專利名稱：動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種動物性食品中獸藥殘留量的測定方法，特別是涉及一種用于同時 測定動物性食品中諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星四種氟喹諾酮類藥物殘留量的 測定方法。
背景技術(shù)：
氟喹諾酮類藥物屬于人工合成的抗菌藥物，廣泛使用于防治水產(chǎn)動物的細菌性疾 病，也常用于池塘與水體的消毒，有時還作為飼料添加劑促進動物生長，提高生長速度與產(chǎn) 量。但這種藥物在獸醫(yī)臨床廣泛和大量的使用必然會導(dǎo)致其在動物性食品中的殘留，如果 不加以控制會嚴重危害人類的健康；影響我國動物性食品的出口，造成巨大的經(jīng)濟損失。我 國和歐盟都已制定了多種氟喹諾酮類藥物在動物組織中的最高殘留限量。農(nóng)業(yè)部1025號 公告-14-2008動物性食品中氟喹諾酮類藥物殘留檢測高效液相色譜法規(guī)定了動物性食品 中的氟喹諾酮類藥物的測定方法，為該類獸藥殘留量的檢測提供了分析依據(jù)。但該法在進 行樣品前處理采用磷酸鹽緩沖溶液勻漿振蕩提取，然后離心收集上清液，所得上清液仍需 用固相萃取的方法進行凈化。操作步驟繁雜，時間長，不能自動化。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種操作簡單，快速，自動化程度高，萃取效率 高，回收率和重復(fù)性好的動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法。本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，包括以下步驟a、樣品制備將樣品絞碎，冷凍保存；b、樣品前處理準確稱取樣品，與硅藻土混和均勻至樣品沒有結(jié)塊，轉(zhuǎn)移至底部放 一層纖維濾紙的萃取池中，將萃取池放置于快速溶劑萃取儀上進行萃取，所得到的提取液 中加入正己烷和乙醚去除脂類雜質(zhì)，劇烈振蕩后靜止分層，棄去正己烷-乙醚層，再加入正 己烷和乙醚重復(fù)操作兩次，下層溶液轉(zhuǎn)入濃縮瓶中，在水浴40°C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓旋蒸 至干，以流動相溶解殘渣，溶液經(jīng)濾膜過濾供HPLC分析；C、標準溶液的配制準確稱取諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星標準品，將 其一起溶于0. 03mol/L氫氧化鈉溶液中，配成同時含有上述四種標準品且其濃度均為Img/ ml的混合標準儲備液，2°C 8°C避光保存，臨用前準確量取上述混合標準儲備液，用流動 相稀釋成系列梯度的標準工作液，低溫條件下避光保存，當天使用；d、高效液相色譜測定吸取配制好的不同濃度的標準工作液，注入配有熒光檢測 器FLD串聯(lián)紫外檢測器UV的高效液相色譜儀；e、殘留量測定結(jié)果的計算以保留時間進行氟喹諾酮類藥物的定性分析，以峰面 積進行氟喹諾酮類藥物的定量分析，用外標法計算結(jié)果；所述流動相的配制先配制0. 05mol/L的磷酸水溶液，用三乙胺將其調(diào)pH至2. 4， 取0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺、乙腈按體積比82 18的比例配制流動相。
本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，其中所述步驟a中 的冷凍保存條件是-18°C。本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，其中所述步驟b中 的樣品前處理，硅藻土與樣品的質(zhì)量比例是(1 幻1 ；正己烷濃度為每克樣品中加入 3 5ml正己烷，乙醚濃度為每克樣品中加入1 3ml乙醚；快速溶劑萃取儀參數(shù)設(shè)置為萃 取溶劑體積份數(shù)8%的氨水乙腈，溫度:80°C，壓力10. OMPa，加熱時間5min，靜態(tài)時間 5min，沖洗體積萃取池體積的60%，氮氣吹掃時間60s，靜態(tài)循環(huán)次數(shù)1次；減壓旋蒸時 真空度為-O. 096MPa ；濾膜孔徑為0. 45 μ m。本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，其中所述步驟c中 系列梯度的標準工作液為0. 01,0. 02,0. 05,0. 1和0. 2mg/L。本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，其中所述步驟d 中采用的高效液相色譜條件為基質(zhì)為B型超高純球形硅膠的C18液相色譜柱，規(guī)格為 4. 6匪Χ250_Χ5μπι，硅膠純度> 99. 999%，柱溫15 25°C ；流動相流速為0. 8mL/min, 進樣量為20 μ L ；熒光檢測器的激發(fā)波長為^5nm，發(fā)射波長為478nm ；紫外檢測器波長為 271nm。本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，其中所述快速溶劑 萃取儀選用北京吉天儀器有限公司APLE2000快速溶劑萃取儀。本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法利用快速溶劑萃取 儀在高溫高壓下萃取動物性食品中氟喹諾酮類藥物，萃取液經(jīng)凈化，進高效液相色譜熒光 檢測器(FLD)串聯(lián)紫外檢測器(UV)進行分析測定?？焖偃軇┹腿》悠非疤幚磉^程簡單， 整個操作自動化程度高，熒光檢測器(FLD)串聯(lián)紫外檢測器(UV)測定準確、靈敏度高、重復(fù) 性好。


圖1是諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星標準品熒光色譜圖；圖2是諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星標準品紫外色譜圖。
具體實施例方式本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法包括以下步驟標準溶液的配制準確稱取諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星標準品，將其 一起溶于0. 03mol/L氫氧化鈉溶液中，配成同時含有上述四種標準品且其濃度均為lmg/ml 的混合標準儲備液，2°C 8°C避光保存，臨用前準確量取上述混合標準儲備液，用流動相稀 釋成濃度分別為0. 01,0. 02,0. 05,0. 1和0. 2mg/L的標準工作液，4°C條件下避光保存，當 天使用。流動相的配制先配制0. 05mol/L的磷酸水溶液，用三乙胺將其調(diào)pH至2. 4，取 0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺、乙腈按體積比82 18的比例配制流動相。高效液相色譜測定吸取配制好的不同濃度的標準工作液，注入配有熒光檢測器 FLD串聯(lián)紫外檢測器UV的高效液相色譜儀。高效液相色譜條件為基質(zhì)為B型超高純球形 硅膠的C18液相色譜柱，規(guī)格為4. 6mmX250mmX5 μ m，硅膠純度> 99. 999%，柱溫15°C ； 流動相流速為0. SmL/min，進樣量為20 μ L ；熒光檢測器的激發(fā)波長為^5nm，發(fā)射波長為478nm ；紫外檢測器波長為271nm。殘留量測定實施例1 測定8個白魚樣品，將樣品絞碎，于_18°C條件下儲存。樣品前處理準確稱取1. Og解凍后的樣品，同1. 5g硅藻土一起置于研缽中，研磨 至樣品沒有明顯結(jié)塊，將樣品置于底部放一層纖維濾紙的IlmL萃取池中，萃取條件為用 體積份數(shù)8%的氨水乙腈作為提取試劑，溫度80°C，壓力lOMPa，加熱5min，靜態(tài)提取5min， 循環(huán)1次，淋洗體積為60%的萃取池體積，用乙腈快速沖洗樣品，氮氣吹掃收集全部提取 液。所得提取液中加入3ml正己烷和Iml乙醚去除脂類雜質(zhì)，振蕩后靜止分層，棄去正己 烷-乙醚層，重復(fù)操作兩次，下層溶液轉(zhuǎn)入濃縮瓶中，在水浴40°C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓旋 蒸，真空度-0. 096MPa,濃縮至干。以流動相溶解殘渣，并準確定容至2mL，溶液經(jīng)0. 45 μ m 濾膜過濾供HPLC分析。快速溶劑萃取儀選用北京吉天儀器有限公司APLE2000快速溶劑萃 取儀。殘留量測定結(jié)果的計算以保留時間進行氟喹諾酮類藥物的定性分析，以峰面積 進行氟喹諾酮類藥物的定量分析，用外標法計算結(jié)果，結(jié)果在8份白魚樣品中均未檢出含 有4種氟喹諾酮類藥物殘留。重復(fù)性和回收率測定采用陰性白魚肉樣品(四種氟喹諾酮類藥物均無檢出)進行測定，以3倍信噪比 確定分析物的檢測限，以10倍信噪比確定分析物的定量限，結(jié)合回收率和樣品量，方法的 定量檢出限為4. 3-10. 0 μ g/kg，采用樣品中添加標準溶液的方法，在同樣的樣品處理條件 下對四種氟喹諾酮類藥物進行加標回收率實驗，結(jié)果見表2。表1液相色譜法檢測四種氟喹諾酮類藥物的線性范圍、相關(guān)系數(shù)、檢出限和定量 限
權(quán)利要求
1.一種動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，包括以下步驟a、樣品制備將樣品絞碎，冷凍保存；b、樣品前處理準確稱取樣品，與硅藻土混和均勻至樣品沒有結(jié)塊，轉(zhuǎn)移至底部放一層 纖維濾紙的萃取池中，將萃取池放置于快速溶劑萃取儀上進行萃取，所得到的提取液中加 入正己烷和乙醚去除脂類雜質(zhì)，劇烈振蕩后靜止分層，棄去正己烷-乙醚層，再加入正己烷 和乙醚重復(fù)操作兩次，下層溶液轉(zhuǎn)入濃縮瓶中，在水浴40°C的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓旋蒸至干， 以流動相溶解殘渣，溶液經(jīng)濾膜過濾供HPLC分析；C、標準溶液的配制準確稱取諾氟沙星、環(huán)丙沙星、恩諾沙星、沙拉沙星標準品，將其一 起溶于0. 03mol/L氫氧化鈉溶液中，配成同時含有上述四種標準品且其濃度均為lmg/ml的 混合標準儲備液，2°C 8°C避光保存，臨用前準確量取上述混合標準儲備液，用流動相稀釋 成系列梯度的標準工作液，低溫條件下避光保存，當天使用；d、高效液相色譜測定吸取配制好的不同濃度的標準工作液，注入配有熒光檢測器 FLD串聯(lián)紫外檢測器UV的高效液相色譜儀；e、殘留量測定結(jié)果的計算以保留時間進行氟喹諾酮類藥物的定性分析，以峰面積進 行氟喹諾酮類藥物的定量分析，用外標法計算結(jié)果；所述流動相的配制先配制0. 05mol/L的磷酸水溶液，用三乙胺將其調(diào)pH至2. 4，取 0.05mol/L磷酸溶液/三乙胺、乙腈按體積比82 18的比例配制流動相。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，其特 征在于所述步驟a中的冷凍保存條件是_18°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，其特 征在于所述步驟b中的樣品前處理，硅藻土與樣品的質(zhì)量比例是(1 幻1;正己烷濃 度為每克樣品中加入3 5ml正己烷，乙醚濃度為每克樣品中加入1 3ml乙醚；快速溶劑 萃取儀參數(shù)設(shè)置為萃取溶劑體積份數(shù)8%的氨水乙腈，溫度80°C，壓力10. OMPa，加熱 時間5min，靜態(tài)時間5min，沖洗體積萃取池體積的60 %，氮氣吹掃時間60s，靜態(tài)循環(huán) 次數(shù)1次；減壓旋蒸時真空度為-0. 096MPa ；濾膜孔徑為0. 45 μ m。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，其特 征在于所述步驟c中系列梯度的標準工作液為0. 01,0. 02,0. 05,0. 1和0. 2mg/L0
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法，其特 征在于所述步驟d中采用的高效液相色譜條件為基質(zhì)為B型超高純球形硅膠的C18液相 色譜柱，規(guī)格為4. 611111^25011111^5“111，硅膠純度> 99. 999%，柱溫15 25°C ；流動相流速 為0. 8mL/min,進樣量為20 μ L ；熒光檢測器的激發(fā)波長為沈5歷，發(fā)射波長為478nm ；紫外 檢測器波長為271nm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5所述之一的動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方 法，其特征在于所述快速溶劑萃取儀選用北京吉天儀器有限公司APLE2000快速溶劑萃取 儀。
全文摘要
本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法涉及一種測定動物性食品中藥物殘留量的液相色譜法。其目的是為了提供一種操作簡單，快速，自動化程度高，萃取效率高，回收率和重復(fù)性好的測定方法。本發(fā)明動物性食品中四種氟喹諾酮類藥物殘留量的測定方法包括以下步驟樣品制備；樣品前處理準確稱取樣品，與硅藻土混和均勻，轉(zhuǎn)移至萃取池中，將萃取池放置于快速溶劑萃取儀上進行萃取，所得到的提取液中加入正己烷和乙醚去除脂類雜質(zhì)，劇烈振蕩后靜止分層，棄去正己烷-乙醚層，再重復(fù)操作兩次，下層溶液轉(zhuǎn)入濃縮瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓旋蒸至干，以流動相溶解殘渣，溶液經(jīng)濾膜過濾供HPLC分析；標準溶液的配制；高效液相色譜測定。
文檔編號G01N30/06GK102081078SQ201110045429
公開日2011年6月1日 申請日期2011年2月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月24日
發(fā)明者于輝, 趙萍 申請人:北京吉天儀器有限公司