專利名稱：一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法
技術領域：
本發(fā)明屬生物組 織學研究技術領域，特別是涉及一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法。
背景技術：
組織切片在生物的組織學研究中具有十分重要的作用。通過組織切片技術可以從顯微層次研究生物器官與組織中的細胞學特征及其變化。魚類的性腺是生殖系統(tǒng)中的重要器官，其中的性細胞具有周期性的變化特征，通過組織切片觀察其細胞學變化弄清其發(fā)生、 發(fā)育和成熟的過程及規(guī)律在魚類繁殖生物學中具有重要的意義。因而，魚類性腺的組織學被廣泛應用于多種魚類中。對于銀鯧成魚來說，由于其性腺較大且容易取得與固定，因而切片過程較容易。然而，對于銀鯧仔稚幼魚等較小的個體來說，其性腺組織較小，甚至不能用肉眼找到。目前，仔稚幼魚性腺組織學研究多采用連續(xù)切片，但由于該時期的性腺組織較小，有時候甚至僅含有少數幾個性細胞，并且臘塊中包含難以切片的魚骨組織，這均給切片工作帶來了一定的難度。

發(fā)明內容
本發(fā)明所要解決的技術問題是提供一種流程簡單且操作簡單的銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法。本發(fā)明解決其技術問題所采用的技術方案是提供一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法，包括下列步驟，(1)取新鮮仔稚幼魚尸體，對其進行生物學數據測定并編號；(2)將測定后的新鮮仔稚幼魚尸體置于戴維森(Davidson’ s AFA)固定液中進行固定24h，然后轉入70%乙醇中保存；對于全長< 3cm的仔稚魚，采用全魚固定的方式，而對于全長> 3cm的幼魚，將其頭部、尾部、背部肌肉及其前半腹部切除，將其后腹部進行固定；(3)取出固定的新鮮仔稚幼魚尸體進行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋處理，包埋時新鮮仔稚幼魚尸體水平放置，以方便對其進行橫向切片；(4)將包埋好的臘塊置于切片機上進行切片，對于全長< 3cm的仔稚魚，保留所有的蠟帶；對于全長> 3cm的幼魚，先快速切除其表皮層，然后開始進行正式切片，切片厚度為4-6 μ m，待新鮮仔稚幼魚尸體切至腹腔的后壁后停止切片；(5)收集蠟帶，在貼片烤片后，做常規(guī)HE染色與觀察。所述的戴維森固定液配方為95%乙醇330ml、甲醛220ml、冰醋酸115ml和單蒸水 335ml ο有益效果本發(fā)明根據固定液的性質與銀鯧仔稚幼魚性腺組織的分布情況設計一套簡單有效的銀鯧仔稚幼魚性腺組織切片方法。本發(fā)明流程簡單，操作簡單，以Davidson’ s AFA固定液代替常規(guī)的波恩氏固定液以增加固定液的穿透力并軟化魚骨組織，有助于提高固定與切片的效果；同時，對于較大的銀鯧仔稚幼魚尸體切除不包含性腺的部分組織以減少整個操作過程的費時；性腺切出率高，無須特殊或昂貴的儀器。本發(fā)明可以用于銀鯧仔稚幼魚性腺組織學切片，也適用于其它鯧屬魚類及鲆鰈類水產生物性腺分化與性別決定研究，具有廣泛的適用性。
具體實施例方式
下面結合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內容之后，本領域技術人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范圍。實施例11)取新鮮的銀鯧仔魚尸體(全長1. 1cm)，測定其生物學數據并編號；2)將測定后的新鮮仔稚幼魚尸體置于Davidson’ s AFA固定液中進行固定24h，然后轉入70%乙醇中保存；3)取出固定的新鮮仔稚幼魚尸體進行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋處理，包埋時新鮮仔稚幼魚尸體水平放置，以方便對其進行橫向切片；4)將包埋好的臘塊置于切片機上進行切片，保留所有蠟帶，至石蠟塊中的新鮮仔稚幼魚尸體切凈后停止切片；5)收集蠟帶，在貼片與烤片后，做常規(guī)HE染色與觀察。實施例21)取新鮮的銀鯧仔魚尸體(全長3. 5cm)，測定其生物學數據并編號；2)將測定后的新鮮仔稚幼魚尸體置于操作臺上，用解剖刀切出其頭部、尾部、背部肌肉及前半腹部組織，將剩余的后半腹部置于Davidson’ s AFA固定液中進行固定24h，然后轉入70%乙醇中保存；3)取出固定的新鮮仔稚幼魚尸體進行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋處理，包埋時新鮮仔稚幼魚尸體水平放置，以方便對新鮮仔稚幼魚尸體進行橫向切片；4)將包埋好的臘塊置于切片機上進行切片，首先快速切除銀鯧的表皮組織，然后開始調整切片厚度至4-6 μ m開始正常切片，待到新鮮仔稚幼魚尸體切至一半后露出腹腔的后側內壁時停止切片；5)收集蠟帶，在貼片與烤片后，做常規(guī)HE染色與觀察。
權利要求
1.一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法，其特征在于包括下列步驟，(1)取新鮮仔稚幼魚尸體，對其進行生物學數據測定并編號；(2)將測定后的新鮮仔稚幼魚尸體置于戴維森固定液中進行固定24h，然后轉入70% 乙醇中保存；對于全長< 3cm的仔稚魚，采用全魚固定的方式，而對于全長> 3cm的幼魚，將其頭部、尾部、背部肌肉及其前半腹部切除，將其后腹部進行固定；(3)取出固定的新鮮仔稚幼魚尸體進行常規(guī)脫水、透明、浸蠟和包埋處理，包埋時新鮮仔稚幼魚尸體水平放置，以方便對其進行橫向切片；(4)將包埋好的臘塊置于切片機上進行切片，對于全長<3cm的仔稚魚，保留所有的蠟帶；對于全長> 3cm的幼魚，先快速切除其表皮層，然后開始進行正式切片，切片厚度為 4-6 μ m，待新鮮仔稚幼魚尸體切至腹腔的后壁后停止切片；(5)收集蠟帶，在貼片與烤片后，做常規(guī)HE染色與觀察。
2.根據權利要求1所述的一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法，其特征在于所述的戴維森固定液配方為95%乙醇330ml、甲醛220ml、冰醋酸115ml和單蒸水335ml。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種銀鯧仔稚幼魚性腺切片方法，首先將新鮮的銀鯧仔稚幼魚尸體測定并采用Davidson’s AFA固定液中進行固定，并切除不含性腺的部分組織與器官，然后對其余部分做常規(guī)石蠟切片、HE染色與觀察。本發(fā)明可以用于銀鯧仔稚幼魚性腺組織學切片，也適用于其它鯧屬魚類及鲆鰈類水產生物性腺分化與性別決定研究，具有廣泛的適用性。
文檔編號G01N1/06GK102221484SQ20111010117
公開日2011年10月19日 申請日期2011年4月21日 優(yōu)先權日2011年4月21日
發(fā)明者孫鵬, 尹飛, 彭士明, 施兆鴻 申請人:中國水產科學研究院東海水產研究所