專利名稱：一種檢測鈉離子的方法和試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測鈉離子的方法和試劑盒。
背景技術(shù)：
電解質(zhì)是指在水溶液中或熔融狀態(tài)下能夠?qū)щ姷幕衔铩Ｔ谌梭w中，電解質(zhì)廣泛分布在細(xì)胞內(nèi)液和細(xì)胞外液中，其中細(xì)胞外液的電解質(zhì)中主要陽離子是鈉離子，主要的陰離子是氯離子和碳酸氫根離子；細(xì)胞內(nèi)液的電解質(zhì)中主要陽離子是鉀離子和鎂離子，主要的陰離子是磷酸氫根離子。這些電解質(zhì)離子通過神經(jīng)、體液調(diào)節(jié)與水形成動態(tài)平衡，兩者共同參與機體的代謝活動等機體重要機能，對正常生命活動的維持起著非常關(guān)鍵的作用。電解質(zhì)離子和水之間的失衡會造成水和電解質(zhì)紊亂，這對機體的正常生命活動影響極大。許多器官系統(tǒng)的疾病以及一些全身性的病理過程，都可以引起或伴有水和電解質(zhì)紊亂。此外，外界環(huán)境的某些變化、某些醫(yī)原性因素如藥物使用不當(dāng)，也?？蓪?dǎo)致水和電解質(zhì)紊亂。如果得不到及時的糾正，水和電解質(zhì)紊亂本身又可使全身各器官系統(tǒng)特別是心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)的生理功能和機體的物質(zhì)代謝發(fā)生相應(yīng)的障礙，嚴(yán)重時?？蓪?dǎo)致死亡。因此，在糾正水和電解質(zhì)紊亂的過程中，必須先檢測機體內(nèi)電解質(zhì)離子的濃度，然后進行針對性的治療。水和電解質(zhì)紊亂在臨床上最常見的是水和鈉的紊亂。現(xiàn)有檢測鈉離子的方法有很多，常用的有火焰光度法、離子選擇電極法和酶法。離子選擇電極法采用靈敏的特定專用電極，在專用儀器上進行血清和尿液等體液的鈉離子測定，其專用儀器是通過離子選擇電極與參比電極組合浸泡在待測標(biāo)本中進行檢測的。但是，該法中的電極在使用一定時間后會自動老化，壽命較短，需要經(jīng)常更換，檢測成本較大，不利于各基層醫(yī)院的廣泛使用。火焰光度法分為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)法和外標(biāo)準(zhǔn)法兩種。由于外標(biāo)準(zhǔn)法操作誤差較大，一般不采用。現(xiàn)在主要使用內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)法，即標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)液采用加進相同濃度的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)元素鋰或銫進行測定。操作時，將含鋰的溶液作為稀釋液，同時測定鈉離子的濃度，以標(biāo)本與標(biāo)準(zhǔn)液的Na/Li比值，計算Na+的濃度。但是火焰光度法儀器受使用燃料的限制，并且測定步驟繁瑣，存在一定誤差，限制了其在鈉離子檢測中的應(yīng)用。隨著各種半、全自動生化分析儀的普遍應(yīng)用，酶法檢測鈉離子濃度也越來越普遍。 其中一種酶法利用的原理是，在340nm波長下每分鐘NADH的吸光度下降的速度與鈉離子濃度成正比，由此測算出鈉離子的濃度大小。但是，該方法中的試劑穩(wěn)定性較差，影響檢測結(jié)果。此外還有一種酶法是基于半乳糖苷酶在鈉離子的促進下，使0-硝基酚-β-D-吡喃糖苷半乳糖分解，生成產(chǎn)物0-硝基酚在405nm波長下的吸光度變化率與鈉離子濃度成正比，但是這種酶法由于0-硝基酚-β -D-吡喃糖苷半乳糖穩(wěn)定性較差，使檢測結(jié)果同樣會出現(xiàn)誤差。鑒于上述原因，現(xiàn)有技術(shù)有利用比濁法對鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應(yīng)生成的懸濁液進行吸光度檢測，從而計算出鈉離子的濃度。但是，鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應(yīng)時間過長，無法準(zhǔn)確判斷反應(yīng)終點，因此會使結(jié)果出現(xiàn)誤差。此外，鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應(yīng)生的小顆粒沉淀還易聚合成大小不同的結(jié)晶體，無法得到均勻的乳濁度，也會使檢測結(jié)果出現(xiàn)較大誤差。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種檢測鈉離子的方法和試劑盒，使得該試劑盒和方法能夠提高檢測鈉離子的準(zhǔn)確度。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案一種檢測鈉離子的方法，將瓊脂膠、阿拉伯膠或聚乙二醇20000中的一種與6-氫氧化銻鉀組成混合液，在PH7. 2-7. 5的緩沖體系中，與待測樣品和復(fù)合醇反應(yīng)得到6-氫氧銻酸鈉懸濁液，然后在630nm波長下檢測吸光度，與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，所述復(fù)合醇由95%的乙醇和5%的其他醇組成。其中，樣品鈉離子濃度(mmol/L)=標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度XA#/Afe，所述待測樣品、混合液和復(fù)合醇的體積比為1 15 10。本發(fā)明所述混合液中瓊脂膠的濃度為200_300mg/L，所述混合液中阿拉伯膠的濃度為1000-1500mg/L，所述混合液中聚乙二醇20000的濃度為5_10g/L，優(yōu)選為瓊脂膠；所述混合液中6-氫氧化銻鉀的濃度為12-15g/L，所述其他醇為乙二醇、異丙醇或兩者任意比例的混合物。在現(xiàn)有技術(shù)中，鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應(yīng)生成6-氫氧銻酸鈉小顆粒沉淀，但反應(yīng)時間過長，無法準(zhǔn)確判斷反應(yīng)終點，因此會使結(jié)果出現(xiàn)誤差。本發(fā)明在鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應(yīng)同時加入了復(fù)合醇，可使反應(yīng)加速，快速達到反應(yīng)終點，析出全部沉淀顆粒，由此實現(xiàn)快速測定和準(zhǔn)確測定。除上述問題外，6-氫氧化銻鈉小顆粒沉淀容易聚合成晶體，同樣影響檢測的準(zhǔn)確度。而本發(fā)明在鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應(yīng)前，將瓊脂膠、阿拉伯膠或聚乙二醇20000提前與6-氫氧化銻鉀混合，這三者均能提高和改善固體或液體物料分散性能，它們能夠促使小顆粒沉淀均勻分散于溶液中，形成穩(wěn)定、均一的懸濁液，使其在檢測吸光度時更加準(zhǔn)確，避免懸濁液不均一而帶來的誤差。同時，本發(fā)明所述復(fù)合醇也具有沖散聚合的小顆粒沉淀的作用，進一步促進懸濁液呈均勻的乳濁度。本發(fā)明所述緩沖體系由80-100mmol/L 的 Tris、20-40mmol/L 的 Tris-HCl、 20-26mmol/L的磷酸氫二鉀和3-5mmol/L的磷酸二氫鉀組成，所述標(biāo)準(zhǔn)溶液由40_60g/L的牛血白蛋白和HOmmo 1/L的疊氮鈉組成。Tris, Tris-HCl、磷酸氫二鉀以及磷酸二氫鉀作為緩沖體系，防止檢測過程中pH 值的較大波動，能夠給檢測樣品提供一個穩(wěn)定的檢測環(huán)境。在標(biāo)準(zhǔn)溶液中，牛血白蛋白能夠給疊氮鈉一個模擬的體內(nèi)環(huán)境，避免在進行吸光度檢測時產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)，影響待測樣品鈉離子濃度的計算。在作為鈉離子標(biāo)準(zhǔn)液的同時，疊氮鈉還可以作為防腐劑，確保牛血白蛋白不易變質(zhì)。本發(fā)明還提供了一種檢測鈉離子的試劑盒，包括200-300mg/L 的瓊脂膠、1000-1500mg/L 的阿拉伯膠、5-10g/L 的聚乙二醇 20000 三者中的一種以及12-15g/L的6-氫氧化銻鉀和復(fù)合醇，所述復(fù)合醇由95%的乙醇和5%的其他醇組成。
其中，所述其他醇為乙二醇、異丙醇或兩者任意比例的混合物。此外，本發(fā)明所述試劑盒還包括80-100mmol/L 的 Tris、20_40mmol/L 的 Tris-HCl、20-26mmol/L 的磷酸氫二鉀、 3-5mmol/L的磷酸二氫鉀和標(biāo)準(zhǔn)溶液，所述標(biāo)準(zhǔn)溶液由40_60g/L的牛血白蛋白和HOmmol/ L的疊氮鈉組成。本發(fā)明試劑盒可以配制成雙試劑，即由200_300mg/L的瓊脂膠、1000_1500mg/L的阿拉伯膠、5-10g/L 的聚乙二醇 20000 三者中的一種、80-100mmol/L 的 Tris、20-40mmol/L 的Tris-HCl、20-26mmol/L的磷酸氫二鉀、3-5mmol/L的磷酸二氫鉀以及12_15g/L的6-氫氧化銻鉀組成的試劑1，由復(fù)合醇組成的試劑2，由40-60g/L的牛血白蛋白和140mmol/L的疊氮鈉組成的標(biāo)準(zhǔn)溶液。本發(fā)明所述方法檢測鈉離子濃度具有較高準(zhǔn)確度和精密度，試驗結(jié)果顯示，本發(fā)明所述方法檢測的結(jié)果在質(zhì)控品的士2SD范圍內(nèi)。此外，本發(fā)明對同一樣品進行重復(fù)性檢測，各結(jié)果之間的標(biāo)準(zhǔn)差率(變異系數(shù))為1. 48%，小于標(biāo)準(zhǔn)的3%。上述試驗結(jié)果表明本發(fā)明具有很高的準(zhǔn)確度和精密度。由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明所述方法能夠促使鈉離子與6-氫氧化銻鉀反應(yīng)生成的小顆粒沉淀快速析出，并且避免小顆粒沉淀的聚合，使溶液形成均一的懸濁液，提高檢測鈉離子濃度的準(zhǔn)確性，同時實現(xiàn)快速檢測，可以廣泛應(yīng)用于鈉離子濃度檢測。
具體實施例方式本發(fā)明公開了一種檢測鈉離子的方法和試劑盒，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述方法及試劑盒已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進行改動或適當(dāng)變更與組合，來實現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。以下就本發(fā)明所提供的一種檢測鈉離子的試劑盒和方法做進一步說明。實施例1 本發(fā)明所述方法將瓊脂膠和6-氫氧化銻鉀組成混合液(瓊脂膠濃度為250mg/L，6_氫氧化銻鉀濃度為 14g/L)，在 pH7. 2 的 100mmol/L Tris、30mmol/L Tris-HCU6mmol/L 磷酸氫二鉀、 4mmol/L的磷酸二氫鉀緩沖體系中，與待測樣品和復(fù)合醇(95%的乙醇和5%的乙二醇)按體積比，待測樣品混合液復(fù)合醇=1 15 10的比例反應(yīng)，得到的懸濁液在630nm 波長下檢測吸光度A#，然后與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液(由50g/L的牛血白蛋白和 140mmol/L的疊氮鈉組成)的Afe比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，公式為樣品鈉離子濃度 (mmol/L)=標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(HOmmol/DXA^/A^。實施例2 本發(fā)明所述方法將阿拉伯膠和6-氫氧化銻鉀組成混合液(阿拉伯膠濃度為1250mg/L，6_氫氧化銻鉀濃度為 15g/L)，在 pH7. 3 的 90mmol/L Tris、40mmol/L Tris-HCl、23mmol/L 磷酸氫二鉀、3mmol/L的磷酸二氫鉀緩沖體系中，與待測樣品和復(fù)合醇(95%的乙醇和5%的異丙醇)按體積比，待測樣品混合液復(fù)合醇=1 15 10的比例反應(yīng)，得到的懸濁液在 630nm波長下檢測吸光度A#，然后與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液(由60g/L的牛血白蛋白和140mmol/L的疊氮鈉組成)的Afe比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，公式為樣品鈉離子濃度(mmol/L)=標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(140πιπιΟ1/ ΧΑ#/Αβ。實施例3 本發(fā)明所述方法將聚乙二醇20000和6-氫氧化銻鉀組成混合液(聚乙二醇20000濃度為7. 5g/L， 6-氫氧化銻鉀濃度為 12g/L)，在 pH7. 5 的 80mmol/L Tris、20mmol/LTris-HCl、20mmol/L 磷酸氫二鉀、5mmol/L的磷酸二氫鉀緩沖體系中，與待測樣品和復(fù)合醇(95%的乙醇、3%的乙二醇和2%的異丙醇)按體積比，待測樣品混合液復(fù)合醇=1 15 10的比例反應(yīng)， 得到的懸濁液在630nm波長下檢測吸光度A#，然后與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液(由40g/ L的牛血白蛋白和140mmol/L的疊氮鈉組成)的Afe比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，公式為樣品鈉離子濃度(mmol/L)=標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度(140mmOl/L) XA#/Afe。實施例4 本發(fā)明所述方法的準(zhǔn)確度分析試驗儀器CB171半自動生化分析儀；檢測樣品中生北控質(zhì)控血清(鈉離子靶值為132. 18mmol/L, X ±2SO為 128.6-137. Ommo1/L)；CB171半自動生化分析儀設(shè)定溫度為37°C，反應(yīng)方法為終點法，測定波長為 630nm，反應(yīng)方向為正反應(yīng)，延遲時間為2s，測量時間為2s。采用實施例1至實施例3的檢測方法對上述質(zhì)控血清分別進行檢測。具體結(jié)果為 實施例1檢測結(jié)果為132. 7mmol/L ；實施例2檢測結(jié)果為134. 2mmol/L ；實施例3檢測結(jié)果為134.0mmol/L。3次檢測結(jié)果表明，本發(fā)明所述方法的檢測結(jié)果位于質(zhì)控血清的士2SD范圍內(nèi)，具有較高準(zhǔn)確性。實施例5 本發(fā)明所述方法的精密度分析試驗儀器CB171半自動生化分析儀；檢測樣品任意一血清樣品；CB171半自動生化分析儀設(shè)定溫度為37°C，反應(yīng)方法為終點法，測定波長為 630nm，反應(yīng)方向為正反應(yīng)，延遲時間為2s，測量時間為2s。采用實施例1至實施例3的檢測方法分別對同一待測樣品重復(fù)檢測10次，其中， 實施例1檢測方法的檢測結(jié)果見表1。表1檢測樣品鈉離子濃度(10次)及標(biāo)準(zhǔn)差率(變異系數(shù))
權(quán)利要求
1.一種檢測鈉離子的方法，其特征在于，瓊脂膠、阿拉伯膠或聚乙二醇20000中的一種與6-氫氧化銻鉀組成混合液，在pH7. 2-7. 5的緩沖體系中，與待測樣品和復(fù)合醇反應(yīng)得到 6-氫氧銻酸鈉懸濁液，然后在630nm波長下檢測吸光度，與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液比濁，計算待測樣品的鈉離子濃度，所述復(fù)合醇由95%的乙醇和5%的其他醇組成。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述待測樣品、混合液和復(fù)合醇的體積比為 1 15 10。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述混合液中瓊脂膠的濃度為200-300mg/L0
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述混合液中阿拉伯膠的濃度為 1000-1500mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述混合液中聚乙二醇20000的濃度為 5-10g/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述混合液中6-氫氧化銻鉀的濃度為 12-15g/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述其他醇為乙二醇、異丙醇或兩者任意比例的混合物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)溶液由40-60g/L的牛血白蛋白和 140mmol/L的疊氮鈉組成。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述緩沖體系由80-100mmol/L的Tris、 20-40mmol/L 的 Tris-HCl、20-26mmol/L 的磷酸氫二鉀和 3_5mmol/L 的磷酸二氫鉀組成。
10.一種檢測鈉離子的試劑盒，其特征在于，包括200-300mg/L的瓊脂膠、1000-1500mg/L的阿拉伯膠、5_10g/L的聚乙二醇20000三者中的一種以及12-15g/L的6-氫氧化銻鉀和復(fù)合醇，所述復(fù)合醇由95%的乙醇和5%的其他醇組成。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述試劑盒，其特征在于，所述其他醇為乙二醇、異丙醇或兩者任意比例的混合物。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述試劑盒，其特征在于，還包括80-100mmol/L 的 Tris、20_40mmol/L 的 Tris-HCl、20-26mmol/L 的磷酸氫二鉀、 3-5mmol/L的磷酸二氫鉀和標(biāo)準(zhǔn)溶液，所述標(biāo)準(zhǔn)溶液由40_60g/L的牛血白蛋白和HOmmol/ L的疊氮鈉組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，公開了一種檢測鈉離子的方法和試劑盒。該方法將瓊脂膠、阿拉伯膠或聚乙二醇20000中的一種與6-氫氧化銻鉀組成混合液，在pH7.2-7.5緩沖體系中，與待測樣品和復(fù)合醇反應(yīng)得到6-氫氧銻酸鈉懸濁液，然后在630nm波長下檢測吸光度，與經(jīng)上述相同處理的標(biāo)準(zhǔn)溶液比濁，計算待測樣品鈉離子濃度。本發(fā)明所述試劑盒包括200-300mg/L瓊脂膠、1000-1500mg/L阿拉伯膠、5-10g/L聚乙二醇20000中的一種及12-15g/L 6-氫氧化銻鉀和復(fù)合醇。本發(fā)明所述方法能使Na+與6-氫氧化銻鉀反應(yīng)快速沉淀，且避免沉淀聚合，提高檢測的準(zhǔn)確性，可廣泛用于鈉離子濃度檢測。
文檔編號G01N21/31GK102297844SQ201110132290
公開日2011年12月28日 申請日期2011年5月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月20日
發(fā)明者董理 申請人:董理