制劑中有效成分的定性鑒別及定量控制，確保藥效成分的穩(wěn)定性，有利于生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/36GK102008573SQ201010582078
公開日2011年4月13日 申請日期2010年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月10日
發(fā)明者冷曉紅, 奇乃, 李小萍, 王春紅, 王景 申請人:寧夏多維藥業(yè)有限公司