專利名稱：一種含有農(nóng)藥殘留的人參樣品測(cè)定前的處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于農(nóng)藥殘留量測(cè)定的技術(shù)領(lǐng)域，涉及中藥人參中農(nóng)藥殘留量的測(cè)定方 法，特別是一種含有有機(jī)磷類及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的人參樣品測(cè)定前的處理方法。
背景技術(shù)：
農(nóng)藥殘留指的是在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中施用農(nóng)藥后一部分農(nóng)藥直接或間接殘存于谷物、蔬 菜、果品、畜產(chǎn)品、水產(chǎn)品中以及土壤和水體中的現(xiàn)象。農(nóng)藥殘留問(wèn)題是隨著農(nóng)藥大量生產(chǎn) 和廣泛使用而產(chǎn)生的。目前使用的農(nóng)藥，有些在較短時(shí)間內(nèi)可以通過(guò)生物降解成為無(wú)害物 質(zhì)，而一些有機(jī)氯類農(nóng)藥卻難以降解，是殘留性強(qiáng)的農(nóng)藥。蔬菜農(nóng)藥殘留超標(biāo)，會(huì)直接危及 人體的神經(jīng)系統(tǒng)和肝、腎等重要器官。同時(shí)殘留農(nóng)藥在人體內(nèi)蓄積，超過(guò)一定量度后會(huì)導(dǎo)致 一些慢性疾病，如肌肉麻木、咳嗽等，甚至?xí)T發(fā)血管疾病、糖尿病和癌癥等。由于農(nóng)藥殘留 對(duì)人類和生物危害很大，各國(guó)對(duì)農(nóng)藥的施用都進(jìn)行嚴(yán)格的管理，并對(duì)食品中農(nóng)藥殘留容許 量作了規(guī)定。在我國(guó)發(fā)生較多的引起農(nóng)藥殘留中毒的農(nóng)藥品種主要是有機(jī)磷農(nóng)藥和氨基甲酸 酯類農(nóng)藥，如氧化樂(lè)果、樂(lè)果、馬拉硫磷、甲胺磷、久效磷、倍硫磷、百克威、抗芽威和西維因 等。這些農(nóng)藥是通過(guò)抑制昆蟲中樞神經(jīng)中的膽堿酯酶使之死亡而發(fā)揮殺蟲作用的。但這些 農(nóng)藥對(duì)人體內(nèi)的膽堿酯酶也有抑制作用，它能阻斷神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞，引起肌肉麻痹造成中 毒。國(guó)家雖明文規(guī)定劇毒、高毒農(nóng)藥不得用于蔬菜、瓜果、茶葉和中草藥材，例如氧化樂(lè)果、 對(duì)硫磷、甲拌磷、甲胺磷、水胺硫磷、呋哺丹等。但某些地區(qū)的菜農(nóng)仍然使用甲胺磷、甲基對(duì) 硫磷等劇毒高毒農(nóng)藥于蔬菜，不時(shí)出現(xiàn)消費(fèi)者因食用含有甲胺磷農(nóng)藥的蔬菜而急性中毒。中醫(yī)藥是我們中華民族的瑰寶，有著幾千年的悠久歷史。我國(guó)現(xiàn)有中藥資源12807 種，其中藥用植物11146種，藥用動(dòng)物1581種，藥用礦物80種，中藥材種植面積近600萬(wàn)畝， 產(chǎn)量超過(guò)35萬(wàn)噸，這些豐富的天然藥用資源為我國(guó)的中藥生產(chǎn)提供了豐富的原材料。然而 在中藥生產(chǎn)中出現(xiàn)的質(zhì)量安全問(wèn)題，制約了我國(guó)中藥的發(fā)展。中藥的質(zhì)量安全直接關(guān)系人 民群眾的日常生活和生命安全，關(guān)系社會(huì)和諧穩(wěn)定。人民群眾要將健康掌握在自己手中，增 強(qiáng)自我保護(hù)意識(shí)。超過(guò)最低限度的重金屬及砷鹽、黃曲霉素、農(nóng)藥殘留、微生物等有毒有害 物質(zhì)，會(huì)對(duì)給人體的免疫系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、骨骼造血功能、血管和消化系統(tǒng)等人體 器官造成巨大的傷害。中藥材作為一種特殊食品為患者及體弱者所服用，服用時(shí)間長(zhǎng)，更易 造成蓄積中毒。人參樣品中含有菊酯類和有機(jī)磷類等多種殘留的農(nóng)藥雜質(zhì)。是否能準(zhǔn)確的檢測(cè)出微量的殘留其關(guān)鍵是樣品的前處理方法，樣品處理的好，可 以減少雜質(zhì)干擾，否則會(huì)造成結(jié)果不準(zhǔn)確，從而造成誤判。本專利所建立的樣品前處理方法 為我單位自行研制的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種含有有機(jī)磷類及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的人參樣品測(cè)定前的 處理方法，主要包括
(1)人參樣品粉碎，過(guò)60-80目篩，60-80°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)精確稱量樣品5g，于250mL燒杯中，加10_15mL水，靜置10-20分鐘，將樣品充 分潤(rùn)濕后，加入20-30mL乙腈，10-20mL水，20000轉(zhuǎn)/min高速組織勻漿，2_5min，乙腈洗殘 渣，抽濾；(3)上述濾液轉(zhuǎn)到分液漏斗中，加氯化鈉8-10g，振蕩3-5分鐘后靜置10_20分鐘； 上層乙腈層過(guò)無(wú)水硫酸鈉，減壓濃縮，濃縮后定容至4mL，其中2mL轉(zhuǎn)入進(jìn)樣小瓶后，直接用 于測(cè)定有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)；(4)剩下2mL轉(zhuǎn)入預(yù)處理弗羅里硅土柱中，采用體積比95/5的正己烷/乙酸乙酯 20mL洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至干后正己烷定容2mL。采用超高效液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián) 用儀測(cè)定農(nóng)產(chǎn)品中稀禾啶殘留量殘留量。本發(fā)明所述的預(yù)處理小柱是指IOOOmg弗羅里硅土柱使用前用正己烷/乙酸乙酯 (95/5，v/v) 5ml預(yù)淋，pH = 7. 5的食鹽飽和2mol/L磷酸緩沖溶液沖洗。本發(fā)明人在進(jìn)行中藥中多殘留的固相萃取凈化效果研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，對(duì)于有機(jī)磷類農(nóng) 藥在進(jìn)行FPD檢測(cè)時(shí)，由于FPD檢測(cè)器選擇性強(qiáng)，雜質(zhì)干擾少，我們采用一次浸提，過(guò)濾后直 接測(cè)定對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、樂(lè)果、氧化樂(lè)果、甲胺磷、久效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺 撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷等12種有機(jī)磷農(nóng)藥(2010版藥典規(guī)定檢測(cè)的農(nóng)藥)，可以達(dá)到較 好的檢測(cè)結(jié)果。然后再吸取提取液采用弗羅里硅土柱(IOOOmg)過(guò)柱后對(duì)雜質(zhì)的凈化效果 可以更好，可繼續(xù)采用ECD對(duì)2010版藥典規(guī)定農(nóng)藥氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯等3種菊 酯類農(nóng)藥進(jìn)行測(cè)定。本發(fā)明通過(guò)人參農(nóng)藥殘留樣品的前處理方法，將人參中有機(jī)磷類和菊酯類農(nóng)藥殘 留樣添加回收率研究，采用氣相色譜法，建立簡(jiǎn)捷可行的人參中有機(jī)磷類和菊酯類農(nóng)藥殘 留量分析方法。本發(fā)明更加詳細(xì)的測(cè)定方法如下1實(shí)驗(yàn)部分1.1試劑與材料農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)樣品(純度均> 95% )對(duì)硫磷、甲基對(duì)硫磷、樂(lè)果、氧化樂(lè)果、甲胺磷、久 效磷、二嗪農(nóng)、乙硫磷、馬拉硫磷、殺撲磷、敵敵畏、乙酰甲胺磷，氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊 酯乙腈、乙酸乙酯、氯化鈉、無(wú)水硫酸鈉(均為分析純)丙酮、正己烷(均為色譜純)洗脫液正己烷/乙酸乙酯(95/5，ν/ν)預(yù)處理小柱弗羅里硅土柱(IOOOmg)用前用正己烷/乙酸乙酯(95/5，v/v) 5ml預(yù) 淋食鹽飽和的2mol/L磷酸緩沖溶液(pH = 7. 5)1. 2儀器設(shè)備Agilent 6890N氣相色譜儀(帶FPD檢測(cè)器)、Agilent 7890N氣相色譜儀 (帶E⑶檢測(cè)器)、電子天平(1/10萬(wàn))、，固相萃取儀(日本GL Sciences)、高速分散機(jī) (IKA-WERKE)、分液漏斗振蕩器(MMV-1000W)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(Laborota 4000efficient，德國(guó) Heidolph)、移液器、容量瓶等
1. 3前處理方法 樣品處理人參樣品粉碎，過(guò)60目篩，60°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放。提取精確稱量樣品5g，于250mL燒杯中，加IOmL水，靜置10分鐘，將樣品充分潤(rùn) 濕后，加入30mL乙腈，IOmL水，高速組織勻漿(20000轉(zhuǎn)/min) 2min，IOml乙腈洗殘?jiān)?，抽濾。凈化上述濾液轉(zhuǎn)到分液漏斗中，加氯化鈉8g左右，振蕩3分鐘后靜置10分鐘。上層乙腈層過(guò)無(wú)水硫酸鈉，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上進(jìn)行減壓濃縮，濃縮后定容至4mL，其 中2mL轉(zhuǎn)入進(jìn)樣小瓶后，直接用于測(cè)定有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)。剩下2mL轉(zhuǎn)入預(yù)淋好 的弗羅里硅土柱(IOOOmg)中，正己烷/乙酸乙酯(95/5，v/v) 20ml洗脫，收集洗脫液，減壓 濃縮至干后正己烷定容2mL。1. 4儀器條件有機(jī)磷類農(nóng)藥儀器條件=Agilent 6890N氣相色譜儀，帶FPD檢測(cè)器；檢測(cè)器 溫度250°C ；進(jìn)樣 口溫度250°C ；柱溫60°C (Imin) 15 °C /min 200 °C (2min) 20 °C /min 250°C (13min)；載氣=He ；流速:lmL/min ；補(bǔ)充氣氫氣 75mL/min,空氣 lOOlmL/min ；色譜 柱:DB-1701(30mX0. 25mmX0. 25 μ m)；進(jìn)樣方式不分流；進(jìn)樣體積:2μ L ；擬除蟲菊酯類農(nóng)藥儀器條件Agi 1 ent 7890N氣相色譜儀，帶E⑶檢測(cè)器；檢 測(cè)器溫度300°C ；進(jìn)樣 口溫度260°C ；柱溫150°C 10°C /min 260 °C (3min) 5 °C /min 280°C (IOmin)；載氣He ；色譜柱HP_5 (30mX 0. 25mmX 0. 25 μ m)；柱壓25psi ；進(jìn)樣方式: 不分流；進(jìn)樣體積2 μ L。2試驗(yàn)結(jié)果添加濃度為0. 4mg/kg和1. Omg/kg,重復(fù)5次。這種方法步驟簡(jiǎn)單，可以一次性檢 測(cè)2010版藥典中所規(guī)定的有機(jī)磷和有機(jī)氯農(nóng)藥殘留，結(jié)果如下表1人參中有機(jī)磷和菊酯類殘留平均回收率和RSD
權(quán)利要求
1.含有有機(jī)磷類及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的人參樣品測(cè)定前的處理方法，其特征在于(1)人參樣品粉碎，過(guò)60-80目篩，60-80°C烘干，放于干燥器內(nèi)存放；(2)精確稱量樣品5g，于250mL燒杯中，加10_15mL水，靜置10-20分鐘，將樣品充分潤(rùn) 濕后，加入20-30mL乙腈，10-20mL水，20000轉(zhuǎn)/min高速組織勻漿，2_5min，乙腈洗殘?jiān)?，?濾；(3)上述濾液轉(zhuǎn)到分液漏斗中，加氯化鈉8-10g，振蕩3-5分鐘后靜置10-20分鐘；上層 乙腈層過(guò)無(wú)水硫酸鈉，減壓濃縮，濃縮后定容至4mL，其中2mL轉(zhuǎn)入進(jìn)樣小瓶后，直接用于測(cè) 定有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)；(4)剩下2mL轉(zhuǎn)入預(yù)處理弗羅里硅土柱中，采用體積比95/5的正己烷/乙酸乙酯20mL 洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至干后正己烷定容2mL，采用超高效液相-質(zhì)譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè) 定農(nóng)產(chǎn)品中稀禾啶殘留量殘留量。
2.權(quán)利要求1所述人參殘留樣測(cè)定前的處理方法，其中所述的預(yù)處理小柱是指 IOOOmg弗羅里硅土柱使用前用體積比為正己烷/乙酸乙酯5mL預(yù)淋；再用pH = 7. 5的食 鹽飽和2mol/L磷酸緩沖溶液沖洗。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含有有機(jī)磷類及擬除蟲菊酯類農(nóng)藥殘留的人參樣品測(cè)定前的處理方法。它是將人參樣品粉碎，過(guò)篩，烘干，精確稱量樣品5g，于250ml燒杯中，加10ml水，靜置10分鐘，將樣品充分潤(rùn)濕后，加入30ml乙腈，10ml水，高速組織勻漿(20000轉(zhuǎn)/min)2min，抽濾。加氯化鈉8g左右，振蕩3分鐘后靜置10分鐘，過(guò)無(wú)水硫酸鈉，減壓濃縮，濃縮后定容至4ml。其中2ml轉(zhuǎn)入進(jìn)樣小瓶后，直接用于測(cè)定有機(jī)磷類農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)。剩下2ml轉(zhuǎn)入預(yù)淋好的弗羅里硅土柱(1000mg)中，用正己烷/乙酸乙酯(95/5，v/v)20ml洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮至干后正己烷定容2ml。本發(fā)明公開的人參中有機(jī)磷類和菊酯類農(nóng)藥殘留樣測(cè)定前的處理方法，測(cè)定速度快，設(shè)備簡(jiǎn)單、測(cè)定成本低，準(zhǔn)確度、穩(wěn)定性和可靠性高。
文檔編號(hào)G01N30/14GK102128902SQ20101059720
公開日2011年7月20日 申請(qǐng)日期2010年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月20日
發(fā)明者劉磊, 張玉婷, 李娜, 李輝, 邵輝, 郭永澤 申請(qǐng)人:天津市農(nóng)業(yè)科學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室