專(zhuān)利名稱(chēng)：一種檢測(cè)他克莫司血藥濃度的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于檢測(cè)他克莫司領(lǐng)域，特別涉及一種檢測(cè)他克莫司血藥濃度的方法。
背景技術(shù)：
貞司(Tacrolimus) FK506, ^/ΛΙ Ιβ (Streptomyces tsukubaensis) 中分離的發(fā)酵產(chǎn)物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)屬23元大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)抗生素。為一種強(qiáng)效的新型免疫抑制 劑，主要通過(guò)抑制白介素-2(L-2)的釋放，全面抑制T淋巴細(xì)胞的作用，較環(huán)孢素A強(qiáng)100 倍。近年來(lái)，作為肝、腎移植的一線用藥，已在日本、美國(guó)等14個(gè)國(guó)家上市。臨床實(shí)驗(yàn)表明， 其在心、肺、腸、骨髓等移植中應(yīng)用有很好的療效。同時(shí)Π(506在治療特應(yīng)性皮炎(AD)、系統(tǒng) 性紅斑狼瘡(SLE)、自身免疫性眼病等自身免疫性疾病中也發(fā)揮著積極的作用。但是，服用他克莫司由胃腸道吸收的變異性大，在每個(gè)病人體內(nèi)的吸收率和清除 率差別較大。如果劑量不足，機(jī)體可能會(huì)排異移植器官，但如果劑量過(guò)大，血藥濃度高會(huì)產(chǎn) 生一定的毒性，損害神經(jīng)系統(tǒng)及腎臟等其他器官，并增加感染的機(jī)會(huì)，因此，定期測(cè)定血藥 濃度以調(diào)整用藥劑量非常必要，通過(guò)測(cè)定他克莫司的血藥濃度并比較肝功能的變化可以了 解所服用藥物劑量是否正確。肝移植術(shù)后理想的他克莫司血藥濃度為術(shù)后一個(gè)月內(nèi)8-15 納克/毫升，1-3個(gè)月為8-12納克/毫升，4-6個(gè)月為5-10納克/毫升，7個(gè)月以后為4_8 納克/毫升，其后維持他克莫司4-8納克/毫升的血藥濃度水平也各不相同。總之，血藥濃 度只是作為一個(gè)參考指標(biāo)，最終還是要由主治醫(yī)生結(jié)合臨床療效和不良反應(yīng)來(lái)調(diào)整藥物劑 量。目前測(cè)定他克莫司血藥濃度的常用方法主要有高效液相色譜法(HPLC)、酶聯(lián)免 疫吸附法(ELISA)和微粒子酶免疫測(cè)定法等。ELISA最為常用，其方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確性和敏感 性較高，檢測(cè)底限可達(dá)0. 3納克/毫升，但是分析速度較慢。Luminex χΜΑΡ技術(shù)，又稱(chēng)流式熒光技術(shù)，又稱(chēng)懸浮陣列、液態(tài)芯片，該技術(shù)的核心 是把直徑為5. 6um的聚苯乙烯小球用熒光染色的方法進(jìn)行編碼，通過(guò)調(diào)節(jié)兩種熒光染料的 不同配比獲得最多可達(dá)100種具有不同特征熒光譜的微球，然后將每種編碼微球共價(jià)交聯(lián) 上針對(duì)特定檢測(cè)物的抗原、抗體或核酸探針等捕獲分子。應(yīng)用時(shí)，先把針對(duì)不同檢測(cè)物的編 碼微球混合，再加入微量待檢樣本，在懸液中靶分子與微球表面交聯(lián)的捕獲分子發(fā)生特異 性結(jié)合，在一個(gè)反應(yīng)孔內(nèi)可以同時(shí)完成多達(dá)100種不同的檢測(cè)反應(yīng)。最后用LuminexTM100 進(jìn)行分析，儀器通過(guò)兩束激光分別識(shí)別微球的編碼和檢測(cè)微球上報(bào)告分子的熒光強(qiáng)度。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種檢測(cè)他克莫司血藥濃度的方法，該方法操 作簡(jiǎn)單，測(cè)定速度快，樣品用量少，成本低，靈敏度以及線性范圍比ELISA法更高更寬，具有 良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明的一種檢測(cè)他克莫司血藥濃度的方法，包括在磁珠表面耦聯(lián)上他克莫司單克隆抗體，在樣品孔中加入經(jīng)抗凝稀釋的血漿樣品以及他克莫司生物素，經(jīng)過(guò)洗脫加入熒光素標(biāo)記親合素，在激發(fā)光激發(fā)下測(cè)定熒光強(qiáng)度，即 得他克莫司血藥濃度。所述抗凝所用抗凝劑為乙二胺四乙酸，稀釋倍數(shù)為4 6倍。他克莫司生物素結(jié)構(gòu)式為
權(quán)利要求
1.一種檢測(cè)他克莫司血藥濃度的方法，包括在磁珠表面耦聯(lián)上他克莫司單克隆抗體，在樣品孔中加入經(jīng)抗凝稀釋的血漿樣品以及 他克莫司生物素，經(jīng)過(guò)洗脫加入熒光素標(biāo)記親合素，在激發(fā)光激發(fā)下測(cè)定熒光強(qiáng)度，即得他 克莫司血藥濃度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)他克莫司血藥濃度的方法，其特征在于所述抗凝 所用抗凝劑為乙二胺四乙酸，稀釋倍數(shù)為4 6倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)他克莫司血藥濃度的方法，其特征在于所述熒光 素為PE。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檢測(cè)他克莫司血藥濃度的方法，其特征在于所述激發(fā) 光波長(zhǎng)為530nm。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種檢測(cè)他克莫司血藥濃度的方法，包括在磁珠表面耦聯(lián)上他克莫司單克隆抗體，在樣品孔中加入經(jīng)抗凝稀釋的血漿樣品以及他克莫司生物素，經(jīng)過(guò)洗脫加入熒光素標(biāo)記親合素，在激發(fā)光激發(fā)下測(cè)定熒光強(qiáng)度，即得他克莫司血藥濃度。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，測(cè)定速度快，樣品用量少，成本低，靈敏度以及線性范圍比ELISA法更高更寬，具有良好的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)G01N33/543GK102095864SQ20111004746
公開(kāi)日2011年6月15日 申請(qǐng)日期2011年2月28日 優(yōu)先權(quán)日2011年2月28日
發(fā)明者孫慶莉 申請(qǐng)人:上海健耕醫(yī)藥科技有限公司