專利名稱：一種用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物和其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種疾病的診斷標(biāo)記物，具體設(shè)計(jì)一種用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
胸腔積液是正常情況下胸腔兩層胸膜之間存在很少量(約廣30毫升)的液體，起潤(rùn)滑作用，減少在呼吸活動(dòng)過程中兩層胸膜之間的摩擦。這種液體從壁層胸膜產(chǎn)生，由臟層胸膜吸收，不斷循環(huán)之處于動(dòng)態(tài)平衡，液體量保持恒定，通常難以檢測(cè)。但是如果某種情況影響到胸膜，無論是壁層胸膜產(chǎn)生胸腔積液或是臟層胸膜吸收胸腔積液的速率發(fā)生改變，均可導(dǎo)致胸腔內(nèi)液體增多，形成胸腔積液，即胸腔積液。胸腔積液從性質(zhì)上可分為滲出性及漏出性。尤其是滲出性胸腔積液，可以是由腫瘤引起，如肺癌、乳房癌、胃癌等(也稱為癌性或癌性胸腔積液)；也有炎癥性病變所致，如由細(xì)菌、病毒或真菌等感染胸膜引起感染性炎癥， 導(dǎo)致胸腔積液，或由于肺栓塞、胰腺炎、結(jié)締組織疾病等非感染性炎癥引起胸腔積液。漏出性胸腔積液的病因，可以是全身性疾病，如低蛋白血癥、過敏性疾病，也可以是某器官的病變，如充血性心力衰竭、肝硬化、胸導(dǎo)管破裂等。胸腔積液是呼吸科的常見病、多發(fā)病，據(jù)報(bào)道在美國(guó)臨床癌性胸腔積液每年有 150,000^175,000例，英國(guó)有40，000例。由于胸腔積液的良癌性的鑒別診斷直接關(guān)系著患者的治療和預(yù)后，尤其對(duì)于癌性胸腔積液的早期診斷可以作為最早的癌癥信號(hào)，因此癌性胸腔積液的快速、早期診斷在臨床治療中顯得及其重要。但肺癌早期診斷較為困難，其臨床癥狀不顯著，肺癌的確認(rèn)多屬于中晚期，其臨床診斷主要通過胸腔鏡檢查、胸膜針刺活檢、胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查，胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查是最簡(jiǎn)單、特異的檢測(cè)方法，但其靈敏度低(< 50%),且耗時(shí)，需要重復(fù)檢查來確定結(jié)果，而近幾年來流行的評(píng)估癌癥標(biāo)記物的水平來診斷癌性胸腔積液，主要的癌癥標(biāo)記物有癌胚抗原(CEA)，癌抗原CA153，CA 199 和 CA 125，但其靈敏度不高，對(duì)于 CEA、CA125、CA199、CA153 分別為 52. 8%、16. 7%,52. 7% 和 50. 0%。其特異性也不盡人意，CEA、CA 15-3、CA 19-9, CA 125 分別為 85. 3%,75. 2%,71. 5% 和40.5%。且由于癌癥標(biāo)記物的種類較多，特異性不強(qiáng)，費(fèi)用昂貴，也限制了其應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、能用于準(zhǔn)確診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，本發(fā)明另一個(gè)目的是提供小分子標(biāo)記物在輔助診斷癌性胸腔積液的應(yīng)用。技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明提供的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，
它由下列化合物組成纈氨酸、乳酸鹽、丙氨酸鹽、乙酰乙酸鹽、肌氨酸酐、氧化三甲胺、 甜菜堿、α-和β-葡萄糖、亮氨酸和異亮氨酸。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，它由下列化合物組成纈氨酸、乳酸鹽、丙氨酸鹽、乙酰乙酸鹽、氧化三甲胺、甜菜堿、α-和β-葡萄糖。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，它由下列化合物組成乳酸鹽、乙酰乙酸鹽、氧化三甲胺、甜菜堿和α-葡萄糖。作為優(yōu)選方案，本發(fā)明提供的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，所述的乳酸鹽為乳酸鉀鹽或鈉鹽、醋酸鹽為醋酸鉀鹽或鈉鹽，乙酰乙酸鹽為乙酰乙酸鉀鹽或鈉鹽。本發(fā)明提供的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物在診斷癌性胸腔積液中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物在診斷肺癌胸腔積液中的應(yīng)用。有益效果本發(fā)明提供的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物和現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn)
本發(fā)明針對(duì)癌性患者胸腔積液的成分及其含量的變化，通過大量實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)合核磁共振技術(shù)和逐步判別函數(shù)分析法篩選出特意性強(qiáng)、靈敏度高、鑒定結(jié)果準(zhǔn)確率高的用于診斷癌性胸腔積液的11個(gè)小分子標(biāo)記物，尤其是乳酸鹽、乙酰乙酸鹽、氧化三甲胺、甜菜堿和α-葡萄糖；本發(fā)明采用核磁共振技術(shù)對(duì)小分子標(biāo)記物的氫化學(xué)位移及信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行分析，并建立區(qū)分胸腔積液類別的判別函數(shù)，可以靈敏、準(zhǔn)確、高效的診斷出良性和癌性胸腔積液，為早期準(zhǔn)確診斷肺癌等癌性胸腔積液，給患者爭(zhēng)取更多的治療時(shí)間，提高臨床治療效果具有重要意義。


圖1為本發(fā)明提供的癌性和良性胸腔積液中小分子標(biāo)記物的氫譜信號(hào)圖。圖2為實(shí)施例2所述的良性和癌性胸腔積液中小分子的判別函數(shù)分析結(jié)果。圖3為實(shí)施例3所述的良性和癌性胸腔積液中小分子的判別函數(shù)分析結(jié)果。
具體實(shí)施例方式
根據(jù)下述實(shí)施例，可以更好地理解本發(fā)明。然而，本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易理解，實(shí)施例所描述的具體的物料配比、工藝條件及其結(jié)果僅用于說明本發(fā)明，而不應(yīng)當(dāng)也不會(huì)限制權(quán)利要求書中所詳細(xì)描述的本發(fā)明。實(shí)施例1胸腔積液中小分子標(biāo)記物的核磁共振分析
1、實(shí)驗(yàn)對(duì)象分別取沈個(gè)良性胸腔積液和沈個(gè)癌性胸腔積液作為核磁共振分析樣本。2、實(shí)驗(yàn)方法分別取上述22個(gè)良性胸腔積液和沈個(gè)癌性胸腔積液1毫升與20毫升丙酮混合，渦旋30秒，放置5分鐘沉淀蛋白，4000轉(zhuǎn)/分鐘離心10分鐘，小分子化合物保留在上層清液中，將上層清液揮干，殘留物用500微升重水復(fù)溶，其中重水內(nèi)含TSP(氘代三甲基甲硅烷基丙酸鈉)作為化學(xué)位移內(nèi)標(biāo)(S =0)，然后將樣品液4000轉(zhuǎn)/分鐘離心 10分鐘，取上層清液移入核磁共振樣品管。樣品測(cè)試在Bruker DPX-300核磁共振儀上進(jìn)行，使用修改了的脈沖序列(zgpr)水峰飽和(pl9 = 60 dB, dl= 2秒)，脈沖間隔為15.0 秒，每個(gè)樣品空掃4次，采樣64次。所有實(shí)驗(yàn)都在5毫米的探頭中進(jìn)行，測(cè)試溫度維持在 27 V。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果具體實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1和表1所示由圖1的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明通過核磁共振分析癌性和良性胸腔積液，共篩選出12個(gè)相關(guān)的小分子，其中11個(gè)可作為鑒定癌性和良性胸腔積液的相關(guān)的小分子標(biāo)記物，圖中A為癌性胸腔積液小分子標(biāo)記物的氫核磁共振分析圖，B為良性胸腔積液小分子標(biāo)記物的氫核磁共振分析圖，圖中12個(gè)相關(guān)的小分子的歸屬分別為1為亮氨酸和異亮氨酸、2為纈氨酸、3為乳酸鹽、4為丙氨酸鹽、5為醋酸鹽、6為乙酰乙酸鹽、7為肌氨酸酐、8為氧化三甲胺和甜菜堿、9為β-葡萄糖、10為α-葡萄糖。從圖1所示的癌性和良性胸腔積液的核磁共振氫譜看出，本發(fā)明通過大量實(shí)驗(yàn)篩選確定最佳的核磁共振分析方法，以上12個(gè)相關(guān)的小分子標(biāo)記物能夠呈現(xiàn)出較好的氫譜圖， 可作為12個(gè)相關(guān)的小分子標(biāo)記物定性、定量分析的依據(jù)。
表1癌性和良性胸腔積液中的小分子標(biāo)記物的氫化學(xué)位移及其位移值比較
權(quán)利要求
1.一種用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，其特征在于，它由下列化合物組成 纈氨酸、乳酸鹽、丙氨酸鹽、乙酰乙酸鹽、肌氨酸酐、氧化三甲胺、甜菜堿、α -和β -葡萄糖、 亮氨酸和異亮氨酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，其特征在于，它由下列化合物組成纈氨酸、乳酸鹽、丙氨酸鹽、乙酰乙酸鹽、氧化三甲胺、甜菜堿、α-和 β-葡萄糖。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，其特征在于，它由下列化合物組成乳酸鹽、乙酰乙酸鹽、氧化三甲胺、甜菜堿和α-葡萄糖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，其特征在于，所述的乳酸鹽、醋酸鹽和乙酰乙酸鹽為鉀鹽或鈉鹽。
5.權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物在診斷癌性胸腔積液中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物及其應(yīng)用，該小分子標(biāo)記物由纈氨酸、乳酸鹽、丙氨酸鹽、乙酰乙酸鹽、肌氨酸酐、氧化三甲胺、甜菜堿、α-和β-葡萄糖、亮氨酸和異亮氨酸11個(gè)化合物組成。本發(fā)明針對(duì)癌性患者胸腔積液的成分及其含量的變化，結(jié)合核磁共振技術(shù)和逐步判別函數(shù)分析法篩選出特意性強(qiáng)、靈敏度高、鑒定結(jié)果準(zhǔn)確率高的用于診斷癌性胸腔積液的小分子標(biāo)記物，尤其是乳酸鹽、乙酰乙酸鹽、氧化三甲胺、甜菜堿和α-葡萄糖可以靈敏、準(zhǔn)確、高效的鑒定出良性和癌性胸腔積液，為早期準(zhǔn)確診斷肺癌等癌性胸腔積液，給患者爭(zhēng)取更多的治療時(shí)間，提高臨床治療效果具有重要意義。
文檔編號(hào)G01N24/08GK102230903SQ20111008671
公開日2011年11月2日 申請(qǐng)日期2011年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月2日
發(fā)明者何翠翠, 周賢梅, 李建新, 趙陽(yáng) 申請(qǐng)人:江蘇省中醫(yī)院