專利名稱：測(cè)量細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的試驗(yàn)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及基于免疫學(xué)診斷試驗(yàn)的領(lǐng)域。更特別地，本發(fā)明考慮檢測(cè)細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的方法。本發(fā)明還能測(cè)定病情、治療劑和環(huán)境污染物的免疫抑制作用。本發(fā)明的試驗(yàn)也能整合到病理學(xué)架構(gòu)中以提供診斷報(bào)告系統(tǒng)和促進(jìn)臨床護(hù)理管理。
背景技術(shù)：
關(guān)于本說(shuō)明書中作者的發(fā)表物詳細(xì)書目在說(shuō)明的結(jié)尾按字母順序集中。在該說(shuō)明書中參考的任何現(xiàn)有技術(shù)不應(yīng)認(rèn)為或不應(yīng)作為承認(rèn)或任何形式暗示表明該現(xiàn)有技術(shù)在任何國(guó)家中構(gòu)成一般常識(shí)的一部分?；诿庖邔W(xué)的診斷提供檢測(cè)各種病情的重要工具?？紤]到免疫系統(tǒng)內(nèi)組分的特異性，更是如此。盡管有此特異性，基于免疫學(xué)的診斷并不總是必須有足夠敏感性以檢測(cè)低水平的適應(yīng)性和/或先天免疫活性，例如響應(yīng)低度感染或出現(xiàn)持續(xù)低水平感染或顯示免疫缺陷或任何免疫抑制形式的對(duì)象。因?yàn)檫m應(yīng)性和先天免疫潛能，需要發(fā)展與細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)相關(guān)的敏感性增強(qiáng)的診斷方法。在對(duì)已接觸或正在顯示誘導(dǎo)或關(guān)聯(lián)免疫抑制的病情和試劑的對(duì)象尤其如此?；诿庖邔W(xué)的一種診斷方法形式涉及在分離細(xì)胞培養(yǎng)或全血液培養(yǎng)中用抗原或有絲分裂原激活T細(xì)胞，然后是檢測(cè)效應(yīng)分子，例如活化T細(xì)胞(也稱為效應(yīng)T細(xì)胞)生成的細(xì)胞因子。效應(yīng)分子一般用諸如酶免疫分析，多元珠分析，酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法(ELISpot)和流式細(xì)胞儀等技術(shù)檢測(cè)。這些試驗(yàn)用于檢測(cè)疾病特異性T細(xì)胞反應(yīng)。評(píng)價(jià)對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的能力在控制免疫缺陷和免疫抑制中特別重要。免疫缺陷的表征是有效增加免疫反應(yīng)的能力下降。這種反應(yīng)的受損或缺失可能來(lái)自原發(fā)性或獲得性(繼發(fā)性)免疫缺陷。原發(fā)性免疫缺陷(PID)可基因遺傳，且表征為獲得性或先天免疫系統(tǒng)的獨(dú)特成分缺失(Hu 和 Gatti, Curr Opin Allergy Clin Immunol. 8 (6) : 540 - 546, 2008)。然而，大部分免疫缺陷是獲得性(繼發(fā)性)，并能由病原試劑誘導(dǎo)，如隨著HIV感染發(fā)生；由藥物誘導(dǎo)，如器官移植后免疫抑制治療；由病情誘導(dǎo)，如在癌癥(如白血病，淋巴瘤)中發(fā)生；或由環(huán)境污染物和污染物質(zhì)誘導(dǎo)。免疫缺陷的分子基礎(chǔ)多樣化，然而，細(xì)胞介導(dǎo)免疫在調(diào)節(jié)很多觀察到的臨床表現(xiàn)中有重要作用。目前，免疫缺陷綜合征以依賴于病原的特定方式診斷和管理。
例如，HIV感染的主要特點(diǎn)是⑶4+T細(xì)胞逐漸喪失和整體免疫功能受損，包括對(duì)病原例如巨細(xì)胞病毒(CMV)和乙型肝炎病毒(HBV)的抗原特異性獲得性免疫反應(yīng)受損(Douek等，Annu. Rev. Med. 60:471-84，2009 和 Chang 等，J. Virol. 83:7649-58，2009)。因此，CD4+T計(jì)數(shù)和病毒載量是HIV感染的重要替代標(biāo)記，并已經(jīng)廣泛作為免疫功能障礙和預(yù)防治療后漸進(jìn)感染及免疫重建的有效預(yù)測(cè)(Hengel和Kovacs, J. Infect. Dis. 188 (12) : 1791-3，2003)。然而，當(dāng)機(jī)會(huì)性感染在正常CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)和低病毒載量存在情況下出現(xiàn)時(shí)，很多情況中臨床疾病不與這些替代標(biāo)記特定預(yù)測(cè)的免疫功能水平相關(guān)(Solomon等，J. Infect.Dis.187 :1915-23,2003)。相似地，還以特定方式監(jiān)控患者的細(xì)胞免疫缺陷狀態(tài)，所述患者進(jìn)行實(shí)體器官移植(S0T)并接受抑制免疫系統(tǒng)藥物(免疫抑制劑)作為抗排異測(cè)量的患者。通常，監(jiān)控患者免疫抑制劑藥物水平，以及監(jiān)控常規(guī)血液計(jì)數(shù)和移植、醫(yī)院或社區(qū)獲得性感染的發(fā)生(Schrem等，Dtsch Arztebl Int. 106(9) :148 - 156，2009)。與很多當(dāng)前用于監(jiān)控和定義疾病狀態(tài)相關(guān)免疫缺陷的標(biāo)記關(guān)聯(lián)的根本問(wèn)題是細(xì)胞介導(dǎo)免疫的缺失。已開(kāi)發(fā)了一些T細(xì)胞功能試驗(yàn)來(lái)檢測(cè)對(duì)有絲分裂原，例如植物血細(xì)胞凝集素(PHA)、商陸促分裂原和伴刀豆球蛋白(ConA)的淋巴增殖反應(yīng)然而，這些只檢測(cè)T細(xì)胞功能能力；所述細(xì)胞是參與細(xì)胞介導(dǎo)免疫的細(xì)胞子集。重要的是，先天免疫機(jī)理對(duì) 宿主防御貢獻(xiàn)重大變得日益明顯，其通過(guò)單獨(dú)作用或增加特異性T細(xì)胞反應(yīng)(Cooper等，Hematology :314-30, 2003)因此，先天(自然殺傷(NK)細(xì)胞)和獲得性(T細(xì)胞)免疫細(xì)胞的功能反應(yīng)一起形成細(xì)胞介導(dǎo)免疫的更廣泛分析。評(píng)價(jià)細(xì)胞介導(dǎo)免疫的能力臨床上重要。例如，超過(guò)三千三百萬(wàn)成人和兒童被HIV感染(2008年全球艾滋病疫情報(bào)告(2008Report on the Global AIDS Epidemic), UNAIDS ；ISBN 9789291737116)并且目前每年全球進(jìn)行約100，000例實(shí)體器官移植(Matesanz等，Transplant Proc. 41(6) :2297-301,2009)。先天免疫功能障礙已經(jīng)涉及到HIV感染中，所述全血IFN-Y分析用于監(jiān)控對(duì)TLR-7/8激動(dòng)劑化合物(咪唑喹啉，R848)的先天免疫反應(yīng)(Nowroozalizadeh等，Cytokine46:325-31,2009)。另外，檢測(cè)功能T細(xì)胞反應(yīng)(Cylex ImmuKnow (注冊(cè)商標(biāo))，如US2003/0199006A1所述)的診斷設(shè)備檢測(cè)來(lái)自PHA刺激CD4+細(xì)胞的ATP生成(Kowalski等，Jlmmunotoxicol. 4(3) :225_32，2007)。特定地，Cylex分析已經(jīng)顯示在SOT設(shè)置的臨床應(yīng)用，從而包括感染和排異在內(nèi)的不良事件能得到有效控制。需要開(kāi)發(fā)一種能評(píng)價(jià)對(duì)象中先天和獲得性細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的組合功能狀態(tài)的試驗(yàn)，并測(cè)定能誘導(dǎo)免疫抑制的病情和試劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供評(píng)價(jià)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫的狀態(tài)和潛能的方法。本文所述方法能在獲得性和先天免疫反應(yīng)的共同刺激下部分預(yù)測(cè)。這提供目標(biāo)對(duì)象中包括任何免疫抑制程度的細(xì)胞介導(dǎo)免疫潛能的預(yù)測(cè)檢測(cè)。在一個(gè)實(shí)施方式中，全血或其部分的細(xì)胞與刺激淋巴細(xì)胞獲得性和先天免疫反應(yīng)的一種或多種試劑接觸。細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的水平通過(guò)測(cè)量免疫細(xì)胞生成的效應(yīng)分子的出現(xiàn)或水平來(lái)確定。在特定實(shí)施方式中，全血或其部分包括T細(xì)胞和NK細(xì)胞。一種或多種試劑刺激或加強(qiáng)通過(guò)T細(xì)胞的獲得性免疫反應(yīng)和通過(guò)NK細(xì)胞的先天免疫反應(yīng)。因此，所述試驗(yàn)檢測(cè)獲得性和先天細(xì)胞介導(dǎo)免疫的組合潛能。與單獨(dú)測(cè)量獲得性或先天免疫活性相比,組合免疫反應(yīng)提供細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)性更好的檢測(cè)。另外，所述試驗(yàn)?zāi)苡眯⊙后w積例如I μ 1-1000 μ I進(jìn)行，并因此該試驗(yàn)適合手指點(diǎn)剌和基于毛細(xì)管取樣。本文也考慮大體積試驗(yàn)，例如I. 5ml-200ml，包括5ml，IOml和20ml ο評(píng)價(jià)組合的獲得性和先天免疫的能力很重要，例如，用于鑒定病情和治療及環(huán)境試劑，所述試劑誘導(dǎo)可造成更大繼發(fā)性感染風(fēng)險(xiǎn)的免疫抑制。因此，本發(fā)明的一方面描述檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞樣品來(lái)源與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，和檢測(cè)免疫細(xì)胞生成的免疫效應(yīng)分子水平，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)水平。本發(fā)明的另一方面提供檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞樣品來(lái)源與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，和檢測(cè)來(lái)自免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的增加，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)水平，其中免疫反應(yīng)的水平指示選自以下列表的疾病或病癥的存在或缺失或水平或階 段病原體感染，自體免疫疾病，癌癥，炎癥病癥，接觸毒性試劑，接觸治療試劑和免疫缺陷。本發(fā)明的另一方面描述檢測(cè)對(duì)象中疾病或病癥的出現(xiàn)、缺失、水平或階段的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞樣品來(lái)源與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，和檢測(cè)來(lái)自免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的增加，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示疾病或病癥。甚至本發(fā)明的另一方面提供監(jiān)控對(duì)象響應(yīng)疾病或病癥的治療方案的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與用于治療方案的試劑接觸，和在能加強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種分子存在情況下，檢測(cè)來(lái)自免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子的出現(xiàn)或水平增加，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示治療方案的功效。本發(fā)明還描述測(cè)定試劑是否誘導(dǎo)對(duì)象免疫抑制的方法，所述方法包括將接觸試劑后的對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與刺激獲得性和先天免疫的一種或多種增強(qiáng)劑接觸，并且檢測(cè)來(lái)自淋巴細(xì)胞的效應(yīng)分子的出現(xiàn)和水平，其中效應(yīng)分子的水平確定所述試劑誘導(dǎo)的免疫抑制的水平。在一個(gè)實(shí)施方式中，血液樣品用TLR激動(dòng)劑和TLR激動(dòng)劑共刺激。根據(jù)此方面，所述試劑可以是藥物或環(huán)境毒藥。本發(fā)明方法也能稱為“試驗(yàn)”。本文的試驗(yàn)用于評(píng)價(jià)對(duì)象的普通免疫反應(yīng)或檢測(cè)對(duì)特定病情的免疫反應(yīng)，所述病情例如自體免疫疾病，乳糜瀉，癌癥，致病生物或試劑的感染，接觸毒性試劑或藥物和免疫缺陷或免疫抑制病癥，如由某一病情誘導(dǎo)。淋巴細(xì)胞來(lái)源是便捷的全血，但是本發(fā)明描述任何淋巴細(xì)胞來(lái)源的應(yīng)用，包括含淋巴細(xì)胞的分離樣品以及經(jīng)歷細(xì)胞分離和/或清除的樣品。血液的微樣品例如衍生自針刺和毛細(xì)管方法，也形成本發(fā)明的一部分。樣品包括至少T細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞)和NK細(xì)胞(NK淋巴細(xì)胞)。提及“免疫細(xì)胞”包括T細(xì)胞。可選地，單糖例如右旋糖或葡萄糖加入到反應(yīng)混合物中。提及“全血”包括沒(méi)有稀釋的全血，和以約10%-約100%總樣品分析體積(即反應(yīng)混合物)的體積用于試驗(yàn)的全血,包括約50%-約100%和80%-約100%。分析體積范圍可以為I μ 1_大于1000 μ 1，包括
I.5ml-200ml,例如 5ml_20ml。一類試劑可用于增強(qiáng)獲得性和先天免疫或者兩種或更多試劑可共同使用。示例包括用TCR激動(dòng)劑和TLR激動(dòng)劑共刺激。淋巴細(xì)胞也可接觸特定抗原，以檢測(cè)對(duì)象的抗原誘導(dǎo)獲得性和先天免疫反應(yīng)的組合能力。所述對(duì)象可以是人或非人動(dòng)物。因此，本發(fā)明有人體醫(yī)學(xué)，獸醫(yī)和畜牧業(yè)應(yīng)用。人在本發(fā)明實(shí)踐中是特別有用的對(duì)象。另一個(gè)實(shí)施方法中，本發(fā)明描述檢測(cè)病情是否誘導(dǎo)對(duì)象免疫抑制的方法，所述方法包括將有病情的對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與加強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，并測(cè)量來(lái)自淋巴細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子的出 現(xiàn)或水平，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示誘導(dǎo)病情或與之相關(guān)的免疫抑制程度。試劑盒和皮膚試驗(yàn)也形成本發(fā)明的一部分。一個(gè)實(shí)施方式中，樣品是全血，從包含試劑或孵育中加入試劑的收集管內(nèi)收集。一般，血液在肝素存在下維持。當(dāng)加入或后續(xù)加入血液時(shí)，肝素可在試管中。血液收集管的應(yīng)用與標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)相容，這些適合大量和隨機(jī)存取抽樣的分析。血液收集管也使處理成本最小化并減少實(shí)驗(yàn)室接觸全血和血漿，因而降低實(shí)驗(yàn)室人員接觸病原體的風(fēng)險(xiǎn)，所述病原體例如人類免疫缺陷病毒(HIV)、乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)。另夕卜，使用收集管進(jìn)行孵育使所述試驗(yàn)的靈敏度高于先前所用24孔培養(yǎng)板。因此本發(fā)明提供增強(qiáng)的細(xì)胞介導(dǎo)免疫試驗(yàn)，所述試驗(yàn)包括在一個(gè)實(shí)施方式中使用收集管，可選單糖例如右旋糖和用加強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑的孵育步驟。培養(yǎng)步驟一般5-50小時(shí)，例如24小時(shí)?？蛇x地加入抗原。免疫效應(yīng)分子一般是細(xì)胞因子，例如但不限于IFN-Y，白細(xì)胞介素(例如IL-2，IL-4，IL-6，IL-10, IL-12或IL-13)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β (TGFβ )或粒細(xì)胞或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(分別是G-CSF和GM-CSF)。其他效應(yīng)分子在表6中列出。免疫效應(yīng)分子的出現(xiàn)或水平可根據(jù)分子自身水平或編碼該分子基因表達(dá)的程度測(cè)定。本發(fā)明試驗(yàn)也能用于治療方案管理的個(gè)性化醫(yī)療方法和/或作為病理學(xué)架構(gòu)平臺(tái)部分。此平臺(tái)可以基于或不基于網(wǎng)絡(luò)。因此也提供商業(yè)方法，其中在運(yùn)輸管中收集血液，然后在定義位點(diǎn)分析細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)，隨后結(jié)果通過(guò)合適結(jié)構(gòu)以電子報(bào)告形式送達(dá)臨床護(hù)理提供者。另外，可以小體積血液進(jìn)行試驗(yàn)的能力對(duì)兒童，老年和體弱人群有用。附圖
簡(jiǎn)要說(shuō)明一些圖片包括彩色表現(xiàn)或?qū)嶓w。彩色照片可向?qū)＠麢?quán)所有人要求或從合適的專利局獲得。如從專利局獲得，可能需要交費(fèi)。圖IA-C是圖形表述，顯示來(lái)自全血培養(yǎng)物的單獨(dú)刺激物IFN- Y反應(yīng)。正常健康供體群散布，使用TCR刺激物有絲分裂原(A)和抗⑶3抗體(B)或TLR刺激物R848 (C)。圖2A-C是圖形表述，顯示抗⑶3抗體(TCR激動(dòng)劑)和不同TLR激動(dòng)劑的協(xié)同。(A)TLR-2 ;Pam3CSK4 和脂甘露聚糖，(B)TLR-4 ；LPS (脂多糖)和(C)TLR-7/8 ；R848 (咪唑喹啉)化合物。圖片上的數(shù)字顯示相比抗CD3抗體單獨(dú)刺激培養(yǎng)物，用TLR/抗CD3抗體共刺激培養(yǎng)物的IFN-Y反應(yīng)增加倍數(shù)。圖3是圖形表述，顯示使用TCR/TLR共刺激的協(xié)同以在正常健康個(gè)體中設(shè)定界限(臨界值)IFN-y反應(yīng)。這可設(shè)定健康人群參考范圍，從而能觀察免疫缺陷個(gè)體的IFN-Y反應(yīng)下降。因此，若反應(yīng)落在健康人群臨界值(界限)內(nèi)時(shí)，可推斷來(lái)自藥物治療或疾病的免疫抑制測(cè)量。圖4是圖形表述，顯示在來(lái)自治療(TCR+TLR激動(dòng)劑)和未治療(NIL)全血的人血漿中檢測(cè)多個(gè)分析物。通過(guò)用抗⑶3抗體(TCR激動(dòng)劑)和TLR-7/8激動(dòng)劑；R848 (咪唑喹啉)的組合刺激來(lái)治療人全血。數(shù)個(gè)趨化因子，細(xì)胞因子和胞外信號(hào)分子只在用TCR和TLR激動(dòng)劑同時(shí)刺激的全血的血漿中發(fā)現(xiàn)(藍(lán)色條；TCR+TLR)。與未治療全血相比，數(shù)個(gè)其他分子上調(diào)(紅色條；NIL)。圖5的圖形顯示與HIV感染和正常健康組中用全血和單獨(dú)TCR激動(dòng)劑或TLR激動(dòng)劑刺激相比，全血培養(yǎng)物的雙重刺激物(TCR+TLR) IFN-Y反應(yīng)間觀察到的協(xié)同。研究人群包括(i )未處理HIV陽(yáng)性(源自南非)；和(ii )正常健康供體(源自澳大利亞)。人群中值見(jiàn)表7。圖6的圖形顯示HIV感染組的組合激動(dòng)劑(TCR+TLR)刺激的全血中，觀察到的IFN- Y反應(yīng)水平和CD4T細(xì)胞計(jì)數(shù)間的關(guān)聯(lián)性。
圖7是圖形表述，顯示在給定供體中能測(cè)定免疫抑制劑抑制濃度的TCR和TLR激動(dòng)劑組合刺激全血。發(fā)明詳述整篇說(shuō)明書中，除非上下文需要另外說(shuō)明，術(shù)語(yǔ)“包括”或其變體如“包含”或“含有”應(yīng)理解為指示包括所述元件或整數(shù)或者元件或整數(shù)組而不排除任何其他元件或整數(shù)或者元件或整數(shù)組。本對(duì)象說(shuō)明書所用的單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”和“該”包括復(fù)數(shù)事物，除非上下文另有明確說(shuō)明。因此，例如，提及“T細(xì)胞”包括單個(gè)T細(xì)胞，和兩個(gè)或更多T細(xì)胞；提及“試齊IJ”包括單一試劑，和兩種或更多試劑；提及“發(fā)明”包括發(fā)明的單個(gè)或多個(gè)方面；等等。術(shù)語(yǔ)“T細(xì)胞”和“T淋巴細(xì)胞”在本文中可互換使用。“免疫細(xì)胞”包括T細(xì)胞和先天免疫系統(tǒng)細(xì)胞，例如NK細(xì)胞。提及“制劑”，“試劑”，“分子”和“化合物”包括單個(gè)實(shí)體和兩個(gè)或多個(gè)這類實(shí)體的組合?！敖M合”也包括多個(gè)部分，例如單獨(dú)提供制劑或單獨(dú)使用或分散或分散前一起混合的兩部分組合物。例如，多部分試驗(yàn)包可以有分別加強(qiáng)獲得性和先天免疫維持的兩種或更多制劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，兩種制劑是TCR激動(dòng)劑和TLR激動(dòng)劑。因此，本發(fā)明的此方面包括制劑，所述制劑干燥和疏松或固定到試驗(yàn)包的分隔墻或固體支持物?！敖M合”也包括含獲得性免疫刺激物和先天免疫刺激物的融合或嵌合分子。獲得性免疫刺激物可以通過(guò)T細(xì)胞受體依賴性或非依賴性方式調(diào)節(jié)獲得性免疫。TCR激動(dòng)劑的示例是抗CD3抗體。TLR激動(dòng)劑包括TLR-7/8激動(dòng)劑，例如R848 (咪唑喹啉)。本發(fā)明部分通過(guò)來(lái)自接觸獲得性和先天免疫增強(qiáng)的淋巴細(xì)胞的效應(yīng)分子生成增加來(lái)預(yù)測(cè)。這使得試驗(yàn)更靈敏以評(píng)價(jià)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。因此，本發(fā)明提供檢測(cè)、評(píng)價(jià)或另外監(jiān)控對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)的試驗(yàn)，這是通過(guò)測(cè)量由獲得性和先天免疫增效劑刺激的T細(xì)胞效應(yīng)分子的出現(xiàn)或水平。淋巴細(xì)胞與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的試劑接觸。一般使用至少兩種試劑，其中至少一種增強(qiáng)獲得性免疫(通過(guò)T細(xì)胞)且至少一種增強(qiáng)先天免疫(通過(guò)NK細(xì)胞)?；蛘撸褂冒ǐ@得性免疫刺激物和先天免疫刺激物的嵌合分子。獲得性免疫刺激物可以通過(guò)T細(xì)胞受體依賴性或非依賴性方式。因此，本發(fā)明提供檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)的方法，并進(jìn)而提供檢測(cè)病情或試劑是否誘導(dǎo)免疫抑制或與之相關(guān)的方法。所述方法也能診斷傳染病，病理狀況，測(cè)定免疫活性水平和評(píng)價(jià)對(duì)內(nèi)源或異源試劑的獲得性和先天免疫細(xì)胞反應(yīng)，以及評(píng)價(jià)接觸毒性試劑例如鈹或其他毒劑。因此，本發(fā)明的方面描述檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，和檢測(cè)免疫細(xì)胞生成的免疫效應(yīng)分子水平，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)水平。本發(fā)明的另一方面提供檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞樣品來(lái)源與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，和檢測(cè)來(lái)自免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的增加，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)水平，其中免疫反應(yīng)的水平指示選自以下列表的疾病或病癥的存在或缺失或水平或階段病原體，自體免疫疾病，癌癥，炎性病癥和接觸毒性試劑。而本發(fā)明的另一方面提供檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞樣品來(lái)源與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，和檢測(cè)來(lái)自 免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的增加，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)水平并指示選自以下列表的疾病或病癥的存在或缺失或水平或階段病原體，自體免疫疾病，癌癥，炎性病癥和接觸毒性試劑。本發(fā)明的另一方面描述檢測(cè)對(duì)象中疾病或病癥的出現(xiàn)、缺失、水平或階段的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，和檢測(cè)來(lái)自免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的增加，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示疾病或病癥。本發(fā)明還描述測(cè)定試劑是否誘導(dǎo)對(duì)象中免疫抑制的方法，所述方法包括將接觸試劑后的對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與刺激獲得性和先天免疫的一種或多種增強(qiáng)劑接觸，并且檢測(cè)來(lái)自淋巴細(xì)胞的效應(yīng)分子的出現(xiàn)和水平，其中效應(yīng)分子的水平確定所述試劑誘導(dǎo)的免疫抑制的水平。根據(jù)此方面，所述試劑可以是藥物或環(huán)境毒藥。在一個(gè)實(shí)施方式中，血液樣品用TCR激動(dòng)劑(如抗⑶3抗體)和TLR激動(dòng)劑(如TLR-7/8激動(dòng)劑，咪唑喹啉(R848))共刺激。因此，本發(fā)明描述檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與提高獲得性和先天免疫的TCR激動(dòng)劑和TLR激動(dòng)劑接觸，和檢測(cè)從免疫細(xì)胞生成的免疫效應(yīng)分子水平，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)水平。本發(fā)明的另一方面提供檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞樣品來(lái)源與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的TCR激動(dòng)劑和TLR激動(dòng)劑接觸，和檢測(cè)來(lái)自免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的增加，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)水平，其中反應(yīng)水平指示選自以下列表的疾病或病癥的存在或缺失或水平或階段病原體感染，自體免疫疾病，癌癥，炎性病癥和接觸毒性試劑。也提供增強(qiáng)獲得性和先天免疫的TCR激動(dòng)劑和TLR激動(dòng)劑在細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的診斷試驗(yàn)生產(chǎn)中的應(yīng)用，所述方法通過(guò)用增強(qiáng)獲得性和先天免疫系統(tǒng)的一種或多種分子孵育淋巴細(xì)胞和檢測(cè)效應(yīng)分子的出現(xiàn)或提高。另一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明描述檢測(cè)對(duì)象病情是否誘導(dǎo)免疫抑制的方法，所述方法包括將有病情的對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與加強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，并測(cè)量來(lái)自淋巴細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子的出現(xiàn)或水平，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示誘導(dǎo)病情或與之相關(guān)的免疫抑制程度。也提供增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑在細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的診斷試驗(yàn)生產(chǎn)中的應(yīng)用，所述方法通過(guò)用增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種分子孵育淋巴細(xì)胞和檢測(cè)效應(yīng)分子的出現(xiàn)或提高。此應(yīng)用包括檢測(cè)或監(jiān)控疾病或病癥的存在、缺失、水平或階段，所述疾病或病癥例如病原體感染、自身免疫疾病、癌癥、炎性病癥和/或接觸藥劑或毒性試劑如鈹或其他環(huán)境毒劑。測(cè)量“免疫效應(yīng)分子”包括檢測(cè)一種或多種不同類型的分子。提及獲得性和先天免疫潛能，包括刺激T細(xì)胞受體依賴性和/或非依賴性免疫和Toll樣受體(TLR)依賴性免疫，例如由NK細(xì)胞介導(dǎo)?！懊庖呒?xì)胞”指包括“T細(xì)胞”。也可加入額外試劑以調(diào)控調(diào)節(jié)T細(xì)胞(T調(diào)節(jié)細(xì)胞)活性。后者包括抑制T調(diào)節(jié)細(xì)胞的抑制功能。本文所涵蓋的調(diào)節(jié)T調(diào)節(jié)細(xì)胞的試劑包括CD25配體；編碼JAKl或TYK2遺傳物質(zhì)的正義或反義寡核苷酸；中和抗體；包括寡核苷酸的CpG ;用作TLR調(diào)控劑的寡核苷酸；和其他TLR調(diào)控劑。在特定實(shí)施方式中，T調(diào)節(jié)細(xì)胞是活性被抑制的免疫反應(yīng)抑制細(xì)胞。因此，本發(fā)明還針對(duì)檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象的調(diào)節(jié)T細(xì)胞來(lái)源與試劑接觸，所述試劑選自(i)調(diào)節(jié)T細(xì)胞抑制子的抑制劑jp(ii)免疫增強(qiáng)細(xì)胞或其亞群的激活劑；并將T細(xì)胞與增強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，和測(cè)量來(lái)自免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的提高，其中免疫效應(yīng)分子水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)的水平。T調(diào)節(jié)功能的抑制劑或調(diào)節(jié)劑的示例包括⑶25配體，例如但不限于⑶25的多克隆或單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，CD25的人源化或去免疫多克隆或單克隆抗體或者多克隆或單克隆抗體的重組或合成形式。試劑的其他示例包括正義或反義核和分子，其針對(duì)編碼Janus酪氨酸激酶I (JAKl)或酪氨酸激酶2 (TYK2)或JAKl或TYK2蛋白的小分子抑制劑的mRNA或DNA (即遺傳物質(zhì))。提及“小分子”包括免疫球蛋白新抗原受體(IgNAR)，如描述于國(guó)際專利公開(kāi)號(hào)WO 2005/118629。然而，合適試劑的其他示例包括刺激試劑，例如通過(guò)Toll樣受體(TLR)和/或其他機(jī)理作用的CpG分子。因此，作為TLR調(diào)節(jié)試劑的包含一種或多種寡核苷酸的CpG也形成本發(fā)明的一部分。
可使用單一類型試劑或使用兩個(gè)或更多類型試劑來(lái)調(diào)節(jié)T調(diào)節(jié)細(xì)胞。例如，所述試驗(yàn)可用CD25配體和JAK1/TYK2正義或反義寡核苷酸；CD25配體和TLR調(diào)節(jié)試劑JAKl/TYK2正義或反義寡核苷酸和TLR調(diào)節(jié)試劑；或⑶25配體，JAK1/TYK2正義或反義寡核苷酸和TLR調(diào)節(jié)試劑進(jìn)行?；蛘撸挥靡环N類型試劑?；蛘?，可使用包括寡核苷酸和TLR調(diào)節(jié)試劑的CpG。根據(jù)本發(fā)明的不同方面，淋巴細(xì)胞/免疫細(xì)胞也可接觸抗原以測(cè)量抗原誘導(dǎo)的獲得性和先天免疫反應(yīng)。提及“對(duì)象”，包括人類或非人物種，包括靈長(zhǎng)類，家畜動(dòng)物(如綿羊，牛，豬，馬，驢，山羊)，實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)動(dòng)物(如小鼠，大鼠，兔，豚鼠，豬，倉(cāng)鼠)，伴侶動(dòng)物(如狗，貓)，鳥類物種(如家禽鳥，飛鳥)，爬行動(dòng)物和兩棲動(dòng)物。因此本發(fā)明可用于人體醫(yī)學(xué)，以及畜牧和獸醫(yī)和野生應(yīng)用，包括馬、狗和駱駝比賽行業(yè)。例如，本發(fā)明的試驗(yàn)通常可用于馬的強(qiáng)度勞作(如賽跑)之前和/或之后以篩選運(yùn)動(dòng)誘發(fā)肺出血(EIPH)的證據(jù)。所有馬在運(yùn)動(dòng)中顯示一定程度的一些EIPH形式。然而，EIPH的亞臨床形式難以檢測(cè)。提及人，包括特定人群，例如兒童、老年和體弱人群以及特定種族的特定組和群體。另一個(gè)實(shí)施方式中，對(duì)象是人且細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)試驗(yàn)用于篩選對(duì)致病微生物、病毒和寄生蟲的響應(yīng)，發(fā)展?jié)撃芑虮O(jiān) 控免疫情況，乳糜瀉，監(jiān)控對(duì)象響應(yīng)腫瘤攻擊和測(cè)定任何免疫缺陷或免疫抑制的出現(xiàn)。后者可出現(xiàn)，例如由包括多種化療試劑的某些藥物引起?；蛘撸佑|環(huán)境毒劑或污染物。免疫效應(yīng)分子可以是響應(yīng)細(xì)胞活化或抗原刺激生成的某一范圍分子的任何一種。盡管干擾素(IFN)例如IFN-Y是特別有用的免疫效應(yīng)分子，其他包括細(xì)胞因子，例如白介素(IL)如 IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12 或 IL-13，腫瘤壞死因子 α (TNF-α )，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β (TGF-β )，集落刺激因子(CSF)例如粒細(xì)胞(G)-CSF或粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞(GM)-CSF，以及許多其他分子如補(bǔ)體通路中的補(bǔ)體或組分?？筛爬ǖ钠渌?yīng)分子包括表6所列的那些。T細(xì)胞受體激動(dòng)劑的示例包括PHA，葡萄球菌腸毒素B(SEB)，CpG寡核苷酸，T細(xì)胞受體復(fù)合物的抗體和抗CD3抗體。不依賴T細(xì)胞受體的獲得性免疫刺激物示例包括PMA和ConA。TLR激動(dòng)劑包括Pam3CSK4(TLR-2配體)，脂甘露聚糖(TLR-2配體)，聚(I:C)-(TLR_3配體)，脂多糖(TLR-4配體)，咪唑喹啉化合物，例如R848(TLR-7/8配體)和CpG寡脫氧核苷酸(TLR-9配體)。至于選擇TLR激動(dòng)劑，激動(dòng)劑按降序選自TLR-7/8>TLR-4>TLR-3>TLR-2?！癈pG分子”指包括CpG序列或基序的寡核苷酸。本發(fā)明延伸至Toll樣受體(TLR)功能或免疫系統(tǒng)其他方面的任何調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明也提供檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與TLR激動(dòng)劑和獲得性免疫刺激物接觸，和檢測(cè)來(lái)自免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。本發(fā)明試驗(yàn)?zāi)軝z測(cè)對(duì)象中疾病或病癥的存在或缺失或水平或階段，所述疾病或病癥例如病原體感染，自身免疫疾病，癌癥，接觸炎性病癥，接觸藥物，接觸毒性試劑例如鈹或其他毒劑或污染物以及免疫缺陷或免疫抑制例如由病情誘導(dǎo)。獲得性和先天免疫試劑可以在反應(yīng)容器中游離或固定于固體支持物，例如珠或反應(yīng)容器的邊或底部。試劑可用干燥形式，在使用前或期間重建。相似地，如果包括抗原，所述抗原可以游離或固定于反應(yīng)容器，例如容器本身或珠或其他固體支持物。在一個(gè)實(shí)施方式中，從對(duì)象收集的樣品一般存于血液收集管中。血液收集試管包括抽血管或其他類似容器。便利地，當(dāng)樣品是全血時(shí)，肝素化血液收集管?；蛘撸菏占笙蛟嚬芗尤敫嗡?。盡管全血特別加以考慮且是最方便的樣品，本發(fā)明也延伸到含有免疫細(xì)胞的其他樣品，例如淋巴液，腦液，組織液和包括鼻腔和肺液在內(nèi)的呼吸液以及經(jīng)歷細(xì)胞清除的樣品。提及“全血”，包括沒(méi)有被例如用組織培養(yǎng)，培養(yǎng)基，試劑，賦形劑等稀釋的全血。在一個(gè)實(shí)施方式中，術(shù)語(yǔ)“全血”包括至少10%全血體積的試驗(yàn)樣品(即反應(yīng)混合物)。術(shù)語(yǔ)“至少 10% 體積”包括血液體積為 10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，60，61，62，63，64，65，66，67，68，69，70，71，72，73，74，75，76，77，78，79，80，81，82，83，84，85，86，87，88，89，90，91，92，93，94，95，96，97，98，99 和100%的反應(yīng)混合物總試驗(yàn)體積。可加入額外試劑,例如培養(yǎng)基,酶,賦形劑、抗原等,而沒(méi)有離開(kāi)包括“全血”的樣品。也可使用小體積血液,例如I μ 1-1000 μ I。示例包括5μ1,10μ1,20μ1,50μ1,ΙΟΟμ I和500μ I和其間的部分。因此，樣品體積包括約I μ I-約200ml，包括lml，5ml，IOml和 20ml。血液收集管的應(yīng)用與標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng)相容，這些可適合大量和隨機(jī)存取抽樣的分析。血液收集管也使處理成本最小化并減少實(shí)驗(yàn)室接觸全血和血漿，因而降低實(shí)驗(yàn)室人員接觸病原體的風(fēng)險(xiǎn)，例如HIV，乙型肝炎病毒(HBV)或丙型肝炎病毒(HCV)。孵育步驟與收集管的組合特別有效并增強(qiáng)試驗(yàn)的靈敏度，如在單糖例如右旋糖或 葡萄糖存在下孵育細(xì)胞的可選特性。細(xì)胞介導(dǎo)免疫系統(tǒng)的細(xì)胞喪失在對(duì)象抽血后的延長(zhǎng)期增加全血中免疫反應(yīng)的能力，并且沒(méi)有干擾的反應(yīng)在抽血后約24小時(shí)常常嚴(yán)重降低或缺失。人工減少和對(duì)專門塑料制品的需求允許在護(hù)理地點(diǎn)用抗原進(jìn)行細(xì)胞介導(dǎo)的刺激，例如醫(yī)師診所、診所、門診設(shè)施和獸醫(yī)檢驗(yàn)或農(nóng)場(chǎng)上。一旦抗原刺激完成，不再需要新鮮和活性細(xì)胞。IFN-Y和其他細(xì)胞因子或免疫效應(yīng)分子在血漿中穩(wěn)定，因此，樣品能在不需要特殊條件或快速要求情況下存儲(chǔ)，或運(yùn)輸。孵育步驟可以為1-50小時(shí)，例如1-40小時(shí)或8_24小時(shí)或以下之間的時(shí)間段1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，47，48，49 或 50 小時(shí)。24 小時(shí)時(shí)間段特別合適。檢測(cè)細(xì)胞介導(dǎo)免疫的能力對(duì)評(píng)價(jià)對(duì)象能力重要，所述能力包括對(duì)病原體例如微生物或病毒或寄生蟲感染的響應(yīng)，增加自體免疫反應(yīng)例如自體免疫糖尿病或保護(hù)抵御癌癥或其他腫瘤情況或檢測(cè)炎性病癥或檢測(cè)對(duì)象對(duì)毒性試劑例如鈹?shù)慕佑|或敏感性。本文所述試驗(yàn)也能檢測(cè)導(dǎo)致免疫抑制或藥物誘導(dǎo)免疫抑制的病情。因此，提及“檢測(cè)對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)”，包括和涵蓋傳染和自體免疫疾病的免疫診斷，免疫活性標(biāo)記和炎癥、癌癥和毒性試劑的標(biāo)記。重要的是，測(cè)定組合的獲得性和先天免疫反應(yīng)。另外，使用小體積血液的能力使得試驗(yàn)在例如兒童、老年和體弱人群中簡(jiǎn)單易行。在一個(gè)實(shí)施方式中，造成免疫抑制的病情包括慢性感染和癌癥。能導(dǎo)致免疫抑制的藥物包括那些用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，癌癥和炎癥性腸病的藥物。病原體或感染原包括細(xì)菌，寄生蟲和病毒。細(xì)菌的示例包括革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性微生物，例如分枝桿菌屬(Mycobacterium),葡萄球菌屬(Staphylococcus),鏈球菌屬(Streptococcus),大腸桿菌(Escherichia coli),沙門氏菌(Salmonella),梭狀芽抱桿菌屬(Clostridium),志賀菌屬(Shigella),變形桿菌屬(Proteus),芽孢桿菌屬(Bacillus),嗜血桿菌屬(Hemophilus),伯疏氏螺旋體屬(Borrelia)等。結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)以及結(jié)核分枝桿菌感染產(chǎn)生的病癥例如結(jié)核病(TB)是特別有用的祀標(biāo)。病毒示例包括肝炎病毒(乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒)，皰疹病毒和人類免疫缺陷病毒(HIV)和其產(chǎn)生的疾病。寄生蟲包括瘧原蟲屬(Plasmodium)，環(huán)癬，肝寄生蟲等等。其他病原體包括真核細(xì)胞，例如酵母和真菌。
本文所述用于檢測(cè)的自體免疫疾病包括脫發(fā)斑禿，強(qiáng)直性脊柱炎，抗磷脂綜合征，自體免疫阿狄森氏病，多發(fā)性硬化癥，腎上腺自體免疫疾病，自體免疫溶血性貧血，自體免疫性肝炎，自體免疫卵巢炎和睪丸炎，白塞氏病，大皰性類天皰瘡，心肌病，口炎性腹瀉皮炎(celiac sprue-dermatitis),慢性疲勞綜合征(CFIDS),慢性炎癥脫髓鞘,慢性炎癥多神經(jīng)病，變應(yīng)性肉芽腫性血管炎，瘢痕性類天皰瘡，CREST綜合征，冷凝集素病，克隆氏病，皰疹樣皮炎，盤狀紅斑狼瘡，基本混合冷球蛋白血癥，纖維組織肌痛，腎小球腎炎，格雷弗氏病，急性多發(fā)性神經(jīng)根炎，橋本甲狀腺炎，特發(fā)性肺纖維化，特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)，IgA腎病，胰島素依賴型糖尿病(I型)，扁平苔蘚，紅斑狼瘡，梅尼埃病，混合性結(jié)締組織病，多發(fā)性硬化癥，重癥肌無(wú)力，心肌炎，尋常性天皰瘡，惡性貧血，結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎，多軟骨炎，多腺體綜合征(polyglancular syndromes),風(fēng)濕性多肌痛,多發(fā)性肌炎和皮肌炎，原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥，原發(fā)性膽汁性肝硬化，牛皮癬，雷諾氏現(xiàn)象，賴特爾綜合癥，風(fēng)濕熱，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，結(jié)節(jié)病，硬皮病，干燥綜合征，全身肌強(qiáng)直綜合征，系 統(tǒng)性紅斑狼瘡，多發(fā)性大動(dòng)脈炎，顳動(dòng)脈炎/巨細(xì)胞動(dòng)脈炎，潰瘍性結(jié)腸炎，葡萄膜炎，血管炎和白癜風(fēng)。通常評(píng)價(jià)接觸傳染實(shí)體的對(duì)象的潛在或?qū)嶋H細(xì)胞介導(dǎo)反應(yīng)非常重要。本發(fā)明方法也能用于檢測(cè)這些情況是否出現(xiàn)以及疾病過(guò)程的水平和階段。 能導(dǎo)致免疫抑制的其他病情包括炎癥病情。本發(fā)明描述的炎癥病情示例包括但不限于，導(dǎo)致某些區(qū)域變紅、腫脹、疼痛和發(fā)熱感覺(jué)響應(yīng)的疾病和紊亂，其用于保護(hù)受損傷或疾病影響的組織。能使用本發(fā)明方法治療的炎癥疾病包括但不限于，痤瘡，心絞痛，關(guān)節(jié)炎，吸入性肺炎，疾病，積膿癥，腸胃炎，炎癥，腸流感，NEC，壞死性腸炎，盆腔炎，咽炎，PID，胸膜炎，喉嚨發(fā)炎，紅腫，發(fā)紅，喉嚨痛，腸胃感冒和尿路感染，慢性炎癥脫髓鞘多神經(jīng)病，慢性炎癥脫髓鞘多神經(jīng)根神經(jīng)病，慢性炎癥脫髓鞘多神經(jīng)病，慢性炎癥脫髓鞘多神經(jīng)根神經(jīng)病。關(guān)于非人類應(yīng)用，本發(fā)明也檢測(cè)馬的EIPH和各種動(dòng)物病癥，例如袋獾面部腫瘤。癌癥治療部分取決于細(xì)胞介導(dǎo)免疫和腫瘤本身或能導(dǎo)致免疫抑制的腫瘤治療藥物。本文所述腫瘤包括一組疾病和紊亂，特征為細(xì)胞生長(zhǎng)失控(例如腫瘤形成)而這些細(xì)胞沒(méi)有任何分化為專門且不同細(xì)胞。這些疾病和紊亂包括=ABLl原癌基因，AIDS相關(guān)癌癥，聽(tīng)神經(jīng)瘤，急性淋巴細(xì)胞性白血病，急性髓細(xì)胞白血病，腺樣囊腺癌，腎上腺皮質(zhì)癌，特發(fā)性髓樣化生，禿頭癥，泡軟組織肉瘤，肛門癌，再生障礙性貧血，星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤，共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥，基底細(xì)胞癌(皮膚)，膀胱癌，骨瘤，腸瘤，腦干膠質(zhì)瘤，腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，乳腺癌，中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，類癌瘤，子宮頸癌，兒童腦腫瘤，兒童癌癥，兒童白血病，兒童軟組織肉瘤，軟骨肉瘤，絨毛膜癌，慢性淋巴細(xì)胞性白血病，慢性粒細(xì)胞白血病，結(jié)直腸癌，皮膚T細(xì)胞淋巴瘤，隆凸性皮膚纖維肉瘤，促纖維組織增生性小細(xì)胞癌，導(dǎo)管癌，內(nèi)分泌癌，子宮內(nèi)膜癌，室管膜瘤，食道癌，尤文氏肉瘤，肝外膽道癌，眼癌，眼黑色素瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，輸卵管癌，范科尼貧血，纖維肉瘤，膽膀胱癌，胃癌，胃腸道癌，胃腸道類癌腫瘤，泌尿生殖系統(tǒng)的癌癥,生殖細(xì)胞瘤,妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病腫瘤,神經(jīng)膠質(zhì)瘤,婦科癌癥,惡性血液腫瘤，毛細(xì)胞白血病，頭頸癌，肝細(xì)胞癌，遺傳乳腺癌，組織細(xì)胞增生癥，何杰金氏病，人類乳頭狀瘤病毒，水囊狀胎塊，高鈣血癥，下咽癌，眼內(nèi)黑色素瘤，胰島細(xì)胞癌，卡波西肉瘤，腎癌，郎格罕細(xì)胞組織細(xì)胞增多病，喉頭癌，平滑肌肉瘤，白血病，李-佛美尼綜合癥，唇癌，脂肪肉瘤，肝癌，肺癌，淋巴性水腫，淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，男性乳腺癌，腎惡性橫紋肌腫瘤，髓母細(xì)胞瘤，黑色素瘤，默克爾細(xì)胞癌，間皮瘤，轉(zhuǎn)移癌，口腔癌，多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤，蕈樣肉芽腫，骨髓增生異常綜合征，骨髓瘤，骨髓增生性疾病，鼻腔癌，鼻咽癌，腎胚細(xì)胞瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，神經(jīng)纖維瘤病，奈梅亨破損綜合癥，非黑色素瘤皮膚癌，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，眼癌，食道癌，□腔癌，□咽癌，骨肉瘤，造□術(shù)卵巢癌，胰腺癌，鼻竇癌，副甲狀腺癌，腮腺腫瘤，陰莖癌，周邊神經(jīng)外胚層腫瘤，垂體腫瘤，真性紅細(xì)胞增多癥，前列腺癌，罕見(jiàn)癌癥和相關(guān)疾病，腎細(xì)胞癌，成視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤，先天性皮膚異色癥，唾液腺腫瘤，肉瘤，神經(jīng)鞘瘤，塞扎里綜合征，皮膚癌，小細(xì)胞肺癌(SCLC)，小腸腫瘤，軟組織肉瘤，脊髓腫瘤，鱗狀細(xì)胞癌(皮膚)，胃癌，滑膜肉瘤，睪丸癌，胸腺癌，甲狀腺癌，移行細(xì)胞癌(膀胱)，移行細(xì)胞癌(腎-腎盂-/_輸尿管)，滋養(yǎng)細(xì)胞癌，尿道癌，泌尿系統(tǒng)的癌癥，膜板塊蛋白，子宮肉瘤，子宮癌，陰道癌，外陰癌，沃爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥和腎母細(xì)胞瘤。如上所示,淋巴細(xì)胞免疫細(xì)胞還可接觸抗原以測(cè)量抗原誘導(dǎo)的獲得性和先天組合免疫。 免疫效應(yīng)分子的檢測(cè)可以在蛋白或核酸水平測(cè)量。因此，免疫效應(yīng)分子的“出現(xiàn)或水平”包括直接和間接數(shù)據(jù)。例如，細(xì)胞因子mRNA的高水平是顯示細(xì)胞因子水平增加的間接數(shù)據(jù)。免疫效應(yīng)物的配體對(duì)檢測(cè)和/或定量這些分子特別有用。免疫效應(yīng)物的抗體特別有用。本文所述試驗(yàn)的技術(shù)為本領(lǐng)域已知,并包括,例如放射性免疫測(cè)定、夾心法,ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法?！翱贵w”包括抗體部分，哺乳動(dòng)物化(例如人源化)抗體，去免疫抗體，重組或合成抗體以及雜交和單鏈抗體。對(duì)于人皮膚實(shí)驗(yàn)，本文特定描述人源化或去免疫抗體用于檢測(cè)效應(yīng)物分子。多克隆和單克隆抗體都可用免疫效應(yīng)物分子或其抗原片段免疫得到，并任一種類都可用于免疫分析。獲取兩種血清的方法為本領(lǐng)域熟知。多克隆血清不太優(yōu)選，但相對(duì)易于制備，通過(guò)向合適實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物注射有效劑量的免疫效應(yīng)物或其抗原部分，從動(dòng)物收集血清，并用任何已知免疫吸附劑技術(shù)分離特定血清。盡管此種方法生產(chǎn)的抗體可用于幾乎任何類型免疫分析，但是它們通常因?yàn)楫a(chǎn)品的潛在異質(zhì)性而不受青睞。免疫分析中應(yīng)用單克隆抗體特別有用，因?yàn)槠淠艽罅可a(chǎn)且產(chǎn)品具有同質(zhì)性。通過(guò)融合永生細(xì)胞系和對(duì)免疫原性制品敏感的淋巴細(xì)胞獲得用于單克隆抗體生產(chǎn)的雜交瘤細(xì)胞系制備可用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)完成。因此，另一方面本發(fā)明描述檢測(cè)對(duì)象含淋巴細(xì)胞的樣品中免疫效應(yīng)分子的方法，所述方法包括將樣品或等分樣品與對(duì)免疫效應(yīng)分子或其抗原片段特異的抗體在足以形成抗體-效應(yīng)物復(fù)合體情況下接觸一段時(shí)間，并且然后檢測(cè)復(fù)合體，其中在淋巴細(xì)胞與增強(qiáng)獲得性和先天免疫系統(tǒng)的一種或多種試劑孵育后產(chǎn)生免疫效應(yīng)分子?！皹悠贰卑ㄈ蚱浒馨图?xì)胞的部分。此方法包括平板或球形固體支持物上的微陣列，宏陣列和納米陣列?？捎梦⒒蚝觋嚵小！皹悠贰币舶sIy 1-1000μ I的小體積樣品，包括 5 μ 1，10μ 1，20μ 1，50μ I 和 ΙΟΟμ I。廣泛的免疫試驗(yàn)技術(shù)可參見(jiàn)美國(guó)專利號(hào)4，016, 043，4，424，279和4，018, 653。下面是一類試驗(yàn)的描述。沒(méi)有標(biāo)記的抗體固定于固體底物，待檢測(cè)免疫效應(yīng)分子(如細(xì)胞因子)的樣品與結(jié)合分子接觸。經(jīng)過(guò)一段合適時(shí)間的孵育，時(shí)間足以形成抗體-免疫效應(yīng)物分子復(fù)合體，然后加入對(duì)效應(yīng)物分子特異的二抗、標(biāo)記有能產(chǎn)生檢測(cè)信號(hào)的報(bào)道分子，孵育且時(shí)間足以形成另一抗體-效應(yīng)物-標(biāo)記抗體復(fù)合物。洗去任何沒(méi)有反應(yīng)的物質(zhì)，通過(guò)觀察報(bào)道分子產(chǎn)生的信號(hào)來(lái)測(cè)定效應(yīng)物分子的存在。結(jié)果可以通過(guò)簡(jiǎn)單觀察可見(jiàn)信號(hào)來(lái)定量，或通過(guò)對(duì)比包括已知抗原量的對(duì)照樣品來(lái)定量。此廣義技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，可以是多種變化中的任一種。在這些試驗(yàn)中，對(duì)即時(shí)免疫效應(yīng)物特異的一抗可共價(jià)或被動(dòng)結(jié)合到固體表面。通常固體表面是玻璃或聚合體，最常用聚合體是纖維素，聚丙烯，尼龍，聚苯乙烯，聚氯乙烯或聚丙烯。固體支持物可以是試管，珠，球，微孔板盤，或其他適合作免疫分析的合適表面。結(jié)合過(guò)程為本領(lǐng)域熟知，并通常由共價(jià)交聯(lián)結(jié)合或物理吸附組成，洗滌聚合體-抗體復(fù)合物以制備檢測(cè)樣品。待檢測(cè)的等份樣品隨后加入固相復(fù)合物并在合適情況下(例如約20° C-約40° C)孵育足夠時(shí)間(例如2-120分鐘或更合適的時(shí)間，過(guò)夜)以使結(jié)合抗體中存在的任何亞基。孵育期后，洗滌抗體亞基固相并干燥，用對(duì)部分效應(yīng)分子特異的二抗孵育。二抗連接報(bào)道分子，用于指示二抗與效應(yīng)分子的結(jié)合。
此試驗(yàn)存在很多變化。一個(gè)特別有用的變化是所有或很多成分基本同時(shí)混合時(shí)同時(shí)分析。另外，抗體與細(xì)胞因子的結(jié)合可以通過(guò)與針對(duì)所提及一抗的經(jīng)標(biāo)記抗體的結(jié)合來(lái)測(cè)定。通過(guò)本說(shuō)明書所用的“報(bào)道分子”，指通過(guò)分子其化學(xué)性質(zhì)提供可分析鑒定的信號(hào)，能檢測(cè)結(jié)合抗原的抗體。檢測(cè)可以是定性或定量。這類試驗(yàn)中最常用的報(bào)道分子是酶，熒光團(tuán)或含分子的放射性核素(即放射性同位元素)和化學(xué)發(fā)光分子。合適熒光團(tuán)的示例在表I中提供。酶免疫測(cè)定的情況中，酶一般通過(guò)戊二醛或過(guò)碘酸鹽與二抗偶聯(lián)。然而，如已公知，存在本領(lǐng)域技術(shù)人員可用的廣泛不同偶聯(lián)技術(shù)。常用的酶包括辣根過(guò)氧化物酶，葡萄糖氧化酶，β-半乳糖苷酶和堿性磷酸酶等。與特定酶一起使用的底物通常選擇為在相應(yīng)酶水解后產(chǎn)生可檢測(cè)的顏色變化。合適酶的示例包括堿性磷酸酶和過(guò)氧化物酶。也可以使用熒光底物，產(chǎn)生熒光產(chǎn)物而不是上面提及的發(fā)色底物。所有情況中，將酶標(biāo)記的抗體加入第一抗體-抗原復(fù)合物中，使之結(jié)合，然后洗去多余試劑。然后將包括合適底物的試劑加入抗體-抗原-抗體復(fù)合物中。底物與連接二抗的酶反應(yīng)，產(chǎn)生定性可見(jiàn)信號(hào)，通?？捎梅止夤舛确治鲞M(jìn)一步定量，指示樣品中存在的抗原量。再者，本方面延伸至基本同時(shí)的分析?；蛘?，熒光化合物例如熒光素和若丹明，可以化學(xué)偶聯(lián)于抗體上而不改變其結(jié)合能力。當(dāng)用特定波長(zhǎng)光照射激活時(shí)，熒色物標(biāo)記抗體吸收光能，誘導(dǎo)分子激發(fā)性狀態(tài)，然后發(fā)射用光學(xué)顯微鏡視覺(jué)可檢測(cè)的特征性顏色的光。熒光標(biāo)記抗體可結(jié)合第一抗體-抗原復(fù)合物。洗去未結(jié)合試劑后，剩余三元復(fù)合物隨后暴露在合適波長(zhǎng)光下，觀察到的熒光指示感興趣抗原的存在。免疫熒光和酶免疫分析技術(shù)在本領(lǐng)域都已完善，并特別優(yōu)選用于本方法。然而，也可使用其他報(bào)道分子，例如放射性同位素，化學(xué)發(fā)光或生物發(fā)光分子?？梢允褂靡幌盗衅渌麢z測(cè)系統(tǒng)，包括膠體金和本發(fā)明涵蓋的所有這種檢測(cè)系統(tǒng)。本發(fā)明也包括遺傳分析，例如涉及PCR分析以檢測(cè)編碼免疫效應(yīng)物的遺傳序列的RNA表達(dá)產(chǎn)物。在一個(gè)實(shí)施方式中，使用引物對(duì)完成PCR，引物之一或兩者一般用相同或能給出可區(qū)分信號(hào)的不同報(bào)道分子標(biāo)記。使用熒光團(tuán)在本發(fā)明實(shí)踐中特別有用。合適熒光團(tuán)的示例可選自表I中給出的列表。其他標(biāo)記包括發(fā)光和磷光以及紅外染料。這些染料或熒光團(tuán)也可用作抗體的報(bào)道分子。
表I合適突光團(tuán)列表
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞樣品來(lái)源與增強(qiáng)獲得性和先天免疫系統(tǒng)的一種或多種試劑接觸，和檢測(cè)來(lái)自免疫細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的出現(xiàn)或增加，其中免疫效應(yīng)分子的出現(xiàn)或水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)。
2.一種測(cè)定試劑是否誘導(dǎo)對(duì)象免疫抑制的方法，所述方法包括將接觸試劑后的對(duì)象淋巴細(xì)胞樣品來(lái)源與刺激獲得性和先天免疫的一種或多種增強(qiáng)劑接觸，并且檢測(cè)來(lái)自淋巴細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子的出現(xiàn)和水平，其中免疫效應(yīng)分子的水平確定試劑誘導(dǎo)的免疫抑制的水平。
3.—種檢測(cè)對(duì)象病情是否誘導(dǎo)免疫抑制的方法，所述方法包括將有病情的對(duì)象淋巴細(xì)胞樣品來(lái)源與加強(qiáng)獲得性和先天免疫的一種或多種試劑接觸，并測(cè)量來(lái)自淋巴細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子的出現(xiàn)和水平，其中免疫效應(yīng)分子的水平指示病情誘導(dǎo)或與之相關(guān)的免疫抑制程度。
4.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象是人。
5.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述樣品是未稀釋的全血。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述樣品是包括待分析樣品體積約10%-100%的全血。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述全血包括待分析樣品體積的約50%-I00%ο
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述全血包括待分析樣品體積的約80%-I00%ο
9.如權(quán)利要求I或2或6中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述樣品是Iμ 1-1000 μ I的小體積血液。
10.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述全血還用抗原孵育。
11.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述全血收集在包含肝素的試管中。
12.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述加強(qiáng)獲得性免疫反應(yīng)的試劑是T細(xì)胞受體激動(dòng)劑。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述試劑選自CpG寡核苷酸，T細(xì)胞受體復(fù)合物抗體，植物血細(xì)胞凝集素和抗CD3抗體。
14.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述加強(qiáng)先天免疫系統(tǒng)的試劑是Toll樣受體(TLR)激動(dòng)劑。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，所述TLR激動(dòng)劑通過(guò)TLR-7/8，TLR-4，TLR-3 或 TLR-2 刺激。
16.如權(quán)利要求15所述的方法，其特征在于，所述激動(dòng)劑選自TLR配體，脂甘露聚糖，聚(I:C)-，和咪唑喹啉，R848。
17.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述加強(qiáng)獲得性免疫系統(tǒng)的試劑通過(guò)T細(xì)胞受體非依賴性方式刺激。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述試劑選自伴刀豆球蛋白，商陸促分裂原和乙酸肉豆蘧佛波醇(PMA)。
19.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述免疫效應(yīng)分子是細(xì)胞因子。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其特征在于，所述細(xì)胞因子是IFN-Y。
21.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述免疫效應(yīng)物用其特異性抗體檢測(cè)。
22.如權(quán)利要求21中所述的方法，其特征在于，所述免疫效應(yīng)物使用ELISA檢測(cè)。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于，所述免疫效應(yīng)物使用酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法檢測(cè)。
24.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象由選自分枝桿菌屬，葡萄球菌屬，鏈球菌屬，伯疏氏螺旋體屬，大腸桿菌，沙門氏菌，梭狀芽孢桿菌屬，志賀菌屬，變形桿菌屬，芽孢桿菌屬，皰疹病毒，乙型或丙型肝炎病毒和人類免疫缺陷病毒(HIV)的病原體感染或有其產(chǎn)生的疾病。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于，所述病情是結(jié)核分枝桿菌感染或結(jié)核病(TB)。
26.如權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于，所述病情是肝炎病毒或HIV感染。
27.如權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象有選自下述的病情脫發(fā)斑禿，強(qiáng)直性脊柱炎，抗磷脂綜合征，自體免疫阿狄森氏病多發(fā)性硬化癥，腎上腺自體免疫疾病，自體免疫溶血性貧血，自體免疫肝炎，自體免疫卵巢炎和睪丸炎，白塞氏病，大皰性類天皰瘡，心肌病，口炎性腹 寫皮炎(celiac sprue-dermatitis),慢性疲勞綜合征(CFIDS),慢性炎癥脫髓鞘，慢性炎癥多神經(jīng)病，變應(yīng)性肉芽腫性血管炎，瘢痕性類天皰瘡，CREST綜合征，冷凝集素病，克隆氏病，皰疹樣皮炎，盤狀紅斑狼瘡，基本混合冷球蛋白血癥，纖維組織肌痛，腎小球腎炎，格雷弗氏病，急性多發(fā)性神經(jīng)根炎，橋本甲狀腺炎，特發(fā)性肺纖維化，特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)，IgA腎病，胰島素依賴型糖尿病(I型)，扁平苔蘚，紅斑狼瘡，梅尼埃病，混合性結(jié)締組織病，多發(fā)性硬化癥，重癥肌無(wú)力，心肌炎，尋常性天皰瘡，惡性貧血，結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎，多軟骨炎，多腺體綜合征，風(fēng)濕性多肌痛，多發(fā)性肌炎和皮肌炎，原發(fā)性無(wú)丙種球蛋白血癥，原發(fā)性膽汁性肝硬化，牛皮癬，雷諾氏現(xiàn)象，賴特爾綜合癥，風(fēng)濕熱，類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，結(jié)節(jié)病，硬皮病，干燥綜合征，全身肌強(qiáng)直綜合征，系統(tǒng)性紅斑狼瘡，多發(fā)性大動(dòng)脈炎，顳動(dòng)脈炎/巨細(xì)胞動(dòng)脈炎，潰瘍性結(jié)腸炎，葡萄膜炎，血管炎，白癜風(fēng)和炎癥性腸病。
28.如權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，所述疾病是乳糜瀉。
29.如權(quán)利要求27所述的方法，其特征在于，所述疾病是自體免疫糖尿病。
30.如權(quán)利要求I或2或3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述對(duì)象有選自下列的癌癥ABL1原癌基因，AIDS相關(guān)癌癥，聽(tīng)神經(jīng)瘤，急性淋巴細(xì)胞性白血病，急性髓細(xì)胞白血病，腺樣囊腺癌，腎上腺皮質(zhì)癌，特發(fā)性髓樣化生，禿頭癥，泡軟組織肉瘤，肛門癌，再生障礙性貧血，星形膠質(zhì)細(xì)胞瘤，共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張癥，基底細(xì)胞癌(皮膚)，膀胱癌，骨瘤，腸瘤，腦干膠質(zhì)瘤，腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，乳腺癌，中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，類癌瘤，子宮頸癌，兒童腦腫瘤，兒童癌癥，兒童白血病，兒童軟組織肉瘤，軟骨肉瘤，絨毛膜癌，慢性淋巴細(xì)胞性白血病，慢性粒細(xì)胞白血病，結(jié)直腸癌，皮膚T細(xì)胞淋巴瘤，隆凸性皮膚纖維肉瘤，促纖維組織增生性小細(xì)胞癌，導(dǎo)管癌，內(nèi)分泌癌，子宮內(nèi)膜癌，室管膜瘤，食道癌，尤文氏肉瘤，肝外膽道癌，眼癌，眼黑色素瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，輸卵管癌，范科尼貧血，纖維肉瘤，膽膀胱癌，胃癌，胃腸道癌，胃腸道類癌腫瘤，泌尿生殖系統(tǒng)的癌癥，生殖細(xì)胞瘤，妊娠滋養(yǎng)細(xì)胞疾病腫瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤,婦科癌癥,惡性血液腫瘤,毛細(xì)胞白血病,頭頸癌,肝細(xì)胞癌,遺傳乳腺癌，組織細(xì)胞增生癥，何杰金氏病，人類乳頭狀瘤病毒，水囊狀胎塊，高鈣血癥，下咽癌，眼內(nèi)黑色素瘤，胰島細(xì)胞癌，卡波西肉瘤，腎癌，郎格罕細(xì)胞組織細(xì)胞增多病，喉頭癌，平滑肌肉瘤，白血病，李-佛美尼綜合癥，唇癌，脂肪肉瘤，肝癌，肺癌，淋巴性水腫，淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤，非霍奇金淋巴瘤，男性乳腺癌，腎惡性橫紋肌腫瘤，髓母細(xì)胞瘤，黑色素瘤，默克爾細(xì)胞癌，間皮瘤，轉(zhuǎn)移癌，口腔癌，多發(fā)性內(nèi)分泌腫瘤，蕈樣肉芽腫，骨髓增生異常綜合征，骨髓瘤，骨髓增生性疾病，鼻腔癌，鼻咽癌，腎胚細(xì)胞瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，神經(jīng)纖維瘤病，奈梅亨破損綜合癥，非黑色素瘤皮膚癌，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，眼癌，食道癌，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤，造口術(shù)卵巢癌，胰腺癌，鼻竇癌，副甲狀腺癌，腮腺腫瘤，陰莖癌，周邊神經(jīng)外胚層腫瘤，垂體腫瘤，真性紅細(xì)胞增多癥，前列腺癌，罕見(jiàn)癌癥和相關(guān)疾病，腎細(xì)胞癌，成視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤，先天性皮膚異色癥，唾液腺腫瘤，肉瘤，神經(jīng)鞘瘤，塞扎里(Sezary)綜合征，皮膚癌，小細(xì)胞肺癌(SCLC)，小腸腫瘤，軟組織肉瘤，脊髓腫瘤，鱗狀細(xì)胞癌(皮膚)，胃癌，滑 膜肉瘤，睪丸癌，胸腺癌，甲狀腺癌，移行細(xì)胞癌(膀胱)，移行細(xì)胞癌(腎-腎盂-/_輸尿管)，滋養(yǎng)細(xì)胞癌，尿道癌，泌尿系統(tǒng)的癌癥，膜板塊蛋白(uroplakin),子宮肉瘤，子宮癌，陰道癌，外陰癌，沃爾登斯特倫氏巨球蛋白血癥和腎母細(xì)胞瘤。
31.一種檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與T細(xì)胞受體激動(dòng)劑和Toll樣受體激動(dòng)劑接觸，和檢測(cè)來(lái)自T細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的出現(xiàn)或增加，其中免疫效應(yīng)分子的出現(xiàn)或水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)水平，其中反應(yīng)水平指示選自以下的疾病或病癥的存在或缺失或水平或階段病原體感染，自體免疫疾病，癌癥，炎性病癥和接觸毒性試劑。
32.—種檢測(cè)對(duì)象中細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)活性的方法，所述方法包括將對(duì)象淋巴細(xì)胞來(lái)源與通過(guò)T細(xì)胞受體非依賴性方式加強(qiáng)獲得性免疫系統(tǒng)的試劑和toll樣受體激動(dòng)劑接觸，和檢測(cè)來(lái)自T細(xì)胞的免疫效應(yīng)分子水平的出現(xiàn)或增加，其中免疫效應(yīng)分子的出現(xiàn)或水平指示對(duì)象的細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)水平，其中反應(yīng)水平指示選自以下的疾病或病癥的存在或缺失或水平或階段病原體感染，自體免疫疾病，癌癥，炎性病癥和接觸毒性試劑。
33.加強(qiáng)獲得性和先天免疫系統(tǒng)的一種或多種試劑在生產(chǎn)細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)診斷試驗(yàn)中的應(yīng)用，所述診斷試驗(yàn)將先天和獲得性刺激物與包括T細(xì)胞和NK細(xì)胞的來(lái)源孵育，并且檢測(cè)效應(yīng)分子的出現(xiàn)或提高。
34.使用如權(quán)利要求33所述的應(yīng)用，其特征在于，所述使用的兩種試劑是TCR激動(dòng)劑和TLR激動(dòng)劑。
35.一種允許用戶測(cè)定對(duì)象細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)狀態(tài)的方法，所述方法包括 (a)通過(guò)通訊網(wǎng)絡(luò)接收來(lái)自用戶的數(shù)據(jù)，所述數(shù)據(jù)的形式是參比對(duì)照能關(guān)聯(lián)到細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)狀態(tài)的免疫效應(yīng)分子水平或濃度，在淋巴細(xì)胞接觸一種或多種能強(qiáng)化獲得性和先天免疫反應(yīng)的試劑之后測(cè)量免疫效應(yīng)分子； (b)通過(guò)單變量或多變量分析處理對(duì)象數(shù)據(jù)得出免疫反應(yīng)狀態(tài)值； (C)根據(jù)免疫反應(yīng)狀態(tài)值與預(yù)定值的比較結(jié)果測(cè)定對(duì)象狀態(tài)；和 Cd)通過(guò)通訊網(wǎng)絡(luò)將對(duì)象狀態(tài)指標(biāo)發(fā)送用戶。
全文摘要
本發(fā)明一般涉及基于免疫學(xué)的診斷試驗(yàn)領(lǐng)域。更特定地，本發(fā)明描述檢測(cè)細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)的方法。本發(fā)明還能測(cè)定病情，治療試劑和環(huán)境污染物的免疫抑制作用。本發(fā)明的試驗(yàn)也能整合到病理學(xué)架構(gòu)中以提供診斷報(bào)告系統(tǒng)和促進(jìn)臨床護(hù)理管理。
文檔編號(hào)G01N33/53GK102713619SQ201080058756
公開(kāi)日2012年10月3日 申請(qǐng)日期2010年12月21日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月23日
發(fā)明者J·伯勒, R·達(dá)拉斯海拉斯 申請(qǐng)人:塞爾雷斯蒂斯有限公司