專利名稱：一步檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種一步檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條。
背景技術(shù)：
雞新城疫(Newcastle Disease，ND) —直是給養(yǎng)雞業(yè)帶來重大危害的疫病，被國 際獸醫(yī)局(OIE)列為A類傳染病，該病對世界貿(mào)易有較大的商業(yè)影響。傳染性支氣管炎 (InfectiousBrochitis, IB)是由傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的危害呼吸和泌尿生殖 道的急性傳染病，雞群一經(jīng)感染，引起巨大經(jīng)濟(jì)損失。兩種病雞的臨床癥狀有很大的差異， 不同宿主對感染后的反應(yīng)也不一樣，這使診斷更為復(fù)雜和困難，單一臨床和病變不能作為 診斷的依據(jù)，因此，建立可診斷新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條有現(xiàn)實(shí)意義。膠體金免疫層析技術(shù)是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù)，具有簡便、快速、 準(zhǔn)確、費(fèi)用低的特點(diǎn)，且由于為干試條形式，無需低溫保存，儲(chǔ)運(yùn)也方便，但是目前尚未見有 可同時(shí)檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條。發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型的目的是提供一種一步檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙 條，它能滿足現(xiàn)有技術(shù)的上述需求。—步檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條，有一底襯、該底襯上面的中 部粘帖一包被膜，其特征在于該包被膜中部有一條包被雞新城疫病毒的抗體的檢測線、一 條包被雞傳染性支氣管炎病毒的抗體的檢測線和一條包被抗鼠IgG抗體的控制線，包被膜 的上面左右分別粘帖一涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜和吸水紙；涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜 上面粘貼一樣品墊。本實(shí)用新型利用現(xiàn)代國際最先進(jìn)的膠體金免疫層析技術(shù)，提供一種現(xiàn)地農(nóng)戶、基 層自測等用的可以同時(shí)檢測雞新城疫病毒和傳染性支氣管炎病毒的膠體金試紙條，該試 紙條具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測速度快等優(yōu)點(diǎn)，且不需使用儀器設(shè)備，成本低廉，操作簡 便。
附圖為本實(shí)用新型的縱剖結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
本實(shí)用新型一步檢測新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條，如圖所示，有一底 襯1、該底襯1上面的中部粘帖一包被膜4，該包被膜4中部有一條包被新城疫抗體的檢測 線6，檢測線6中包被的雞新城疫病毒的抗體為單克隆抗體和/或多克隆抗體；一條包被傳 染性支氣管炎抗體的檢測線7，檢測線7中包被的雞傳染性支氣管炎病毒的抗體為單克隆 抗體和/或多克隆抗體；和一條包被抗鼠IgG抗體的控制線8，包被膜4的上面左右分別粘 帖一涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜3和吸水紙5 ；涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜3上面粘貼一 樣品墊2。制造本實(shí)用新型的步驟如下用BALB/C小鼠分別免疫新城疫病毒和傳染性支氣管炎病毒，取其脾細(xì)胞與SP2/0 細(xì)胞融合建立瘤細(xì)胞株，進(jìn)行篩選，取瘤細(xì)胞注射于BALB/C小鼠腹腔，使其產(chǎn)生腹水。提取小鼠腹水進(jìn)行純化篩選，分別獲得能與新城疫病毒和傳染性支氣管炎病毒產(chǎn)生中和反應(yīng)的 單克隆抗體用于膠體金標(biāo)記。制備包被膜4時(shí)，將0. 05M、pH9. 6的碳酸鹽緩沖液(PBS)用0. 22u膜過濾，制成 包被緩沖液。另將20g牛血清白蛋白(BSA)和20g脫脂奶溶于IOOOmlO. 01Μ、ρΗ7· 0的PBS 用0. 22u膜過濾，制成封閉工作液。調(diào)試噴膜機(jī)，用上述包被緩沖液稀釋新城疫病毒的單克 隆抗體、傳染性支氣管炎病毒的單克隆抗體和抗鼠IgG多克隆抗體，分別在硝酸纖維膜中 部上劃線，間隔5mm，應(yīng)細(xì)致均勻，室溫晾干20分鐘，該三線用的液體分別滲入硝酸纖維膜 中，即分別為新城疫病毒的檢測線6、傳染性支氣管炎病毒的檢測線7和控制線8。用上述 封閉工作液將硝酸纖維膜于37°C封閉60分鐘，取出后置于37°C烘干處理兩小時(shí)，制成包被 膜4。制造涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜3時(shí)，將IOg氯金酸用IOOOml雙蒸水溶解，配成 水溶液；將IOg檸檬酸三鈉用IOOOml雙蒸水溶解，配成水溶液；將13. 8g碳酸鉀溶于IOOOml 雙蒸水，用0. 22u膜過濾，配制成碳酸鉀水溶液；將20g BSA溶于IOOOml 0. 01M、pH7. 0的 PBS中，用0. 22u膜過濾配成標(biāo)記洗滌液；將IOg BSA、5g脫脂奶粉、0. 5g疊氮鈉(NaN3)和 Iml 吐溫-20 (Tween-20)在 IOOOml 0. 01M、pH 7. OPBS 中溶解，用 0. 22u 膜濾過，配成金標(biāo) 抗體保存液。用雙蒸水將1 %氯金酸稀釋成0. 01 %，置電爐煮沸，按每100毫升0. 01 %氯 金酸加入4毫升檸檬酸三納，繼續(xù)煮沸，直到液體呈亮紅色即停止加熱，冷卻至室溫后 補(bǔ)足失水。外觀應(yīng)純凈，透亮，無沉淀和漂浮物，即為燒制成的膠體金。用0. IM碳酸鉀水溶 液調(diào)膠體金的PH值至7. 6，按20微克抗體/毫升的膠體金同時(shí)加入抗雞新城疫病毒的單 克隆抗體和抗雞傳染性支氣管炎病毒的單克隆抗體，混勻，靜置30分鐘，以12000rpm離心 30分鐘，棄去上清液，將所得沉淀用標(biāo)記洗滌液洗滌兩次，最后一次棄去上清液，將所得沉 淀用十分之一初始膠體金體積的金標(biāo)抗體保存液溶解，配制成金標(biāo)抗體。將上述標(biāo)記好的 標(biāo)抗體均勻地涂敷在玻璃纖維膜上，每毫升溶液涂敷鋪10平方厘米，干燥，制得涂覆金標(biāo) 抗體的玻璃纖維膜3。所述底襯1、樣品墊2和吸水紙5是本領(lǐng)域通用的部件。將上述包被膜4、涂覆金 標(biāo)抗體的玻璃纖維膜3、底襯1、樣品墊2和吸水紙5按照本實(shí)用新型的結(jié)構(gòu)粘貼起來，得到 試紙板，最后將該試紙板切割成不同寬度的試紙條即可。使用實(shí)用新型時(shí)，在試紙條的檢測線6、檢測線7和控制線8位置上各出現(xiàn)一條紫 紅色條帶，雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒均為陽性結(jié)果；在試紙條的檢測線6和控制線8 位置上各出現(xiàn)一條紫紅色條帶，雞新城疫病毒為陽性結(jié)果；在試紙條的檢測線7和控制線 8位置上各出現(xiàn)一條紫紅色條帶，雞傳染性支氣管炎病毒為陽性結(jié)果；僅試紙條的控制線8 位置上出現(xiàn)一條紫紅色條帶，為陰性結(jié)果；在試紙條的控制線8位置上未出現(xiàn)紫紅色條帶 為無效結(jié)果。
權(quán)利要求1.一步檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條，有一底襯(1)、該底襯(1)上面 的中部粘帖一包被膜G)，其特征在于該包被膜中部有一條包被雞新城疫病毒的抗體 的檢測線(6)、一條包被雞傳染性支氣管炎病毒的抗體的檢測線(7)和一條包被抗鼠IgG抗 體的控制線(8)，包被膜(4)的上面左右分別粘帖一涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜C3)和吸水 紙(5)；涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜C3)上面粘貼一樣品墊O)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一步檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條，其特征 在于所述的檢測線(6)中包被的雞新城疫病毒的抗體為單克隆抗體和/或多克隆抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一步檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條，其特征 在于所述的檢測線(7)中包被的雞傳染性支氣管炎病毒的抗體為單克隆抗體和/或多克隆 抗體。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一步檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條，其特征 在于所述的涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜(3)中有由膠體金顆粒標(biāo)記的抗雞新城疫病毒和 抗雞傳染性支氣管炎病毒的單克隆抗體。
專利摘要一步檢測雞新城疫和傳染性支氣管炎病毒的試紙條，有一底襯、該底襯上面的中部粘帖一包被膜，其特征在于該包被膜中部有一條包被新城疫抗體的檢測線、一條包被傳染性支氣管炎抗體的檢測線和一條包被抗鼠IgG抗體的控制線，包被膜的上面左右分別粘帖一涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜和吸水紙；涂覆金標(biāo)抗體的玻璃纖維膜上面粘貼一樣品墊。本實(shí)用新型利用現(xiàn)代國際最先進(jìn)的膠體金免疫層析技術(shù)，提供一種現(xiàn)地農(nóng)戶、基層自測等用的可以同時(shí)檢測雞新城疫病毒和傳染性支氣管炎病毒的膠體金試紙條，該試紙條具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、檢測速度快等優(yōu)點(diǎn)，且不需使用儀器設(shè)備，成本低廉，操作簡便。
文檔編號(hào)G01N33/569GK201845015SQ20102019148
公開日2011年5月25日 申請日期2010年5月5日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月5日
發(fā)明者凌紅麗, 宋新宇, 蔣貽海, 馬鳳燕, 高亞東, 魏笑笑 申請人:青島寶依特生物制藥有限公司, 青島康地恩藥業(yè)有限公司