專(zhuān)利名稱(chēng)：通過(guò)測(cè)定降鈣素原水平對(duì)在原發(fā)性非感染性疾病患者中的抗生素治療進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明的領(lǐng)域是臨床診斷學(xué)。具體地說(shuō)，本發(fā)明涉及通過(guò)測(cè)定患者樣品中的降鈣素原(PCT)水平來(lái)對(duì)原發(fā)性非感染性疾病患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。
背景技術(shù)：
已知降鈣素原(PCT)是細(xì)菌感染和膿毒癥的標(biāo)志物。這一肽激素原的血液或血清高水平是嚴(yán)重感染的指標(biāo)。在臨床上，無(wú)論是否已實(shí)際診斷出細(xì)菌感染的存在，經(jīng)常作為預(yù)防措施，使用抗生素來(lái)治療原發(fā)性非感染性疾病的患者以防止或治療可能已被證實(shí)或可能還未被證實(shí)的可能的感染。本發(fā)明基于發(fā)明人出人意料的發(fā)現(xiàn)，即為了治療或預(yù)防可能的細(xì)菌感染來(lái)使用抗生素治療原發(fā)性非感染性疾病的患者，在特定的患者組中會(huì)伴隨不良結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)增加。具體地說(shuō)，血液PCT水平低的患者在給予抗生素時(shí)會(huì)導(dǎo)致風(fēng)險(xiǎn)增加。根據(jù)本發(fā)明，建議在開(kāi)始進(jìn)行可能有害的抗生素治療之前先測(cè)定原發(fā)性非感染性疾病患者的體液樣品中的PCT水平。高的血液或血清PCT水平表明嚴(yán)重細(xì)菌感染或甚至膿毒癥的存在，且需要使用抗生素對(duì)該患者進(jìn)行治療。然而，到目前為止，對(duì)于原發(fā)性非感染性疾病的患者，在開(kāi)始抗生素治療之前還沒(méi)有進(jìn)行低PCT水平的常規(guī)篩查。

發(fā)明內(nèi)容
因此，本發(fā)明涉及診斷方法，其用于鑒定患有由給受試者給予抗生素可能誘導(dǎo)的不良結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)增加的原發(fā)性非感染性疾病的受試者；所述方法包含如下步驟(i)提供患有原發(fā)性非感染性疾病的所述受試者的體液樣品，(ii)測(cè)定所述樣品中降鈣素原(PCT)或其片段或前體，或所述前體的具有至少12 個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度的片段的水平，(iii)將降鈣素原(PCT)或其片段或前體，或所述前體的具有至少12個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度的片段所測(cè)得的水平與給予抗生素誘導(dǎo)的產(chǎn)生不良結(jié)果的可能風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)。本發(fā)明的診斷方法為體外方法。患有原發(fā)性非感染性疾病的所述受試者不具有細(xì)菌感染、尤其不具有嚴(yán)重的細(xì)菌感染、優(yōu)選不表現(xiàn)出任何細(xì)菌感染的癥狀。本文中所述的根據(jù)本發(fā)明的方法能夠?yàn)榛加性l(fā)性非感染性疾病的受試者預(yù)測(cè)由抗生素誘導(dǎo)的不良結(jié)果。因此，本文中所述的根據(jù)本發(fā)明的方法同樣是為患有原發(fā)性非感染性疾病的受試者預(yù)測(cè)由抗生素誘導(dǎo)的不良結(jié)果的方法。第一次發(fā)現(xiàn)，對(duì)于患有原發(fā)性非感染性疾病的受試者來(lái)說(shuō)，當(dāng)給予該受試者抗生素時(shí)，極低的PCT水平顯示誘導(dǎo)不良結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)增加。因此，在優(yōu)選實(shí)施方案中，如果降鈣素原(PCT)或其片段或前體，或所述前體的具有至少12個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度的片段所測(cè)得的水平低于某個(gè)閾值的話(huà)，那么預(yù)計(jì)該受試者在被給予抗生素時(shí)產(chǎn)生不良結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)會(huì)增加。相反，根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)的方法，已知在降鈣素原(PCT)或其片段或前體，或所述前體的具有至少12個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度的片段低于某個(gè)閾值時(shí)，可能不需要使用抗生素進(jìn)行治療；但是還沒(méi)有了解到降鈣素原(PCT)或其片段或前體，或所述前體的具有至少12個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度的片段所測(cè)得的水平與對(duì)該受試者進(jìn)行抗生素治療會(huì)誘導(dǎo)不良結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)增加之間有相關(guān)性。根據(jù)現(xiàn)有的技術(shù)，在沒(méi)有臨床相關(guān)細(xì)菌性疾病的證據(jù)的情況下，經(jīng)常使用抗生素來(lái)治療可疑的細(xì)菌感染。建議僅在具有臨床相關(guān)細(xì)菌性疾病的證據(jù)的情況下給予抗生素， 以便省錢(qián)、以便避免副作用或避免耐抗生素細(xì)菌的蔓延。本發(fā)明的成就是通過(guò)將降鈣素原 (PCT)或其片段或前體，或所述前體的具有至少12個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度的片段所測(cè)得的水平與所述風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)以預(yù)測(cè)抗生素誘導(dǎo)的產(chǎn)生嚴(yán)重副作用或產(chǎn)生不良結(jié)果的增加的風(fēng)險(xiǎn)。因此，在使用抗生素對(duì)患有原發(fā)性非感染性疾病的受試者進(jìn)行治療之前先測(cè)定降鈣素原(PCT)或其片段或前體，或所述前體的具有至少12個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度的片段的水平是絕對(duì)不可避免的措施，以便鑒定出抗生素可導(dǎo)致產(chǎn)生不良結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)增加的那些受試者ο所述結(jié)果優(yōu)選為不良事件。不良事件被定義為危害個(gè)體健康的事件。所述不良事件不限于但可選自冠狀動(dòng)脈事件、心血管事件、死亡、心力衰竭、糖尿病、高血壓。冠狀動(dòng)脈事件被定義為包括心肌梗塞在內(nèi)的致命或非致命性急性冠狀動(dòng)脈綜合征、或由缺血性心臟病所致的死亡。心血管事件被定義為包括心肌梗塞在內(nèi)的致命或非致命性急性冠狀動(dòng)脈綜合征、致命或非致命性中風(fēng)、或由心血管疾病所致的死亡。所述不良結(jié)果可以是由抗生素治療、尤其是引起嚴(yán)重副作用的抗生素治療所引起的副作用。這樣的副作用可以包括例如胃部不適、腹瀉、以及婦女的陰道酵母菌感染。一些受試者可對(duì)抗生素過(guò)敏。所述結(jié)果或所述風(fēng)險(xiǎn)可以例如涉及存活和/或功能性結(jié)果。在本文中，術(shù)語(yǔ)“結(jié)果”涉及例如在確定的時(shí)間如3天、5天、10天、14天、20天、3 周、4周、30天、45天、60天、90天、3個(gè)月、6個(gè)月、1年、優(yōu)選30天后患者的存活。在本發(fā)明的背景下，術(shù)語(yǔ)“功能性結(jié)果”涉及在確定的時(shí)間如3天、5天、10天、14 天、20天、3周、4周、30天、45天、60天、90天、3個(gè)月、6個(gè)月、1年、優(yōu)選30天后疾病的嚴(yán)重程度，即患者的健康狀況。不良結(jié)果可以是例如死亡率。這表示使用本發(fā)明的方法，受試者可被鑒定出給予抗生素將在指定的時(shí)期內(nèi)，例如開(kāi)始使用抗生素治療后的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、14、15、 20、21、30、60、或90天內(nèi)導(dǎo)致致命性結(jié)果的風(fēng)險(xiǎn)增加。受試者患有的原發(fā)性非感染性疾病可優(yōu)選地選自心血管疾病、心臟疾病、癌癥、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)疾病、糖尿病、自身免疫病、以及與炎癥相關(guān)的疾病。所述原發(fā)性疾病在特定的例子中可以是心力衰竭。在優(yōu)選實(shí)施方案中受試者可以患有心力衰竭和/或氣促。本文中的心力衰竭優(yōu)選涉及充血性心力衰竭(CHF)。所述心力衰竭可優(yōu)選為急性心力衰竭(AHF)或慢性心力衰竭。心力衰竭是當(dāng)心臟的結(jié)構(gòu)或功能性問(wèn)題損害了它提供充足的血流以滿(mǎn)足身體需要的能力時(shí)發(fā)生的心臟病況。它可以引起多種癥狀，特別是氣促和踝關(guān)節(jié)腫脹，但是一些患者可以完全沒(méi)有癥狀。由于缺乏在明確診斷上普遍接受的定義和激發(fā)(challenge)，特別是在早期階段，所以心力衰竭經(jīng)常不能確診。通過(guò)適當(dāng)?shù)闹委?，在大多?shù)患者中，心力衰竭可以得到管理，但它是潛在危及生命的病況，且進(jìn)行性疾病的年死亡率為10%。在大于65歲的人中，它是住院治療的首要原因。氣促(SoB ；還被稱(chēng)為氣急或呼吸困難)涉及受試者困難的或不舒適的呼吸的感覺(jué)、或沒(méi)有得到足夠空氣的感覺(jué)。SoB可具有許多不同的原因，其中包括心臟病如心臟病發(fā)作、充血性心力衰竭、以及肺動(dòng)脈高壓。在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，受試者患有氣促且隨后被診斷為心力衰竭。在本發(fā)明的背景下，樣品中低于200pg/mL、優(yōu)選低于150pg/mL、更優(yōu)選低于 100pg/mL的PCT或其片段或前體或所述前體的片段的濃度與可能給予抗生素誘導(dǎo)的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)。這些值已使用PCT測(cè)試形式(BRAHMS KRYPTOR PCT敏感性(sensitive))來(lái)測(cè)定， 所述PCT測(cè)試形式在定量測(cè)量范圍中與更敏感的PCT分析(BRAHMS PCT LIA敏感性)具有相同的標(biāo)度(calibration)，后者的PCT分析能夠定量地測(cè)定正常人群中的PCT水平，給出了如EP09011073.5( “用于預(yù)測(cè)無(wú)癥狀人群中的不良事件的降鈣素原”)中所述的平均PCT 水平。上述值在其它PCT分析中可能會(huì)不同，如果這些在標(biāo)度上與BRAHMS KRYPTOR PCT敏感性有所不同的話(huà)。將標(biāo)度的差異考慮在內(nèi)，則上述值將適用于這類(lèi)標(biāo)度不同的PCT分析。 量化標(biāo)度差異的一個(gè)可能性是通過(guò)使用兩種方法來(lái)測(cè)量樣品中的PCT的針對(duì)所提及的PCT 分析與BRAHMS KRYPTOR PCT敏感性的方法比較分析(相關(guān)性)。另一個(gè)可能性是使用所提及的PCT分析進(jìn)行測(cè)定，假定這一測(cè)試具有充分的分析敏感度、有代表性的正常人群的平均PCT水平，將結(jié)果與EP 09011073.5( “用于無(wú)癥狀人群中的不良事件預(yù)后的降鈣素原”) 中所述的平均PCT水平進(jìn)行比較，并基于通過(guò)這一比較所得出的差異來(lái)重新計(jì)算定標(biāo)。在特定的實(shí)施方案中，另外還要測(cè)定選自如下的至少一種臨床參數(shù)年齡、性別、 收縮壓、舒張壓、抗高血壓治療、中風(fēng)史、喘息、體重指數(shù)、心率、體溫、糖尿病的存在、以及目前的吸煙習(xí)慣；最優(yōu)選地選自心率、體溫、體重指數(shù)、收縮壓、以及舒張壓。在一些特定的實(shí)施方案中，另外還可以測(cè)定其它的實(shí)驗(yàn)室參數(shù)，例如嗜中性粒細(xì)胞的水平、或進(jìn)一步的預(yù)后標(biāo)記物，尤其是其它肽激素及其片段或其前體或所述前體的片段的水平。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“樣品”是指所得的體液樣品，其用于對(duì)感興趣的受試者如患者進(jìn)行診斷、預(yù)后、或評(píng)估。優(yōu)選的測(cè)試樣品包括血液、血清、血漿、腦脊液、尿、唾液、 痰、以及胸腔積液。此外，本技術(shù)領(lǐng)域的專(zhuān)業(yè)人員將了解，在分餾或純化程序如將全血分離為血清或血漿成分后一些測(cè)試樣品將會(huì)更易于分析。因此，在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述樣品選自血液樣品、血清樣品、血漿樣品、 腦脊液樣品、唾液樣品、以及尿樣品、或上述樣品中任何一種的提取物。優(yōu)選地，所述樣品為血液樣品、最優(yōu)選為血清樣品或血漿樣品。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“受試者”是指活著的人或非人的生物體，優(yōu)選為由于原發(fā)性非感染性疾病而正在接受醫(yī)療護(hù)理或?qū)⒁邮茚t(yī)療護(hù)理的患者。這包括正在進(jìn)行病理學(xué)體征調(diào)查的沒(méi)有確定的疾病的人。因此，本文中所述的方法和分析適用于人類(lèi)和獸醫(yī)學(xué)疾病。
PCT或其前體的“片段”涉及長(zhǎng)度為至少十二個(gè)氨基酸殘基的片段。在本發(fā)明的背景下，PCT優(yōu)選涉及跨越氨基酸殘基1-116、2_116、或3-116的肽或其片段。降鈣素原可包含翻譯后修飾如糖基化、脂化(liposidation)、或衍生化。PCT本身是降鈣素和鈣抑肽(katacalcin)的前體。PCT的氨基酸序列在SEQ ID N0:1(圖4)中給
出ο在本發(fā)明的背景下，術(shù)語(yǔ)“水平”涉及取自受試者的樣品中的PCT (或片段/前體) 的濃度(優(yōu)選以重量/體積；w/v來(lái)表示)。本文中對(duì)PCT或片段或其前體或所述前體的片段的水平的測(cè)定(或測(cè)量或檢測(cè)) 是使用如下文中所說(shuō)明的檢測(cè)方法和/或診斷學(xué)分析來(lái)進(jìn)行的。如本文中所提到的，“分析”或“診斷學(xué)分析”可以是在診斷學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用的任何類(lèi)型。這樣的分析可以基于待檢測(cè)的分析物與具有一定程度親和力的一種或多種捕獲探針 (捕獲分子)的結(jié)合。就捕獲分子與目標(biāo)分子或感興趣分子之間的相互作用來(lái)說(shuō)，親和力常數(shù)優(yōu)選大于IO8M4。在本發(fā)明的背景下，“捕獲分子”是可用于結(jié)合如下分子的分子來(lái)自樣品的目標(biāo)分子或感興趣分子，即分析物(在本發(fā)明的背景下即為心血管肽)。因此捕獲分子必須要在空間上并且根據(jù)表面特征如表面電荷、疏水性、親水性、lewis供體和/或受體的存在或缺乏來(lái)進(jìn)行充分的塑造以特異性地與靶分子或感興趣分子結(jié)合。以此方式，所述結(jié)合可以例如通過(guò)如下進(jìn)行調(diào)節(jié)離子的、范德華的(van-der-Waals)、Ji - ji、ε - π、疏水鍵或氫鍵的相互作用、或捕獲分子與目標(biāo)分子或感興趣分子之間的上述相互作用中兩種或更多種的組合。在本發(fā)明的背景下，捕獲分子可例如選自核酸分子、碳水化合物分子、RNA分子、蛋白質(zhì)、抗體、肽、或糖蛋白。優(yōu)選地，捕獲分子是對(duì)目標(biāo)或感興趣分子具有充分親和力的抗體， 包括其片段；且包括重組抗體或重組抗體片段、以及所述抗體以化學(xué)和/或生化方法修飾的衍生物或來(lái)源于長(zhǎng)度為至少12個(gè)氨基酸的其變異鏈的片段。優(yōu)選的檢測(cè)方法包含各種形式的免疫分析，如放射免疫分析(RIA)、化學(xué)發(fā)光和熒光免疫分析、酶聯(lián)免疫分析(ELASA)、液相芯片基珠陣列(Luminex-based bead arrays), 蛋白質(zhì)微陣列分析、以及快速測(cè)試形式如免疫層析試紙條測(cè)試(immimochromatographic strip test)。所述分析可以是同質(zhì)性或異質(zhì)性分析、競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性?shī)A心式分析(sandwich assay)。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述分析的形式是夾心式分析，其是非競(jìng)爭(zhēng)性免疫分析，其中將待檢測(cè)和/或量化的分子與第一抗體以及第二抗體結(jié)合。所述第一抗體可以與固相如珠子、孔或其它容器的表面、芯片或試紙條(a chip or a strip)結(jié)合，且第二抗體是例如使用染料、放射性同位素、或反應(yīng)性或催化活性部分標(biāo)記的抗體。然后通過(guò)適當(dāng)?shù)姆椒▉?lái)測(cè)量與分析物結(jié)合的標(biāo)記抗體的量。與“夾心式分析”相關(guān)的常規(guī)組合物和程序是已為大家接受的，且是專(zhuān)業(yè)人員所了解的。(《免疫分析手冊(cè)》(The Immunoassay Handbook)，David Wild 編輯，Elsevier LTD, Oxford ；第三版· (2005 年 5 月)，ISBN-13 978-0080445267 ；Hultschig C等，Curr Opin Chem Biol. 2006年 2 月；10(1) :4-10. PMID 16376134)，通過(guò)參考被引入本文)。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述分析包含兩種捕獲分子一優(yōu)選二者都作為液體反應(yīng)混合物中的分散相存在的抗體，其中將第一標(biāo)記組分附著在第一捕獲分子上，其中所述第一標(biāo)記組分是基于熒光-或化學(xué)發(fā)光-猝滅或放大的標(biāo)記系統(tǒng)的一部分，并將所述標(biāo)記系統(tǒng)的第二標(biāo)記組分附著在第二捕獲分子上，所以在兩種捕獲分子都與分析物結(jié)合后產(chǎn)生了可測(cè)量的信號(hào)，其允許對(duì)含有樣品的溶液中所形成的夾心式復(fù)合物進(jìn)行檢測(cè)。還更優(yōu)選地，所述標(biāo)記系統(tǒng)包含與熒光染料或化學(xué)發(fā)光染料，尤其是菁類(lèi)染料組合的稀土穴狀化合物或稀土螯合物。在本發(fā)明的背景下，基于熒光的分析包含染料的使用，所述染料可例如選自 FAM(5-或6-羧基熒光素)、VIC、NED、熒光素、異硫氰酸熒光素(FITC)、IRD-700/800、 花青染料如CY3、CY5、CY3. 5、CY5. 5、CY7、咕噸、6-羧基-2’，4’，7’，4，7-六氯熒光素 (hexachlorof luorescein) (HEX)、TET、6-羧基-4，，5，-二氯-2，，7，，二甲氧基熒光素 (dimethodyfluorescein) (JOE)、N，N，N，，N，-四甲基-6-羧基若丹明(TAMRA)、6_ 羧基-X-若丹明(ROX)、5-羥基若丹明-6G (R6G5)、6-羧基若丹明_6G (RG6)、若丹明、若丹明綠、若丹明紅、若丹明110、BODIPY染料如BODIPY TMR、俄勒岡綠、香豆素如傘形酮、苯酰胺如赫希斯特(Hoechst) 33258 ；菲啶，如德克薩斯紅、Yakima黃、Alexa Fluor、PET、溴化乙錠、吖啶染料、咔唑染料、吩噁嗪染料、嚇啉染料、多次甲基染料等。在本發(fā)明的背景下，基于化學(xué)發(fā)光的分析包含染料的使用，其基于在如下文獻(xiàn)中描述的用于化學(xué)發(fā)光材料的物理原理Kirk-0thmer，《化工技術(shù)百科全書(shū)》(Encyclopedia of chemical technology),第 4 版，執(zhí)行編輯:J. I. Kroschwitz ；編輯M. Howe-Grant, John ffiley&Sons, 1993，第15卷，p. 518-562，通過(guò)參考被引入本文，其中包括551-562頁(yè)上的引述。優(yōu)選的化學(xué)發(fā)光染料是吖啶酯。本發(fā)明還涉及使用根據(jù)本發(fā)明的方法將患有原發(fā)性非感染性疾病的受試者分層為由給予抗生素誘導(dǎo)的不良結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)增加的受試者組和沒(méi)有由給予抗生素誘導(dǎo)的風(fēng)險(xiǎn)的受試者組。此外，本發(fā)明涉及使用包含一種或多種針對(duì)PCT或其片段或前體或所述前提的片段的抗體的試劑盒將患有原發(fā)性非感染性疾病的受試者分層為由給予抗生素誘導(dǎo)的不良結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)增加的受試者組和沒(méi)有由給予抗生素誘導(dǎo)的風(fēng)險(xiǎn)的受試者組。SEQ ID NO :1 (PCT 的氨基酸序列)1 APFRSALESS PADPATLSED EARLLLAALV QDYVQMKASE LEQEQEREGS51 SLDSPRSKRC GNLSTCMLGT YTQDFNKFHT FPQTAIGVGA PGKKRDMSSD101 LERDHRPHVS MPQNAN


圖1 實(shí)施例1的臨床研究中患者的總結(jié)。圖2 圖2圖示說(shuō)明了在實(shí)施例1的研究中被診斷為AHF的患者在從入院 (admission)起最長(zhǎng)90天的時(shí)間(以周計(jì))內(nèi)的存活(以％計(jì))。實(shí)線(xiàn)涉及沒(méi)有接受抗生素治療的患者組，而虛線(xiàn)涉及使用抗生素治療的患者。A 所有被診斷為AHF的患者(η =561)，使用抗生素治療的m = 104(90天后18人死亡)，沒(méi)有使用抗生素治療的n = 457(90天后46人死亡)，p = 0. 03011 ；B 被診斷為AHF且血漿PCT水平為從0. 0207至 0. 0511pg/mL的患者(η = 112)，使用抗生素治療的η = 17(90天后4人死亡)，沒(méi)有使用抗生素治療的n = 95 (90天后5人死亡)，p = 0. 00632 ；C 被診斷為AHF且血漿PCT水平為從0. 0511至0. 205pg/mL的患者(n = 336)，使用抗生素治療的n = 55(90天后9人死亡)，沒(méi)有使用抗生素治療的n = 281 (90天后M人死亡)，p = 0. 06328 ；D 被診斷為AHF 且血漿PCT水平為從0. 205至230pg/mL的患者(n = 113),使用抗生素治療的n = 32 (90 天后5人死亡)，沒(méi)有使用抗生素治療的n = 81 (90天后17人死亡)，ρ = 0. 06328。圖3 圖3圖示說(shuō)明了在實(shí)施例1的研究中被診斷為AHF的患者在從入院起最長(zhǎng) 90天的時(shí)間(以周計(jì))內(nèi)的存活(以％計(jì))。實(shí)線(xiàn)涉及沒(méi)有接受抗生素治療的患者組，而虛線(xiàn)涉及使用抗生素治療的患者。圖3A-D分別相當(dāng)于與圖2A-D中相同的患者組。已將圖 3的數(shù)據(jù)針對(duì)患者中喘息的發(fā)生、中風(fēng)史、以及血液嗜中性粒細(xì)胞的水平進(jìn)行了調(diào)整，以說(shuō)明抗生素治療組與非治療組之間可能的差異。圖4 降鈣素原(PCT)的氨基酸序列，SEQ ID NO :1。
實(shí)施例實(shí)施例1 臨床研究15個(gè)灃冊(cè)中心-墓集了 1641名患有氣促(SoB)和急性心力衰竭(AHF)的患者。這一研究獲得了 8個(gè)機(jī)構(gòu)的機(jī)構(gòu)審查委員會(huì)的批準(zhǔn)。從2007年三月至2008年二月注冊(cè)了來(lái)自十五個(gè)中心的1，641名患者，所述中心包括8個(gè)美國(guó)、6個(gè)歐洲、以及1個(gè)新西蘭中心。為了符合入選條件，患者必須要報(bào)告氣促是他們?nèi)ゼ痹\科就診的主要原因。年齡不滿(mǎn)18歲或不能提供同意書(shū)的患者被排除。具有急性ST段抬高心肌梗塞或進(jìn)行血液透析的患者亦被排除。在主治醫(yī)生的評(píng)估下，一些患者被給予了抗生素。對(duì)于在研究中注冊(cè)的每個(gè)患者，對(duì)調(diào)查的標(biāo)志物結(jié)果(marker result)不知情的急診醫(yī)生通過(guò)兩份獨(dú)立的李克特量表問(wèn)卷(Likert scale questionnaire)評(píng)估了患者患有急性HF或肺炎的可能性，以指定0-100%的臨床確定性值。研究細(xì)節(jié)的總結(jié)-所包括的前往急診科(ED)就診的患者，其具有并非來(lái)源于外傷、或明顯的心肌梗塞(MI)的SoB，且未進(jìn)行透析。-在同意后，對(duì)心力衰竭和/或肺炎的可能性進(jìn)行MD評(píng)估。-兩名獨(dú)立的心臟病科醫(yī)生對(duì)出院(discharge)后的最后診斷達(dá)成一致意見(jiàn)。-進(jìn)行90天的存活隨訪(fǎng)；結(jié)果“90天內(nèi)的所有死因死亡率”。表1和圖1進(jìn)一步總結(jié)了研究中患者的詳細(xì)情況。確認(rèn)診斷為了確定金標(biāo)準(zhǔn)診斷，兩名心臟病科醫(yī)生要獨(dú)立地審核患者的所有醫(yī)療記錄，并獨(dú)立地將診斷分層為由于心力衰竭、肺炎、或由于其它潛在原因所致的呼吸困難。兩名心臟病科醫(yī)生都對(duì)于彼此的評(píng)估、調(diào)查的標(biāo)志物、以及急診醫(yī)生的初步診斷不知情。他們可以得到包括如下內(nèi)容的ED病例報(bào)告表病史和可獲得的關(guān)于胸片、放射性核素血管造影術(shù)、超聲心動(dòng)圖、以及心導(dǎo)管插入術(shù)的數(shù)據(jù)、外加那些被接受入院的患者的住院診治經(jīng)過(guò)。在心臟病學(xué)審核者之間沒(méi)有在診斷上達(dá)成一致意見(jiàn)的情況下，會(huì)要求他們進(jìn)行接觸以達(dá)成一個(gè)共同的結(jié)論。在他們不能達(dá)成共同結(jié)論的情況下，終點(diǎn)評(píng)價(jià)委員會(huì)(endpoints committee) 會(huì)指定第三名心臟病學(xué)評(píng)判員來(lái)決定最后的診斷。為了達(dá)成肺炎的診斷，必須要滿(mǎn)足Fine等1990年以及Leroy等1995年修改的標(biāo)準(zhǔn)(Leroy等，《重癥監(jiān)護(hù)醫(yī)學(xué)》(Intensive Care Med)(1995)21 :24-31 ；Fine 等.Am J Med 1990 ；89 :713-721)。生物標(biāo)志物的測(cè)量所有血液樣品都收集在含EDTA的塑料管中，并將血漿在-70°C下儲(chǔ)存在塑料冷凍小瓶中。在KRYPT0R系統(tǒng)(B. R. Α. H. M. S AG, Hennigsdorf，德國(guó))上使用自動(dòng)夾心式化學(xué)發(fā)光免疫分析來(lái)測(cè)量PCT。所述分析基于夾心式化學(xué)發(fā)光分析，其在其它地方進(jìn)行了詳細(xì)描述(Morgenthaler 等，Clin Chem 2002 ；48 :788-790)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析在適當(dāng)情況下，值以平均和標(biāo)準(zhǔn)偏差(means and standard deviation)或計(jì)數(shù)和百分比來(lái)表達(dá)。在適當(dāng)情況下，使用獨(dú)立樣品t檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)來(lái)對(duì)診斷組進(jìn)行比較。使用 0.0125的ρ值作為各自的顯著性標(biāo)準(zhǔn)來(lái)估算兩個(gè)主要目標(biāo)(primary objective) 0所有其它分析都是考察性的，且就顯著性來(lái)說(shuō)利用0. 05的ρ值。二級(jí)分析利用邏輯回歸(logistic regression)、斯皮爾曼相關(guān)性(Spearman’ s correlation)、以及ROC曲線(xiàn)分析。使用Cox 比例風(fēng)險(xiǎn)回歸模型來(lái)估算結(jié)果預(yù)測(cè)。每個(gè)模型的預(yù)測(cè)值都通過(guò)模型擬然比卡方統(tǒng)計(jì)(model likelihood ratio chi-square statistic)來(lái)評(píng)估。通過(guò) Kaplan-Meier 法繪制的存活曲線(xiàn)用于說(shuō)明性目的，且時(shí)序檢驗(yàn)(log-rank test)用于測(cè)試存活差異。結(jié)果對(duì)已被診斷為急性心力衰竭(AHF)的氣促患者評(píng)估就存活而言的90天結(jié)果。在進(jìn)入研究后被診斷為AHF的457名患者沒(méi)有使用抗生素治療，104名給予了抗生素。在加入研究后的90天，在沒(méi)有使用抗生素治療的患者中有46名已死亡(10.1%)。在使用抗生素治療的患者中，在第90天之前有18名患者已死亡(17. 3% )。被診斷為AHF的患者的結(jié)果(存活率)在圖2A-D中進(jìn)行了說(shuō)明。未經(jīng)抗生素治療的患者組以實(shí)線(xiàn)來(lái)表示，使用抗生素治療的患者組以虛線(xiàn)表示。圖2A顯示了獨(dú)立于其血漿PCT水平之外的患者結(jié)果。圖2B對(duì)血漿PCT水平為從0. 0207至0. 0511pg/mL的患者進(jìn)行了總結(jié)(n = 112)，圖2C對(duì)血漿PCT水平為從0. 0511至0. 205pg/mL的患者進(jìn)行了總結(jié) (n = 336)，圖2D對(duì)血漿PCT水平高于0. 205pg/mL的患者進(jìn)行了總結(jié)(n = 113) 0結(jié)果證實(shí)，對(duì)于具有低PCT水平即低于約0. 205pg/mL且尤其是低于約0. 0511pg/mL的患者來(lái)說(shuō)， 與未經(jīng)抗生素治療的組相比，使用抗生素治療的組中存活率更低。圖3A-D與圖2A-D各自相符，除了圖3A_D的結(jié)果已針對(duì)患者的協(xié)變量 (covariant)“喘息的發(fā)生”、“中風(fēng)史”、以及“血液嗜中性粒細(xì)胞的水平”進(jìn)行了調(diào)整，以說(shuō)明使用抗生素治療與未經(jīng)治療的患者組之間的差異。圖3的結(jié)果顯示在血漿PCT水平低于約0. 0511pg/mL的患者中，與沒(méi)有使用抗生素治療的患者相比，使用抗生素治療的患者組中死亡率更高。表1 診斷的患者特性
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權(quán)利要求
1.一種診斷方法，其用于鑒定患有由給受試者給予抗生素可能誘導(dǎo)的不良結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)增加的原發(fā)性非感染性疾病的受試者，所述方法包含如下步驟(i)提供患有原發(fā)性非感染性疾病的所述受試者的體液樣品，(ii)測(cè)定所述樣品中降鈣素原(PCT)或其片段或前體，或所述前體的具有至少12個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度的片段，(iii)將所測(cè)得的水平與由給予抗生素誘導(dǎo)的可能風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)聯(lián)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的診斷方法，其中所述結(jié)果是不良事件。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的診斷方法，其中所述結(jié)果是死亡率。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)的診斷方法，其中所述受試者患有選自如下的原發(fā)性非感染性疾病心血管疾病、心臟疾病、癌癥、CNS疾病、糖尿病、自身免疫病、以及與炎癥相關(guān)的疾病。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的診斷方法，其中所述原發(fā)性疾病是充血性心力衰竭。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的診斷方法，其中所述原發(fā)性疾病是急性心力衰竭。
7.根據(jù)權(quán)利要求5的診斷方法，其中所述原發(fā)性疾病是慢性心力衰竭。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的診斷方法，其中在所述樣品中低于200pg/mL的PCT或其片段或前體或所述前體的片段的濃度與可能給予抗生素誘導(dǎo)的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)聯(lián)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1至7任一項(xiàng)的診斷方法，其中在所述樣品中低于50pg/mL的PCT或其片段或前體或所述前體的片段的濃度與可能給予抗生素誘導(dǎo)的風(fēng)險(xiǎn)增加相關(guān)聯(lián)。
10.權(quán)利要求1至9任一項(xiàng)的方法在將患有原發(fā)性非感染性疾病的受試者分層為由給予抗生素誘導(dǎo)的不良結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)增加的受試者組和沒(méi)有由給予抗生素誘導(dǎo)的風(fēng)險(xiǎn)的受試者組中的應(yīng)用。
11.包含一種或多種針對(duì)PCT或其片段或前體或所述前體的片段的抗體的試劑盒在將患有原發(fā)性非感染性疾病的受試者分層為由給予抗生素誘導(dǎo)的不良結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)增加的受試者組和沒(méi)有由給予抗生素誘導(dǎo)的風(fēng)險(xiǎn)的受試者組中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及診斷方法，其用于鑒定患有由給受試者給予抗生素可能誘導(dǎo)的不良結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)增加的原發(fā)性非感染性疾病的受試者；所述方法包含測(cè)定所述受試者的體液樣品中降鈣素原(PCT)或其片段或前體，或所述前體的具有至少12個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)度的片段，以及在所測(cè)得的水平與給予抗生素誘導(dǎo)的可能風(fēng)險(xiǎn)之間建立相關(guān)性。
文檔編號(hào)G01N33/74GK102395888SQ201080016849
公開(kāi)日2012年3月28日 申請(qǐng)日期2010年4月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月14日
發(fā)明者安德烈亞斯·貝格曼, 約阿希姆·斯特魯克 申請(qǐng)人:B.R.A.H.M.S有限公司