專利名稱：一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種中藥杜仲制劑的指紋圖譜檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
杜仲為杜仲科植物杜仲(Eucommia ulmoids oliv.)的干燥樹皮，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，上品，為我國(guó)名貴藥材，具有被肝腎、強(qiáng)筋骨、降血壓、安胎等諸多功效。多用于高血壓癥，腎虛腰痛，腰膝無力。因杜仲資源易得，已要為當(dāng)今藥用開發(fā)熱點(diǎn)，并取得不少成就， 如全杜仲膠囊、杜仲顆粒、杜仲平壓片、杜仲壯骨丸、杜仲?zèng)_劑等。杜仲制劑作為中成藥，其藥效不是來自任何單一的活性成分，其藥效作用上是多種活性成分共同協(xié)作的結(jié)果。然而，對(duì)于杜仲制劑目前多采用單一指標(biāo)成分進(jìn)行質(zhì)量控制， 其質(zhì)量控制方法不能準(zhǔn)確全面反映產(chǎn)品的內(nèi)在質(zhì)量，也無法用于生產(chǎn)過程中、以及產(chǎn)品質(zhì)量的有效控制，更不能保證其臨床療效。因此，人們希望能有一種能全面檢測(cè)杜仲制劑中有效成分的質(zhì)量檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)上述中藥杜仲制劑的質(zhì)量控制現(xiàn)狀，提供一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，該方法提供一種基于高效液相色譜法的中藥杜仲制劑的指紋圖譜檢測(cè)方法，可得到中藥杜仲制劑的HPLC (高效液相色譜)指紋圖譜，可有效控制中藥杜仲制劑的質(zhì)量及保證其臨床療效。本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的。一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟。( 1)對(duì)照品溶液的制備。取綠原酸對(duì)照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解，搖勻，制成對(duì)照品溶液。(2)供試品溶液的制備。取杜仲制劑粉末，置于容量瓶中，加50%甲醇，超聲處理，取出放冷，經(jīng)微孔濾膜濾過即得供試品溶液。(3)色譜條件。色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，規(guī)格為4.6πιπιΧ250πιπι，5μπι。流動(dòng)相乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液，磷酸的PH值調(diào)至2. 0 2. 2。梯度洗脫，洗脫程序?yàn)橄炔捎?. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫；25min時(shí)，采用乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫，乙腈與0. 005%磷酸二氫鉀的體積百分比為 8%: 92% ；60min時(shí)，采用乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫，乙腈與0. 005%磷酸二氫鉀的體積百分比為18%:82% ；70min時(shí)，采用乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫， 乙腈與0. 005%磷酸二氫鉀的體積百分比為22%: 78% ；80min時(shí)，采用乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫，乙腈與0. 005%磷酸二氫鉀的體積百分比為25%: 75%。
流速1.Oml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng):340nm ；柱溫:20°C。(4)以綠原酸為參照峰的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定。吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各10批，每批10 μ L，分別注入高效液相色譜儀中，按高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖，依據(jù)所得的10批對(duì)照品的指紋圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。所述中藥杜仲制劑的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，各共有峰以綠原酸為參照峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積。(5)指紋圖譜的質(zhì)量控制。將中藥杜仲制劑的供試品溶液指紋圖譜與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比較，計(jì)算相似度，識(shí)別兩者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，確定相似度。所述步驟(2)中杜仲制劑粉末與甲醇的質(zhì)量與體積比為1:8 10 ；所述超聲處理時(shí)間為35 45min。所述步驟(2)中微孔濾膜的孔徑為0. 45 μ m。所述步驟(4)中相對(duì)保留時(shí)間的計(jì)算公式為相對(duì)保留時(shí)間=其它各組分峰的保留時(shí)間/參照峰的保留時(shí)間。相對(duì)峰面積的計(jì)算公式為相對(duì)峰面積=其它各組分峰的峰面積/參照峰的峰面積。所述參照峰為綠原酸峰。步驟(4)中所述相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積分別為。相對(duì)保留時(shí)間1(0. 200 0. 204)，2 (0. 657 0. 673)，3 (1.000)，4 (1.026 1. 028),5 (1. 447 1. 455),6 (1. 589 1. 613),7 (2. 059 2. 101),8 (2. 253 2. 304)， 9 (2. 442 2. 506)。相對(duì)峰面積1(0. 064 0. 161)，2 (0. 140 0. 163)，3 (1. 000),4 (0. 248 0. 284), 5 (0. 078 0. 237), 6 (0. 032 0. 132), 7 (0. 0630. 122), 8 (0. 107 0. 200), 9 (0. 026 0. 070)。步驟(5)中所述確定相似度是指將中藥杜仲制劑的供試品溶液指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比對(duì)，其相似度應(yīng)為0. 90 1. 00。本發(fā)明所述指紋圖譜的質(zhì)量控制，運(yùn)用國(guó)家藥典委員會(huì)制定的《中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件》(2004)，經(jīng)過多點(diǎn)校正，色譜峰的匹配，計(jì)算供試品溶液指紋圖譜與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度；指紋圖譜相似度計(jì)算參數(shù)設(shè)置為時(shí)間寬度為0. 5秒；校正方式采用多點(diǎn)校正，校正色譜峰的匹配點(diǎn)為共有峰，峰1 (0. 200 0. 204)，峰2 (0. 657 0. 673)， 峰 3 (1.000)，峰 5 (1. 447 1. 455)，峰 8 (2. 253 2. 304)。本發(fā)明還提供一種杜仲藥材的指紋圖譜建立方法，包括如下步驟。(1)杜仲藥材供試品溶液的制備取杜仲藥材粉碎，過篩，得粉末；稱取粉末4. Og, 置錐形瓶中，加50%甲醇100ml，超聲處理40min，取出放冷，補(bǔ)足失重，搖勻，經(jīng)微孔濾膜 (0. 45 μ m)濾過，即得杜仲藥材供試品溶液。(2)杜仲藥材指紋圖譜的制備吸取杜仲藥材供試品溶液20 μ L注入高效液相色譜儀，依照上述步驟(3)中的色譜條件，制定杜仲藥材指紋圖譜。本發(fā)明的有益效果是與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用高效液相建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以杜仲的有效成分特征為主，通過指紋圖譜得到量化參數(shù)，方法精密度較高，穩(wěn)定性、重復(fù)性良好，能更全面、有效的控制制劑的質(zhì)量。本發(fā)明還提供杜仲藥格的指紋圖譜的建立方法，可通過控制藥材的質(zhì)量來控制制劑的質(zhì)量。


圖1為本發(fā)明所述以綠原酸為參照制得的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。圖2為本發(fā)明所述杜仲制劑制得的10批樣品指紋圖譜。圖3為本發(fā)明所述杜促藥材制得的指紋圖譜。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 中藥杜仲制劑標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜建立(以全杜仲膠囊為例)。(1)儀器及試劑高效液相色譜儀島津LC - IOATvp高效液相色譜儀(SPD — MlOAvp檢測(cè)器，CLASS-VP軟件)；數(shù)控超聲波清洗器KQ_250DB型，昆山市超聲儀器有限公司；十萬分之一天平島津AUW220 ；萬分之一天平AB104 — N型，廠家梅特勒一托利多。乙腈山東禹王實(shí)驗(yàn)有限公司化工分公司；甲醇上海振興化工一廠；磷酸(優(yōu)級(jí)純)天津精細(xì)化學(xué)品開發(fā)有限公司；磷酸二氫鉀汕頭市西隴化工廠有限公司；超純水。綠原酸對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品檢定所；全杜仲膠囊江西普正制藥有限公司。( 2)對(duì)照品溶液的制備。稱取綠原酸對(duì)照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解，搖勻，制成對(duì)照品溶液。(3)供試品溶液的制備。取全杜仲膠囊粉末0. 9g，置IOml容量瓶中，加50%甲醇9ml，超聲處理40min，取出放冷，經(jīng)微孔濾膜(0. 45 μ m)濾過即得。(4)色譜條件。色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(4. 6mmX 250mm，5 μ m)；流動(dòng)相乙腈 (A) -0. 005%磷酸二氫鉀水溶液(磷酸調(diào)pH至2. 1) (B)，梯度洗脫，洗脫程序見表1 ；流速 1. 0 mL/min ；檢測(cè)波長(zhǎng):340nm ；柱溫20°C。表1液動(dòng)相系統(tǒng)洗脫程序。
權(quán)利要求
1.一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟(1)對(duì)照品溶液的制備取綠原酸對(duì)照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解，搖勻，制成對(duì)照品溶液；(2)供試品溶液的制備取杜仲制劑粉末，置于容量瓶中，加50%甲醇，超聲處理，取出放冷，經(jīng)微孔濾膜濾過即得供試品溶液；(3)色譜條件色譜柱用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，規(guī)格為4. 6mm X 250mm，5ym；流動(dòng)相乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液，磷酸的PH值調(diào)至2. 0 2. 2 ；梯度洗脫，洗脫程序?yàn)橄炔捎?. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫；25min時(shí)，采用乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫，乙腈與0. 005%磷酸二氫鉀的體積百分比為 8%: 92% ；60min時(shí)，采用乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫，乙腈與0. 005%磷酸二氫鉀的體積百分比為18%:82% ；70min時(shí)，采用乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫， 乙腈與0. 005%磷酸二氫鉀的體積百分比為22%: 78% ；80min時(shí)，采用乙腈一 0. 005%磷酸二氫鉀水溶液進(jìn)行洗脫，乙腈與0. 005%磷酸二氫鉀的體積百分比為25%: 75% ；流速1. Oml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng):340nm ；柱溫:20°C ；(4)以綠原酸為參照峰的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定吸取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各10批，每批10 μ L，分別注入高效液相色譜儀中， 按高效液相色譜法測(cè)定，記錄色譜圖，依據(jù)所得的10批對(duì)照品的指紋圖譜，制定標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；所述中藥杜仲制劑的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，各共有峰以綠原酸為參照峰，計(jì)算相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積；(5)指紋圖譜的質(zhì)量控制將中藥杜仲制劑的供試品溶液指紋圖譜與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行比較，計(jì)算相似度，識(shí)別兩者所具有的共同吸收峰的數(shù)量，確定相似度。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟 (2 )中杜仲制劑粉末與甲醇的質(zhì)量與體積比為1 8 10 ；所述超聲處理時(shí)間為35 45min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟 (2)中微孔濾膜的孔徑為0. 45 μ m。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述步驟(4) 中相對(duì)保留時(shí)間的計(jì)算公式為士口 M βπ抖,、，其它各組分峰的保圉時(shí)間相對(duì)保留時(shí)間=參照峰的保SBt_ ；相對(duì)峰面積的計(jì)算公式為扣抖山夂廟 π 其它各組分峰的峰面積相對(duì)峰面積=參照峰的峰面積；所述參照峰為綠原酸峰。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于步驟(4)中所述相對(duì)保留時(shí)間和相對(duì)峰面積分別為相對(duì)保留時(shí)間1 (0. 200 0. 204)，2 (0. 657 0. 673)，3 (1. 000)，4 (1. 026 1. 028),5 (1. 447 1. 455),6 (1. 589 1. 613),7 (2. 059 2. 101),8 (2. 253 2. 304)， 9 (2. 442 2. 506)；相對(duì)峰面積1 (0. 064 0. 161), 2 (0. 140 0. 163)，3 (1. 000),4 (0. 248 0. 284)， 5 (0. 078 0. 237),6 (0. 032 0. 132), 7 (0. 0630. 122),8 (0. 107 0. 200),9 (0. 026 0. 070)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于步驟(5)中所述確定相似度是指將中藥杜仲制劑的供試品溶液指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)圖譜比對(duì)，其相似度應(yīng)為 0. 90 1. 00。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，其特征在于所述指紋圖譜的質(zhì)量控制，運(yùn)用國(guó)家藥典委員會(huì)制定的《中藥指紋圖譜相似度計(jì)算軟件》(2004)， 經(jīng)過多點(diǎn)校正，色譜峰的匹配，計(jì)算供試品溶液指紋圖譜與制定的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度； 指紋圖譜相似度計(jì)算參數(shù)設(shè)置為時(shí)間寬度為0. 5秒；校正方式采用多點(diǎn)校正，校正色譜峰的匹配點(diǎn)為共有峰，峰1 (0. 200 0. 204)，峰2 (0. 657 0. 673)，峰3 (1.000)，峰5 (1. 447 1. 455)，峰 8 (2. 253 2. 304)。
全文摘要
一種中藥杜仲制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法，屬于藥物質(zhì)量控制技術(shù)領(lǐng)域。包括如下步驟(1)對(duì)照品溶液的制備；(2)供試品溶液的制備；(3)梯度洗脫；(4)以綠原酸為參照峰的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的制定；(5)指紋圖譜的質(zhì)量控制。本發(fā)明的有益效果是與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用高效液相建立標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，以杜仲的有效成分特征為主，通過指紋圖譜得到量化參數(shù)，方法精密度較高，穩(wěn)定性、重復(fù)性良好，能更全面、有效的控制制劑的質(zhì)量。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102262132SQ20111010704
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2011年4月27日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月27日
發(fā)明者余寶平, 吳永忠, 夏川川, 李旭, 肖軍平 申請(qǐng)人:江西普正制藥有限公司