專利名稱：適用于酶抑制法農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品前處理方法及農(nóng)藥檢測(cè)方法和檢測(cè)盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種適用于酶抑制法農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品前處理方法及相應(yīng)的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法和根據(jù)該方法制備的快速檢測(cè)盒。
背景技術(shù)：
農(nóng)藥對(duì)確保農(nóng)業(yè)豐產(chǎn)豐收做出了巨大貢獻(xiàn)，但是殘存于環(huán)境，特別是食品中的農(nóng)藥及其降解產(chǎn)物也給人類帶來(lái)了潛在危害，其引起的食品安全性問(wèn)題受到了人們的廣泛關(guān)注。為保證人類健康，需要對(duì)農(nóng)產(chǎn)品，特別是糧食進(jìn)行農(nóng)藥殘留檢測(cè)，確保食品中的農(nóng)藥殘留量在安全范圍內(nèi)。目前，農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法主要有薄層色譜法、氣相色譜法、分光光度法等，而前兩種檢測(cè)精度高，能實(shí)現(xiàn)每種農(nóng)藥的定量檢測(cè)，但由于操作繁雜，儀器昂貴，且需要專人操作，難以滿足快速、簡(jiǎn)便的市場(chǎng)需求。因此食品中的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)面臨新的挑戰(zhàn)和發(fā)展機(jī)遇。我國(guó)農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)應(yīng)用最多的是酶抑制法，其具有較高的專一性、準(zhǔn)確性及低成本等優(yōu)點(diǎn)。目前，主要被應(yīng)用于蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速測(cè)定。該方法的原理是有機(jī)磷類和氨基甲酯類農(nóng)藥可以抑制膽堿酯酶活性，進(jìn)而影響膽堿酯酶與底物的顯色反應(yīng)。因此，簡(jiǎn)單通過(guò)顯色反應(yīng)的顏色，根據(jù)反應(yīng)顏色的深淺即可判斷樣品中的農(nóng)藥殘留情況。根據(jù)這一原理，開發(fā)出了多種農(nóng)藥殘留速測(cè)卡。常見的農(nóng)藥殘留速測(cè)卡一般采用膽堿酯酶(白色)與底物靛酚乙酸酯(紅色底物)反應(yīng)，水解生成乙酸和藍(lán)色的靛酚。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T5009. 199-2003蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量的快速檢測(cè)，該標(biāo)準(zhǔn)中涉及兩種酶抑制法其中紙片法主要由酶片和底物片兩部分組成，對(duì)樣品進(jìn)行簡(jiǎn)單的前處理后，以少量緩沖液提取樣品中的農(nóng)藥殘留，取50 100微升提取液滴到酶片上，配以簡(jiǎn)易的恒溫裝置，經(jīng)過(guò)抑制反應(yīng)和顯色反應(yīng)后即可判定結(jié)果。酶抑制率法是根據(jù)待測(cè)樣品提取液對(duì)膽堿酯酶的抑制率來(lái)確定待測(cè)樣品中是否含有有機(jī)磷或甲酸酯類農(nóng)藥。 然而，小麥、稻谷等糧食樣品中對(duì)農(nóng)藥的限量比蔬菜等樣品食品要低得多，如果單憑現(xiàn)在的酶抑制法來(lái)檢測(cè)糧食樣品，其靈敏度無(wú)法達(dá)到相關(guān)要求。CN101776601A公開了有機(jī)磷農(nóng)藥的熒光檢測(cè)方法，利用帶程序的熒光分光光度計(jì)，以卟啉化合物為熒光指示劑和顯色劑，經(jīng)制備卟啉溶液和有機(jī)磷農(nóng)藥溶液及液態(tài)檢測(cè)溶液，測(cè)量液態(tài)卟啉檢測(cè)溶液中有機(jī)磷農(nóng)藥。雖然靈敏度高，但是樣品處理時(shí)需要用到較多的有機(jī)溶劑，如乙腈，容易造成污染，且操作也比較復(fù)雜；此外，需要配備熒光分光光度計(jì)， 成本相對(duì)較高。CN1763508A公開了一種快速檢測(cè)農(nóng)藥殘留的方法，通過(guò)(1)提取被檢測(cè)物，(2) 還原、產(chǎn)氣反應(yīng)將被檢測(cè)物置于裝有固體還原劑的反應(yīng)器中，被檢測(cè)物中的二硫代氨基甲酸酯迅速還原為二硫化碳。此時(shí)，從加液器中加入酸溶液，瞬間產(chǎn)生大量氣體。( 顯色反應(yīng)將二硫化碳隨著大量氣體引入吸收器中并被吸收器中的吸收液所吸收。二硫化碳與吸收液中的特定顯色劑反應(yīng)，溶液變成黃色。(4)定性分析顏色深淺與樣品中的二硫代氨基甲酸酯類農(nóng)藥含量成正比，從而使樣品中的二硫代氨基甲酸酯類農(nóng)藥得到測(cè)定。該方法靈敏度無(wú)法到達(dá)糧食樣品的要求，且樣品前處理時(shí)比較麻煩，需要配備反應(yīng)器才能進(jìn)行。CN1266990A公開了一種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留速測(cè)試劑檢測(cè)液A為帶色的金屬鹽溶液，如高錳酸鉀溶液或重鉻酸鉀溶液等；檢測(cè)液B為有強(qiáng)催化作用的金屬離子酸溶液(Cu、 Pd、Au、Ag等)，如Pd離子硫酸溶液。有機(jī)磷農(nóng)藥在檢測(cè)液B催化作用下水解為磷酸和醇， 其水解物與檢測(cè)液A反應(yīng)可使檢測(cè)液A的顏色褪去。這樣，利用檢測(cè)液A褪色與否即可來(lái)判斷蔬菜中是否有超量有機(jī)磷農(nóng)藥殘留。該試劑雖然操作較為快速，但靈敏度低，根本無(wú)法滿足糧食農(nóng)藥殘留檢測(cè)的需要。可見，現(xiàn)有的農(nóng)藥殘留方法，要么靈敏度不夠高，要么操作復(fù)雜，成本高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種適用于酶抑制法農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品前處理方法。本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法。本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供一種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)盒。適用于酶抑制法農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品前處理方法，包括以下步驟
1)將待測(cè)樣品粉碎，加入提取液，震蕩，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)在提取液中加入農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑，反應(yīng)。一種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法，包括以下步驟
1)將待測(cè)樣品粉碎，加入提取液，震蕩，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)在提取液中加入農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑，反應(yīng)得到反應(yīng)液；
3)取反應(yīng)液滴加在酶片上，將酶與底物反應(yīng)，顯色，根據(jù)顯色結(jié)果判斷農(nóng)藥殘留狀況。優(yōu)選的，農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑為溴，溴的添加量為提取液質(zhì)量的0. 05%。 0. 2%0。一種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)盒，包括農(nóng)藥殘留檢測(cè)卡和農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑。優(yōu)選的，農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑為溴水，溴水的質(zhì)量濃度為0. 1% 5%。通過(guò)本發(fā)明方法對(duì)樣品進(jìn)行前處理，可提高農(nóng)藥殘留檢測(cè)的靈敏度，在不改變現(xiàn)有檢測(cè)試劑的情況下，獲得更為可靠的結(jié)果。本發(fā)明的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法，操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、成本低、安全環(huán)保、實(shí)用快速。本發(fā)明的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)盒，使用方便，靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、成本低、安全環(huán)保、實(shí)用快速，特別適用于糧食農(nóng)藥殘留檢測(cè)的需要。
具體實(shí)施例方式適用于酶抑制法農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品前處理方法，包括以下步驟
1)將待測(cè)樣品粉碎，加入提取液，震蕩，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)在提取液中加入農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑，反應(yīng)。一種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法，包括以下步驟1)將待測(cè)樣品粉碎，加入提取液，震蕩，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)在提取液中加入農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑，反應(yīng)得到反應(yīng)液；
3)取反應(yīng)液滴加在酶片上，將酶與底物反應(yīng)，顯色，根據(jù)顯色結(jié)果判斷農(nóng)藥殘留狀況。優(yōu)選的，農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑為溴，溴的添加量為提取液質(zhì)量的0. 05%。 0. 2%0。一種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)盒，包括農(nóng)藥殘留檢測(cè)卡和農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑。優(yōu)選的，農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑為溴水，溴水的質(zhì)量濃度為0. 1% 5%。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。方便起見，以下實(shí)施例中使用的溴水的質(zhì)量濃度均為0. 2%。當(dāng)然，也可以使用其他濃度的溴水。使用的農(nóng)藥殘留檢測(cè)卡，如無(wú)特別說(shuō)明，為綠洲生化公司的AClOl型號(hào)農(nóng)藥殘留檢測(cè)卡。當(dāng)然，也可以使用市售的其他相同檢測(cè)原理的農(nóng)藥殘留檢測(cè)卡。實(shí)施例1
1)將1號(hào)小麥樣品20g粉碎，加入60 mL純凈水，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入25yL溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例2
1)將2號(hào)小麥樣品20g粉碎，加入60 mL pH=7的PBS，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入50 μ L溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例3
1)將3號(hào)小麥樣品20g粉碎，加入60 mL pH=8. 5的PBS，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入100 μ L溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例4
1)將1號(hào)水稻樣品20g粉碎，加入60 mL純凈水，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入25yL溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例5
1)將2號(hào)水稻樣品20g粉碎，加入60 mL pH=6的PBS，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入50 μ L溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例6
1)將3號(hào)水稻樣品20g粉碎，加入60 mL pH=6. 5的PBS，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入100 μ L溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例7
1)將1號(hào)大米樣品20g粉碎，加入60 mL純凈水，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入25yL溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例8
1)將2號(hào)大米樣品20g粉碎，加入60 mL pH=6的PBS，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入50 μ L溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例9
1)將3號(hào)大米樣品20g粉碎，加入60 mL pH=6. 5的PBS，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入100 μ L溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例10
1)將1號(hào)糙米樣品20g粉碎，加入60 mL純凈水，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入25yL溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例11
1)將2號(hào)糙米樣品20g粉碎，加入60 mL pH=6的PBS，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入50 μ L溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。實(shí)施例12
1)將3號(hào)糙米樣品20g粉碎，加入60 mL pH=6. 5的PBS，超聲震蕩5min，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；
2)4000rpm離心沉淀，取上清1 mL ；
3)在上清中加入100 μ L溴水，混勻，靜置5min，得到前處理液。對(duì)照試驗(yàn)
對(duì)照組1 12中，在取相應(yīng)實(shí)施例離心后的上清1 mL，之后在上清中加入等溴水體積的純凈水。農(nóng)殘檢測(cè)
1) 取一片農(nóng)藥殘留檢測(cè)卡，撕去上蓋膜，用移液器吸取80 μ L加前處理液于白色藥片(酶片)上；2)在37°C恒溫裝置中放置IOmin后，將檢測(cè)卡對(duì)折，使紅色藥片(底物)與白色藥片疊合發(fā)生反應(yīng)，3min后查看白色藥片的變色情況；
3)白色藥片不變色或略有淺藍(lán)色均為陽(yáng)性結(jié)果，白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色為陰性結(jié)果。檢測(cè)結(jié)果表明，1 3號(hào)小麥樣品分別為陰性、陽(yáng)性、陽(yáng)性，重復(fù)3次，結(jié)果相同； 1 3號(hào)水稻樣品分別為陽(yáng)性、陰性、陰性，重復(fù)3次，結(jié)果相同；
1 3號(hào)大米樣品分別為陽(yáng)性、陰性、陰性，重復(fù)3次，結(jié)果相同； 1 3號(hào)糙米樣品分別為陰性、陽(yáng)性、陰性，重復(fù)3次，結(jié)果相同； 使用對(duì)照組中的前處理液，其結(jié)果均為陰性。使用氣象色譜法，對(duì)上述12個(gè)樣品進(jìn)行相同的檢測(cè)，其結(jié)果與本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果相同。檢出限試驗(yàn)
將常見的農(nóng)藥配制成標(biāo)準(zhǔn)液并稀釋，得到不同濃度的農(nóng)藥溶液。試驗(yàn)組中，取不同濃度的農(nóng)藥溶液1 mL，加入50 μ L質(zhì)量濃度為0.洲的溴水，混勻，靜置5min，之后按上述農(nóng)藥檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，以確定其檢出限；
對(duì)照組中，取不同濃度的農(nóng)藥溶液1 mL，加入50 μ L的純凈水，混勻，靜置5min，之后按上述農(nóng)藥檢測(cè)方法進(jìn)行檢測(cè)，以確定其檢出限。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下表所示。
權(quán)利要求
1.適用于酶抑制法農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品前處理方法，包括以下步驟1)將待測(cè)樣品粉碎，加入提取液，震蕩，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；2)在提取液中加入農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑，反應(yīng)。
2.一種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法，包括以下步驟1)將待測(cè)樣品粉碎，加入提取液，震蕩，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；2)在提取液中加入農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑，反應(yīng)得到反應(yīng)液；3)取反應(yīng)液滴加在酶片上，將酶與底物反應(yīng)，顯色，根據(jù)顯色結(jié)果判斷農(nóng)藥殘留狀況。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑包括溴。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于溴的添加量為提取液質(zhì)量的0.05%。 0. 2 %ο ο
5.一種農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)盒，包括農(nóng)藥殘留檢測(cè)卡和農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)盒，其特征在于農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑包括溴水。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)盒，其特征在于溴水的質(zhì)量濃度為 0. 1% 5%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種適用于酶抑制法農(nóng)藥殘留檢測(cè)的樣品前處理方法及農(nóng)藥檢測(cè)方法和檢測(cè)盒。方法包括將待測(cè)樣品粉碎，加入提取液，震蕩，使樣品中的農(nóng)藥殘留轉(zhuǎn)移至提取液中；在提取液中加入農(nóng)藥殘留增強(qiáng)劑，反應(yīng)。本方法和檢測(cè)盒操作方便，靈敏度高、結(jié)果準(zhǔn)確、成本低、安全環(huán)保、實(shí)用快速，特別適用于糧食農(nóng)藥殘留檢測(cè)的需要。
文檔編號(hào)G01N1/28GK102183396SQ20111006495
公開日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2011年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月17日
發(fā)明者盧新, 溫東海, 王亞軍, 胡玥靜, 謝俊平, 鐘國(guó)才, 陳嘉東, 陳威 申請(qǐng)人:廣州綠洲生化科技有限公司