專利名稱：穩(wěn)定的缺血修飾白蛋白測(cè)定試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物化學(xué)試劑領(lǐng)域，具體的，涉及一種穩(wěn)定的缺血修飾白蛋白測(cè)定試劑盒。
背景技術(shù)：
缺血修飾白蛋白(Ischemia-modified albumin，簡(jiǎn)稱IMA)是在機(jī)體發(fā)生缺血或再 灌注時(shí)，由于自由基等破壞了血清白蛋白的氨基酸序列，導(dǎo)致白蛋白與過渡金屬的結(jié)合能 力改變，而產(chǎn)生的與過渡金屬結(jié)合能力改變的白蛋白。1990 年，Bar. Or 等最早應(yīng)用白蛋白鈷結(jié)合試驗(yàn)(albumin cobalt binding test, ACB)來測(cè)定血漿IMA濃度。即樣本與第一試劑中的氯化鈷(CoCl2)溶液混合時(shí)，Co2+與結(jié) 合能力正常的白蛋白結(jié)合，加入第二試劑后，游離Co2+與二硫蘇糖醇(DTT)結(jié)合產(chǎn)生紅色反 應(yīng)，在505nm處檢測(cè)吸光度。而當(dāng)機(jī)體缺血時(shí)，血漿中的白蛋白多處于修飾狀態(tài)結(jié)合Co2+能 力降低，溶液中游離Co2+的濃度就相對(duì)較高，與DTT結(jié)合產(chǎn)生的顯色反應(yīng)更明顯。故IMA 含量與顏色程度呈正比，通過與一定濃度的標(biāo)準(zhǔn)品比較，從而間接對(duì)IMA進(jìn)行定量測(cè)定。目前國內(nèi)外普遍采用檢測(cè)IMA的試劑盒由液體雙試劑組成。第一試劑中為鈷離子 試劑，第二試劑為二硫蘇糖醇試劑。但由于DTT本身是一種很強(qiáng)的還原劑，容易被空氣氧 化，因此DTT的穩(wěn)定性較差。目前國外銷售的ACB Test試劑盒，因?yàn)镈TT易氧化分解，有 效期只有14天。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供穩(wěn)定的缺血修飾白蛋白測(cè)定試劑盒，該試劑盒穩(wěn)定性好， 室溫開瓶避光保存穩(wěn)定30天，2-80C閉瓶保存穩(wěn)定12個(gè)月，完全滿足臨床檢驗(yàn)的需要。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的缺血修飾白蛋白測(cè)定試劑盒，包括 鈷離子試劑和二硫蘇糖醇試劑組成，
所述鈷離子試劑，其組分成分(按重量百分?jǐn)?shù))是
六水合氯化鈷0. 001%~0. 1%
疊氮鈉0.01% 1%
三羥甲基氨基甲烷緩沖液 0. 5% ~10%
純化水 88. 9%~99. 489%,
所述二硫蘇糖醇試劑，其組成成分(按重量百分?jǐn)?shù))是
二硫蘇糖醇 0. 05% ~1%
疊氮鈉 0. 01% 1%
穩(wěn)定劑 0. 01% 1%
咪唑緩沖溶液 0. 5% 10%
純化水 87%~99. 43%,
并且，所述鈷離子試劑和二硫蘇糖醇試劑的體積的混合比例為1 1~4:1。
進(jìn)一步的，所述鈷離子試劑和二硫蘇糖醇試劑的體積的混合比例為3:1。進(jìn)一步的，所述穩(wěn)定劑是曲拉通，聚氧化乙烯烷基酚醚和十二烷基苯磺酸鈉中的一種。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下的優(yōu)點(diǎn)和有益效果
(1)、本發(fā)明通過在二硫蘇糖醇試劑中加入少量非離子型表面活性劑，大大降低了試劑 中DTT與游離氧的結(jié)合，從而減緩DTT氧化的速度，顯著提高試劑的穩(wěn)定性。(2)、本發(fā)明通過增加DTT的濃度，在一定程度上也提高試劑盒的穩(wěn)定性。(3)、本發(fā)明試劑盒穩(wěn)定性好，室溫開瓶避光保存穩(wěn)定30天，2_8°C閉瓶保存穩(wěn)定 12個(gè)月，完全滿足臨床檢驗(yàn)的需要。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例1
本發(fā)明包括鈷離子試劑和二硫蘇糖醇試劑，其體積混合比例為鈷離子試劑，50% ；二 硫蘇糖醇試劑，50%。試劑1 鈷離子試劑(按重量百分?jǐn)?shù))，其組分成分是
六水合氯化鈷0. 001%
疊氮鈉0.01%
三羥甲基氨基甲烷緩沖液0. 5%
純化水99.489% 將上述成分混合后即鈷離子試劑。
試劑2 二硫蘇糖醇試劑(按重量百分?jǐn)?shù))，其組成成分是
二硫蘇糖醇0. 05%
疊氮鈉0.01%
曲拉通0.01%
咪唑緩沖溶液0. 5%
純化水99.43% 將上述組分混合后即二硫蘇糖醇試劑。將上述組成成分的試劑盒于2_8°C儲(chǔ)存，6個(gè)月后測(cè)定純化水，(此時(shí)吸光度最大 且穩(wěn)定便于觀察)。在37°C條件下，用分光光度計(jì)，在505nm的波長下連續(xù)測(cè)定反應(yīng)溶液的 吸收情況，記錄吸光度。以儲(chǔ)存試劑中剩余DTT的濃度(相對(duì)百分?jǐn)?shù)表示)。結(jié)果見表1。表1曲拉通對(duì)試劑盒穩(wěn)定的影響
權(quán)利要求
1.穩(wěn)定的缺血修飾白蛋白測(cè)定試劑盒，其特征在于包括鈷離子試劑和二硫蘇糖醇試劑，所述鈷離子試劑，其組分成分(按重量百分?jǐn)?shù))是 六水合氯化鈷0. 0019Γ0. 1%疊氮鈉0.01% 1%三羥甲基氨基甲烷緩沖液0. 59TlO%純化水88. 9% 99. 489%,所述二硫蘇糖醇試劑，其組成成分(按重量百分?jǐn)?shù))是 二硫蘇糖醇0. 05% 1%疊氮鈉0.01% 1%穩(wěn)定劑0.01% 1%咪唑緩沖溶液0. 5°/Γ Ο%純化水87% 99. 43% ；并且，所述鈷離子試劑和二硫蘇糖醇試劑的體積的混合比例為1:廣4:1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的缺血修飾白蛋白測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述鈷離 子試劑和二硫蘇糖醇試劑的體積的混合比例為3:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定的缺血修飾白蛋白測(cè)定試劑盒，其特征在于，所述穩(wěn)定 劑是曲拉通，聚氧化乙烯烷基酚醚和十二烷基苯磺酸鈉中的一種。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種穩(wěn)定的缺血修飾白蛋白測(cè)定試劑盒，包括鈷離子試劑和二硫蘇糖醇試劑。本發(fā)明通過在二硫蘇糖醇試劑中加入少量非離子型表面活性劑，大大降低了試劑中DTT與游離氧的結(jié)合，從而減緩DTT氧化的速度，顯著提高試劑的穩(wěn)定性。同時(shí)，通過增加DTT的濃度，在一定程度上也提高試劑盒的穩(wěn)定性。本發(fā)明試劑盒室溫開瓶避光保存穩(wěn)定30天，2-8℃閉瓶保存穩(wěn)定12個(gè)月，完全滿足臨床檢驗(yàn)的需要。
文檔編號(hào)G01N33/68GK102147416SQ20111002176
公開日2011年8月10日 申請(qǐng)日期2011年1月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月19日
發(fā)明者周帥, 譚韜, 陳衛(wèi), 高命 申請(qǐng)人:四川省新成生物科技有限責(zé)任公司