專利名稱：基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及蛋白芯片技術(shù)，尤其是涉及一種基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片檢測(cè)時(shí)去除發(fā)光底物的裝置及使用這種裝置去除發(fā)光底物的方法。
背景技術(shù)：
蛋白芯片技術(shù)的基本原理是將各種蛋白質(zhì)有序地固定于滴定板、濾膜和載玻片等載體上成為檢測(cè)用的芯片，然后，用帶有特定標(biāo)記的蛋白質(zhì)或其他成份與芯片作用后，經(jīng)漂洗將未能與芯片上的蛋白質(zhì)結(jié)合的成份洗去，再利用各種信號(hào)捕獲技術(shù)，測(cè)定芯片上各點(diǎn)的信號(hào)強(qiáng)度，通過(guò)信號(hào)強(qiáng)度分析蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間相互作用的關(guān)系，由此達(dá)到測(cè)定各種蛋白質(zhì)功能及含量的目的。蛋白芯片在醫(yī)療診斷領(lǐng)域可以利用抗原抗體間的相互作用來(lái)達(dá)到對(duì)與疾病相關(guān)蛋白質(zhì)含量的檢測(cè)目的。 本發(fā)明所涉及的蛋白芯片反應(yīng)體系采用雙抗體夾心法，其基本工作原理是利用連接于固相載體上的抗體和酶標(biāo)抗體分別與樣品中被檢測(cè)抗原分子上兩個(gè)抗原決定簇結(jié)合，形成固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體免疫復(fù)合物。由于反應(yīng)系統(tǒng)中固相抗體和酶標(biāo)抗體的量相對(duì)于待測(cè)抗原是過(guò)量的，因此復(fù)合物的形成量與待測(cè)抗原的含量成正比(在方法可檢測(cè)范圍內(nèi))。測(cè)定復(fù)合物中的酶作用于加入的底物后的信號(hào)值，即可確定待測(cè)抗原含量。本發(fā)明所屬的蛋白芯片檢測(cè)體系如下(I)將腫瘤標(biāo)志物一抗通過(guò)點(diǎn)樣儀定量點(diǎn)在硝酸纖維素膜上；(2)用封閉液封閉已點(diǎn)樣的硝酸纖維素膜；(3)加待檢樣本及標(biāo)準(zhǔn)品，溫育；(4)洗去未結(jié)合的抗原抗體；(5)加酶標(biāo)二抗，溫育；(6)洗去未結(jié)合的酶標(biāo)二抗；(7)加化學(xué)發(fā)光底物(發(fā)光底物為液體)；(8)用芯片閱讀儀檢測(cè)信號(hào)值；(9)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算待檢樣本抗原含量。以上蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)中，底物發(fā)光方法也會(huì)影響芯片檢測(cè)的信噪比，目前加化學(xué)發(fā)光底物發(fā)光的步驟采用加化學(xué)發(fā)光底物于硝酸纖維素膜上，待其與酶標(biāo)二抗上的酶反應(yīng)Imin后，直接放入芯片檢測(cè)儀中讀取光信號(hào)值及本底值。由于發(fā)光底物形成的液膜對(duì)反應(yīng)產(chǎn)生的光有折射等削弱效應(yīng)，閱讀儀所捕獲的有效光信號(hào)降低；另外，該發(fā)光底物液膜的存在也會(huì)增加本底值。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明是提出一種基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片檢測(cè)時(shí)去除發(fā)光底物的裝置以及使用這種裝置去除發(fā)光底物的方法。本發(fā)明提出的基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置所采用的技術(shù)方案是， 基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置，包括一中空柱體，該柱體下端封閉，上端開口，還包括一上蓋，該上蓋將柱體上端蓋住，柱體上還設(shè)置有抽氣嘴，該抽氣嘴上連接有真空泵，上蓋外表面設(shè)置有放置蛋白芯片的凹槽，該凹槽內(nèi)設(shè)置有連通柱體內(nèi)部的通氣孔；所述通氣孔分為6排，每排8個(gè)，均勻分布于所述凹槽底部，各通氣孔與蛋白芯片的反應(yīng)孔位置對(duì)應(yīng)。本發(fā)明提出的去除基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物的方法所采用的技術(shù)方案是，去除基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物的方法，使用上述基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置，去除過(guò)程包括如下步驟，(I)將加完發(fā)光底物并靜置后的蛋白芯片置于凹槽中，使蛋白芯片的膜正面朝上，背面朝下，打開真空泵開關(guān)，開始抽氣，在膜背面形成負(fù)壓，使膜正面殘留的發(fā)光底物在空氣壓力下滲濾透過(guò)膜；(2)待膜表面殘留的發(fā)光底物完全去除之后，取下蛋白芯片，關(guān)閉真空泵，然后將該蛋白芯片迅速置于芯片閱讀儀中讀取信號(hào)值及本底值。本發(fā)明的有益效果是，其提出的基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作方便，通過(guò)真空泵作用，在膜背面形成負(fù)壓，使膜正面殘留的發(fā)光底物在空氣壓力下滲濾透過(guò)膜，相對(duì)于有發(fā)光底物液膜存在時(shí)檢測(cè)光信號(hào)，芯片硝酸纖維素膜表面去除發(fā)光底物液膜后檢測(cè)光信號(hào)其信號(hào)值提高40%左右，本底值降低50%左右。


圖I是本發(fā)明基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2是基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置的剖視圖。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明實(shí)現(xiàn)的技術(shù)手段、創(chuàng)作特征、達(dá)成目的與功效易于明白了解，下面結(jié)合具體圖示，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。如圖I、圖2所示，本發(fā)明提出的基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置包括中空柱體100，柱體100下端封閉，上端開口，還包括上蓋200，上蓋200將柱體100上端蓋住，柱體100上還設(shè)置有抽氣嘴110，抽氣嘴110上連接有真空泵(圖中未標(biāo)出)，上蓋200的外表面設(shè)置有放置蛋白芯片的凹槽210，凹槽210內(nèi)設(shè)置有連通柱體100內(nèi)部的通氣孔 211 ；如圖I所示，通氣孔211分為6排，每排8個(gè)，均勻分布于凹槽210底部，通氣孔211與蛋白芯片的反應(yīng)孔位置對(duì)應(yīng)。本發(fā)明提出的去除基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物的方法，使用圖I、圖2中基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置，其去除過(guò)程包括如下步驟，(I)將加完20ul/孔發(fā)光底物并靜直Imin后的蛋白芯片直于凹槽210中，使蛋白芯片的膜正面朝上，背面朝下，打開真空泵開關(guān)，開始抽氣，在膜背面形成負(fù)壓，使膜正面殘留的發(fā)光底物在空氣壓力下滲濾透過(guò)膜；(2)待膜表面殘留的發(fā)光底物完全去除之后，取下蛋白芯片，關(guān)閉真空泵，然后將該蛋白芯片迅速置于芯片閱讀儀中讀取信號(hào)值及本底值。相對(duì)于直接檢測(cè)，去除發(fā)光底物液膜后檢測(cè)可提高信號(hào)值而降低本底值。發(fā)明人進(jìn)行了對(duì)比實(shí)驗(yàn)，直接檢測(cè)和去除發(fā)光底物后檢測(cè)獲得的信號(hào)值與本底值如表I所示表I.檢測(cè)結(jié)果對(duì)比,所用抗體原材料為AFP(Alpha-Fetoprotein)
權(quán)利要求
1.基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置，其特征在于，包括一中空柱體，該柱體下端封閉，上端開口，還包括一上蓋，該上蓋將柱體上端蓋住，柱體上還設(shè)置有抽氣嘴，該抽氣嘴上連接有真空泵，上蓋外表面設(shè)置有放置蛋白芯片的凹槽，該凹槽內(nèi)設(shè)置有連通柱體內(nèi)部的通氣孔。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的裝置，其特征在于，所述通氣孔分為6排，每排8個(gè)，均勻分布于所述凹槽底部，各通氣孔與蛋白芯片的反應(yīng)孔位置對(duì)應(yīng)。
3.使用權(quán)利要求I所述的裝置，去除基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物的方法，其特征在于，包括如下步驟， (1)將加完發(fā)光底物并靜置后的蛋白芯片置于凹槽中，使蛋白芯片的膜正面朝上，背面朝下，打開真空泵開關(guān)，開始抽氣，在膜背面形成負(fù)壓，使膜正面殘留的發(fā)光底物在空氣壓力下滲濾透過(guò)膜； (2)待膜表面殘留的發(fā)光底物完全去除之后，取下蛋白芯片，關(guān)閉真空泵。
全文摘要
基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物去除裝置，包括一中空柱體，該柱體下端封閉，還包括一上蓋，柱體上還設(shè)置有連接真空泵抽氣嘴，上蓋外表面設(shè)置有放置蛋白芯片的凹槽，該凹槽內(nèi)設(shè)置通氣孔。去除基于硝酸纖維素膜的蛋白芯片發(fā)光底物的方法，首先將加完發(fā)光底物并靜置后的蛋白芯片置于凹槽中，打開真空泵開關(guān)，使膜正面殘留的發(fā)光底物在空氣壓力下滲濾透過(guò)膜。該去除裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，操作方便，通過(guò)真空泵作用，在膜背面形成負(fù)壓，使膜正面殘留的發(fā)光底物在空氣壓力下滲濾透過(guò)膜，相對(duì)于有發(fā)光底物液膜存在時(shí)檢測(cè)光信號(hào)，芯片硝酸纖維素膜表面去除發(fā)光底物液膜后檢測(cè)光信號(hào)其信號(hào)值提高40％左右，本底值降低50％左右。
文檔編號(hào)G01N33/547GK102621300SQ20111002878
公開日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2011年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月26日
發(fā)明者傅曉利, 姚涌, 曹友洪, 趙雷 申請(qǐng)人:上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司