專利名稱：一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，屬于檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
番茄斑萎病毒(iTomato spotted wilt vi rus , TSffV) 是布尼亞病毒科 (Bunyaviridae)番茄斑萎病毒屬(Tospovi rus )的典型成員，也是寄主范圍最廣、最具 經(jīng)濟(jì)重要性的病毒之一。TSWV在歐洲、北美、南美、亞洲和大洋州等多個(gè)國家和地區(qū)廣泛 分布，溫帶、亞熱帶和熱帶地區(qū)均有發(fā)生，能侵染包括煙草、大豆、番茄、花生、辣椒、萵苣、菊 花、鳳仙花等80科900多種植物，且發(fā)現(xiàn)的寄主種類還在不斷增加。該病毒傳播方式主要 是薊馬以持久性方式傳播。病毒粒子球形，直徑約70 90 nm，表面包裹一層約5 nm厚 的雙層脂質(zhì)包膜。病毒基因組為3分體單鏈RNA基因組，編碼4種結(jié)構(gòu)蛋白。TSWV為我 國進(jìn)境植物檢疫的危險(xiǎn)性有害生物，寄主范圍廣、傳播途徑多、適生性強(qiáng)，進(jìn)口植物種苗攜 帶該病毒的風(fēng)險(xiǎn)性很大，伴隨著我國進(jìn)出境貿(mào)易的高速增長，傳入我國并危害流行的可能 性極大。但研究表明TSWV在植物提取液中非常不穩(wěn)定，即使提純病毒其免疫原性也很弱， 因而多抗血清的滴度較低，常規(guī)的血清學(xué)方法由于其靈敏度低和特異性差，大大限制了對(duì) 該病毒的檢測(cè)。煙草脆裂病毒(Tobacco rattle virus, TRV)屬于煙草脆裂病毒屬 (Tobravirus)。TRV 通過生于土壤的線蟲(Trchodorus and Paratrichodours)傳播。線蟲 往往會(huì)在排水不良的地方發(fā)現(xiàn)，在這種地方TRV持續(xù)存在，并通過當(dāng)?shù)氐木€蟲傳播到敏感 植物種類上。許多種類的雜草是病毒主要的所在地，馬鈴薯以及其它一些農(nóng)作物是次要場(chǎng) 所。TRV分布廣泛，可以侵染大量的植物種類，在馬鈴薯、煙草、觀賞植物的塊莖上會(huì)引起重 要的經(jīng)濟(jì)損失。該病毒目前是我國的檢疫生物之一。煙草脆裂病毒是一類應(yīng)用比較廣泛而 且效率和持久性較好的病毒載體，能夠介導(dǎo)基因沉默同時(shí)不會(huì)帶來病毒誘導(dǎo)的癥狀。改造 后的病毒能夠促進(jìn)非病毒序列的插入以及對(duì)植物的后續(xù)感染，也可以鑒定宿主植物生長點(diǎn) 的基因，因此TRV在植物基因功能鑒定中具有廣泛的應(yīng)用。黃瓜綠斑駁病毒屬在歐洲、印度、韓國和日本葫蘆科植物上發(fā)現(xiàn)的一種RNA病毒， 病毒粒子細(xì)管狀，長度約300 X 18 nm.病毒易通過汁液傳播，但病毒的寄主范圍較窄。黃瓜 綠斑駁花葉病毒病以種傳和接觸性傳播為主要途徑。另外，嫁接、田間作業(yè)也容易造成接觸 侵染?？梢噪S種子或流水遠(yuǎn)距離傳播，隨農(nóng)事操作在田間傳播，病毒在種子或土壤內(nèi)都可存 活1年以上，生物學(xué)介體未知。香石竹斑駁病毒屬番茄叢矮病毒科(Tombusviridae)，香石竹斑駁病毒屬(Ca rmovirus)的典型成員，病毒粒子呈正二十面體，直徑觀 33 nm。Ca rMV基因組為單組 分單鏈正義RNA，含4 003 η t，包括4個(gè)0RF，其中0RF2和0RF3與ORFl具有共同的起 始位點(diǎn)，分別為一次通讀區(qū)和雙重通讀區(qū)，0RF4編碼38 kD的外殼蛋白。CarMV靠汁液 摩擦傳播，能侵染香石竹、中國石竹、甜石竹、莧色藜、菠菜、千日紅等多種植物。引起香石 竹品種退化，長勢(shì)衰弱，植株畸形，花葉，花枝變小，花碎色，葉莖和花出現(xiàn)枯斑，因而使產(chǎn)量和品質(zhì)下降，降低了觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。CarMV在我國上海、北京、昆明等香石竹產(chǎn)地 廣泛流行，發(fā)病嚴(yán)重，因而迫切需要建立實(shí)用的檢測(cè)方法，為該病毒病的診斷和防治、脫毒 種苗的生產(chǎn)提供技術(shù)支撐。百合無癥病毒(Lily symptomless virus，LSV) 是香石竹潛隱病毒屬( Carlavirus)成員，病毒粒子為略彎曲的線狀，無包膜，長610 700nm，直徑12 15nm， 螺旋對(duì)稱結(jié)構(gòu)。病毒基因組為單分子線形正義ssRNA，長8394nt，含有6個(gè)0RF，其中0RF5 編碼32kD外殼蛋白，基因組RNA 3'端有一個(gè)Poly(A) [1 3 ]。LSV的寄主范圍很窄， 主要侵染百合科植物，單獨(dú)侵染百合寄主時(shí)表現(xiàn)為隱癥，與其它病毒復(fù)合侵染時(shí)則可引起 嚴(yán)重的田間癥狀，直接影響了百合的花和球莖質(zhì)量，給花卉生產(chǎn)帶來重大經(jīng)濟(jì)損失。目前，檢測(cè)植物病毒的方法主要采用進(jìn)口抗血清檢測(cè)試劑盒進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附測(cè) 定(ELISA)以及用電鏡直接觀察組織中的病毒粒子，對(duì)檢測(cè)設(shè)備和操作技能的要求較高，檢 測(cè)成本高，無法用于田間快速檢測(cè)。
發(fā)明內(nèi)容本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問題是提供一種成本低、使用簡便、能夠檢測(cè)多種植物 病毒的蛋白芯片。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本實(shí)用新型采用以下技術(shù)方案一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，由固設(shè)于一背板上的至少兩個(gè)不同種類的病 毒檢測(cè)單元并列構(gòu)成，每一個(gè)病毒檢測(cè)單元的結(jié)構(gòu)是在PVC載體上依次設(shè)有樣品墊、膠體 金結(jié)合物墊、硝酸纖維膜和吸收墊；硝酸纖維素膜的一端通過膠體金結(jié)合物墊與樣品墊相 搭接，硝酸纖維素膜的另一端與吸收墊相搭接；硝酸纖維素膜上設(shè)有植物病毒檢測(cè)帶T和 質(zhì)控帶C。所述膠體金結(jié)合物墊為由干燥的紅色膠體金標(biāo)記多克隆抗體的膠體金結(jié)合物墊。所述樣品墊為玻璃纖維材質(zhì)。所述吸收墊為棉漿板。所述質(zhì)控帶為羊抗兔IgG抗體。所述植物病毒選自番茄斑萎病毒、煙草脆裂病毒、黃瓜綠斑駁病毒、香石竹斑駁病 毒和百合無癥病毒中的至少兩種病毒。所述蛋白芯片的外部還設(shè)有塑料罩，塑料罩上對(duì)應(yīng)于蛋白芯片的樣品墊和硝酸纖 維素膜的位置分別設(shè)有點(diǎn)樣孔和檢測(cè)窗。該塑料罩上還在相應(yīng)位置標(biāo)記有所檢測(cè)病毒的名 稱。本實(shí)用新型收集了 5種在日常檢疫中要求檢疫頻率較高的病毒，即煙草脆裂病 毒、百合無癥病毒、香石竹斑駁病毒、黃瓜綠斑駁病毒和番茄斑萎病毒，制備了 5種病毒的 多克隆抗體。利用制備的抗體研制了用于5種病毒檢測(cè)的蛋白芯片，該芯片可以在20分鐘 內(nèi)檢測(cè)到病毒的存在，并且具有較好的檢測(cè)靈敏度，可以滿足日常檢疫對(duì)快速、靈敏、高效 的要求，芯片的檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定可靠，可用于各種食品安全監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)、出入境檢驗(yàn)檢疫局及農(nóng) 業(yè)系統(tǒng)對(duì)植物病毒的篩查。本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是蛋白芯片的使用方法簡便，成本低廉，能夠?qū)崿F(xiàn)田間快速檢 測(cè)，結(jié)果準(zhǔn)確，為多種植物病毒病的診斷提供了有力的技術(shù)支持。[0019]以下通過實(shí)施例詳細(xì)說明本實(shí)用新型的技術(shù)方案，并不以此限定本實(shí)用新型的實(shí) 施范圍。

圖1為本實(shí)用新型五聯(lián)植物病毒檢測(cè)蛋白芯片的整體結(jié)構(gòu)示意圖。圖2為本實(shí)用新型五聯(lián)植物病毒檢測(cè)蛋白芯片的一個(gè)檢測(cè)單元結(jié)構(gòu)示意圖。圖3為本實(shí)用新型五聯(lián)植物病毒檢測(cè)蛋白芯片結(jié)合塑料卡套后的俯視示意圖。
具體實(shí)施方式
實(shí)施例1 五種植物病毒多克隆抗體的制備一.材料1.供試毒株煙草脆裂病毒PPK20株系的基因組RNAl和RNA2。百合無癥病毒采集于浙江麗水百合栽培基地自然感病的東方百合。香石竹斑駁病毒由浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所植物病毒實(shí)驗(yàn)室鑒定保存。番茄斑萎病毒OIGPTsl和FopaTsl分離物分別來自日本綠辣椒和紅辣椒。黃瓜綠斑駁病毒來自遼寧蓋州市的西瓜病葉。2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)用家兔為雄性新西蘭大白兔。二.方法1.抗原的制備(1)煙草脆裂病毒抗原的制備以實(shí)驗(yàn)室保存TRV PPK20株系的基因組RNA1和RNA2的菌液相同體積混合 共浸潤本氏煙，10-14d后收集病葉，并參照Hsu等(Hsu H T，Kim J Y，Lawson R H. Purification of lily symptomless virus and detection of the virus in lilies. Plant Disease, 1995，79: 912-916.，百合無癥病毒的純化及在百合中的病毒檢測(cè)，植物 病害，1995，79 :912-916)的提純方法略作修改，病毒即離心時(shí)在離心管底部加20%的蔗糖 溶液墊，病毒提純液經(jīng)洲磷鎢酸(pH6. 7)負(fù)染色后置日本JEOL公司的JEM-1200EX透射電 鏡下觀察粒子形態(tài)。(2)番茄斑萎病毒抗原的制備基因克隆和原核表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)GenBank 中的 TSWVN 基因序列(GenBank Aeeession No. nl3926. 1)設(shè)計(jì)引 物，克隆TSWV N基因。通過RT-PCR方法擴(kuò)增得到TSWV N基因，將割膠回收的PCR產(chǎn)物 及pET-3h分別用BamHI和B10I進(jìn)行雙酶切，酶切產(chǎn)物用V-GENE割膠回收試劑盒從瓊脂 糖凝膠中回收目的DNA片段，用連接酶將回收的TSWV N基因亞克隆連接到原核表達(dá)質(zhì)粒ρ ET-32a ( + )的多克隆位點(diǎn)上，構(gòu)建成重組質(zhì)粒ρ ET-3h-N。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌 DH5a細(xì)胞中。誘導(dǎo)表達(dá)將含重組質(zhì)粒的表達(dá)菌菌斑接種于含氨節(jié)青霉素抗生素(50 “留ml)的液體LB，37°C培養(yǎng)過夜，將過夜培養(yǎng)菌液以1:100轉(zhuǎn)接于含氨節(jié)青霉素抗生素的新鮮液體LB中， 37°C繼續(xù)培養(yǎng)至OD66tl=O. 6左右時(shí)加入誘導(dǎo)劑IPTG至終濃度為ImM，在37°C誘導(dǎo)培養(yǎng)4h。 取1000 μ L菌液離心收集菌體，加入hSDS樣品緩沖液100 μ L懸浮并于沸水中煮5min， 12000rpm離心后取上清進(jìn)行SDS — PAGE分析。表達(dá)產(chǎn)物在變性條件下的純化將大量誘導(dǎo)后QOOmL)的菌液放冰上lOmin，60009離心IOmin后徹底去上清；沉 淀用5mL緩沖液B懸浮后于室溫振搖60min至細(xì)菌充分裂解，12000r/min離心IOmin ；取上 清，加入2mLNi，+-N認(rèn)agarose混勻后于室溫振搖60min ；將混合液裝入純化柱，置于室溫 下緩慢流下，棄流出液；用8 — IOmL緩沖液C洗柱3 — 4次；用4mL緩沖液D洗柱4次； 用4X0. 5mL緩沖液E洗脫蛋白，獲得所需蛋白提純液。純化的6xHis融合蛋白經(jīng)PBS透析 去除尿素，即為制備單克隆和多克隆抗體所需的抗原。(3)黃瓜綠斑駁病毒、百合無癥病毒、香石竹斑駁病毒抗原的制備將黃瓜綠斑駁病毒、百合無癥病毒和香石竹斑駁病毒用摩擦接種的方法分別接種 西葫蘆、中國石竹和莧色藜，15天后收集葉片，按孔寶華等的方法提取植物病毒，即為制備 單克隆和多克隆抗體所需的抗原。病毒提純液經(jīng)洲磷鎢酸(PH 6.7)染色后置日本JEOL 公司的JEM 21200EX電鏡下觀察粒子形態(tài)。2.制備多克隆抗體將純化的抗原與等體積的弗氏完全佐劑充分乳化后，在雄性新西蘭大白兔背部脊 柱兩側(cè)4點(diǎn)以及腹股溝和腋窩兩側(cè)進(jìn)行多點(diǎn)皮下注射免疫，注射劑量一次為Iml左右。18 天后進(jìn)行二次免疫，皮下注射前先與弗氏不完全佐劑充分乳化。以后每隔18天進(jìn)行加強(qiáng) 免疫，加強(qiáng)免疫不加佐劑，并采用大腿肌注的方式進(jìn)行。每次免疫后7天取少量血清，用間 接EL ISA測(cè)定抗體的效價(jià)，當(dāng)效價(jià)達(dá)到1 32以上時(shí)，大量采血。將所血在室溫下放置 1小時(shí)，4°C凝結(jié)過夜，收集血清即為病毒的多克隆抗體?？寡逵?80 °C冰箱中保存?zhèn)?用。取血并分離血清即為病毒的多克隆抗體?？寡逵?80 °C冰箱中保存?zhèn)溆?。?shí)施例2.制備植物病毒檢測(cè)蛋白芯片一.材料試劑各抗體原料(實(shí)施例1制備)，氯金酸，檸檬酸三鈉，飽和硫酸銨，純水。儀器臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，劃膜噴金儀HM3030 (Goldbio上海金標(biāo)生物科技有 限公司)，斬切機(jī)ZQ2000 (Goldbio上海金標(biāo)生物科技有限公司)，冷凍干燥機(jī)。二.方法1.膠體金及金標(biāo)抗體制備(1)膠體金顆粒的制備運(yùn)用檸檬酸三鈉還原法，取1%氯金酸溶液1ml，加99ml超 純水成終濃度0. 01%的氯金酸溶液，加熱沸騰后，取1%檸檬酸三鈉1. 6ml 一次性迅速加入 煮沸的氯金酸溶液中，繼續(xù)加熱至溶液由淡黃色轉(zhuǎn)為藍(lán)黑色最終變?yōu)榱良t色，顏色穩(wěn)定后 繼續(xù)加熱5min，室溫冷卻，補(bǔ)充失水至原體積。(2)膠體金標(biāo)記抗體確定標(biāo)記的原核表達(dá)蛋白最適穩(wěn)定量和最適標(biāo)記pH，進(jìn)行 標(biāo)記。得到的免疫膠體金復(fù)合物經(jīng)超速離心法純化，棄上清，用保存液懸起較疏松的紅色沉 積物即為初步純化的免疫膠體金復(fù)合物。以保存液作對(duì)照測(cè)530nm處OD值，4°C避光保存。2.條件優(yōu)化[0057](1)免疫膠體金復(fù)合物稀釋度的確定純化的膠體金標(biāo)記蛋白作不同程度稀釋后， 均勻等量浸于同樣大小的玻璃纖維素膜制成金標(biāo)墊。組裝試紙條，在其他條件不變的情況 下，根據(jù)反應(yīng)結(jié)果，確定達(dá)到試紙條敏感度要求的最適膠體金標(biāo)記蛋白的稀釋度，為工作濃 度。( 2 )金標(biāo)墊的制備保存液稀釋膠體金標(biāo)記蛋白復(fù)合物原液至工作濃度，按比例均 勻浸于玻璃纖維素膜，-20°C凍存，冷凍真空干燥后，密封保存。(3)樣品墊的處理選擇適當(dāng)?shù)姆忾]試劑、表面活性劑和(或)非離子型去污劑單 獨(dú)或以適當(dāng)比例組合后均勻浸于玻璃纖維素膜，室溫干燥備用。(4)蛋白在硝酸纖維素膜上的包被用0. 01mol/L的PB緩沖液(pH 7. 2)以各抗 體原料包被濃度，經(jīng)Goldbio型HM3030點(diǎn)樣儀線形包被于硝酸纖維素膜的觀察結(jié)果的測(cè) 試反應(yīng)區(qū)，定義為檢測(cè)帶(T)，距離檢測(cè)帶5mm遠(yuǎn)的質(zhì)控帶(C)用點(diǎn)樣儀線形包被羊抗兔 IgG(2mg/ml)。37°C干燥 2h，4°C密封保存。3.蛋白芯片的組裝和分切根據(jù)功能不同可將試紙條分為四個(gè)部分上段(A區(qū))為手持部位(吸水濾紙吸收 檢測(cè)樣品中多余液體)，中段(B區(qū))為實(shí)驗(yàn)反應(yīng)區(qū)(硝酸纖維素膜包括判讀結(jié)果的檢測(cè)帶T 和指示試紙條質(zhì)量的質(zhì)控帶C)，下段(D區(qū))為樣品區(qū)(玻璃纖維素膜接觸待檢測(cè)樣品)，在 中下段之間(C區(qū))放置浸有膠體金標(biāo)記蛋白復(fù)合物的金標(biāo)墊；而整個(gè)試紙條貼附于白色塑 料背板。利用抗體、硝酸纖維膜(N C膜)、結(jié)合墊、樣品墊、背襯、塑料卡等材料加工組裝成 試紙條和測(cè)試卡。三.蛋白芯片的檢測(cè)(1)靈敏度檢測(cè)5min時(shí)，判讀檢測(cè)帶強(qiáng)度均在色卡號(hào)3左右。(2)交叉反應(yīng)性檢測(cè)均無交叉反應(yīng)。(3)重復(fù)性和穩(wěn)定性重復(fù)性CV < 5%，穩(wěn)定性37°C—周無明顯變化。實(shí)施例3. —種五聯(lián)植物病毒檢測(cè)蛋白芯片如圖1所示，五聯(lián)植物病毒檢測(cè)蛋白芯片具有如下結(jié)構(gòu)由固設(shè)于同一塑料背板 1上的5種不同的病毒(番茄斑萎病毒、煙草脆裂病毒、黃瓜綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒和 百合無癥病毒)檢測(cè)單元2并列構(gòu)成。如圖2所示，每一個(gè)病毒檢測(cè)單元的結(jié)構(gòu)是在PVC載體21上依次設(shè)有樣品墊M、 膠體金結(jié)合物墊23、硝酸纖維膜22和吸收墊25 ；硝酸纖維素膜22的一端通過膠體金結(jié)合 物墊23與樣品墊M相搭接，硝酸纖維素膜22的另一端與吸收墊25相搭接；硝酸纖維素膜 22上設(shè)有植物病毒檢測(cè)帶T 221和質(zhì)控帶C 222。膠體金結(jié)合物墊23為由干燥的紅色膠體金標(biāo)記多克隆抗體的膠體金結(jié)合物墊； 樣品墊M為玻璃纖維材質(zhì)；吸收墊25為棉漿板；質(zhì)控帶C 222為羊抗兔IgG抗體。 如圖3所示，所述蛋白芯片的外部還設(shè)有塑料罩3，塑料罩上對(duì)應(yīng)于蛋白芯片的樣 品墊和硝酸纖維素膜的位置分別設(shè)有點(diǎn)樣孔31和檢測(cè)窗32。該塑料罩上還在相應(yīng)位置標(biāo) 記有所檢測(cè)病毒的名稱。
權(quán)利要求1.一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，其特征在于由固設(shè)于一背板上的至少兩個(gè)不同 種類的病毒檢測(cè)單元并列構(gòu)成，每一個(gè)病毒檢測(cè)單元的結(jié)構(gòu)是在PVC載體上依次設(shè)有樣 品墊、膠體金結(jié)合物墊、硝酸纖維膜和吸收墊；硝酸纖維素膜的一端通過膠體金結(jié)合物墊與 樣品墊相搭接，硝酸纖維素膜的另一端與吸收墊相搭接；硝酸纖維素膜上設(shè)有植物病毒檢 測(cè)帶T和質(zhì)控帶C。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，其特征在于所述膠體 金結(jié)合物墊為由干燥的紅色膠體金標(biāo)記多克隆抗體的膠體金結(jié)合物墊。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，其特征在于所述樣品 墊為玻璃纖維材質(zhì)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，其特征在于所述吸收 墊為棉漿板。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，其特征在于所述質(zhì)控 帶為羊抗兔IgG抗體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任何一項(xiàng)所述的一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，其特征在 于所述植物病毒選自番茄斑萎病毒、煙草脆裂病毒、黃瓜綠斑駁病毒、香石竹斑駁病毒和 百合無癥病毒中的至少兩種病毒。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，其特征在于所述蛋白 芯片的外部還設(shè)有塑料罩，塑料罩上對(duì)應(yīng)于蛋白芯片的樣品墊和硝酸纖維素膜的位置分別 設(shè)有點(diǎn)樣孔和檢測(cè)窗。
專利摘要本實(shí)用新型公開了一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，屬于檢驗(yàn)檢疫領(lǐng)域。一種檢測(cè)多種植物病毒的蛋白芯片，由固設(shè)于一背板上的至少兩個(gè)不同種類的病毒檢測(cè)單元并列構(gòu)成，每一個(gè)病毒檢測(cè)單元的結(jié)構(gòu)是在PVC載體上依次設(shè)有樣品墊、膠體金結(jié)合物墊、硝酸纖維膜和吸收墊；硝酸纖維素膜的一端通過膠體金結(jié)合物墊與樣品墊相搭接，硝酸纖維素膜的另一端與吸收墊相搭接；硝酸纖維素膜上設(shè)有植物病毒檢測(cè)帶T和質(zhì)控帶C。本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)是蛋白芯片的使用方法簡便，成本低廉，能夠?qū)崿F(xiàn)田間快速檢測(cè)，結(jié)果準(zhǔn)確，為多種植物病毒病的診斷提供了有力的技術(shù)支持。
文檔編號(hào)G01N33/569GK201867414SQ20102064325
公開日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2010年12月6日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月6日
發(fā)明者吳建祥, 周雪平, 汪萬春, 馬新穎, 高文娜 申請(qǐng)人:中華人民共和國北京出入境檢驗(yàn)檢疫局