專利名稱：檢測(cè)寵物過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)寵物過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)試紙條，該檢測(cè)試紙條 主要是針對(duì)貓毛、狗毛過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)，適用于家庭自檢。
背景技術(shù)：
過(guò)敏性疾病是現(xiàn)代社會(huì)中最常見(jiàn)的一種疾病，是機(jī)體受抗原物質(zhì)(也稱變應(yīng)原或 過(guò)敏原)刺激后，引起的組織損傷或生理功能紊亂。而寵物皮屑(如貓毛、狗毛)是重要的 過(guò)敏原之一。當(dāng)機(jī)體再受同類過(guò)敏原刺激時(shí)，過(guò)敏原使人體內(nèi)IgE分子交聯(lián)，引起嗜堿性 粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞脫顆粒釋放組胺、白三烯、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)，使機(jī)體產(chǎn)生過(guò)敏反 應(yīng)、導(dǎo)致機(jī)體毛細(xì)血管擴(kuò)張、水腫、平滑肌痙攣、內(nèi)分泌亢進(jìn)等過(guò)敏癥狀。根據(jù)美國(guó)寵物產(chǎn)品制造商協(xié)會(huì)APPMA的統(tǒng)計(jì)，近三分之二的美國(guó)家庭擁有至少一 只寵物。中國(guó)大約有7000到8000千萬(wàn)寵物愛(ài)好者，這是國(guó)家統(tǒng)計(jì)局2007年的一個(gè)統(tǒng)計(jì)數(shù) 據(jù)，并不包括農(nóng)村和無(wú)法統(tǒng)計(jì)的養(yǎng)寵物人數(shù).比例估計(jì)是1 5。因此，在養(yǎng)寵物之前，進(jìn)行 寵物過(guò)敏的檢測(cè)是非常有意義的，早診斷，早預(yù)防。對(duì)于寵物過(guò)敏目前無(wú)特別的治療方法，嚴(yán)格避免接觸寵物是最有效的方法。常用 的檢測(cè)過(guò)敏原方法有體內(nèi)過(guò)敏原點(diǎn)刺試驗(yàn)、體外檢測(cè)特異性IgE抗體。體內(nèi)檢測(cè)假陽(yáng)性高 并受藥物的影響，現(xiàn)行的體外檢測(cè)如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試驗(yàn)步驟多、時(shí)間長(zhǎng)。而免 疫膠體金層析技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來(lái)的快速免疫分析方法。其原理是以條狀纖維 層析材料為固相，借助毛細(xì)作用使樣品溶液在層析條上泳動(dòng)，同時(shí)使樣品中的待測(cè)物與層 析材料上的受體(金標(biāo)抗體)發(fā)生高特異性、高親和性的免疫反應(yīng)，層析過(guò)程中免疫復(fù)合物 被富集或截留在層析材料的檢測(cè)帶上，膠體金聚集形成明顯條帶，5-lOmin內(nèi)便可得到直觀 的結(jié)果。省去了繁瑣的加樣、洗滌、孵育等步驟。因而這種分析技術(shù)操作簡(jiǎn)單快速，分析結(jié) 果清楚，易于判斷，無(wú)需儀器設(shè)備，成本低廉，適用于家庭自檢。目前市場(chǎng)上還沒(méi)有出現(xiàn)檢測(cè) 寵物過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)試紙條。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種使用方便、快速檢測(cè)人血清或鼻分泌物中的檢測(cè)寵 物過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)試紙條。本實(shí)用新型為解決上述提出的問(wèn)題所采用解決方案為檢測(cè)寵物過(guò)敏的免疫膠體 金層析檢測(cè)試紙條，其特征在于包括有樣本墊、膠體金試劑墊、硝酸纖維素膜、吸水墊、粘膠 層和聚苯乙烯底板，硝酸纖維素膜上設(shè)置有質(zhì)控線和檢測(cè)線，聚苯乙烯底板上通過(guò)粘膠層 連接有硝酸纖維素膜、吸水墊和膠體金試劑墊，膠體金試劑墊上還連有樣本墊，其中膠體金 試劑墊中噴有膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgE，質(zhì)控線為兔抗鼠IgG，檢測(cè)線為標(biāo)準(zhǔn)化變應(yīng)原。按上述方案，還包括有一 PVC外殼，所述的PVC外殼包括有殼體，殼體上對(duì)應(yīng)樣本 墊處設(shè)置有滴入孔，殼體上對(duì)應(yīng)質(zhì)控線和檢測(cè)線處設(shè)置有觀察孔。本實(shí)用新型具有如下特點(diǎn)(1)本實(shí)用新型使用鼻分泌物檢測(cè)，對(duì)人無(wú)創(chuàng)傷；(2)操作簡(jiǎn)單、方便，5-15分鐘完成全部檢測(cè)；(3)敏感度高、特異性強(qiáng)；(4)檢測(cè)成本較低，便于 推廣和使用。

圖1是本實(shí)用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為圖1的側(cè)視圖；圖3為PVC外殼的結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型做進(jìn)一步的說(shuō)明，但是此說(shuō)明不能構(gòu)成對(duì)本 實(shí)用新型的限制。如圖1-2所示，檢測(cè)寵物過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)試紙條，包括有樣本墊2、膠 體金試劑墊3、硝酸纖維素膜4、吸水墊1、粘膠層7和聚苯乙烯底板8，硝酸纖維素膜上設(shè) 置有質(zhì)控線5和檢測(cè)線6，聚苯乙烯底板上通過(guò)粘膠層連接有硝酸纖維素膜、吸水墊和膠體 金試劑墊，膠體金試劑墊上還連有樣本墊，其中膠體金試劑墊中噴有膠體金標(biāo)記的鼠抗人 IgE，質(zhì)控線為兔抗鼠IgG，檢測(cè)線為標(biāo)準(zhǔn)化變應(yīng)原，如圖3所示，還可以包括有一與試紙條 相配的PVC外殼，所述的PVC外殼包括有殼體11，殼體上對(duì)應(yīng)樣本墊處設(shè)置有滴入孔9，殼 體上對(duì)應(yīng)質(zhì)控線和檢測(cè)線處設(shè)置有觀察孔10。本實(shí)用新型的制備方法1.變應(yīng)原的制備用梳子梳理動(dòng)物毛皮，將梳理下來(lái)的毛發(fā)皮屑用2倍丙酮溶劑浸泡2小時(shí)，期間經(jīng) 常攪拌，倒掉溶劑，將揮發(fā)除盡的脫脂后的粉末以1 20(w/v)的量加入0.3mol/l的碳酸 氫鈉_氯化鈉緩沖液(PH8. 2)，含0. 01%疊氮鈉的提取液中，磁力攪拌器轉(zhuǎn)速250轉(zhuǎn)分鐘， 置于冰箱4°C過(guò)夜。取上清液-20°C下保存。2.制備膠體金稱取0. Olg氯金酸加到IOOml超純水中，加熱至沸騰后加入Iml 檸檬酸三鈉溶 液，加熱煮沸8min，獲得透明、酒紅色的膠體金溶液。3.膠體金標(biāo)記蛋白質(zhì)邊攪拌邊逐滴加入蛋白溶液(抗體)至膠體金溶液中，將待標(biāo)記的抗體蛋白Img 加入IOOml膠體金溶液中混合，室溫?cái)嚢?0min ；邊攪拌邊逐滴加入IOmg牛血清白蛋白 (BSA)，繼續(xù)攪拌lOmin，靜置過(guò)夜；于8000r/min，4°C下離心45min ；吸取上清液，將沉淀溶 于2ml磷酸緩沖液中，備用，也可加甘油混勻于-20°C保存；4.噴樣選用millipore公司的中等流速的硝酸纖維膜。蛋白濃度為2mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)化變 應(yīng)原以及兔抗屬IgG蛋白(質(zhì)控)用5-50Mm的PBS進(jìn)行1 30的稀釋。將稀釋后的變應(yīng) 原及兔抗屬IgG蛋白(質(zhì)控)各IOOul加到噴樣儲(chǔ)液瓶?jī)?nèi)，應(yīng)用微量噴膜機(jī)(BioDot)Jf 變應(yīng)原溶液噴線于硝酸纖維膜的相應(yīng)位置，噴墨的體積控制在lul/cm，噴樣結(jié)束后，室溫真 空抽干或37°C干燥2小時(shí)，使抗體牢固的結(jié)合在硝酸纖維膜的表面。噴樣后的膜應(yīng)保存于 4°C、干燥的環(huán)境，封閉時(shí)用2% BSA封閉液，于保濕盒內(nèi)，37°C下保溫1小時(shí)；[0023]5.試紙條制備噴樣結(jié)束后，將膠體金試劑墊、吸水墊和硝酸纖維膜通過(guò)粘膠層固定連接于聚苯 乙烯底板上，并在膠體金試劑墊上貼上樣本墊組成檢測(cè)寵物過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)試 紙條。采用切割機(jī)將復(fù)合好的膜片切成所需的形狀和規(guī)格，制成完整的檢測(cè)裝置，將其裝于 含有干燥劑的鋁箔袋中。本實(shí)用新型的使用方法(1)收集檢測(cè)樣本；(2)將試紙條有箭頭的一端浸入被檢 測(cè)的鼻分泌物樣本中；(3)3-5秒后取出試紙條，平放。5-10分鐘內(nèi)觀察結(jié)果。出現(xiàn)兩條紅 線(檢測(cè)線和質(zhì)控線)，表明過(guò)敏原陽(yáng)性；僅出現(xiàn)一條質(zhì)控線，則表明過(guò)敏原陰性。僅出現(xiàn) 一條檢測(cè)線，應(yīng)重新檢測(cè)。
權(quán)利要求檢測(cè)寵物過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)試紙條，其特征在于包括有樣本墊(2)、膠體金試劑墊(3)、硝酸纖維素膜(4)、吸水墊(1)、粘膠層(7)和聚苯乙烯底板(8)，硝酸纖維素膜上設(shè)置有質(zhì)控線(5)和檢測(cè)線(6)，聚苯乙烯底板上通過(guò)粘膠層連接有硝酸纖維素膜、吸水墊和膠體金試劑墊，膠體金試劑墊上還連有樣本墊，其中膠體金試劑墊中噴有膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgE，質(zhì)控線為兔抗鼠IgG，檢測(cè)線為標(biāo)準(zhǔn)化變應(yīng)原。
2.按權(quán)利要求1所述的檢測(cè)寵物過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)試紙條，其特征在于還 包括有一 PVC外殼，所述的PVC外殼包括有殼體(11)，殼體上設(shè)置有滴入孔(9)和觀察孔 (10)。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)寵物過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)試紙條，該檢測(cè)試紙條主要是針對(duì)貓毛、狗毛過(guò)敏的免疫膠體金層析檢測(cè)，適用于家庭自檢，包括有樣本墊、膠體金試劑墊、硝酸纖維素膜、吸水墊、粘膠層和聚苯乙烯底板，硝酸纖維素膜上設(shè)置有質(zhì)控線和檢測(cè)線，聚苯乙烯底板上通過(guò)粘膠層連接有硝酸纖維素膜、吸水墊和膠體金試劑墊，膠體金試劑墊上還連有樣本墊，其中膠體金試劑墊中噴有膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgE，質(zhì)控線為兔抗鼠IgG，檢測(cè)線為標(biāo)準(zhǔn)化變應(yīng)原。本實(shí)用新型具有如下特點(diǎn)(1)本實(shí)用新型使用鼻分泌物檢測(cè)，對(duì)人無(wú)創(chuàng)傷；(2)操作簡(jiǎn)單、方便，5-15分鐘完成全部檢測(cè)；(3)敏感度高、特異性強(qiáng)；(4)檢測(cè)成本較低，便于推廣和使用。
文檔編號(hào)G01N33/558GK201654043SQ201020133558
公開(kāi)日2010年11月24日 申請(qǐng)日期2010年3月16日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月16日
發(fā)明者尹玉敏, 梁智輝, 梅亞紅, 王幫洲, 祝戎飛, 陳建軍, 陳琰, 龔鎮(zhèn)奎 申請(qǐng)人:湖北楚冠生物藥業(yè)有限公司