專利名稱：測定方法和裝置的制作方法
測定方法和裝置本發(fā)明涉及用于檢測分析物存在的方法和裝置。更特別地，本發(fā)明涉及用于檢測針對多態(tài)性同種抗原(如HLA抗原)和/或主要組織相容性復(fù)合體(MHC)的其他產(chǎn)物的免疫球蛋白的存在的方法和裝置。移植和/或輸血程序常常需要篩選受試者是否存在可能結(jié)合存在于捐贈(zèng)者組織或血液上的捐贈(zèng)者抗原的抗體；這些捐贈(zèng)者抗原的實(shí)例是HLA抗原。本領(lǐng)域已知的用于HLA測試的方法包括補(bǔ)體依賴性淋巴細(xì)胞毒性(⑶C)測試，其中用捐贈(zèng)者的淋巴細(xì)胞培養(yǎng)接受者的血清，接著與補(bǔ)體一起培養(yǎng)。然后通過用眼睛分辨死細(xì)胞和活細(xì)胞來估算細(xì)胞毒性的水平。這種方法是勞動(dòng)密集性的，需要活細(xì)胞，可能是非特異性的，并且需要主觀評價(jià)。免疫測定，例如，利用免疫系統(tǒng)的機(jī)制，其中應(yīng)答致病的或生物體外來的抗原的存在而產(chǎn)生抗體。這些抗體和抗原，即免疫反應(yīng)物，能夠彼此結(jié)合，因此引起高特異性的反應(yīng)機(jī)制，這可以用來確定生物樣品中的特定抗原的存在或濃度。已經(jīng)描述了用于檢測抗-HLA抗體的酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA) (Zaer等， Transplantation 63 :48-51(1997)；美國專利 6046013&美國專利 5482841),藉此將從集合的血小板或類淋巴母細(xì)胞細(xì)胞系純化的I類HLA分子固定于測定板的孔中并可以用于檢測抗-HLA抗體，由此該系統(tǒng)的讀出是測試板孔中的光密度變化。Barnardo等 (Transplantation，2000年8月15日；70 (3) :531-6)證實(shí)了單個(gè)重組HLA，而不是來自集合的細(xì)胞或血小板的抗原，可以用于檢測HLA抗原的ELISA形式中。最近，Jar-How在美國專利5948627中教導(dǎo)了 HLA抗原可以附著于微珠上并且可以利用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)器，Luminex平臺(tái)或用于檢測結(jié)合的抗HLA抗體的相似的裝置在流體 ELISA測定中進(jìn)行檢測。這些抗體檢測方法緩慢并且需要昂貴的專用實(shí)驗(yàn)室設(shè)備，如光密度平板閱讀器或流式細(xì)胞計(jì)數(shù)裝置。缺乏快速的重點(diǎn)照護(hù)檢驗(yàn)意味著用于同種抗體篩選的所有樣品必須進(jìn)行貯存并分批檢驗(yàn)，導(dǎo)致用于移植的不穩(wěn)定的病房用血液、血液制品和器官的使用延遲。側(cè)向流動(dòng)測試或免疫色譜測定已經(jīng)存在有些時(shí)間了。它們是膠乳凝聚測試中所用技術(shù)的合理延伸，膠乳凝聚測試首先是由Singer和Plotz在1956年研發(fā)的。側(cè)向流動(dòng)測試的益處包括快速測試(通常少于10分鐘)、易于使用(通常就在樣品中蘸一下)、長期穩(wěn)定性，這使其適于全世界使用。在它們最簡單的形式中，側(cè)向流動(dòng)測試是吸水試紙條，其中樣品通過由吸水試紙條一端的吸收墊產(chǎn)生的毛細(xì)管作用沿著試紙條流動(dòng)。隨著樣品穿過試紙條，其遇到了有色試劑，通常是已經(jīng)結(jié)合了特異性結(jié)合成員(通常是蛋白質(zhì)或抗體)的微粒。涂覆的微粒與樣品混合并結(jié)合其配體。珠子-分析物復(fù)合體通過試紙條，遇到已經(jīng)預(yù)先用抗體或抗原處理過的線條或區(qū)域。根據(jù)樣品中存在的分析物，有色試劑結(jié)合在測試線或區(qū)域中。側(cè)向流動(dòng)測試可以與競爭性測定或夾層測定那樣來進(jìn)行。通常描述兩種類型的色譜免疫測定。在一種類型中，檢測人流體(尿液、血液、血漿、血清和唾液)中含有的蛋白質(zhì)或小分子分析物。 分析物包括hCG、FSH、LH、CKMB, TSH、肌鈣蛋白、肌肉球蛋白、癌蛋白、病毒/細(xì)菌蛋白、半抗原、治療藥物和濫用藥物。在其他色譜免疫測定中，待檢測的分析物是與以下如病毒/細(xì)菌蛋白(HIV、甲肝和丙肝、幽門螺桿菌、EBV、Rubella、CMV、HSV、登革熱、Lyme、Chagas, TB、弓形蟲、自身免疫抗原等)或過敏原(花粉、霉菌、粉塵/螨類、食物、動(dòng)物上皮細(xì)胞等)等物質(zhì)特異性反應(yīng)的人抗體。為了在側(cè)向流動(dòng)測試中檢測抗體，可以使用各種形式；兩種常用的方法是競爭性的或非競爭性的。競爭性的形式依賴于通過標(biāo)記的競爭性試劑阻止待測試的分析物在試紙條上的測試區(qū)結(jié)合；用于分析物的陰性測試是由標(biāo)記的競爭性試劑在測試區(qū)引起的顏色變化而產(chǎn)生的。在競爭性測試中，沿著測試區(qū)進(jìn)一步檢測到無關(guān)標(biāo)記，表明測定已經(jīng)進(jìn)行了工作。在競爭性測定中，測試區(qū)可以包含抗原或抗體；如果使用抗原，則競爭性標(biāo)記的試劑是抗-抗原，其與測試抗體在測試區(qū)競爭結(jié)合。如果在競爭性測定的測試區(qū)使用了抗體，則競爭性試劑是標(biāo)記的抗原，允許該抗原結(jié)合測試樣品中的配體并且因此阻止其在測試區(qū)的結(jié)合。由于以下情況陰性視覺結(jié)果實(shí)際上是測試的陽性結(jié)果并且因此看上去是違反直覺的， 尤其是對于外行，因此競爭性測定沒有非競爭性測定那么普遍。在非競爭性測定中，陽性測試區(qū)是用于分析物的陽性測試在這些非競爭性測試中，測試區(qū)可以是分析物或分析物的抗體。如果測試區(qū)是分析物(抗原)，則可移動(dòng)的標(biāo)記試劑通常是抗-免疫球蛋白。在該測試中，移動(dòng)相中的抗-免疫球蛋白將樣品中的所有免疫球蛋白進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記的免疫球蛋白通過試紙條，并且如果存在抗原的抗體，則在測試區(qū)被捕獲，導(dǎo)致測試區(qū)的顏色變化。如果在測試區(qū)使用抗-免疫球蛋白，則標(biāo)記的移動(dòng)相為測試分析物，其結(jié)合樣品中的抗體，通過試紙條并且被測試區(qū)的抗-免疫球蛋白捕獲。側(cè)向流動(dòng)測定是實(shí)驗(yàn)室測試有用的產(chǎn)物，因?yàn)樗鼈兪菨撛诳焖俚牟⑶医?jīng)濟(jì)的測定臨床分析物存在的方法。然而，現(xiàn)有的裝置存在它們的問題，并且現(xiàn)有的設(shè)計(jì)并不適用于所有分析物。為了改進(jìn)側(cè)向流動(dòng)測定裝置，已經(jīng)描述了改進(jìn)的一步測定裝置和方法。例如，May 等的美國專利 5，602，040，5，622，871，5，656，503，6，187，598 和 6，228，660 描述了有助于一步側(cè)向流動(dòng)測定方法的裝置、試劑盒和方法。提供了一種測試試紙條，上面含有干燥的標(biāo)記試劑，其通過液體生物樣品釋放成可移動(dòng)形式。標(biāo)記的試劑特異性地結(jié)合待檢測的分析物， 形成復(fù)合體，并且液體樣品沿著側(cè)向流動(dòng)基質(zhì)的移動(dòng)通過毛細(xì)管作用將復(fù)合體傳送至檢測區(qū)。無關(guān)的血液成分可能引起側(cè)向流動(dòng)測定中的干擾。I^dhia等在專利 TO/2007/063423中公開了用于檢測IgE的兩步法，由此裝置的外殼含有用于除去全血成分 (如，細(xì)胞材料)的濾器，這使得可以在全血中使用該裝置。更具體地，側(cè)向流動(dòng)測試中的問題是樣品中大量的IgG，這可能干擾其他類別(如 IgE)的檢測。為了解決這一問題，Hubscher等在美國專利6，528，325中公開了一種更特異性的用于檢測人血清中的IgE抗體的裝置和方法，其中使用了有助于一步技術(shù)的側(cè)向流動(dòng)測定。獲自體液的測試樣品與金標(biāo)記的抗原反應(yīng)，并且所得到的復(fù)合體穿過膜并沿著側(cè)向流動(dòng)試紙條移動(dòng)。沿著測試試紙條的特定位置中形成的有色線條表示測試樣本中類別特異性抗體的存在。在Hubscher等公開的更具體的實(shí)施方案中，側(cè)向流動(dòng)測定具有加入樣品墊的IgG反應(yīng)蛋白(例如，蛋白A或IgG的抗體)，以與樣品中所含的IgG復(fù)合，使得IgG復(fù)合體的分子量高于1. 0百萬。這個(gè)大的復(fù)合體明顯比IgA、IgM和IgE的移動(dòng)慢，由此使這些抗體在IgG之前反應(yīng)。因此，這個(gè)發(fā)明對于IgG的檢測不再工作，因?yàn)镮gG的移動(dòng)性被阻礙，導(dǎo)致未結(jié)合的IgG阻斷了特異性結(jié)合的IgG的捕獲。因此，對檢測同種抗原的抗體的改進(jìn)方法，包括快速、方便且精確的用于測定抗體的方法存在著需求。本發(fā)明的目的是克服或減輕一個(gè)或多個(gè)與現(xiàn)有技術(shù)相關(guān)的問題。沒有一篇現(xiàn)有技術(shù)教導(dǎo)或公開了適用于多態(tài)性抗原(如，MHC或HLA抗原)的抗體或血小板糖蛋白的快速且靈敏的測試的快速而有效的側(cè)向流動(dòng)方法。根據(jù)本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供了一種用于檢測測試樣品中分析物的存在或量的流通測定裝置，該裝置包括與結(jié)合墊(conjugate pad)和芯吸墊(wicking pad)液體連通的多孔膜，所述結(jié)合墊具有用于檢測特定分析物的檢測部件，所述多孔膜具有檢測區(qū)，其中固定了第一種捕獲試劑，該捕獲試劑被構(gòu)造成結(jié)合在分析物和分析物-結(jié)合物復(fù)合體的至少一部分，以產(chǎn)生檢測信號。本發(fā)明提供了一種改進(jìn)的用于檢測抗體的快速方法，其使得使用者可以快速地評價(jià)生物樣品中抗體(例如，HLA抗原的抗體)的存在或不存在，并且在其他實(shí)施方案中，還可以測定抗體的特異性。測試可以是臨床重點(diǎn)照護(hù)檢驗(yàn)(POC)測試，和/或基于手指戳刺的基于家庭的POC測試，由此患者可以在家里檢查抗體狀況。該測試包括將來自受試者的生物流體加入側(cè)向流動(dòng)裝置中含有相關(guān)抗體的生物流體沿著裝置流動(dòng)并且接觸結(jié)合了有色的、熒光和/或金微粒的抗原配體。分析物結(jié)合的抗體的檢測發(fā)生在測試線上，由此固定相同或相似的抗原通過抗體結(jié)合兩個(gè)位置(珠子和試紙條)的抗原來固定抗體-抗原-顆粒聚集物，并且通過有色珠子的視覺存在來表示陽性測試。在本申請中，應(yīng)當(dāng)清楚使用HLA 抗原只是舉例說明，并且是多態(tài)性同種抗原系列的優(yōu)選實(shí)施方案，并且本發(fā)明包括用于檢測任何同種抗原的任何同種抗體的側(cè)向流動(dòng)測試。優(yōu)選地，對照區(qū)位于多孔膜上的檢測區(qū)的下游并且具有固定在對照區(qū)內(nèi)的第二種捕獲試劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，結(jié)合墊位于檢測區(qū)的上游，并且具有檢測探針，該檢測探針具有用于分析物的特異性結(jié)合膜。檢測部件優(yōu)選包括視覺標(biāo)記物，如有色的顆粒和/或直接連接的發(fā)色團(tuán)和/或熒光團(tuán)，用于結(jié)合并標(biāo)識(shí)/標(biāo)記配體，使得可以檢測分析物。結(jié)合墊含有發(fā)出分析物存在信號的檢測部件。結(jié)合墊還可以包括其他不同的檢測部件群，包括用于在對照區(qū)顯示的部件。檢測部件可以是納米顆粒，例如，直徑5-150nm的納米顆粒，更特別地，部件具有20至60nm的直徑，以促進(jìn)標(biāo)記物-分析物結(jié)合物的移動(dòng)。合適的檢測部件包括由金屬膠體(如銀和金膠體)、熒光顆粒、碳、聚苯乙烯和染色的膠乳顆粒制得的那些。在一個(gè)實(shí)施方案中，將含有分析物的樣品沉積在結(jié)合墊上，與檢測部件相互作用， 并且朝向用于檢測的檢測區(qū)移動(dòng)。術(shù)語“上游”和“下游”指的是相對于樣品從測定裝置上的沉積點(diǎn)的流動(dòng)方向的物
品位置。術(shù)語“分析物”通常指的是待檢測的物質(zhì)。例如，分析物可以包括多態(tài)性抗原，如MHC或HLA抗體或血小板糖蛋白、半抗原、抗體，及其組合。分析物包括但不限于毒素、有機(jī)化合物、蛋白質(zhì)、肽、微生物、氨基酸、核酸、激素、類固醇、維生素、藥物、藥物中間體或副產(chǎn)物、細(xì)菌、病毒粒子和上述任何物質(zhì)的代謝產(chǎn)物或針對上述任何物質(zhì)的抗原或免疫球蛋白。術(shù)語“測試樣品”通常指的是懷疑含有分析物的材料。術(shù)語“液體連通”指的是液體及其內(nèi)含物(包括分析物等)能夠從一個(gè)區(qū)域移動(dòng)至另一個(gè)區(qū)域的能力。例如，測試樣品可以包括從來源直接獲得的材料，以及使用技術(shù)預(yù)先處理的材料， 這些技術(shù)如但不限于過濾、沉淀、稀釋、裂解、蒸餾、混合、濃縮、滅活干擾成分、添加試劑等。 測試樣品可以源自生物來源，如生理流體，包括血液、間質(zhì)液、唾液、眼睛分泌物、腦脊髓液、 汗液、尿液、乳汁、腹水液、粘液、滑液、腹膜液、陰道分泌物、月經(jīng)、精液、糞便、羊水等。芯吸墊優(yōu)選與膜液體連通，并且由于墊子的毛細(xì)管作用給液體移動(dòng)提供驅(qū)動(dòng)力。因此，本發(fā)明提供了一種檢測涉及移植和血液制品灌輸?shù)亩鄳B(tài)性抗原的臨床相關(guān)抗體的測試裝置。受過訓(xùn)練的技師或未受過訓(xùn)練的人員可以容易地使用測試裝置，并且優(yōu)選只需要將樣品施加至樣品墊上(例如，來自手指戳刺的血液或血樣或血清樣品)，并且此后在觀察到分析結(jié)果之前，使用者只需要很少或不再需要?jiǎng)幼?。理想地，?yīng)當(dāng)快速地觀察到分析結(jié)果，在十分鐘或更短時(shí)間內(nèi)。本發(fā)明涉及用于檢測移植或灌輸同種抗原的抗體的快速實(shí)驗(yàn)室和重點(diǎn)照護(hù)檢驗(yàn)方法。同種抗原是物種中以可替換(等位基因)形式存在的抗原，因此包括將一種形式轉(zhuǎn)移至缺少這種形式的物種成員中時(shí)的免疫應(yīng)答；這些的實(shí)例包括抗人白血球抗原(HLA)抗體以及針對人血小板抗原(HPA)的血型抗體和紅血球抗體。個(gè)體在懷孕過程中，或通過輸血或血小板灌輸或之前的器官移植，可能對同種抗原變得敏感。暴露于HLA同種抗原可以產(chǎn)生抗體應(yīng)答，該應(yīng)答可以是免疫球蛋白類別中的任何一種，但通常是IgG、IgM，或很少是 IgA。個(gè)體中同種抗原的檢測在許多臨床情況下是重要的，如灌輸和移植。測定對HLA等位基因的敏感性的測試與組織和器官移植相關(guān)，其中對抗捐贈(zèng)者的HLA抗原的接受者抗體的存在預(yù)示著移植排斥的高風(fēng)險(xiǎn)。對移植后抗-HLA抗體的測試也可能是臨床相關(guān)的，因?yàn)榭?HLA抗體的出現(xiàn)或提高可能與移植排斥相關(guān)。檢測免疫球蛋白的IgG類別是最重要的，因?yàn)檫@個(gè)類別對于移植成功是危害最大的，并且因此大部分抗體檢測系統(tǒng)依賴于IgG 檢測。移植領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)踐是相對一組選定來代表人群的HLA抗原來測試所有潛在的接受者，并且測定相對其血清是反應(yīng)性的HLA等位基因的百分比。該方法是漫長的并且成本高，在一些情況下，獲得非?？焖俚慕Y(jié)果是重要的。如果樣品未具有HLA抗體，在常規(guī)測試中可能就浪費(fèi)了時(shí)間和金錢，因此對快速且廉價(jià)的鑒定有害抗體存在的篩選測試存在著需求。此外，血液或血液制品(如全血)或血小板灌輸內(nèi)多態(tài)性抗原(如HLA)的存在可能引起接受者灌輸相關(guān)的急性肺損傷(TRALI)，如果灌輸含有抗-HLA抗體；因此，本發(fā)明非常適合篩選和鑒定血液制品中的有害抗體。裝置可以是簡單的量桿，藉此將樣品墊插入血清樣品或血樣樣品中?；蛘撸梢赃M(jìn)一步包括外殼，在樣品墊上具有孔隙，使得可以添加樣品，并且在測試區(qū)具有窗口，用于觀察結(jié)果?；蛘?，可以將多重測定結(jié)合單個(gè)血清或血液收集裝置，如通過多重分析物尿液分析裝置(如檢測濫用藥物的尿杯)所證明的。在這最后一個(gè)實(shí)施方案中，可以預(yù)期裝置將裝有1至50個(gè)測試試紙條，每個(gè)測試試紙條具有1至50個(gè)同種抗原區(qū)，允許一次測試高達(dá)2，500個(gè)單個(gè)同種抗原。裝置接收器可以接受一定體積的用于分析的試劑，并且同時(shí)使特定的量施加至每個(gè)單獨(dú)的測試中。在另一個(gè)實(shí)施方案中，可以將測試裝置整體地與血液制品收集袋一起使用，以產(chǎn)生血液制品的同種抗體狀態(tài)的視覺指示。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供了一種用于檢測測試樣品中分析物的存在或量的方法，該方法包括i)提供一種流通測定裝置，其包括與結(jié)合墊和芯吸墊液體連通的多孔膜，該多孔膜限定了 a)檢測區(qū)，其中固定了第一種抗體，該抗體被構(gòu)造成結(jié)合在分析物和結(jié)合的檢測部件之間形成的復(fù)合體，以產(chǎn)生檢測信號；b)對照區(qū)，其中固定了第二種抗體，當(dāng)其包含在對照區(qū)內(nèi)時(shí)能夠產(chǎn)生對照信號；ii)使含有分析物的測試樣品接觸結(jié)合的檢測部件；和iii)檢測所述檢測信號。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供了用于檢測測試樣品中分析物的存在或量的試劑套盒，其包括a)如上所述的裝置；b)洗滌緩沖液和/或追蹤緩沖液；和c)檢測部件。根據(jù)本發(fā)明進(jìn)一步的方面，提供了用于檢測測試樣品中分析物的存在或量的方法，包括a)將含有分析物的樣品接觸檢測部件；b)通過洗滌除去未結(jié)合的檢測部件和/或其他材料；c)提供流通裝置，其具有檢測區(qū)和對照區(qū)，檢測區(qū)內(nèi)固定了第一種抗體，該抗體被構(gòu)造成結(jié)合在分析物和結(jié)合的檢測部件之間形成的復(fù)合體，以產(chǎn)生檢測信號，對照區(qū)內(nèi)固定了第二種抗體，當(dāng)其包含在對照區(qū)內(nèi)時(shí)能夠提供對照信號；d)使含有分析物的測試樣品接觸結(jié)合的檢測部件；和e)檢測所述檢測信號?，F(xiàn)在將參照附圖來描述本發(fā)明的特定實(shí)施方案，只是舉例說明，其中圖Ia和b是根據(jù)本發(fā)明的側(cè)向流動(dòng)測定裝置的示意圖；圖加和b是圖Ia和b的側(cè)向流動(dòng)測定裝置的示意圖；圖3顯示了根據(jù)本發(fā)明的量桿測試。圖4顯示了根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例16的兩級測定的結(jié)果；和圖5顯示了根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例17的兩級測定的結(jié)果。本發(fā)明的裝置10最低限度包括側(cè)向流動(dòng)裝置或側(cè)向流動(dòng)量桿，該裝置或量桿包括

圖1中所示的組成部分，即任選的血液分離墊12、芯吸墊14、結(jié)合墊16、含有固定的抗原 (測試分析物)和對照分析物的有背襯的測試試紙條18，20、22、M分成測試區(qū)和對照區(qū)以及安置在支持物觀上的吸收墊26?？梢蕴峁┪捶庋b的測試試紙條，作為量桿測試，由此只需要將樣品墊浸入分析物中，或者；側(cè)向流動(dòng)測試裝置可以包含在塑料外殼中，外殼使試紙條變得不明顯，就顯示樣品墊、測試區(qū)和對照區(qū)；在這個(gè)實(shí)施方案中，通過滴在暴露的樣品墊窗口上來施加樣品。或者，側(cè)向流動(dòng)裝置中帶有多個(gè)對不同分析物特異性的側(cè)向流動(dòng)量桿，并封裝在普通的容器中，使得可以對單個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行多個(gè)測試。作為多態(tài)性系列的實(shí)例來使用HLA抗原，并且本發(fā)明涉及用于檢測任何同種抗體的側(cè)向流動(dòng)測試。在第一個(gè)實(shí)施方案中(如圖2中所示的)，側(cè)向流動(dòng)測試用于同時(shí)檢測和區(qū)分針對多態(tài)性I類HLA抗原的免疫球蛋白和另一個(gè)檢測區(qū)中的II類抗原。測試裝置由任選的血液濾膜、含有移動(dòng)相標(biāo)記試劑的結(jié)合墊、通常由尼龍或硝基纖維素制得的使施加的樣品移動(dòng)至固定了配體的測試和對照區(qū)的有背襯的測試試紙條和吸收用過的樣品并促進(jìn)沿著試紙條芯吸的吸收墊組成。第一個(gè)實(shí)施方案利用了移動(dòng)相，其中測試珠子是結(jié)合從捐贈(zèng)者集合通過親和性純化的I類HLA抗原的特定顏色的聚苯乙烯珠；將另一種有色珠子，不同于第一種珠子的顏色，結(jié)合Π類抗原。選擇捐贈(zèng)者的集合，使得集合中代表了大部分常見的 HLA抗原。將相同集合的抗原以高濃度涂覆在獨(dú)立的位置上，形成兩條測試線；I類測試區(qū)和II類測試區(qū)。將測試珠沿著邊在結(jié)合墊上干燥，對照珠群，優(yōu)選利用第三種顏色的珠子， 覆蓋抗生物素蛋白鏈菌素。對照區(qū)由結(jié)合牛血清白蛋白(BSA)的生物素組成。在陽性測試中，將樣品施加至樣品墊上。使用血液分離濾器，如Vivid血漿分離膜(Pall Ltd)，使樣品是血液或血清或可能含有抗體的任何其他生物流體；含有抗體的組分穿過血漿分離膜進(jìn)入結(jié)合墊中，由此免疫球蛋白遇到HLA抗原并與其結(jié)合。然后測試試紙條的芯吸作用牽引含有樣品的珠子、免疫球蛋白和對照珠沿著試紙條移動(dòng)。隨著結(jié)合抗體的珠子遇到固定的抗原，珠子/免疫球蛋白復(fù)合體將變成固定的。該相是基于IgG和IgM免疫球蛋白對抗原各自具有兩個(gè)和十個(gè)化合價(jià)來工作的。因此，在IgG結(jié)合的情況下，IgG分子的一個(gè)部分結(jié)合移動(dòng)相，而該分子的其他部分結(jié)合固定相。在陰性測試的情況下，沒有抗原覆蓋的珠子固定在測試區(qū)。然而，抗生物素蛋白鏈菌素覆蓋的珠子通過生物素配體固定在測試試紙條的遠(yuǎn)端。利用此來顯示所有試劑已經(jīng)正確地穿過測試區(qū)。在第一個(gè)實(shí)施方案中，測試鑒定了同種抗原集合的抗體的存在或不存在。在第二個(gè)實(shí)施方案中，單個(gè)或多個(gè)抗原的各種組合可以用于鑒定抗體的特異性。例如，通過重組生物學(xué)方法制得的單個(gè)抗原或從細(xì)胞膜分裂并通過親和性純化的單個(gè)抗原或單個(gè)捐贈(zèng)者抗原(一個(gè)個(gè)體的抗原的綜合)可以施加于移動(dòng)相、測試區(qū)或兩者中。在這個(gè)實(shí)施方案中， 將單個(gè)施加于固定區(qū)中，每個(gè)區(qū)一種同種抗原，而將相同的單個(gè)抗原，或相關(guān)抗原類別的集合，結(jié)合移動(dòng)區(qū)中的珠子。因此，免疫球蛋白結(jié)合移動(dòng)區(qū)中的抗原，并且被攜帶至測試區(qū)；陽性測試結(jié)果將表示單個(gè)抗原的特異性抗體的存在。可以使用多個(gè)測試區(qū)，每個(gè)測試區(qū)含有不同的單個(gè)抗原或多個(gè)抗原。同樣，在第三個(gè)實(shí)施方案中，肽片段可以用于鑒定表位。在第四個(gè)實(shí)施方案中，測試的獨(dú)特特征，S卩，移動(dòng)抗原和固定抗原之間夾入的樣品免疫球蛋白，使得可以在兩個(gè)位置使用兩種不同的抗原并且因此可以檢查交叉反應(yīng)性的免疫學(xué)現(xiàn)象。在這個(gè)測試中，移動(dòng)相將展示抗原，例如，A0101，多個(gè)固定的測試區(qū)將展示一個(gè)測試區(qū)(最遠(yuǎn)端的測試區(qū))中的相同抗原和其他測試區(qū)中的相關(guān)(交叉反應(yīng)性)抗原，例如，測試區(qū)1、2&3可能各自含有A3601、Al 101和AO101。該測試的基礎(chǔ)是二價(jià)IgG分子的每個(gè)臂是相同的，但每個(gè)單獨(dú)的臂可以以不同的親和性或親合力結(jié)合不同同種抗原上的相似表位，本領(lǐng)域技術(shù)人員稱為交叉反應(yīng)性。在該測試中，如果抗體于A0101和A3601是交叉反應(yīng)性的，則二價(jià)抗體將珠子與測試區(qū)2和3中的抗原結(jié)合起來。如果抗體在A0101和AllOl之間是反應(yīng)性的，則結(jié)果將在區(qū)域2和3顯示出陽性反應(yīng)。這樣，可以詳細(xì)分析同種抗原的特異性，從其獲得的信息對于本領(lǐng)域技術(shù)人員監(jiān)控患者在移植或灌輸情況下的抗體應(yīng)答是有臨床價(jià)值的。因?yàn)榈谝粋€(gè)至第四個(gè)實(shí)施方案中的測試沒有區(qū)分免疫球蛋白類別(IgG、IgM等) 或同種型(IgGl、IgG2等)，因此可以使用第五個(gè)實(shí)施方案，由此可以使用另外的指示劑來顯示抗體存在的類別或同種型。在這個(gè)實(shí)施方案中，將標(biāo)記的類別或同種型特異性的抗體， 例如，抗-IgG加入結(jié)合墊中，或此后加入追蹤緩沖液中，由此標(biāo)記的抗體將特異性地識(shí)別測試區(qū)中存在的珠子-抗體-抗原復(fù)合體的類別或同種型。標(biāo)記的抗體將需要具有不同于任何標(biāo)記的抗原或?qū)φ盏臉?biāo)記，使得可以通過視覺來區(qū)分。該標(biāo)記可以是不同顏色的顆?；蛑苯訕?biāo)記的熒光標(biāo)記物，如Cy3或Cy5，或是任何其他通過適當(dāng)刺激可以視覺觀察到的熒光團(tuán)。可以使用圖1中所示的組成部分來構(gòu)建側(cè)向流動(dòng)裝置。任選的血液分離層系統(tǒng) (acts)是從全血中除去特定物質(zhì)(特別是凝塊、纖維蛋白和細(xì)胞材料)的濾器，使含有抗體的級分(血漿)進(jìn)入下一個(gè)相中(芯吸墊)。濾器通常由浸漬pyols的滲透性玻璃纖維構(gòu)成，pyols使血液成分凝結(jié)，防止不溶性成分傳送，如美國專利5725774中所述的，典型實(shí)例使Vivid 血漿分離膜(Pall Ltd)。在不存在血液分離濾器的情況下，通常不推薦將側(cè)向流動(dòng)裝置與全血一起使用。接下來的階段是樣品墊，其起作用將分析物轉(zhuǎn)移至含有結(jié)合物的墊子。結(jié)合墊通常由玻璃纖維構(gòu)成，這使得配體-珠子結(jié)合物在上面干燥，以這樣的方式使得移動(dòng)分析物階段到達(dá)時(shí)，珠子不受玻璃纖維固體支持物的影響，并且分析物、配體-珠子和液體成分轉(zhuǎn)移至吸水性的測試試紙條上。測試試紙條用于將反應(yīng)物和液體從結(jié)合墊區(qū)域轉(zhuǎn)移至遠(yuǎn)端吸收墊，并使這些成分接觸試紙條上離散區(qū)域中分散的固定試劑(測試和對照區(qū))。試紙條應(yīng)當(dāng)由任何可以使試劑以受控方式穿過試紙條的材料制得，受控方式可以使反應(yīng)物接觸測試區(qū)和對照區(qū)。測試試紙條通常由多孔膜制得，多孔膜由丙烯酸共聚物、醋酸纖維素、硝基纖維素、尼龍、聚醚砜(PES)、聚丙烯、聚砜、聚四氟乙烯(PTFE)或聚偏二氟乙烯(PVDF)構(gòu)成。通常將測試區(qū)和對照區(qū)噴霧并干燥在Imm寬區(qū)域的膜上，對照區(qū)通常遠(yuǎn)離測試區(qū)，以確保完全的測試。遠(yuǎn)端吸收墊可以由任何吸收材料制得，其足以能夠吸收加入的總液體體積。裝配的試紙條可以和通常的側(cè)向流動(dòng)測試那樣包含在塑料外殼內(nèi)，或可以沒有外殼和“量桿”那樣使用，在這種情況下，將近端插入分析物流體中，并使其沿著量桿進(jìn)行芯吸，以完成測試。參照圖3，提出以下實(shí)施例，以給本領(lǐng)域普通技術(shù)人員提供完整的怎樣形成和使用本發(fā)明的公開內(nèi)容和描述，并且不是用來限制發(fā)明人所認(rèn)為的發(fā)明的范圍，也不是用來表示以下的實(shí)驗(yàn)就是所進(jìn)行的全部的或僅有的實(shí)驗(yàn)。已經(jīng)進(jìn)行了嘗試來確保關(guān)于所用數(shù)字的精確性，但應(yīng)當(dāng)說明一些實(shí)驗(yàn)錯(cuò)誤和偏差，除非另外指出。對于本發(fā)明的工作實(shí)施例，構(gòu)建了三個(gè)不同的裝置。用于所有測試的測試膜來自 Sartorius ；UniSart CN140由硝酸纖維素多態(tài)性物構(gòu)成(背面有層壓的不能滲透的襯底材料)，零件號碼1UN14ER050025 裝置1含有測試試紙條，測試試紙條含有由I類HLA抗原的集合組成的單個(gè)測試區(qū)，和由生物素組成的分開的遠(yuǎn)端對照區(qū)；第二個(gè)裝置由II類HLA抗原的集合和分開的遠(yuǎn)端對照區(qū)組成，該對照區(qū)由生物素組成；第三個(gè)裝置含有兩個(gè)測試區(qū)， 由此將I類和II類抗原施加于兩個(gè)不同的測試區(qū)中，遠(yuǎn)端對照區(qū)為生物素。在每個(gè)情況下，作為親和性純化的人MHC抗原從GTI Inc (Waukesha, WI 53186 USA)購得HLA抗原，并且以0. 75mg/ml的濃度來施加I類和II類抗原結(jié)合，并且施加的速率使得測試裝置接受大約0. 5ul/裝置。在每種情況下，將來自儲(chǔ)液的蛋白質(zhì)稀釋于含有5% (w/v)BSA和20% (w/ ν)蔗糖的0. OlM硼酸鹽緩沖液中。硼酸鹽緩沖液是混合的0. Sg氯化鈉，3. 81g Borax (焦硼酸鈉)和1升蒸餾水，調(diào)節(jié)至PH8. 5，并在使用前高壓滅菌。通過施加2mg/ml的BSA-生物素結(jié)合物來構(gòu)建生物素對照區(qū)，速率為傳送大約0. 5ul/裝置。將測試配體和對照劃上條紋后,將膜風(fēng)干,然后通過施加來自 SurModics, Inc. (Eden Prairie, USA) ^ Stabilcoat 來阻斷。對于測試的移動(dòng)相，將來自GTI Inc的相同I類和II類抗原集合結(jié)合Bangs Labs DC02B Dark Blue聚苯乙烯微球體，其具有-COOH活性基團(tuán)和0. 43um的平均直徑。用于這的實(shí)驗(yàn)方案如下1.將50ul珠子(10%濃縮物)與1450ul洗滌緩沖液混合。2.在 21000_21500g 離心 4 分鐘。3.洗滌珠子&重復(fù)離心兩次，并且重懸浮于洗滌緩沖液中。4.除去上清液并且重懸浮于125ul的洗滌緩沖液中(如果可能，對于該階段，使用 200ul吸液管-通過再一次的溫和洗滌作用)。5.在連續(xù)旋轉(zhuǎn)下，在35°C下培養(yǎng)兩小時(shí)。6.加入125ul阻斷緩沖液。7.邊旋轉(zhuǎn)邊培養(yǎng)30分鐘。8.按照之前的離心4分鐘。9.除去上清液并且重懸浮于750ul洗滌緩沖液中。10.洗滌珠子&重復(fù)離心兩次，并且重懸浮于洗滌緩沖液中，再次離心，除去上清液，并且重懸浮于250ul貯存緩沖液中。貯存在4°C?！跋礈炀彌_液”是ph8. 5的硼酸鹽緩沖液?！白钄嗑彌_液”是使用硼酸鹽緩沖液制備的，包含4% BSA w/v?！百A存緩沖液”還是基于硼酸鹽緩沖液，包含5% BSA和20%蔗糖w/v(+0. 01%疊氮化鈉作為防腐劑)。將固定相(剝離并阻斷的試紙條)裝配成量桿將玻璃纖維結(jié)合墊連接在近端，將吸收墊連接在遠(yuǎn)端。將量桿貯存在環(huán)境溫度下，直至使用。實(shí)施例1至15顯示為量桿測試(參見圖幻，即，沒有將測試試紙條密封在標(biāo)準(zhǔn)塑料側(cè)向流動(dòng)外殼中，然而，可以理解相似的方法和程序可以用于成品中，作為商品用于銷售。本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解側(cè)向流動(dòng)制造中所用的試劑濃度，和所用的測試樣品的體積可以在任何臨床上成功的產(chǎn)品中有所不同。實(shí)施例1實(shí)施例1是用于比較目的的未經(jīng)測試的側(cè)向流動(dòng)量桿。對于圖3中顯示的實(shí)施例2-5，將Iul結(jié)合I類的測試珠子和0. 5ul 0. 32um抗生物素蛋白鏈菌素珠子CP01B/8891 (Bangs Labs)的1 %溶液施加于結(jié)合墊上。隨后，使用 Gilson移液管將40ul血清樣品(由牛津組織定型實(shí)驗(yàn)室，牛津贈(zèng)送，并且已知含有HLA抗體)施加于結(jié)合墊上。用含有ν/ν吐溫20的PBS緩沖液來“追蹤”樣品，通過將40ul追蹤緩沖液加入96-孔微量滴定平板的孔中，并將試紙條放入孔中，使得結(jié)合墊吸收追蹤緩沖液，這使得血清和珠子-結(jié)合物垂直沿著試紙條向上，穿過測試線和對照線，并到達(dá)吸收墊上。當(dāng)出現(xiàn)對照線時(shí)，在10分鐘內(nèi)完成測試。實(shí)施例2-4實(shí)施例2-4是未稀釋、1/10(在PBS中稀釋)和1/50稀釋測試的相同抗-B18血清樣品。所有樣品顯示出陽性I類測試線，強(qiáng)度隨著樣品稀釋而變?nèi)?。?shí)施例5實(shí)施例5是針對DR2和DQl的II類抗體陽性的樣品，因此這對于I類測試線恰好是陰性的。實(shí)施例6和7實(shí)施例6和7使用在測試區(qū)剝離的僅含有II類的試紙條，并且對照區(qū)還是生物素。對于圖3中所示的實(shí)施例6-7，按照之前所述的，使用Iul II類結(jié)合的測試珠和0. 5ul 0. 32um抗生物素蛋白鏈菌素珠子的溶液。樣品6是I類抗血清，恰好顯示為相對II類線是陰性的，而測試7顯示了含有II類抗體的血清的成功鑒定。實(shí)施例8-15這些實(shí)施例利用了含有不同組合的I類和II類抗體的測試試紙條。對于圖3中所示的實(shí)施例8-15，使用了 Iul結(jié)合I類和Iul結(jié)合II類的測試珠子，和0.5ul 0.32um抗生物素蛋白鏈菌素珠子的溶液。通過第一個(gè)位置(d.)的線來證明抗-I類的存在，通過第二個(gè)位置(e.)的陽性線來證明II類的抗體。一些測試血清對I類和II類抗體的存在都是陽性的，并且因此顯示出兩條陽性線，相反，樣品15是沒有顯示出I類或II類抗體的陰性對照樣品。兩階段測定用于HLA抗體的側(cè)向流動(dòng)測定的可替換形式包括兩階段測定，其中在施加于側(cè)向流動(dòng)裝置的反應(yīng)區(qū)之前，將分析物接觸HLA配體。這種方法的優(yōu)勢在于可以使抗原接觸樣品抗體，并且可以在珠子-抗原-免疫球蛋白復(fù)合體穿過側(cè)向流動(dòng)裝置之前，除去無關(guān)蛋白或其他材料。這種方法還使得可以將測定用于可替換的檢測方法中。以下顯示了這些中的一些實(shí)例。實(shí)施例16兩階段測定變化1為了測試兩階段測定，按照所述的實(shí)驗(yàn)方案將1類HLA蛋白結(jié)合膠乳微粒。將結(jié)合的顆粒與對照生物素化的膠乳顆粒1 1混合。將Iul的珠子混合物加入以下的陽性和陰性測試樣品中。1) 50ul抗-HLA II類(DRB)單克隆(陰性對照)2)50ul HLA 1類陰性血清(陰性測試)3) 50ul PBS吐溫中的50ul抗-HLA A2單克隆抗體(陽性測試)4) 50ul抗-1類HLA陽性的血清(陽性測試)通過在14，300rpm下離心5分鐘，使每個(gè)測試沉淀，并且丟棄上面的上清液。然后將膠乳顆粒重懸浮于50ul PBS吐溫中并在測試側(cè)向流動(dòng)試紙條上運(yùn)行。這些試紙條上的測試線是鼠抗人IgG，形成用于陽性樣品的陽性對照。測試線是抗生物素蛋白鏈菌素對照線，其結(jié)合未結(jié)合的珠子，顯示測試已經(jīng)完成。結(jié)果顯示于圖4中。該兩階段測定中的測試線可以是與這種情況下相同的抗-IgG，或者是任何其他類別或同種型特異性的實(shí)例，如抗IgM，抗IgG/A/M，抗同種型，如IgGl、2、3或4。實(shí)施例17兩階段測定變化2 ； 二價(jià)抗原測試將來自實(shí)例χ的相同血清和單克隆在可替換的試紙條上運(yùn)行，試紙條在測試線上含有濃縮的HLA蛋白，來替代之前所述的“二價(jià)”測試中的抗體。結(jié)果顯示于圖5中。一或兩階段測定的其他變化包括使用第二種抗體的夾層測定；在該實(shí)施例中，如果樣品含有HLA結(jié)合的抗體，將HLA覆蓋的珠子接觸蛋白樣品。然后將珠子-抗體復(fù)合體接觸并結(jié)合分離緩沖液或結(jié)合墊中的抗人抗體。這些第二種抗體的實(shí)例可以是任何鼠抗人 IgG、山羊抗人IgG或雞抗人IgG?？梢允褂萌魏挝锓N的抗人免疫球蛋白，并且同樣這些可以是類別或同種型特異性抗體。為了檢測珠子-HLA-抗體-第二層復(fù)合體，在測試線使用抗-物種抗體；因此如果將雞抗人用作第二層，測試線將由合適的抗雞抗體組成，這將固定復(fù)合體，產(chǎn)生陽性應(yīng)答。
權(quán)利要求
1.一種用于檢測測試樣品中分析物的存在或量的流通測定裝置，該裝置包括與結(jié)合墊和芯吸墊液體連通的多孔膜，所述結(jié)合墊具有用于檢測和結(jié)合特定分析物的檢測部件，所述多孔膜具有檢測區(qū)，其中固定的第二種捕獲試劑被構(gòu)造成結(jié)合分析物-結(jié)合物復(fù)合體的至少一部分，以產(chǎn)生檢測信號。
2.如權(quán)利要求1中所要求的裝置，其中所述分析物包含HLA抗原、多態(tài)性蛋白或在移植或灌輸情況下可能引起抗體應(yīng)答的蛋白片段，如MICA、MICB、KIR、主要組織相容性抗原 (MIHAg)、粒細(xì)胞抗原(HNA系列)、血小板抗原(ΗΡΑ系列)、內(nèi)皮細(xì)胞-單核細(xì)胞抗原(如 P-選擇蛋白、E-選擇蛋白)、CD31和輸血抗原，如Lewis、Rhesus、MN、I/i和HT-A，或針對其的免疫球蛋白。
3.如權(quán)利要求1或2中所要求的裝置，其中所述測試可以用于鑒定針對多態(tài)性分析物的免疫球蛋白的存在或不存在。
4.如權(quán)利要求3中所要求的裝置，其中所述多態(tài)性分析物包括包含許多表型的多種抗原的混合集合或針對其的免疫球蛋白。
5.如權(quán)利要求1、2或3中所要求的裝置，其中所述裝置可以用于鑒定針對來自多態(tài)性系統(tǒng)的單個(gè)分析物的免疫球蛋白或針對其的免疫球蛋白的存在或不存在。
6.如權(quán)利要求5中所要求的裝置，其中所述分析物包括單個(gè)HLA抗原，如A0101、A0201 等，或表示臨床相關(guān)表位的單個(gè)抗原的肽片段。
7.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，其中所述分析物或配體包括可能源自多個(gè)組合來源以產(chǎn)生表示基因座上的所有多態(tài)性抗原的蛋白集合的抗原，或源自單個(gè)個(gè)體的抗原，或單個(gè)抗原，如重組抗原，或抗原的一個(gè)或多個(gè)片段，如一個(gè)或多個(gè)肽，或針對其的免疫球蛋白。
8.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，其中所述檢測區(qū)含有不連續(xù)的多個(gè)抗原。
9.如權(quán)利要求6中所要求的裝置，其中所述分析物包括一個(gè)區(qū)域中的I類HLA抗原，第二個(gè)區(qū)域中的II類HLA抗原，使得可以檢測個(gè)體內(nèi)多個(gè)免疫球蛋白特異性，或針對其的免疫球蛋白。
10.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，其中所述檢測區(qū)可以含有與移動(dòng)相相同的配體。
11.如權(quán)利要求1至10任一項(xiàng)中所要求的裝置，其中所述檢測區(qū)含有與移動(dòng)相相關(guān)的抗原或表位，使得可以通過使第一個(gè)抗原的表位與第二個(gè)抗原上的表位連接來檢測免疫交叉反應(yīng)性，由此所述表位可以是相似的或不同的。
12.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，其中所述移動(dòng)相由可移動(dòng)顆粒組成，可移動(dòng)顆?？梢詾槟z乳、聚苯乙烯、聚碳酸酯、膠態(tài)金屬或其他可以在側(cè)向流動(dòng)測試區(qū)中檢測到的可移動(dòng)顆粒。
13.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，其中所述樣品墊可以由能從全血中分離出血清并使血清在所述裝置上流動(dòng)的材料組成。
14.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，其中所述移動(dòng)相可以由多個(gè)有差別地標(biāo)記的顆粒組成，這些顆粒可以在不同檢測區(qū)中得以區(qū)分。
15.如權(quán)利要求14中所要求的裝置，其中所述標(biāo)記的顆粒包括I類HLA抗原、II類HLC 抗原和/或?qū)φ湛乖?br> 16.如權(quán)利要求15中所要求的裝置，包括附著于紅色顆粒上的I類HLA，附著于藍(lán)色顆粒上的II類HLA，附著于黑色顆粒上的對照抗原。
17.如權(quán)利要求14、15或16中所要求的裝置，其中其他可移動(dòng)試劑，如針對免疫球蛋白的標(biāo)記的抗體可以用于雙重標(biāo)記反應(yīng)，使得能區(qū)分抗體類別或同種型。
18.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，其中使用移動(dòng)相中顆粒上的無關(guān)標(biāo)記，如生物素或抗生物素蛋白鏈菌素和遠(yuǎn)端對照檢測區(qū)中的相關(guān)配體來測試所述裝置的正確流動(dòng)。
19.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，其特征在于該裝置用于移植前或移植后監(jiān)控以及篩選血液和其他血液制品中抗體的存在，其中所述裝置包括可以未封裝提供的樣品墊、結(jié)合墊、測試試紙條和吸收墊，作為量桿測試，由此將樣品墊浸入分析物中。
20.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，包括a.夕卜殼b.樣品墊c.結(jié)合墊d.膜，其上具有標(biāo)記的一個(gè)或多個(gè)反應(yīng)區(qū)，和e.吸收墊。
21.如權(quán)利要求1至20任一項(xiàng)中所要求的裝置，裝有多個(gè)對不同的分析物具有特異性并裝在總的容器中的其他裝置，使得可以對于單個(gè)樣品同時(shí)進(jìn)行多個(gè)測試。
22.如之前任一項(xiàng)權(quán)利要求中所要求的裝置，其中可以通過眼睛或通過測量測試區(qū)和對照區(qū)強(qiáng)度以獲得可以產(chǎn)生定量或半定量結(jié)果的數(shù)字輸出的裝置來辨別結(jié)果。
23.一種用于檢測測試樣品中分析物的存在或量的方法，包括i)提供一種流通測定裝置，其包括與結(jié)合墊和芯吸墊液體連通的多孔膜，該多孔膜限定了 a)檢測區(qū)，其中固定了第一種抗體，該抗體被構(gòu)造成結(jié)合分析物和結(jié)合的檢測部件之間形成的復(fù)合體，以產(chǎn)生檢測信號；b)對照區(qū)，其中固定了第二種抗體，當(dāng)包含在對照區(qū)內(nèi)時(shí)，能夠產(chǎn)生對照信號； )使含有分析物的測試樣品與芯吸墊接觸；和iii)檢測所述檢測信號。
24.一種用于檢測測試樣品中分析物的存在或量的試劑套盒，包括a)如權(quán)利要求1至22任一項(xiàng)或多項(xiàng)中所要求的裝置；b)洗滌緩沖液和/或追蹤緩沖液；和c)檢測部件。
25.如權(quán)利要求M中所要求的試劑盒，進(jìn)一步包括用于收集樣品并且含有所述檢測部件的容器。
26.一種用于檢測測試樣品中分析物的存在或量的方法，包括a)使含有分析物的測試樣品接觸檢測部件；b)通過洗滌除去未結(jié)合的檢測部件和/或其他材料；c)提供一種流通測定裝置，其具有(i)檢測區(qū)，其中固定了第一種抗體，該抗體被構(gòu)造成結(jié)合在分析物和結(jié)合的檢測部件之間形成的復(fù)合體，以產(chǎn)生檢測信號，和(ii)對照區(qū)， 其中固定了第二種抗體，當(dāng)包含在對照區(qū)內(nèi)時(shí)，能夠提供對照信號；d)使結(jié)合檢測部件的洗滌過的分析物接觸所述裝置；和e)檢測所述檢測信號。
27. 一種用于檢測測試樣品中分析物的存在或量的兩階段測定法，包括 第一階段，包括a)使含有分析物的測試樣品接觸檢測部件；b)通過洗滌除去未結(jié)合的檢測部件和/或其他材料； 和第二個(gè)階段，包括c)提供一種流通測定裝置，其具有(i)檢測區(qū)，其中固定了第一種抗體，該抗體被構(gòu)造成結(jié)合在分析物和結(jié)合的檢測部件之間形成的復(fù)合體，以產(chǎn)生檢測信號，和(ii)對照區(qū)， 其中固定了第二種抗體，當(dāng)包含在對照區(qū)內(nèi)時(shí)，能夠提供對照信號；d)使結(jié)合檢測部件的洗滌過的分析物接觸所述裝置；和e)檢測所述檢測信號。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于檢測分析物存在的方法和裝置。更特別地，本發(fā)明涉及用于檢測針對多態(tài)性同種抗原(如HLA抗原)和/或主要組織相容性復(fù)合體(MHC)的其他產(chǎn)物的免疫球蛋白的存在的方法和裝置。
文檔編號G01N33/569GK102439450SQ201080022456
公開日2012年5月2日 申請日期2010年3月31日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月31日
發(fā)明者B·J·帕斯, D·查威爾, M·邦斯 申請人:生物廣益有限公司