專利名稱:一種中藥組合物中知母皂苷bⅱ的含量測定方法
技術領域:
本發(fā)明涉及一種中藥組合物中知母皂苷B II的含量測定方法。
背景技術:
CN1833703A公開了一種治療糖尿病周圍神經(jīng)病變的藥物及制備方法,該中藥組合物中含有原料藥材知母,知母中富含留體皂苷、雙苯吡酮類、黃酮類、木脂素類、多糖類、有機酸類及微量元素等成分。而其中,留體皂苷類為 主要成分,其在根莖中的量約為6 %,且種類繁多。其中知母皂苷B II為該藥材中的重要成分,常作為中藥組合物中含量檢測指標進行質(zhì)量控制,常見的測定方法為薄層掃描法,高效液相色譜法等,但是,由于中成藥成分復雜,往往不同的中藥組合物,知母皂苷B II的含量測定方法會有所不同,原因主要是由于中藥組合物中不同原料存在干擾,因此,同一成分的測定方法在不同的中藥組合物中,很難采用同一種方法測定,每種中藥組合物的測定方法都需要嚴格的方法篩選才能確定。本發(fā)明是在CN1833703A專利的基礎上進行的改進發(fā)明,在此全文引用該專利文件記載的內(nèi)容。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一種中藥組合物中知母皂苷B II的含量測定方法,所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成
黃芪300-400份、生地黃300-400份、雞血藤300-400份、桂枝80-120份、當歸100-150份、川芎150-200份、荔枝核150-200份、知母80-120份、桑枝80-120份、徐長卿80-120份、延胡索70-120份、麻黃50-100份、地龍30-60份;
該方法采用高效液相色譜法,色譜條件和測定法如下
色譜條件色譜柱C18,規(guī)格為4. 6mmX250mm,5u m ;流動相為乙腈7jC -24:76 ;蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為75°C,加熱級別為66%,載氣流速為25psi,柱溫為30°C,流速為
I.Oml/min,理論塔板數(shù)以知母皂苷B II計不少于6000 ;
供試品溶液的制備取上述中藥組合物制劑內(nèi)容物或研細的粉末2. Og,精密稱定,置具塞三角瓶中,精密加入25%乙腈50ml,稱重,超聲提取30分鐘,放冷,用25%乙腈補足減失的重量,過濾,取續(xù)濾液25ml,回收溶劑至近干,殘渣用約50ml水溶解,通過AB-8大孔吸附樹脂柱,規(guī)格為內(nèi)徑I. 5cm,長10cm,分別用氨試液50ml、20%乙醇50ml洗脫,棄去;再用80%乙醇洗脫100ml,收集洗脫液,蒸干,殘渣用25%乙腈溶解,并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加25%乙腈至刻度,搖勻,作為供試品溶液;
對照品溶液的制備精密稱取知母皂苷B II對照品IOmg置IOml量瓶中,加25%乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為母液,精密量取Iml母液置IOml量瓶中,加25%乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液;
測定法分別精密吸取對照品溶液15rt、30W,供試品溶液15耵,注入液相色譜儀,測定,用外標兩點法對數(shù)方程計算,即得。
外標兩點法即對照品進樣質(zhì)量的自然對數(shù)與其相應的峰面積的自然對數(shù)這兩點做對數(shù)方程,將供試品峰面積取自然對數(shù)后代人方程從而求得供試品的含量。優(yōu)選地,該中藥組合物由如下重量份的原料藥制成
黃芪340份、生地黃340份、雞血藤340份、桂枝113份、當歸136份、川芎170份、荔枝核170份、知母113份、桑枝113份、徐長卿102份、延胡索91份、麻黃68份、地龍45份?;?br>
黃芪300份、生地黃300份、雞血藤300份、桂枝80份、當歸100份、川彎150份、荔枝核150份、知母80份、桑枝80份、徐長卿80份、延胡索70份、麻黃50份、地龍30份。或
黃芪400份、生地黃400份、雞血藤400份、桂枝120份、當歸150份、川芎200份、荔枝 核200份、知母120份、桑枝120份、徐長卿120份、延胡索120份、麻黃100份、地龍60份?;?br>
黃芪300份、生地黃300份、雞血藤300份、桂枝120份、當歸150份、川芎150份、荔枝核200份、知母120份、桑枝120份、徐長卿120份、延胡索120份、麻黃100份、地龍60份。更優(yōu)選地,本發(fā)明中藥組合物的活性成分由下列成分組成
1)黃芪、麻黃、桑枝、延胡索、雞血藤、川芎,分別加8-12倍量50-80%乙醇,回流提取1-3次,提取時間分別為1-3小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C熱測時相對密度I. 02-1. 06的流浸膏;
2)桂枝、當歸、徐長卿,加5-8倍量水,浸泡20-40分鐘,水蒸汽蒸餾法提油時間5-8小時,提取的揮發(fā)油;
3)桂枝、當歸、徐長卿提取完揮發(fā)油后經(jīng)過濾的水煎液;
4)生地黃、荔枝核、知母、地龍與桂枝、當歸、徐長卿提取揮發(fā)油后的殘渣合并,加8-12倍量水,加熱煎煮1-3次,時間分別為1-3小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,減壓濃縮至60°C熱測時相對密度為I. 20-1. 24的清膏,加95%乙醇至醇濃度50_70%,5_10°C靜置18-36小時,過濾,濾液減壓回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C熱測時相對密度I. 02-1. 06的流浸膏。本發(fā)明中藥組合物中,原料藥材的拉丁名及其加工方法來自《中藥大辭典》(1977年7月,第一版,上??茖W技術出版社)和《中國藥典》(2005年版,化學工業(yè)出版社)。本發(fā)明中藥組合物制劑還可以按常規(guī)的制劑工藝,例如,范碧亭《中藥藥劑學》(上??茖W出版社1997年12月第I版)記載的制備工藝,制成藥劑學可接受的任意常規(guī)劑型,例如膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、散劑、口服液等。本發(fā)明的應用中,所述中藥組合物為膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑、散劑、口服液制劑中的一種,為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn),需在制備這些劑型時加入藥學可接受的輔料,例如填充劑、崩解劑、潤滑劑、助懸劑、粘合劑、甜味劑、矯味劑、防腐劑、基質(zhì)等。填充劑包括淀粉、預膠化淀粉、乳糖、甘露醇、甲殼素、微晶纖維素、蔗糖等;崩解劑包括淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉等;潤滑劑包括硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉、滑石粉、二氧化硅等;助懸劑包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纖維素、蔗糖、瓊脂、羥丙基甲基纖維素等;粘合劑包括,淀粉漿、聚乙烯吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素等;甜味劑包括糖精鈉、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等;矯味劑包括甜味劑及各種香精;防腐劑包括尼泊金類、苯甲酸、苯甲酸鈉、山梨酸及其鹽類、苯扎溴銨、醋酸氯乙定、桉葉油等;基質(zhì)包括PEG6000,PEG4000,蟲蠟等。為使上述劑型能夠?qū)崿F(xiàn)中藥藥劑學,需在制備這些劑型時加入藥學可接受的其它輔料(范碧亭《中藥藥劑學》,上海科學出版社1997年12月第I版中各劑型記載的輔料)?;蛘撸景l(fā)明制劑優(yōu)選通過以下制備方法制成
原料藥重量比例
黃芪300-400份、生地黃300-400份、雞血藤300-400份、桂枝80-120份、當歸100-150份、川芎150-200份、荔枝核150-200份、知母80-120份、桑枝80-120份、徐長卿80-120份、延胡索70-120份、麻黃50-100份、地龍30-60份;
制備方法 1)取方中藥材,分別凈選,粗碎為約5-10mm顆粒,按比例稱量;
2)按比例稱取黃芪、麻黃、桑枝、延胡索、雞血藤、川芎,分別加8-12倍量50-80%乙醇,回流提取1-3次,提取時間分別為1-3小時。過濾,合并提取液,殘渣棄去?;厥找掖贾翢o醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用;
3)按比例稱取桂枝、當歸、徐長卿,加5-8倍量水,浸泡20-40分鐘,水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油,提時間5-8小時,揮發(fā)油另器收集。水煎液過濾,備用;
4)按比例稱取生地黃、荔枝核、知母、地龍,與提油后殘渣合并,加8-12倍量水,加熱煎煮1-3次,時間分別為1-3小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 20-1. 24的清膏,加95%乙醇至醇濃度50-70%,5_10°C靜置18-36小時,過濾,濾液減壓回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用;
5)將淀粉,糊精混勻,置噴霧制粒機中,將步驟2)所得醇提流浸膏和步驟4)所得水提醇沉流浸膏混合噴入制粒,整粒,噴入揮發(fā)油,密閉半小時,制成所需劑型,即得。或者,本發(fā)明制劑優(yōu)選通過以下制備方法制成
原料藥比例
黃芪340份、生地黃340份、雞血藤340份、桂枝113份、當歸136份、川芎170份、荔枝核170份、知母113份、桑枝113份、徐長卿102份、延胡索91份、麻黃68份、地龍45份;制備方法
1)取方中藥材,分別凈選,粗碎為約5-10mm顆粒,按比例稱量;
2)按比例稱取黃芪、麻黃、桑枝、延胡索、雞血藤、川芎,分別加10倍量、8倍量60%乙醇,回流提取2次,提取時間分別為2、1. 5小時。過濾,合并提取液,殘渣棄去?;厥找掖贾翢o醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用;
3)按比例稱取桂枝、當歸、徐長卿,加7倍量水,浸泡30分鐘,水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油,提時間6小時,揮發(fā)油另器收集。水煎液過濾,備用;
4)按比例稱取生地黃、荔枝核、知母、地龍,與提油后殘渣合并,加9倍量水,加熱煎煮2次,時間分別為2、I. 5小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 20-1. 24的清膏,加95%乙醇至醇濃度60%,5-10°C靜置24小時,過濾,濾液減壓回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用;
5)將淀粉,糊精混勻,置噴霧制粒機中,將醇提流浸膏和水提醇沉流浸膏混合噴入制粒,整粒,噴入揮發(fā)油,密閉半小時,制成所需劑型,即得。
為證實本發(fā)明中藥組合物中知母皂苷B II的含量測定方法的可行性,發(fā)明人進行了如下實驗
I儀器與試藥
Waters2695-2424型HPLC儀(包括四元泵、在線脫氣機、蒸發(fā)光檢測器、柱溫箱、IOOiU進樣閥、化學工作站等);乙腈(色譜純);水(超純水);其余試劑均為分析純。對照品知母皂苷B II批號(A0338)、供含量測定用,在選定的色譜條件分離后,按面積歸一化法計算,其純度大于98%。本發(fā)明中藥組合物制劑(實驗室按照實施例I的方法自制,批號100501,100601,100701)。方法與結(jié)果
2. I色譜條件色譜柱為AquaSep C18 (4. 6mmX 250mm, 5 u m, ES公司);流動相為乙腈水-24:76 ;ELSD檢測器漂移管溫度為75°C,加熱級別為66%,載氣流速為25psi,柱溫為 30°C,流速為I. Oml/min,供試品進樣量為15ML,對照品進樣量為IOML和30ML。理論塔板數(shù)以知母皂苷B II計不少于6000。溶液的制備
2.2. I對照品溶液的制備精密稱取知母皂苷B II對照品10. 38mg置IOml量瓶中,加25%乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為母液,精密量取Iml母液置IOml量瓶中,加25%乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。供試品溶液的制備取制劑內(nèi)容物2. Og,精密稱定,置具塞三角瓶中,精密加入25%乙腈50ml,稱重,超聲提取30分鐘,放冷,用25%乙腈補足減失的重量,過濾,取續(xù)濾液25ml,回收溶劑至近干,殘渣用約50ml水溶解,通過AB-8大孔吸附樹脂柱,規(guī)格為內(nèi)徑
I.5cm,長10cm,分別用氨試液50ml、20%乙醇50ml洗脫,棄去;再用80%乙醇洗脫100ml,收集洗脫液,蒸干,殘渣用25%乙腈溶解,并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加25%乙腈至刻度,搖勻,作為供試品溶液。陰性樣品溶液的制備按制劑工藝制備不含知母的樣品,同“供試品溶液的制備”方法,制備陰性樣品溶液
2.3專屬性試驗精密量取供試品溶液、對照品溶液、陰性樣品溶液各15y L,分別注入液相色譜儀,按上述色譜條件測定,結(jié)果見圖1-3。由圖1-3可知,陰性樣品在供試品和對照品知母皂苷B II色譜峰位置上無干擾,方法專屬性良好。線性范圍考察精密吸取“對照品溶液的制備”項下的母液I. 0ml,共5份,加25%乙腈分別稀釋2倍、5倍、10倍、12. 5倍、25倍,制得系列濃度對照品溶液。精密吸取上述不同濃度對照品溶液各15 UL,注入液相色譜儀,按上述色譜條測定,記錄知母皂苷B II的峰面積A值,并以峰面積A值的自然對數(shù)對進樣量M的自然對數(shù)進行線性回歸,得回歸方程,InA=L 77871nM+12. 139,r=0. 9997結(jié)果表明,知母皂苷B II進樣量在0. 62 7. 79 y g范圍內(nèi),峰面積自然對數(shù)與進樣量自然對數(shù)有良好的線性關系。精密度試驗精密吸取對照品溶液15 U L,注入液相色譜儀,連續(xù)進樣6次,按上述色譜條件測定,結(jié)果知母皂苷B II峰面積RSD為I. 04% ;表明儀器精密度良好。穩(wěn)定性試驗精密吸取對照品和供試品溶液,按上述色譜條件,分別于Oh, 4h, 8h, 12h, 16h, 20h,24h測定,計算供試品中知母皂苷B II的含量RSD為0. 82% ;表明供試品在24小時內(nèi)穩(wěn)定。重復性試驗取同一批號(100501)樣品9份,分別為I. 5克3份,2.0克3份,
2.5克3份,精密稱定,按照“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液,精密吸取對照品溶液及供試品溶液按上述色譜條件測定,計算知母皂苷B II含量的RSD為I. 63% ;表明重復性良好。加樣回收率試驗稱取同一批號(100501)樣品9份,每份I. 0g,精密稱定,分3組,每組3份,每組按樣品中知母皂苷B II含量的80%、100%、120%分別精密加入對照品,按照“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液,精密吸取對照品溶液及供試品溶液,按上述色譜條件測定,計算知母皂苷B II的含量,結(jié)果見表I。表I知母皂苷B II加樣回收率試驗結(jié)果
序咢| #S C叫巧中的添f的量測,■靈j回收率(%)|平收R9>(%)
___g(mg) (mg^ (mg)__' 率( 句__.
11.005廠 L46 — t.62 . 3 JO "loi.23
21.0064 146 1 62 3.04 9153
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結(jié)果表明,知母皂苷B II的回收率均在95% 105%,方法準確性良好。樣品測定取3批樣品,按“供試品溶液的制備”方法制備供試品溶液,精密吸取對照品溶液及供試品溶液按上述色譜條件測定,計算知母皂苷B II的含量量,結(jié)果見表2。表2本發(fā)明中藥組合物制劑中知母皂苷B II含量測定結(jié)果 表2知母皂苷B II含量測定結(jié)果_
批號知母阜苷B II (mg/g)
100501 I. 45 100601 I. 48 100701 |l.43
3結(jié)論
本發(fā)明含量測定方法,用于本發(fā)明中藥組合物制劑的質(zhì)量控制,準確,靈敏,穩(wěn)定可靠,方法簡便,符合藥物制劑的質(zhì)量控制方法的要求。發(fā)明人曾對供試樣品的處理方法進行了考察,由于制劑中藥味較多、成分復雜、含糖量較高等原因,為了降低測定中其他成分對知母皂苷B II的干擾,我們比較了液液萃取,固相萃取小柱,D330陰離子樹脂和AB-8大孔吸附樹脂等前處理方法,結(jié)果AB-8大孔吸附樹脂除雜效果最佳,為了保證知母皂苷B II測定的準確性,本文選擇了 AB-8大孔吸附樹脂作為樣品除雜方法。參考《中國藥典》2010年版一部的比例,柱子由CS換成C18,通過調(diào)整流動相比例,供試品中知母皂苷B II達到基線分離,故選擇為本實驗的流動相系統(tǒng)。
圖I知母皂苷B II對照品圖。圖2供試品圖譜。圖3陰性樣品圖譜。
具體實施例方式實施例I :
原料藥重量黃芪340kg、生地黃340kg、雞血藤340kg、桂枝113kg、當歸136kg、川芎170kg、蒸枝核170kg、知母113kg、桑枝113kg、徐長卿102kg、延胡索91kg、麻黃68kg地龍45kg ; 制備方法
I)取方中藥材,分別凈選,粗碎為約5-10mm顆粒,按比例稱量。2)按比例稱取黃芪、麻黃、桑枝、延胡索、雞血藤、川芎,分別加10倍量、8倍量60%乙醇,回流提取2次,提取時間分別為2、1. 5小時。過濾,合并提取液,殘渣棄去?;厥找掖贾翢o醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。3)按比例稱取桂枝、當歸、徐長卿,加7倍量水,浸泡30分鐘,水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油,提時間6小時,揮發(fā)油另器收集。水煎液過濾,備用。4)按比例稱取生地黃、荔枝核、知母、地龍,與提油后殘渣合并,加9倍量水,加熱煎煮2次,時間分別為2、I. 5小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 20-1. 24的清膏,加95%乙醇至醇濃度60%,5-10°C靜置24小時,過濾,濾液減壓回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。5)將淀粉,糊精混勻,置噴霧制粒機中,將醇提流浸膏和水提醇沉流浸膏混合噴入制粒,整粒,噴入揮發(fā)油,密閉半小時,裝膠囊,即得膠囊劑;
測定方法
色譜條件色譜柱C18,規(guī)格為4. 6mmX250mm,5iim ;流動相為乙腈7jC -24:76 ;蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為75°C,加熱級別為66%,載氣流速為25psi,柱溫為30°C,流速為
I.Oml/min,理論塔板數(shù)以知母皂苷B II計不少于6000 ;
供試品溶液的制備取上述中藥組合物制劑內(nèi)容物粉末2. Og,精密稱定,置具塞三角瓶中,精密加入25%乙腈50ml,稱重,超聲提取30分鐘,放冷,用25%乙腈補足減失的重量,過濾,取續(xù)濾液25ml,回收溶劑至近干,殘渣用約50ml水溶解,通過AB-8大孔吸附樹脂柱,規(guī)格為內(nèi)徑I. 5cm,長10cm,分別用氨試液50ml、20%乙醇50ml洗脫,棄去;再用80%乙醇洗脫100ml,收集洗脫液,蒸干,殘渣用25%乙腈溶解,并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加25%乙腈至刻度,搖勻,作為供試品溶液;
對照品溶液的制備精密稱取知母皂苷B II對照品IOmg置IOml量瓶中,加25%乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為母液,精密量取Iml母液置IOml量瓶中,加25%乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液;
測定法分別精密吸取對照品溶液15rt、30W,供試品溶液15耵,注入液相色譜儀,測定,用外標兩點法對數(shù)方程計算,即得;
評價結(jié)果評價結(jié)果表
I專屬性I精密度RSD (%) I重復性RSD(%) I溶液穩(wěn)定性RSD (f 無干擾 |l.04|l. 63|o. 82
實施例2
原料藥重量黃芪300kg、生地黃300kg、雞血藤300kg、桂枝80kg、當歸100kg、川芎150kg、蒸枝核150kg、知母80kg、桑枝80kg、徐長卿80kg、延胡索70kg、麻黃50kg、地龍30kg ;
制備方法
I)取方中藥材,分別凈選,粗碎為約5-10mm顆粒,按比例稱量。
2)按比例稱取黃芪、麻黃、桑枝、延胡索、雞血藤、川芎,分別加12倍量、10倍量、8倍量50%乙醇,回流提取3次,提取時間分別為1、2、3小時。過濾,合并提取液,殘渣棄去?;厥找掖贾翢o醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。 3)按比例稱取桂枝、當歸、徐長卿,加7倍量水,浸泡20分鐘,水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油,提時間5小時,揮發(fā)油另器收集。水煎液過濾,備用。4)按比例稱取生地黃、荔枝核、知母、地龍,與提油后殘渣合并,加8倍量水,加熱煎煮2次,時間分別為2、3小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 20-1. 24的清膏,加95%乙醇至醇濃度50%,5-10°C靜置24小時,過濾,濾液減壓回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。5)將淀粉,糊精混勻,置噴霧制粒機中,將醇提流浸膏和水提醇沉流浸膏混合噴入制粒,整粒,噴入揮發(fā)油,密閉半小時,壓片,即得片劑;
測定方法
色譜條件色譜柱C18,規(guī)格為4. 6mmX250mm,5iim ;流動相為乙腈7jC -24:76 ;蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為75°C,加熱級別為66%,載氣流速為25psi,柱溫為30°C,流速為I. Oml/min,理論塔板數(shù)以知母皂苷B II計不少于6000 ;
供試品溶液的制備取上述中藥組合物制劑研細的粉末2. Og,精密稱定,置具塞三角瓶中,精密加入25%乙腈50ml,稱重,超聲提取30分鐘,放冷,用25%乙腈補足減失的重量,過濾,取續(xù)濾液25ml,回收溶劑至近干,殘渣用約50ml水溶解,通過AB-8大孔吸附樹脂柱,規(guī)格為內(nèi)徑I. 5cm,長10cm,分別用氨試液50ml、20%乙醇50ml洗脫,棄去;再用80%乙醇洗脫100ml,收集洗脫液,蒸干,殘渣用25%乙腈溶解,并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加25%乙腈至刻度,搖勻,作為供試品溶液;
對照品溶液的制備精密稱取知母皂苷B II對照品IOmg置IOml量瓶中,加25%乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為母液,精密量取Iml母液置IOml量瓶中,加25%乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液;
測定法分別精密吸取對照品溶液15rt、30W,供試品溶液15耵,注入液相色譜儀,測定,用外標兩點法對數(shù)方程計算,即得;
評價結(jié)果
評價結(jié)果表___
I專屬性I精密度RSD (%) I重復性RSD(%) I溶液穩(wěn)定性RSD (f 結(jié)果 I無干擾 |l. 26|l. 72|l.01
實施例3 原料藥重量黃芪400kg、生地黃400kg、雞血藤400kg、桂枝120kg、當歸150kg、川芎200kg、蒸枝核200kg、知母120kg、桑枝120kg、徐長卿120kg、延胡索120kg、麻黃IOOkg、地龍 60kg ;
制備方法
I)取方中藥材,分別凈選,粗碎為約5-10mm顆粒,按比例稱量。2)按比例稱取黃芪、麻黃、桑枝、延胡索、雞血藤、川芎,分別加10倍量、12倍量70%乙醇,回流提取2次,提取時間分別為1、3小時。過濾,合并提取液,殘渣棄去?;厥找掖贾翢o醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。3)按比例稱取桂枝、當歸、徐長卿,加8倍量水,浸泡40分鐘,水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油,提時間8小時,揮發(fā)油另器收集。水煎液過濾,備用。
4)按比例稱取生地黃、荔枝核、知母、地龍,與提油后殘渣合并,加12倍量水,加熱煎煮3次,時間分別為1、2、3小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 20-1. 24的清膏,加95%乙醇至醇濃度70%,5_10°C靜置18小時,過濾,濾液減壓回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。5)將淀粉,糊精混勻,置噴霧制粒機中,將醇提流浸膏和水提醇沉流浸膏混合噴入制粒,整粒,噴入揮發(fā)油,密閉半小時,分裝,即得顆粒劑;
測定方法
色譜條件色譜柱C18,規(guī)格為4. 6mmX250mm,5iim ;流動相為乙腈7jC -24:76 ;蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為75°C,加熱級別為66%,載氣流速為25psi,柱溫為30°C,流速為I. Oml/min,理論塔板數(shù)以知母皂苷B II計不少于6000 ;
供試品溶液的制備取上述中藥組合物制劑研細的粉末2. Og,精密稱定,置具塞三角瓶中,精密加入25%乙腈50ml,稱重,超聲提取30分鐘,放冷,用25%乙腈補足減失的重量,過濾,取續(xù)濾液25ml,回收溶劑至近干,殘渣用約50ml水溶解,通過AB-8大孔吸附樹脂柱,規(guī)格為內(nèi)徑I. 5cm,長10cm,分別用氨試液50ml、20%乙醇50ml洗脫,棄去;再用80%乙醇洗脫100ml,收集洗脫液,蒸干,殘渣用25%乙腈溶解,并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加25%乙腈至刻度,搖勻,作為供試品溶液;
對照品溶液的制備精密稱取知母皂苷B II對照品IOmg置IOml量瓶中,加25%乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為母液,精密量取Iml母液置IOml量瓶中,加25%乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液;
測定法分別精密吸取對照品溶液15rt、30W,供試品溶液15耵,注入液相色譜儀,測定,用外標兩點法對數(shù)方程計算,即得;
評價結(jié)果
評價結(jié)果表
I專屬性I精密度RSD (%) I重復性RSD(%) I溶液穩(wěn)定性RSD (f 無干擾 |l. 15|l. 57|o. 98
實施例4
原料藥重量黃芪300kg、生地黃300kg、雞血藤300kg、桂枝120kg、當歸150kg、川芎150kg、蒸枝核200kg、知母120kg、桑枝120kg、徐長卿120kg、延胡索120kg、麻黃100kg、地龍 60kg ;
制備方法I)取方中藥材,分別凈選,粗碎為約5-10mm顆粒,按比例稱量。2)按比例稱取黃芪、麻黃、桑枝、延胡索、雞血藤、川芎,分別加10倍量、12倍量70%乙醇,回流提取2次,提取時間分別為1、3小時。過濾,合并提取液,殘渣棄去?;厥找掖贾翢o醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。3)按比例稱取桂枝、當歸、徐長卿,加8倍量水,浸泡40分鐘,水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油,提時間8小時,揮發(fā)油另器收集。水煎液過濾,備用。4)按比例稱取生地黃、荔枝核、知母、地龍,與提油后殘渣合并,加12倍量水,加熱煎煮3次,時間分別為1、2、3小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 20-1. 24的清膏,加95%乙醇至醇濃度70%,5_10°C靜置18小時,過濾,濾液減壓回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。5)將醇提流浸膏和水提醇沉流浸膏混合,烘干,泛制為丸,噴入揮發(fā)油,密封包裝, 即得丸劑;
測定方法
色譜條件色譜柱C18,規(guī)格為4. 6mmX250mm,5u m ;流動相為乙腈7jC -24:76 ;蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為75°C,加熱級別為66%,載氣流速為25psi,柱溫為30°C,流速為I. Oml/min,理論塔板數(shù)以知母皂苷B II計不少于6000 ;
供試品溶液的制備取上述中藥組合物制劑研細的粉末2. Og,精密稱定,置具塞三角瓶中,精密加入25%乙腈50ml,稱重,超聲提取30分鐘,放冷,用25%乙腈補足減失的重量,過濾,取續(xù)濾液25ml,回收溶劑至近干,殘渣用約50ml水溶解,通過AB-8大孔吸附樹脂柱,規(guī)格為內(nèi)徑I. 5cm,長10cm,分別用氨試液50ml、20%乙醇50ml洗脫,棄去;再用80%乙醇洗脫100ml,收集洗脫液,蒸干,殘渣用25%乙腈溶解,并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加25%乙腈至刻度,搖勻,作為供試品溶液;
對照品溶液的制備精密稱取知母皂苷B II對照品IOmg置IOml量瓶中,加25%乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為母液,精密量取Iml母液置IOml量瓶中,加25%乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液;
測定法分別精密吸取對照品溶液15rt、30W,供試品溶液15耵,注入液相色譜儀,測定,用外標兩點法對數(shù)方程計算,即得;
評價結(jié)果
評價結(jié)果表
I專屬性I精密度RSD (%) I重復性RSD(%) I溶液穩(wěn)定性RSD (f 無干擾 |l.33|l. 62|o. 87
實施例5
原料藥重量黃芪300kg、生地黃300kg、雞血藤300kg、桂枝120kg、當歸150kg、川芎150kg、蒸枝核200kg、知母120kg、桑枝120kg、徐長卿120kg、延胡索120kg、麻黃100kg、地龍 60kg ;
制備方法
I)取方中藥材,分別凈選,粗碎為約5-10mm顆粒,按比例稱量。2)按比例稱取黃芪、麻黃、桑枝、延胡索、雞血藤、川芎,分別加10倍量、12倍量70%乙醇,回流提取2次,提取時間分別為1、3小時。過濾,合并提取液,殘渣棄去?;厥找掖贾翢o醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。
3)按比例稱取桂枝、當歸、徐長卿,加8倍量水,浸泡40分鐘,水蒸汽蒸餾法提取揮發(fā)油,提時間8小時,揮發(fā)油另器收集。水煎液過濾,備用。4)按比例稱取生地黃、荔枝核、知母、地龍,與提油后殘渣合并,加12倍量水,加熱煎煮2次,時間分別為1、3小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 20-1. 24的清膏,加95%乙醇至醇濃度70%,5-10°C靜置36小時,過濾,濾液減壓回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C測定時相對密度為I. 02-1. 06的流浸膏,備用。5)將醇提流浸膏和水提醇沉流浸膏混合,烘干,研細,噴入揮發(fā)油,密封包裝,即得散劑;
測定方法
色譜條件色譜柱C18,規(guī)格為4. 6mmX250mm,5u m ;流動相為乙腈7jC -24:76 ;蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為75°C,加熱級別為66%,載氣流速為25psi,柱溫為30°C,流速為 I. Oml/min,理論塔板數(shù)以知母皂苷B II計不少于6000 ;
供試品溶液的制備取上述中藥組合物制劑研細的粉末2. Og,精密稱定,置具塞三角瓶中,精密加入25%乙腈50ml,稱重,超聲提取30分鐘,放冷,用25%乙腈補足減失的重量,過濾,取續(xù)濾液25ml,回收溶劑至近干,殘渣用約50ml水溶解,通過AB-8大孔吸附樹脂柱,規(guī)格為內(nèi)徑I. 5cm,長10cm,分別用氨試液50ml、20%乙醇50ml洗脫,棄去;再用80%乙醇洗脫100ml,收集洗脫液,蒸干,殘渣用25%乙腈溶解,并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中,加25%乙腈至刻度,搖勻,作為供試品溶液;
對照品溶液的制備精密稱取知母皂苷B II對照品IOmg置IOml量瓶中,加25%乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為母液,精密量取Iml母液置IOml量瓶中,加25%乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液;
測定法分別精密吸取對照品溶液15rt、30W,供試品溶液15耵,注入液相色譜儀,測定,用外標兩點法對數(shù)方程計算,即得;
評價結(jié)果
評價結(jié)果表
I專屬性I精密度RSD (%) I重復性RSD(%) I溶液穩(wěn)定性RSD (f 結(jié)果 I無干擾 |l. 47|l. 51|o. 9權(quán)利要求
1.一種中藥組合物中知母皂苷B II的含量測定方法,該中藥組合物是由如下重量份的原料藥制成的黃芪300-400份、生地黃300-400份、雞血藤300-400份、桂枝80-120份、當歸100-150份、川芎150-200份、荔枝核150-200份、知母80-120份、桑枝80-120份、徐長卿80-120份、延胡索70-120份、麻黃50-100份、地龍30-60份,其特征在于該方法采用高效液相色譜法,色譜條件和測定法如下 色譜條件色譜柱C18,規(guī)格為4. 6mmX 250mm, 5 u m ;流動相為乙腈7jC -24:76 ;蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度為75°C,加熱級別為66%,載氣流速為25psi,柱溫為30°C,流速為I.Oml/min,理論塔板數(shù)以知母皂苷B II計不少于6000 ; 供試品溶液的制備取上述中藥組合物制劑內(nèi)容物或研細的粉末2. O g,精密稱定,置具塞三角瓶中,精密加入25%乙腈50ml,稱重,超聲提取30分鐘,放冷,用25%乙腈補足減失的重量,過濾,取續(xù)濾液25ml,回收溶劑至近干,殘渣用約50ml水溶解,通過AB-8大孔吸附樹脂柱,規(guī)格為內(nèi)徑I. 5cm,長10cm,分別用氨試液50ml、20%乙醇50ml洗脫,棄去;再用80%乙醇洗脫IOOml,收集洗脫液,蒸干,殘渣用25%乙腈溶解,并轉(zhuǎn)移至10 ml量瓶中,加25%乙腈至刻度,搖勻,作為供試品溶液; 對照品溶液的制備精密稱取知母皂苷B II對照品IOmg置IOml量瓶中,加25%乙腈溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為母液,精密量取Iml母液置IOml量瓶中,加25%乙腈稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液; 測定法分別精密吸取對照品溶液15rt、30W,供試品溶液15耵,注入液相色譜儀,測定,用外標兩點法對數(shù)方程計算,即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的知母皂苷BII的含量測定方法,其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成 黃芪340份、生地黃340份、雞血藤340份、桂枝113份、當歸136份、川芎170份、荔枝核170份、知母113份、桑枝113份、徐長卿102份、延胡索91份、麻黃68份、地龍45份。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的知母皂苷BII的含量測定方法,其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成 黃芪300份、生地黃300份、雞血藤300份、桂枝80份、當歸100份、川芎150份、荔枝核150份、知母80份、桑枝80份、徐長卿80份、延胡索70份、麻黃50份、地龍30份。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的知母皂苷BII的含量測定方法,其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成 黃芪400份、生地黃400份、雞血藤400份、桂枝120份、當歸150份、川芎200份、荔枝核200份、知母120份、桑枝120份、徐長卿120份、延胡索120份、麻黃100份、地龍60份。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的知母皂苷BII的含量測定方法,其特征在于所述中藥組合物由如下重量份的原料藥制成 黃芪300份、生地黃300份、雞血藤300份、桂枝120份、當歸150份、川芎150份、荔枝核200份、知母120份、桑枝120份、徐長卿120份、延胡索120份、麻黃100份、地龍60份。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項所述的知母皂苷BII的含量測定方法,其特征在于所述中藥組合物的活性成分由下列成分組成 I)、黃芪、麻黃、桑枝、延胡索、雞血藤、川芎,分別加8-12倍量50-80%乙醇,回流提取1-3次,提取時間分別為1-3小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C熱測時相對密度I. 02-1. 06的流浸膏; 2)、桂枝、當歸、徐長卿,加5-8倍量水,浸泡20-40分鐘,水蒸汽蒸餾法提油,時間為5-8小時,所提取的揮發(fā)油; 3)、桂枝、當歸、徐長卿提取完揮發(fā)油后經(jīng)過濾的水煎液; 4)、生地黃、荔枝核、知母、地龍與桂枝、當歸、徐長卿提取揮發(fā)油后的殘渣合并,加8-12倍量水,加熱煎煮1-3次,時間分別為1-3小時,過濾,合并提取液,殘渣棄去,減壓濃縮至60°C熱測時相對密度為I. 20-1. 24的清膏,加95%乙醇至醇濃度50_70%,5_10°C靜置18-36小時,過濾,濾液減壓回收乙醇至無醇味,減壓濃縮至60°C熱測時相對密度I. 02-1. 06的流浸膏。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的知母皂苷BII的含量測定方法,其特征在于所述中藥組合物的制劑劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑或散劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的知母皂苷BII的含量測定方法,其特征在于所述中藥組合物的制劑劑型為膠囊劑、片劑、顆粒劑、丸劑或散劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種中藥組合物中知母皂苷BⅡ的含量測定方法。該中藥組合物由黃芪、生地黃、雞血藤、桂枝、當歸、川芎、荔枝核、知母、桑枝、徐長卿、延胡索、麻黃、地龍組成,臨床用于糖尿病周圍神經(jīng)病變,本發(fā)明通過高效液相色譜法測定其中知母皂苷BⅡ的含量,該方法簡便快捷,準確可靠,用于該中藥組合物的中間體和終產(chǎn)品的質(zhì)量控制。
文檔編號G01N30/88GK102749407SQ20111009733
公開日2012年10月24日 申請日期2011年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月19日
發(fā)明者宋劍, 王貴金, 裴彩云, 賈繼明, 鄭亞杰 申請人:河北以嶺醫(yī)藥研究院有限公司