專利名稱：測定復(fù)合維生素中維生素a、維生素d和維生素e的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種測定保健食品復(fù)合維生素中維生素A、D、E的方法。
背景技術(shù)：
維生素是維持人和動物正常生理所必須的營養(yǎng)物質(zhì)，人和動物對維生素的需求雖然不大，但作用卻非常重要。由于人不能合成維生素，必須依賴食物來提供足夠的維生素， 隨著社會的發(fā)展，市場上出現(xiàn)了越來越多的含維生素的產(chǎn)品，并且越來越多的保健品中標(biāo)明富含各種維生素，但是，某種含維生素的產(chǎn)品中究竟含有多少維生素，測定食品中維生素的方法顯得很重要。近年來，隨著社會的發(fā)展，含有復(fù)合維生素的產(chǎn)品越來越多，劑型有片劑或沖劑等，大多數(shù)食品中的維生素是以復(fù)合維生素的形式加入的，而復(fù)合維生素中維生素多以維生素微膠囊或微粒形式存在。維生素A、維生素D和維生素E是脂溶性維生素，它們較易在體內(nèi)蓄積，當(dāng)食用過量會導(dǎo)致中毒，因而需要對含有維生素的產(chǎn)品進(jìn)行監(jiān)測，這就需要一種對脂溶性維生素進(jìn)行快速測定的方法，高效液相色譜法為維生素的測定提供了一種快速可靠的方法。但目前食品國家標(biāo)準(zhǔn)方法僅限于GB 5413. 9-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)嬰幼兒食品和乳品中維生素A、D、E的測定；GB/T 5009. 82-2003食品中維生素A和維生素E的測定；GB 14755-1993食品添加劑維生素D2的測定。而對于保健食品生產(chǎn)過程中最主要的原料復(fù)合維生素中維生素A、D、E測定的方法并沒有明確的規(guī)定，通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，采用國標(biāo)的方法檢測復(fù)合維生素中的脂溶性維生素存在如下問題1.采用皂化提取法，全部實(shí)驗(yàn)過程費(fèi)時，操作繁瑣，整個實(shí)驗(yàn)過程試劑消耗量較大，檢測周期較長，增加檢測費(fèi)用的同時也達(dá)不到快速檢測的目的。2.皂化法通常適用于維生素含量不高的試樣，可減少脂溶性物質(zhì)的干擾，保健食品的生產(chǎn)過程中的最主要原料“復(fù)合維生素”中維生素A、D、E的含量很高，不宜用皂化法對復(fù)合維生素進(jìn)行樣品處理。采用皂化法對復(fù)合維生素樣品進(jìn)行處理，會導(dǎo)致復(fù)合維生素中的維生素A、D、E的嚴(yán)重?fù)p失，從而導(dǎo)致檢測結(jié)果不能真實(shí)反映樣品中維生素的含量，影響檢測數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。3.重現(xiàn)性差，準(zhǔn)確率低；4.試劑消耗量大。由于維生素A、D、E的極性不同，采用現(xiàn)有技術(shù)無法同時檢測出維生素A、D、E，通常先采用反相色譜法分離出維生素A、E，經(jīng)紫外檢測器檢測，采用內(nèi)標(biāo)法定量測定維生素A和維生素E，對于維生素D則另外采用正相色譜系統(tǒng)分離后再用反相色譜系統(tǒng)檢測。這種檢測方法的不足在于正相色譜柱壽命短、價(jià)格昂貴，且采用正相、反相兩個色譜系統(tǒng)交替使用操作繁瑣，同時加大了樣品的損失量，降低了檢測準(zhǔn)確度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確率高，試劑消耗量小的測定復(fù)合維生素中維生素A、維生素D和維生素E的方法。本發(fā)明的技術(shù)方案概述如下一種測定復(fù)合維生素中維生素A、維生素D和維生素E的方法，包括如下步驟(1)待測樣品溶液的制備稱取質(zhì)量為m克的待測復(fù)合維生素樣品于IOOml容量瓶中，加入氨水調(diào)節(jié)至PH值為7. 8 8. 5，加入300mg-500mg的胰蛋白酶，于65°C超聲波水浴處理20-40min，靜置冷卻至室溫，乙醇定容至刻度，搖勻過濾，濾除殘?jiān)?，取V1Hil濾液于已裝有50ml石油醚和5ml-10ml水的IOOml的容量瓶中，振蕩容量瓶使濾液分層，靜置IOmin ； 取V2ml石油醚提取液于40°C水浴中氮?dú)獯蹈蓛x下氮吹濃縮后，用Iml甲醇溶解定容，得到待測樣品溶液；(2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備維生素D2、維生素D3混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備①取維生素D2、維生素D3對照品各10mg，分別用甲醇溶解并定容至IOOml棕色容量瓶中；②取步驟①獲得的維生素A溶液V微升、維生素D3溶液V微升，分別用無水乙醇稀釋至10. OOmL,得到維生素D2的標(biāo)準(zhǔn)儲備液和D3的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別用表1所述的條件用紫外分光光度計(jì)測定維生素A儲備液和維生素D3儲備液的的吸光值，用各自的比吸光系數(shù) E按照公式(1)計(jì)算出維生素D2標(biāo)準(zhǔn)儲備液和維生素D3標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度；所述的維生素 D2、維生素D3標(biāo)準(zhǔn)儲備液的測定條件如表1所示表 權(quán)利要求
1. 一種測定復(fù)合維生素中維生素A、維生素D和維生素E的方法，其特征是包括如下步驟(1)待測樣品溶液的制備稱取質(zhì)量為m克的待測復(fù)合維生素樣品于IOOml容量瓶中， 加入氨水調(diào)節(jié)至PH值為7. 8 8. 5，加入300mg-500mg的胰蛋白酶，于65°C超聲波水浴處理20-40min，靜置冷卻至室溫，乙醇定容至刻度，搖勻過濾，濾除殘?jiān)?，取V1Hil濾液于已裝有 50ml石油醚和5ml-10ml水的IOOml的容量瓶中，振蕩容量瓶使濾液分層，靜置IOmin ；取 V2Hil石油醚提取液于40°C水浴中氮?dú)獯蹈蓛x下氮吹濃縮后，用Iml甲醇溶解定容，得到待測樣品溶液；(2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備維生素D2、維生素D3混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備①取維生素D2、維生素D3對照品各10mg，分別用甲醇溶解并定容至IOOml棕色容量瓶中；②取步驟①獲得的維生素&溶液V微升、維生素D3溶液V微升，分別用無水乙醇稀釋至 10. OOmL,得到維生素A的標(biāo)準(zhǔn)儲備液和D3的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，分別用表1所述的條件用紫外分光光度計(jì)測定維生素A儲備液和維生素D3儲備液的的吸光值，用各自的比吸光系數(shù)E按照公式(1)計(jì)算出維生素A標(biāo)準(zhǔn)儲備液和維生素D3標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度；所述的維生素D2、維生素D3標(biāo)準(zhǔn)儲備液的測定條件如表1所示 表1比吸光系數(shù)標(biāo)準(zhǔn)加入標(biāo)準(zhǔn)液的量波長1%λ /nmV/μ L^lm維生素D2100. 0485264維生素D3100. 0462264C- ^x1x1qqq ........................公式⑴式中C-維生素D2或維生素D3標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度，單位為微克每毫升(yg/mL)； A-維生素D2或維生素D3的紫外吸光值； V-加入標(biāo)準(zhǔn)儲備液的量，單位為微升(yL)； E-維生素D2或維生素D3溶液1 %的比吸光系數(shù)； 10. 00-"為維生素A或維生素D3標(biāo)準(zhǔn)儲備液稀釋倍數(shù)；VXl(r9③取步驟②維生素D2、維生素D3的標(biāo)準(zhǔn)儲備液各0. ImL,分別用甲醇稀釋并定容至 IOml容量瓶中，得到濃度分別為Cl μ g/ml的維生素D2和C2 μ g/ml的維生素D3的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，合并二標(biāo)準(zhǔn)品溶液，得到維生素D2、維生素D3混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液； 維生素A標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備①取維生素A，對照品IOmg用脫醛乙醇溶解并定容至IOml棕色容量瓶中；②取步驟①維生素A溶液V微升，用乙醇稀釋至10.00毫升，得到維生素A的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用紫外分光光度計(jì)按照325nm測定維生素A標(biāo)準(zhǔn)儲備液中的維生素A吸光值，并用維生素A的比吸光系數(shù)按照公式(2)計(jì)算出該維生素A標(biāo)準(zhǔn)儲備液的濃度；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定復(fù)合維生素中維生素A、維生素D和維生素E的方法，其特征是，所述高效液相色譜儀的色譜條件為流動相為體積比為25 75 4的乙腈-甲醇-水，流速為l.OmL/min，柱溫30°C，維生素D檢測波長265nm，維生素A、維生素 E檢測波長300nm，所述的色譜柱為Waters反相C18硅膠色譜柱。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種測定復(fù)合維生素中維生素A、維生素D和維生素E的方法，其特征在于，所述的高效液相色譜儀的色譜條件為流動相為甲醇-水體系，所述的流動相為體積比為96 4的甲醇-水，流速1.0mL/min，柱溫30°C，維生素D檢測波長 265nm,維生素A、維生素E檢測波長300nm，所述的色譜柱為Waters反相C18硅膠色譜柱。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種測定復(fù)合維生素中維生素A、維生素D和維生素E的方法，該方法包括如下步驟(1)待測樣品溶液的制備；(2)標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備；(3)取待測樣品溶液，步驟(2)制備的溶液用Waters反相C18色譜柱進(jìn)行分離，二極管陣列檢測器檢測，得到相應(yīng)色譜圖，通過標(biāo)準(zhǔn)品溶液中各維生素的保留時間定性判定待測樣品溶液中的各維生素；(4)通過色譜圖中各維生素峰面積的比例關(guān)系，并根據(jù)各維生素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的濃度分別獲得待測樣品溶液中所含各維生素的質(zhì)量濃度；(5)根據(jù)濃度，通過公式計(jì)算待測樣品溶液中維生素的含量本方法測定簡便、快速、準(zhǔn)確，在對保健食品原料實(shí)施控制的同時縮短分析時間，降低有機(jī)試劑消耗。
文檔編號G01N21/33GK102253130SQ20101060490
公開日2011年11月23日 申請日期2010年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月24日
發(fā)明者李星芝, 袁海新, 賈鑫, 趙曉娟 申請人:天津天獅生命源有限公司, 天津天獅生物發(fā)展有限公司, 天獅集團(tuán)有限公司